Publicado: 2023 | Última revisão: maio de 2026

Compreender o «número de passagem»

O conceito de «número de passagem» é fundamental na cultura celular e refere-se ao número de vezes que uma linha celular foi subcultivada ou transferida para um meio de crescimento fresco após a sua reativação inicial a partir da criopreservação ou da receção de um banco de células de referência. Esta métrica é essencial para acompanhar a linhagem e o histórico de uma cultura celular.

Visão geral do processo

• Na prática rotineira de cultura celular, quando as células atingem uma determinada densidade, são transferidas para um novo meio para sustentar o crescimento e evitar a sobreconfluência. Cada uma dessas transferências é registada como uma passagem.
• Tradicionalmente, quando recebíamos uma linha celular, por exemplo, na passagem 60 do depositante, continuávamos a partir desse número de passagem, incrementando-o a cada subcultura. Esta prática, embora mantivesse um fio condutor histórico, conduzia frequentemente a números de passagem elevados desde o início. Dado o uso extensivo e muitas vezes ao longo de décadas de certas linhas celulares, como a linha HeLa estabelecida em 1951, não é viável determinar o número total de passagens desde o início da linha celular.
• Para aumentar a clareza e a qualidade nos nossos processos de cultura celular, revimos esta abordagem no início de 2023. Agora, quando iniciamos uma cultura a partir de um novo frasco, independentemente do número de passagens do depositante, reiniciamos e começamos a contar de novo a partir da passagem um para cada lote fabricado.

Justificação

A passagem é um procedimento vital para garantir a saúde e a utilidade das culturas celulares para investigação. Quando as células crescem em excesso, sofrem inibição de contacto, reduzindo a sua taxa de proliferação, o que pode afetar negativamente os resultados experimentais. Para mitigar estas questões, a Cytion implementa controlos rigorosos sobre as densidades celulares em que ocorre a subcultura, mantendo assim baixos números de passagem durante o fabrico das suas linhas celulares. Esta precaução ajuda a prevenir os efeitos adversos de passagens excessivas, tais como anomalias morfológicas, alterações na taxa de crescimento e deriva genética, que podem fazer com que as células se diferenciem significativamente do seu estado original. Períodos prolongados de subcultura também podem aumentar o risco de contaminação microbiana.

A nossa promessa

Asseguramos que as células fornecidas aos investigadores sejam o mais próximo possível da composição genética e das características fenotípicas originais, aumentando a fiabilidade dos dados experimentais. Além disso, ao documentar meticulosamente cada passagem, a Cytion contribui para a rastreabilidade e reprodutibilidade da investigação, um compromisso que reflete os elevados padrões de prática na cultura celular. Os investigadores são encorajados a manter registos precisos dos números de passagem, tanto nos recipientes de cultura como nos seus cadernos de laboratório, como referência para a saúde e o historial das suas culturas celulares.

Dicas e erros comuns

Seguir o protocolo correto é essencial, mas compreender as armadilhas comuns pode ser igualmente importante. Os procedimentos de cultura celular são sensíveis a pequenos desvios na técnica, no tempo e na qualidade dos reagentes. As dicas seguintes refletem as melhores práticas recomendadas pela equipa científica da Cytion com base numa vasta experiência em cultura celular.

• Aqueça sempre os reagentes a 37 °C antes da utilização para minimizar o choque térmico nas células.
• Trabalhe rapidamente, mas com cuidado — minimize o tempo que as células passam fora da incubadora.
• Utilize reagentes certificados e testados para micoplasma para evitar contaminação que possa comprometer os resultados experimentais.
• Documente cada etapa, incluindo o número de passagem, a data e as observações da morfologia celular.
• Valide o seu protocolo com uma pequena experiência piloto antes de passar para uma escala maior, para evitar o desperdício de reagentes dispendiosos.

Reagentes Cytion recomendados

A Cytion oferece uma gama de reagentes de cultura celular validados, especificamente concebidos para apoiar este protocolo. Todos os reagentes são testados quanto ao desempenho com linhas celulares de uso comum e estão disponíveis com documentação completa. Visite cytion.com/Media-Reagents para explorar o portfólio completo.