Células RBL-2H3 - Importância da RBL-2H3 na resposta alérgica e em estudos imunológicos
A linha celular RBL-2H3 é uma linha celular de leucemia basofílica derivada de rato utilizada na investigação imunológica. Serve como um sistema modelo para estudar a fisiologia, o comportamento e as funções dos mastócitos. Estas células são também utilizadas para estudar reacções alérgicas, processos imunológicos e testes e desenvolvimento de medicamentos.
Este artigo fornece informações sobre a origem das células RBL-2H3, os seus atributos gerais, os requisitos de cultura e as suas aplicações na investigação.
Células RBL-2H3: Origem e caraterísticas gerais
Antes de utilizar uma linha celular de basófilos na sua investigação, deve conhecer a sua origem e caraterísticas gerais. Esta secção do artigo irá informá-lo sobre as caraterísticas básicas das células RBL-2H3. Por exemplo, o que são os mastócitos RBL-2H3? Porquê utilizar células RBL-2H3? O que são as células RBL-2H3 na leucemia basofílica do rato? Qual é a morfologia das células RBL-2H3? As células RBL-2H3 são imortais?
- As RBL-2H3 são células de leucemia basofílica derivadas de células basófilas de ratos Wistar em 1978 no Laboratório de Imunologia do Instituto Nacional de Investigação Dentária.
- As células RBL-2H3 possuem receptores de tirosina quinase do recetor c-kit e receptores de protease de mastócitos II (RMCP-II), o que as torna um modelo potencial de mastócitos. Por conseguinte, são normalmente designadas por mastócitos, apesar de serem originárias de basófilos de rato [1].
- Libertam histamina e outros mediadores após ativação e expressam receptores IgE de alta afinidade.
- As células RBL-2H3 apresentam uma morfologia semelhante à dos fibroblastos.
Células RBL-2H3: Informações sobre a cultura
Esta secção irá ajudá-lo a aprender alguns aspectos fundamentais para a cultura da linha de células RBL-2H3. Ficará a saber: Qual é o tempo de duplicação das células RBL-2H3? Qual é a densidade de sementeira das células RBL-2H3? O que é o protocolo de cultura de células RBL-2H3? O que é o meio de congelação da linha de células RBL-2H3?
Pontos-chave para a cultura de células RBL-2H3
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Tempo de duplicação da população: |
O tempo de duplicação dos mastócitos RBL-2H3 é de aproximadamente 50 a 60 horas. |
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Aderente ou em suspensão: |
A RBL-2H3 é uma linha celular aderente. |
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Rácio de subcultura: |
Para as células RBL-2H3, o rácio de divisão é mantido entre 1:2 e 1:4. As células aderentes são lavadas com uma solução 1 x PBS isenta de magnésio e cálcio. É adicionada a solução de passagem Accutase e as células são mantidas à temperatura ambiente durante 10 minutos para se soltarem do fundo do recipiente de cultura. Adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas. As células colhidas são cuidadosamente ressuspendidas em meio fresco e colocadas em novos frascos com meio de cultura. |
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Meio de cultura: |
O meio EMEM contendo 10% de FBS, 2 mM de L-Glutamina, 2,2 g/L de NaHCO3 e sal EBSS é utilizado para cultivar as células RBL-2H3. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana. |
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Condições de crescimento: |
As células RBL-2H3 são cultivadas numa incubadora humidificada regulada para uma temperatura de 37 °C e ligada a uma fonte deCO2 a 5%. |
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Armazenamento: |
As células são armazenadas na fase de vapor do azoto líquido ou a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador elétrico para proteger a viabilidade das células a longo prazo. |
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Processo e meio de congelação: |
O meio de congelação CM-1 ou CM-ACF é utilizado para congelar as células RBL-2H3 através de um processo de congelação lenta. Resumidamente, este método permite uma diminuição da temperatura de 1 °C por minuto e protege as células do choque. |
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Processo de descongelação: |
As células RBL-2H3 são descongeladas num banho de água pré-definido (37 °C) durante aproximadamente 60 segundos. Em seguida, as células são adicionadas a um meio de cultura fresco e centrifugadas. Este passo é essencial para remover os componentes do meio de congelação. Em seguida, o pellet de células é ressuspenso num meio de crescimento e as células são distribuídas num frasco para cultura. |
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Nível de biossegurança: |
As células RBL-2H3 devem ser mantidas em laboratórios de biossegurança 1. |
Vantagens e limitações da linha celular de basófilos RBL-2H3
As células RBL-2H3 são normalmente utilizadas na investigação imunológica. Esta secção descreve as suas principais vantagens e limitações.
Vantagens
- Fácil de cultivar: As células RBL-2H3 podem ser facilmente cultivadas e mantidas em ambiente laboratorial. Este facto facilita a realização de experiências rentáveis e reprodutíveis, tornando-as uma escolha popular para estudos iniciais em imunologia.
Limitações
- Origem não-humana: Originárias de basófilos de rato, as células RBL-2H3 podem não imitar com exatidão os processos biológicos humanos, o que pode limitar a sua aplicabilidade em estudos de investigação específicos para humanos. Este facto obriga a uma interpretação cautelosa dos dados quando se extrapolam os resultados para sistemas humanos.
- Modelo simplificado de mastócitos: Embora estas células forneçam um modelo básico para estudar as funções dos mastócitos, não representam totalmente a natureza complexa das interações dos mastócitos no sistema imunitário humano. Consequentemente, podem não modelar adequadamente os papéis multifacetados dos mastócitos nas respostas imunitárias ou nas condições de doença in vivo.
Linha celular RBL-2H3: Uma pedra angular na investigação imunológica
Pesquisa de Basófilos e Mastócitos Utilizando a Linha Celular RBL-2H3
A linha celular RBL-2H3, derivada de Rattus norvegicus, serve como um modelo chave para o estudo da biologia dos basófilos e mastócitos. Estes mastócitos de rato fornecem informações essenciais sobre a libertação de mediadores dos mastócitos, essenciais para compreender as condições alérgicas, como a rinite alérgica. Através destas células, os investigadores exploram a dinâmica dos receptores celulares e o estabelecimento de sinapses imunológicas, que são centrais para a resposta do sistema imunitário aos alergénios. Um estudo interessante publicado em 2019 utilizou a linha celular RBL-2H3 e investigou os mecanismos subjacentes às reacções pseudo-alérgicas produzidas pela injeção de Qingkailing. O estudo descobriu que a cascata de sinalização PI3K-RAC1 provoca parcialmente esta resposta alérgica nas células [2]
Dinâmica das sinapses imunológicas na investigação sobre alergias
Empregadas extensivamente na investigação imunológica, as células RBL-2H3 são particularmente eficazes para investigar a dinâmica das sinapses imunológicas. Isto ajuda a elucidar os processos de comunicação do sistema imunitário, com aplicações no estudo de mastócitos do sangue periférico e peritoneais. Esta investigação é vital para uma compreensão abrangente da resposta imunitária, tanto em contextos sistémicos como localizados
Rastreio de drogas e testes de toxicidade
No rastreio e teste de medicamentos, é explorada a capacidade de resposta das células RBL a vários estímulos, incluindo o estudo da forma como o H2O2 inibe as respostas mediadas por IgE. Estas células desempenham um papel essencial no desenvolvimento de tratamentos para doenças como as infecções estreptocócicas, em que o estreptococo do grupo mitis inibe a ativação dos mastócitos. Além disso, os investigadores avaliam os efeitos tóxicos de várias substâncias, incluindo produtos químicos, fármacos e nanopartículas, utilizando este modelo de RBL 2H3 mc. Um estudo recente (2022), por exemplo, avaliou a citotoxicidade dos microplásticos de poliestireno nas células RBL-2H3. Verificou-se que os microplásticos danificam os organelos das células RBL-2H3 e promovem a morte celular [3]. Outro estudo de 2021 avaliou o potencial anti-alérgico e anti-inflamatório de um produto natural, a neferina, utilizando o modelo RBL 2H3 mc. O estudo revelou as boas propriedades anti-alérgicas e anti-inflamatórias do composto [4]
Metodologias avançadas na medição imunológica
A libertação consistente e mensurável de mediadores das células RBL-2H3 torna-as ideais para uma fluorimetria conveniente, facilitando medições precisas e exactas, cruciais para o estudo de doenças e a avaliação de agentes terapêuticos.
A linha celular RBL-2H3, com origem no Rattus norvegicus, é um recurso inestimável na investigação fundamental e aplicada no domínio da imunologia. Oferece oportunidades profundas para o avanço do nosso conhecimento e tratamento de doenças imunológicas
Linha celular RBL-2H3 para investigação imunológica avançada
Células RBL-2H3: Publicações de investigação
Seguem-se algumas publicações de investigação interessantes sobre os mastócitos RBL-2H3:
Atividade inibitória da narirutina na degranulação das células RBL-2H3
Este trabalho de investigação foi publicado na revista Immunopharmacology and Immunotoxicology (2021). O estudo propôs que a narirutina, um composto natural, exerce efeitos inibitórios na desgranulação de RBL 2H3 por meio da regulação de NF-κB, MAPK e da via de sinalização da tirosina quinase.
Esta pesquisa no International Journal of Molecular Sciences (2020) propôs que o composto de apigenina suprime significativamente as respostas alérgicas e inflamatórias das células RBL-2H3 e RAW264.7. Por conseguinte, pode servir como um potencial agente de combate a doenças relacionadas com o sistema imunitário.
Este artigo de pesquisa no International Journal of Molecular Sciences (2021) avaliou os efeitos antialérgicos e antiinflamatórios de um produto natural, a saponarina, usando diferentes linhas celulares, incluindo RBL-2H3.
Este estudo de Medicina Complementar e Alternativa Baseada em Evidências (2014) descobriu que os extractos de Benchalokawichian e alguns constituintes activos exercem potenciais efeitos inibitórios na libertação de ß-hexosaminidase de RBL 2H3.
Este artigo foi publicado em 2018 no International Journal of Biological Macromolecules. O estudo afirmou que a spirulina maxima, um produto natural, inibe a desgranulação de RBL 2H3, impedindo a fosforilação de MAPKs e AKT.
Recursos para a linha de células RBL-2H3: Protocolos, vídeos e muito mais
A RBL-2H3 é uma linha de mastócitos amplamente utilizada. Os recursos disponíveis que abrangem os protocolos de cultura e transfecção da RBL-2H3 são aqui mencionados:
- Modelo RBL 2H3 MC: Este artigo de investigação inclui protocolos para a manutenção de culturas de RBL-2H3 e para a transfecção de RBL-2H3.
Aqui estão alguns recursos que explicam o protocolo de cultura de células RBL-2H3:
- Células RBL-2H3: Este sítio Web é útil para aprender protocolos de cultura de células para a linha de células RBL-2H3. Além disso, inclui informações sobre os meios celulares RBL-2H3 e as condições de cultura.
Linha celular RBL-2H3: Perguntas frequentes essenciais para os investigadores
Referências
- Passante, E. e N. Frankish, The RBL-2H3 cell line: its provenance and suitability as a model for the mast cell. Inflamm Res, 2009. 58(11): p. 737-45.
- Li, Q., et al., Reação pseudo-alérgica causada pela injeção de Qingkailing parcialmente através da via de sinalização PI3K-Rac1 em células RBL-2H3. Pesquisa em Toxicologia, 2019. 8(3): p. 353-360.
- Liu, L., et al., Os micro (nano) plásticos de poliestireno danificam as organelas das células RBL-2H3 e promovem o MOAP-1 para induzir a apoptose. Journal of Hazardous Materials, 2022. 438: p. 129550.
- Chiu, K.-M., et al., Efeitos antialérgicos e anti-inflamatórios da neferina nas células RBL-2H3. Jornal Internacional de Ciências Moleculares, 2021. 22(20): p. 10994.