Células Hep3B: Investigação e descoberta do carcinoma hepatocelular
A HEP3B é uma linha celular imortalizada de carcinoma de hepatócitos derivados de humanos. É amplamente utilizada na investigação da hepatotoxicidade e do metabolismo dos medicamentos. A eficiência de transfecção da HEP3B é substancial; por conseguinte, estas células são normalmente utilizadas para estudar o desenvolvimento, a progressão e as intervenções terapêuticas do cancro do fígado. Este artigo cobre toda a informação necessária sobre a linha celular HEP3B para o ajudar a trabalhar com ela. Incluirá principalmente
- Caraterísticas gerais e origem das células HEP3B
- Informações sobre a cultura da linha celular HEP3B
- Linha celular HEP3B: Vantagens e limitações
- Aplicações das células HEP3B na investigação
- Publicações sobre a linha celular HEP3B
- Recursos para a linha celular HEP3B: Protocolos, vídeos e muito mais
1.caraterísticas gerais e origem das células HEP3B
A principal informação necessária sobre uma linha celular é a sua origem e caraterísticas gerais. Estas informações podem ajudá-lo a decidir a sua utilização na sua investigação e ajudá-lo a lidar com ela. Esta secção do artigo cobre todas as informações essenciais sobre a origem e as caraterísticas da HEP3B. Aqui ficará a saber: O que são linhas celulares Hep 3B? Qual é a origem das células Hep3B? Qual é a morfologia das células HEP3B?
- A HEP3B, uma linha celular contínua de hepatoma humano, teve origem no tecido hepático de um rapaz africano de 8 anos com carcinoma hepatocelular (CHC). Foi criada por Aden e colegas em 1979 no laboratório de Barbara B. Knowles, Instituto Wistar, Filadélfia, EUA [1].
- As células HEP3B têm uma integração do genoma do vírus da hepatite B (VHB) no seu cromossoma.
- Estas células de carcinoma de hepatócitos exibem uma morfologia epitelial.
- As células HEP3B têm um número cromossómico modal de 60. Ao contrário das HepG2, não possuem um cromossoma 1 rearranjado.
Qual é a diferença entre HepG2 e Hep3B?
O HepG2 e o HEP3B diferem no número de cromossomas por célula. A HEP3B contém 60 cromossomas, enquanto as células HepG2 têm uma média de 55 cromossomas. Além disso, a HepG2 é não tumorigénica e negativa para a hepatite B, enquanto a HEP3B é tumorigénica e positiva para o VHB.
2.informações de cultura sobre a linha celular HEP3B
O conhecimento das informações sobre a cultura de uma linha celular pode facilitar a sua utilização. Esta secção abrange todos os pontos-chave para a cultura da linha celular HEP3B HBV, incluindo: Qual é o tempo de duplicação das células Hep3B? Quais são as condições de cultura de HEP3B? Como se faz a cultura de células HEP3B HCC?
Pontos-chave para a cultura de células HEP3B
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Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação das células HEP3B é de aproximadamente 36 horas. |
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Aderente ou em suspensão: |
Esta linha de células de hepatoma é aderente. |
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Rácio de divisão: |
As células HEP3B são sub-cultivadas numa proporção de 1:2 a 1:4. As células HEP3B aderentes são lavadas com 1 x PBS e depois incubadas com a solução de dissociação Accutase. Após 8 a 10 minutos, é adicionado meio fresco e as células são centrifugadas. As células colhidas são então cuidadosamente ressuspendidas e vertidas para frascos que contêm meios de cultura numa proporção de divisão recomendada. |
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Meio de cultura: |
O meio EMEM contendo 10% de FBS, 2,2 g/L de NaHCO3, 2 mM de L-Glutamina e Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) é utilizado para a cultura de células HEP3B. |
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Condições de crescimento: |
As células HEP3B são cultivadas numa incubadora humidificada a 37°C com um fornecimento contínuo de 5% de CO2. |
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Armazenamento: |
As células HEP3B congeladas são armazenadas a uma temperatura inferior a -150°C num congelador elétrico ou na fase de vapor do azoto líquido. |
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Processo e meio de congelação: |
O meio de congelação recomendado para as células HEP3B é CM-1 ou CM-ACF. As células são congeladas utilizando um processo de congelação lento que permite apenas uma diminuição da temperatura de 1°C por minuto para proteger a viabilidade celular. |
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Processo de descongelação: |
As células congeladas são descongeladas num banho de água pré-ajustado a 37°C durante 40 a 60 segundos. Posteriormente, estas células são adicionadas ao meio de crescimento fresco e centrifugadas para remover os elementos do meio de congelação. As células recolhidas são ressuspensas e distribuídas em novos frascos para crescimento. |
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Nível de biossegurança: |
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para a cultura de células HEP3B. |
3.linha celular HEP3B: Vantagens e limitações
A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular muito utilizada. Esta secção centrar-se-á em algumas das principais vantagens e limitações destas células de hepatoma.
Vantagens
As principais vantagens das células HEP3B são
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Fácil de cultivar |
As células HEP3B não têm requisitos exigentes em termos de cultura de células, o que as torna fáceis de manusear e manter num laboratório de investigação. Este facto simplifica os procedimentos experimentais. |
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Elevada eficiência de transfecção |
As células HEP3B apresentam uma eficiência de transfecção notável, o que as torna amplamente utilizadas na manipulação genética e em estudos relacionados com a expressão genética. |
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Tumorigenicidade |
A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular tumorigénica capaz de formar tumores quando injectada num rato imunocomprometido. Isto ajuda a estudar a progressão e o desenvolvimento do cancro utilizando modelos de xenoenxertos HEP3B. |
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Estado da P53 da HEP3B |
As células HEP3B possuem uma mutação do gene P53 semelhante à do carcinoma hepatocelular (HCC) e de outros cancros, o que as torna relevantes para o estudo dos efeitos da mutação do gene P53 no crescimento, desenvolvimento e progressão do cancro. |
Limitações
A limitação associada à linha celular HEP3B é:
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Modelo celular in vitro |
A linha celular HEP3B serve de modelo in vitro de células de carcinoma hepatocelular (CHC). No entanto, pode não representar totalmente a complexidade do CHC tal como se encontra nos organismos vivos. Por conseguinte, os resultados experimentais in vitro podem diferir dos observados in vivo. |
4.aplicações das células HEP3B na investigação
A linha celular HEP3B oferece várias aplicações de investigação no domínio da investigação biomédica. Algumas das principais aplicações de investigação das células HEP3B incluem:
- Biologia do cancro: A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular humano. É um modelo celular de valor inestimável para investigar os mecanismos celulares e moleculares subjacentes ao desenvolvimento e progressão do CHC. Os investigadores utilizam estas células para estudar as mutações genéticas, os processos celulares e as vias de sinalização celular associadas ao cancro do fígado. Um estudo utilizou células HEP3B e descobriu que o microRNA-223-3p regula os componentes do inflamassoma NLRP3, inibe a proliferação e aumenta a apoptose das células de hepatocarcinoma HEP3B [2].
- Rastreio e desenvolvimento de medicamentos: A linha celular HEP3B é também utilizada para testar, selecionar e desenvolver novas terapêuticas contra o carcinoma do fígado. Além disso, é utilizada para avaliar a toxicidade e a eficácia de diferentes medicamentos e tratamentos anticancerígenos. Os investigadores também utilizaram estas células de hepatoma para estudar o metabolismo dos medicamentos. Os investigadores utilizaram células HEP3B e avaliaram o potencial citotóxico do extrato da planta Cotinus coggygria em células de carcinoma de hepatócitos HEP3B [3].
- Infecções virais: A HEP3B é uma linha celular positiva para o vírus da hepatite B; por conseguinte, é utilizada para estudar infecções virais que podem levar ao desenvolvimento de cancro do fígado, ou seja, HBV e HCV. Isto pode ajudar a compreender melhor as infecções virais e a desenvolver potenciais tratamentos antivirais. Por exemplo, um estudo utilizou células cancerosas de hepatócitos HEP3B e investigou a importância da ubiquitinação para a propagação do vírus da hepatite C. Os resultados sugeriram que a protease 15 específica da ubiquitina (USP15) está envolvida na propagação do VHC através da regulação de funções específicas dos hepatócitos, incluindo a formação de gotículas lipídicas e a tradução do ARN do VHC [4].
5.publicações sobre a linha celular HEP3B
Esta secção do artigo abordará algumas publicações de investigação interessantes sobre as células HEP3B.
Regulação da apoptose e autofagia por luteolina em células Hep3B de cancro hepatocelular humano
Esta publicação na Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) propôs que o stress do retículo endoplasmático induzido por compostos de luteolina pode exercer efeitos antitumorais em células HEP3B sem P53 de uma forma independente de P53.
Potencial de combate às células Hep3B de cancro do fígado pelo lupeol isolado da Avicennia marina
Este estudo publicado no Archiv der Pharmazie (2021) propôs um triterpenóide pentacíclico, o lupeol, como potencial agente anticancerígeno contra as células HEP3B.
Este artigo foi publicado na revista Molecular Medicine Reports (2017). Os resultados do estudo afirmam que o extrato de etanol de Cnidium monnieri (L.) Cusson induz a morte celular (apoptose) e a paragem do ciclo celular em células de hepatocarcinoma HepG2 e HEP3B através da regulação da via de sinalização p53 e Akt/GSK-3β.
Esta pesquisa publicada em Biomolecules and Therapeutics (2020) propôs que a auranofina exibe atividade sinérgica e promove a apoptose mediada por sulforafano de células HEP3B via ativação da via PI3K / AKT.
Este artigo de investigação na revista BioFactors (2023) propôs que o RNA-0072309 circular exerce efeitos antitumorais nas células de carcinoma hepatocelular HEP3B através da ativação do miRNA-665.
6.recursos para a linha de células HEP3B: Protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos disponíveis sobre as células HEP3B:
- Transfecção de HEP3B: Este vídeo explica o protocolo de transfecção das células HEP3B.
- Eficiência da transfecção de HEP3B: Esta ligação ajuda-o a conhecer a composição do meio DMEM HEP3B, a passagem das células e o protocolo de transfecção para células HEP3B. Além disso, fornece informações para otimizar o reagente HEP3B lipofectamine 3000 no seu protocolo de transfecção.
A seguinte ligação contém o protocolo de cultura de células HEP3B:
- Condições de cultura de HEP3B: Esta hiperligação ajudá-lo-á a conhecer o protocolo de manuseamento e manutenção de culturas de Huh7 e HEP3B.
- Células HEP3B: Este sítio Web tem muitas informações sobre as células HEP3B, incluindo os meios HEP3B, o protocolo para a divisão de células, a descongelação e o manuseamento de culturas proliferativas e criopreservadas.
Referências
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origem e propriedades das linhas celulares de carcinoma hepatocelular. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., O miRNA-223-3p regula o NLRP3 para promover a apoptose e inibir a proliferação de células hep3B. Medicina experimental e terapêutica, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. e S. Selen-Isbilir, Efeito citotóxico do extrato de Cotinus coggygria na linha celular de câncer Hep3B. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 participa na propagação do vírus da hepatite C através da regulação da tradução do RNA viral e da formação de gotículas lipídicas. Jornal de Virologia, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.