Células Hep3B: Investigação e descobertas sobre o carcinoma hepatocelular
A HEP3B é uma linha celular imortalizada de carcinoma hepatocelular derivada de humanos. É amplamente utilizada na investigação sobre hepatotoxicidade e metabolismo de fármacos. A eficiência de transfecção das células HEP3B é substancial; por isso, estas células são frequentemente utilizadas para estudar o desenvolvimento, a progressão e as intervenções terapêuticas do cancro do fígado. Este artigo abrange toda a informação necessária sobre a linha celular HEP3B para o ajudar a trabalhar com ela. Inclui, principalmente:
- Meio de crescimento
- Utiliza-se o meio EMEM contendo 10% de FBS, 2,2 g/L de NaHCO3, 2 mM de L-glutamina e Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) para cultivar células HEP3B.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células HEP3B é de aproximadamente 36 horas.
- Tipo de crescimento
- Esta linha celular de hepatoma é aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar HEP3B
- Características gerais e origem das células HEP3B
- Informações sobre a cultura da linha celular HEP3B
- Linha celular HEP3B: Vantagens e Limitações
- Aplicações das células HEP3B na investigação
- Publicações sobre a linha celular HEP3B
- Recursos para a linha celular HEP3B: protocolos, vídeos e muito mais
- Características gerais e origem das células HEP3B
- Informações sobre a cultura da linha celular HEP3B
- Linha celular HEP3B: vantagens e limitações
- Aplicações das células HEP3B na investigação
- 5. Publicações sobre a linha celular HEP3B
- Recursos para a linha celular HEP3B: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Características gerais e origem das células HEP3B
A informação principal de que necessita sobre uma linha celular é a sua origem e características gerais. Isso pode ajudá-lo a decidir a sua utilização na sua investigação e a lidar com ela. Esta secção do artigo abrange toda a informação essencial sobre a origem e as características das células HEP3B. Aqui irá aprender: O que são as linhas celulares Hep 3B? Qual é a origem das células Hep3B? Qual é a morfologia das células HEP3B?
- A HEP3B, uma linha celular contínua de hepatoma humano, teve origem no tecido hepático de um menino africano de 8 anos com carcinoma hepatocelular (CHC). Foi estabelecida por Aden e colegas em 1979 no laboratório de Barbara B. Knowles, no Wistar Institute, em Filadélfia, EUA [1].
- As células HEP3B apresentam uma integração do genoma do vírus da hepatite B (VHB) no seu cromossoma.
- Estas células de carcinoma hepatocitário apresentam uma morfologia epitelial.
- As células HEP3B têm um número modal de cromossomas de 60. Ao contrário das HepG2, não possuem um cromossoma 1 rearranjado.
Qual é a diferença entre HepG2 e Hep3B?
As células HepG2 e HEP3B diferem no número de cromossomas por célula. As células HEP3B contêm 60 cromossomas, enquanto as células HepG2 têm uma média de 55 cromossomas. Além disso, as células HepG2 são não tumorigénicas e negativas para a hepatite B, enquanto as células HEP3B são tumorigénicas e positivas para o HBV.
Informações sobre o cultivo da linha celular HEP3B
Conhecer as informações sobre a cultura de uma linha celular pode facilitar o seu trabalho. Esta secção aborda todos os pontos-chave para a cultura da linha celular HEP3B HBV, incluindo: Qual é o tempo de duplicação das células Hep3B? Quais são as condições de cultura das células HEP3B? Como se cultivam as células HEP3B HCC?
Pontos-chave para a cultura de células HEP3B
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células HEP3B é de aproximadamente 36 horas.
Adesivas ou em suspensão:
Esta linha celular de hepatoma é aderente.
Rácio de divisão:
As células HEP3B são subcultivadas numa proporção de 1:2 a 1:4. As células HEP3B aderentes são lavadas com PBS 1x e, em seguida, incubadas com a solução de dissociação Accutase. Após 8 a 10 minutos, é adicionado meio fresco e as células são centrifugadas. As células colhidas são então cuidadosamente ressuspensas e vertidas em frascos contendo meio de cultura na proporção de divisão recomendada.
Meio de crescimento:
Utiliza-se meio EMEM contendo 10% de FBS, 2,2 g/L de NaHCO3, 2 mM de L-glutamina e Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) para cultivar células HEP3B.
Condições de crescimento:
As células HEP3B são cultivadas numa incubadora humidificada a 37 °C com um fornecimento contínuo de 5% de CO2.
Armazenamento:
As células HEP3B congeladas são armazenadas a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador elétrico ou na fase de vapor de nitrogénio líquido.
Processo de congelação e meio:
O meio de congelamento recomendado para as células HEP3B é o CM-1 ou o CM-ACF. As células são congeladas através de um processo de congelamento lento que permite apenas uma diminuição de 1 °C na temperatura por minuto, para proteger a viabilidade celular.
Processo de descongelação:
As células congeladas são descongeladas num banho-maria pré-ajustado a 37 °C durante 40 a 60 segundos. Posteriormente, estas células são adicionadas ao meio de crescimento fresco e centrifugadas para remover os elementos do meio de congelamento. As células recolhidas são ressuspensas e distribuídas em novos frascos para crescimento.
Nível de biossegurança:
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para a cultura de células HEP3B.
Linha celular HEP3B: Vantagens e limitações
A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular amplamente utilizada. Esta secção irá centrar-se em algumas das principais vantagens e limitações destas células de hepatoma.
Vantagens
As principais vantagens das células HEP3B são:
Fácil de cultivar
As células HEP3B não têm requisitos de cultura celular exigentes, o que as torna fáceis de manusear e manter num laboratório de investigação. Isto simplifica os procedimentos experimentais.
Elevada eficiência de transfecção
As células HEP3B apresentam uma eficiência de transfecção notável, o que as torna amplamente utilizadas em estudos relacionados com a manipulação genética e a expressão genética.
Tumorigenicidade
A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular tumorigénica, capaz de formar tumores quando injetada num rato imunocomprometido. Isto ajuda no estudo da progressão e desenvolvimento do cancro utilizando modelos de xenoenxertos HEP3B.
Estado do P53 nas HEP3B
As células HEP3B possuem uma mutação no gene P53 semelhante à do carcinoma hepatocelular (CHC) e de outros cancros, tornando-as relevantes para o estudo dos efeitos da mutação do P53 no crescimento, desenvolvimento e progressão do cancro.
Limitações
A limitação associada à linha celular HEP3B é:
Modelo celular in vitro
A linha celular HEP3B serve como modelo in vitro de células de carcinoma hepatocelular (CHC). No entanto, pode não representar totalmente a complexidade do CHC tal como se encontra em organismos vivos. Consequentemente, os resultados experimentais in vitro podem diferir dos observados in vivo.
Aplicações das células HEP3B na investigação
A linha celular HEP3B oferece várias aplicações na investigação biomédica. Algumas das principais aplicações das células HEP3B incluem:
- Biologia do cancro: A HEP3B é uma linha celular de carcinoma hepatocelular humano. É um modelo celular inestimável para investigar os mecanismos celulares e moleculares subjacentes ao desenvolvimento e progressão do HCC. Os investigadores utilizam estas células para estudar mutações genéticas, processos celulares e vias de sinalização celular associadas ao cancro do fígado. Por exemplo, um estudo utilizou células HEP3B e descobriu que o microRNA-223-3p regula os componentes do inflamassoma NLRP3, inibe a proliferação e aumenta a apoptose das células de hepatocarcinoma HEP3B [2].
- Triagem e desenvolvimento de medicamentos: a linha celular HEP3B também é utilizada para testar, triar e desenvolver novas terapêuticas contra o carcinoma hepático. Além disso, é utilizada para avaliar a toxicidade e a eficácia de diferentes medicamentos e tratamentos anticancerígenos. Os investigadores também utilizaram estas células de hepatoma para estudar o metabolismo dos fármacos. Os investigadores utilizaram células HEP3B e avaliaram o potencial citotóxico do extrato da planta Cotinus coggygria em células de carcinoma hepatocitário HEP3B [3].
- Infecções virais: A HEP3B é uma linha celular positiva para o vírus da hepatite B; por isso, é utilizada para estudar infecções virais que podem levar ao desenvolvimento de cancro do fígado, ou seja, o VHB e o VHC. Isto pode ajudar a compreender melhor as infecções virais e a desenvolver potenciais tratamentos antivirais. Por exemplo, um estudo utilizou células cancerígenas de hepatócitos HEP3B e investigou a importância da ubiquitinação para a propagação do vírus da hepatite C. Os resultados sugeriram que a protease 15 específica da ubiquitina (USP15) está envolvida na propagação do HCV através da regulação de funções específicas dos hepatócitos, incluindo a formação de gotículas lipídicas e a tradução do ARN do HCV [4].
5. Publicações sobre a linha celular HEP3B
Esta secção do artigo abordará algumas publicações de investigação interessantes sobre as células HEP3B.
Regulação da apoptose e da autofagia pela luteolina em células Hep3B de cancro hepatocelular humano
Esta publicação na revista Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) propôs que o stress do retículo endoplasmático induzido pelo composto luteolina pode exercer efeitos antitumorais em células HEP3B sem P53, de uma forma independente do P53.
Potencial ação sobre as células de cancro do fígado Hep3B pela lupeol isolada da Avicennia marina
Este estudo publicado na revista Archiv der Pharmazie (2021) propôs um triterpenóide pentacíclico, o lupeol, como um potencial agente anticancerígeno contra as células HEP3B.
Este artigo foi publicado na revista Molecular Medicine Reports (2017). Os resultados do estudo indicam que o extrato etanólico de Cnidium monnieri (L.) Cusson induz a morte celular (apoptose) e a paragem do ciclo celular nas células de carcinoma hepatocelular HepG2 e HEP3B através da regulação das vias de sinalização p53 e Akt/GSK-3β.
Esta investigação, publicada na revista Biomolecules and Therapeutics (2020), propôs que a auranofina exibe atividade sinérgica e promove a apoptose mediada pelo sulforafano nas células HEP3B através da ativação da via PI3K/AKT.
Este artigo de investigação publicado na revista BioFactors (2023) propôs que o RNA circular-0072309 exerce efeitos antitumorais nas células de carcinoma hepatocelular HEP3B através da ação sobre o miRNA-665.
Recursos para a linha celular HEP3B: protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos disponíveis sobre as células HEP3B:
- Transfecção de HEP3B: Este vídeo explica o protocolo de transfecção para células HEP3B.
- Eficiência da transfecção de HEP3B: Esta ligação irá ajudá-lo a conhecer a composição do meio DMEM para HEP3B, a passagem de células e o protocolo de transfecção para células HEP3B. Além disso, fornece informações para otimizar o reagente Lipofectamine 3000 para HEP3B no seu protocolo de transfecção.
O link a seguir contém o protocolo de cultura de células HEP3B:
- Condições de cultura de HEP3B: Este link irá ajudá-lo a conhecer o protocolo para o manuseamento e manutenção de culturas de Huh7 e HEP3B.
- Células HEP3B: Este site contém muita informação sobre as células HEP3B, incluindo meios HEP3B, o protocolo para divisão celular, descongelamento e manuseamento de culturas proliferativas e criopreservadas.
Referências
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origem e propriedades das linhas celulares de carcinoma hepatocelular. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., O miRNA-223-3p regula o NLRP3 para promover a apoptose e inibir a proliferação das células Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. e S. Selen-Isbilir, Efeito citotóxico do extrato de Cotinus coggygria na linha celular cancerígena Hep3B. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., A USP15 participa na propagação do vírus da hepatite C através da regulação da tradução do ARN viral e da formação de gotículas lipídicas. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.