Linha celular HT-29
A HT-29 é uma linha celular de cancro colorretal humano com uma vasta gama de aplicações na investigação oncológica e toxicológica. Por exemplo, estas células são sensíveis aos tratamentos quimioterapêuticos padrão contra o cancro colorretal. Além disso, a linha celular HT-29 é um modelo in vitro bem caracterizado para investigar a resposta do epitélio intestinal à infeção bacteriana. As células HT-29 imitam as características das células intestinais maduras, ou seja, os enterócitos, sendo, por isso, adequadas para estudos de adesão e mecânicos.
- Meio de crescimento
- Consulte a página do produto
- Tempo de duplicação
- Consulte a página do produto
- Tipo de crescimento
- Adesivo
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar HT-29
- Células HT-29: Origem e informações gerais
- Informações sobre a cultura celular da linha celular HT-29
- Células HT-29: Vantagens e limitações
- Células HT-29: Aplicações
- 5. Publicações de investigação sobre as células HT-29
- Recursos sobre as células HT-29: Protocolos, vídeos e mais
- Referências
- Perguntas frequentes
Células HT-29: Origem e informações gerais
Antes de utilizar qualquer linha celular, deve conhecer as características gerais e a origem da mesma. Esta secção irá ajudá-lo a saber: O que são as células HT-29? A HT-29 é uma linha celular de cancro colorretal? Qual é a morfologia das células HT-29?
O que é a linha celular HT-29? A HT-29 é uma linha celular de adenocarcinoma colorretal estabelecida em 1964 por Trempe e Fogh. As células foram originalmente derivadas do tumor primário de uma mulher caucasiana (44 anos) com adenocarcinoma colorretal [1]. Desde a sua criação, esta linha celular tem sido utilizada para estudar a biologia dos cancros.
Morfologia das células HT-29: A linha celular HT-29 apresenta geralmente uma morfologia de tipo epitelial. As células diferenciadas crescem em monocamadas, formam junções célula-célula estreitas e possuem uma borda em escova apical. Se estas células forem cultivadas em meio com deficiência de glicose ou receberem indutores como butirato ou ácido, exibem características semelhantes às dos enterócitos.
Tamanho celular: O diâmetro da linha celular de cancro colorretal HT-29 é de 11 μm.
Genoma e ploidia: O número modal de cromossomas da linha celular HT-29 é 71. Pode variar entre 68 e 72. Além disso, o número de cromossomas simplificado para as células HT-29 é hiper-triploide, com o componente 2S a ocorrer a uma taxa de 2,4 %.
O que é o HT29 MTX? O HT29 MTX é uma linha celular resistente ao metotrexato, isolada da linha celular original de cancro do cólon humano HT-29 por adaptação a 10 µM de metotrexato. Estas células apresentam características de células caliciformes maduras secretoras de muco.
Informações sobre a cultura celular da linha celular HT-29
Conhecer os requisitos básicos de cultura de uma linha celular pode facilitar o seu trabalho com ela. Deve saber: qual é o tempo de duplicação da linha celular HT-29? Qual é a densidade de sementeira das células HT-29? Que meio de cultura é adequado para as células HT-29?
Tempo de duplicação
O tempo médio de duplicação da linha celular HT-29 é de 24 horas.
Adesiva/em suspensão
A HT-29 é uma linha celular aderente.
Densidade de sementeira
A densidade de sementeira recomendada para as células HT-29 é de 3 x 10⁴ células/cm². As células cultivadas são lavadas com PBS 1X e desprendidas após incubação com Accutase durante 8 a 10 minutos. Adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas. O sedimento celular é ressuspenso e as células são distribuídas em novos frascos à densidade celular recomendada.
Meio de crescimento
O Meio Essencial Mínimo de Eagle (EMEM), suplementado com 2,5 mM de L-glutamina e 10 % de FBS, é utilizado para a cultura ideal das células HT-29. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento
As células HT-29 requerem uma incubadora humidificada com temperatura de 37 °C e fornecimento de 5 % de CO₂ para o crescimento.
Armazenamento
Estas células são armazenadas na fase de vapor de nitrogénio líquido a temperaturas inferiores a -195 °C.
Meio e processo de congelamento
O meio de congelamento utilizado para a linha celular HT-29 é o CM-1 ou o CM-ACF. As células são congeladas através de um processo de congelamento lento que provoca uma descida de 1 °C na temperatura e protege eficazmente a viabilidade das células.
Processo de descongelação
As células HT-29 congeladas são descongeladas num banho-maria a uma temperatura de 37 °C. Estas células podem ser ressuspensas e dispensadas diretamente num frasco com meio de crescimento fresco. Em contrapartida, as células descongeladas podem ser centrifugadas para remover os elementos do meio de congelamento, ressuspensas em meio fresco e cultivadas em frascos.
Nível de biossegurança
O nível de biossegurança 1 é utilizado para manusear e manter a linha celular HT-29.
Células HT-29: Vantagens e limitações
Cada linha celular tem vantagens e desvantagens únicas que a distinguem das outras linhas celulares. Esta secção abordará as principais vantagens e limitações associadas às células HT-29.
Vantagens
As principais vantagens das células HT-29 são:
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Fácil de cultivar
A linha celular HT-29 é fácil de manusear e manter, sem requisitos complexos para a cultura. É amplamente cultivada em laboratórios de investigação.
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Modelo in vitro de células intestinais
As células HT-29 podem diferenciar-se em células intestinais maduras (entrocitos e células produtoras de muco) em condições de cultura específicas. São utilizadas como modelo celular para estudar a digestão dos alimentos e a biodisponibilidade.
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Elevada eficiência de transfecção
As células de cancro do cólon HT-29 oferecem uma elevada eficiência de transfecção, tornando-as adequadas para estudos de expressão e regulação genética. Podem ser realizadas experiências de transfecção tanto transitória como estável, utilizando vários métodos.
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Sensibilidade a medicamentos
As células HT-29 são sensíveis a fármacos quimioterapêuticos, tais como o fluorouracilo e a oxaliplatina, comumente utilizados no tratamento do cancro do cólon. São utilizadas para estudar a resistência aos fármacos e para selecionar potenciais fármacos terapêuticos para o carcinoma colorretal.
Limitações
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Heterogeneidade
As células HT-29, tal como outras linhas celulares cancerígenas, apresentam heterogeneidade e podem não formar uma população celular uniforme. Isto pode afetar a reprodutibilidade dos resultados em determinados ensaios e conduzir a pequenas variações nos resultados experimentais.
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Diferenciação limitada
As células HT-29 têm um potencial de diferenciação limitado. Não se diferenciam totalmente em células intestinais ou do cólon, mas apresentam apenas algumas características. Esta limitação pode restringir a sua utilização no estudo de processos biológicos mais complexos.
Células HT-29: Aplicações
A linha celular HT-29 é amplamente cultivada em laboratórios de investigação devido à sua vasta gama de aplicações. Esta secção abordará apenas algumas aplicações significativas das células HT-29.
Investigação do cancro: A HT-29 é uma linha celular de adenocarcinoma colorretal, pelo que é utilizada para estudar a progressão, o desenvolvimento e os mecanismos moleculares subjacentes do cancro. Um estudo realizado em 2018 utilizou a linha celular HT-29 para investigar as moléculas celulares responsáveis pela metástase. Este estudo observou que os genes da vimentina e do CXCR4 regulam a metástase celular. Por outro lado, a transfecção do mimético do microRNA-193a-5p pode reduzir os níveis de mRNA destes genes e diminuir com sucesso a metástase das células cancerígenas [2].
Investigação toxicológica: A linha celular HT-29 é amplamente utilizada na investigação toxicológica. Estas células de carcinoma colorretal são utilizadas para avaliar a toxicidade de diferentes candidatos a fármacos através de diversos ensaios. Por exemplo, um estudo explorou o potencial de toxicidade de um extrato etanólico da planta Syzygium cumini na linha celular HT-29. Os resultados revelaram uma supressão significativa do crescimento das células HT-29, indicando as promissoras propriedades anticancerígenas do extrato [3].
Microbiologia: As células HT-29 podem ser utilizadas como um sistema de células hospedeiras para investigar a patogénese de micróbios potenciais, ou seja, bactérias e vírus. Os investigadores podem infetar células HT-29 com micróbios para investigar a sua virulência e a resposta do hospedeiro. Um estudo deste tipo utilizou células HT-29 para explorar as propriedades probióticas das bactérias do ácido láctico [4]. Outro estudo utilizou células HT-29 para avaliar a eficácia e a segurança de tratamentos com bacteriófagos [5].
5. Publicações científicas sobre as células HT-29
Esta secção irá destacar algumas publicações notáveis sobre as células HT-29 que o ajudarão a conceber o seu estudo de investigação.
Este estudo propôs o extrato etanólico de Syzygium cumini como um potencial agente anticancerígeno contra a linha celular colorretal HT-29. O extrato inibiu significativamente o crescimento das células cancerígenas.
Esta publicação na revista Bioscience Reports testou a atividade anticancerígena de um composto, a tetrandrina, nas células HT-29. Os resultados revelaram que a tetrandrina inibe a proliferação e o crescimento das células cancerígenas através da regulação das vias de sinalização celular.
Este estudo propôs que o miRNA-193a-5p pode potencialmente regular a metástase das células HT-29 através da regulação de genes relacionados com a metástase.
Este artigo foi publicado na Nature Scientific Reports em 2018. Este estudo utilizou a linha celular tumorigénica HT-29 como modelo celular intestinal para avaliar a eficácia do tratamento proposto com bacteriófagos.
Neste estudo, os investigadores utilizaram células HT-29 para investigar as atividades probióticas das bactérias do ácido láctico. Curiosamente, o estudo indicou que as bactérias lactobacilos impedem a adesão de bactérias patogénicas às células do cólon.
Células HT-29 Recursos: Protocolos, Vídeos e Mais
Esta secção abordará alguns recursos online disponíveis sobre as células HT-29 que ajudarão a aprender os seus protocolos de manutenção, cultura e transfecção.
Protocolos de cultura celular
Os recursos a seguir irão orientá-lo sobre a subcultura de células HT-29.
- Cultivo de células HT-29: Esta ligação fornecerá conhecimentos básicos sobre o meio de crescimento, descongelamento e subcultura de células HT-29.
- Manutenção de culturas de HT-29: Este artigo contém todas as informações úteis sobre a cultura e manutenção de células HT-29.
Protocolos de transfecção
A linha celular HT-29 tem uma grande eficiência de transfecção e é frequentemente utilizada em estudos de expressão genética. Os recursos a seguir descrevem os possíveis protocolos de transfecção para estas células.
- Transfecção de HT-29: Este link do site contém o protocolo detalhado para a transfecção de células HT-29.
- Transfecção da linha celular HT-29: Este documento descreve o protocolo de transfecção da linha celular HT-29 com ADN plasmídeo.
Vídeos relacionados com a linha celular HT-29
Aqui estão alguns vídeos sobre a cultura e manutenção desta linha celular tumorigénica.
- Passagem de células: Este vídeo mostra o protocolo de passagem de células para linhas celulares aderentes.
- Transfecção de células HT-29: Este vídeo irá orientá-lo sobre o método de transfecção utilizado para as células HT-29.
Esperamos que as informações contidas neste artigo sejam úteis e suficientes para que possa lidar com o manuseamento e a manutenção da linha celular HT-29. Se pretender utilizar células HT-29 no seu estudo, encomende-as através de nós.
Referências
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles e I. Recio, Linha celular HT29. O Impacto dos Bioativos Alimentares na Saúde: modelos in vitro e ex vivo, 2015: p. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., o microRNA-193a-5p inibe a migração de células de cancro do cólon HT-29 humanas através da supressão da via de metástase. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean e R. Safaralizadeh, Avaliação do efeito anticancerígeno do extrato etanólico de Syzygium cumini na linha celular colorretal HT-29. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Propriedades probióticas dos lactobacilos e a sua capacidade de inibir a adesão de bactérias enteropatógenas às células Caco-2 e HT-29. Probióticos e proteínas antimicrobianas, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J., et al., Os bacteriófagos são mais virulentos para as bactérias em presença de células humanas do que em cultura bacteriana; conclusões a partir das células HT-29. Relatórios científicos, 2018. 8(1): p. 5091.