Linha celular HT-29

HT-29 é uma linha celular de cancro colorrectal humano com uma vasta gama de aplicações na investigação sobre cancro e toxicologia. Por exemplo, estas células são sensíveis a tratamentos quimioterapêuticos padrão contra o cancro colorrectal. Além disso, a linha celular HT-29 é um modelo in vitro bem caracterizado para investigar a resposta do epitélio intestinal à infeção bacteriana. As células HT-29 imitam as caraterísticas das células intestinais maduras, ou seja, os enterócitos, e, por conseguinte, são adequadas para estudos de ligação e mecanicismo.

Este artigo abordará todos os aspectos da linha celular HT-29 que é necessário conhecer antes de trabalhar com ela. Incluirá principalmente:

Células HT-29: Origem e informações gerais
Informações sobre a cultura de células da linha celular HT-29
Células HT-29: Vantagens e limitações
Células HT-29: Aplicações
Publicações de investigação sobre células HT-29
Recursos sobre células HT-29: Protocolos, vídeos e mais

1. Células HT-29: Origem e informações gerais

Antes de utilizar qualquer linha celular, deve conhecer as caraterísticas gerais e a origem da linha celular. Esta secção ajudá-lo-á a aprender: O que são as células HT-29? A HT-29 é uma linha celular de cancro colorrectal? Qual é a morfologia das células HT-29?

O que é a linha celular HT-29? A HT-29 é uma linha celular de adenocarcinoma colorrectal criada em 1964 por Trempe e Fogh. As células foram originalmente derivadas do tumor primário de uma mulher caucasiana (44 anos de idade) com adenocarcinoma colorrectal [1]. Desde a sua criação, esta linha celular tem sido utilizada para estudar a biologia dos cancros.

Morfologia das células HT-29: A linha celular HT-29 tem geralmente uma morfologia de tipo epitelial. As células diferenciadas crescem em monocamadas, formam junções apertadas célula-célula e possuem um bordo apical em escova. Se estas células forem cultivadas em meio deficiente em glucose ou se lhes forem administrados indutores como butirato ou ácido, apresentam caraterísticas semelhantes às dos enterócitos.

Tamanho das células: O diâmetro da linha celular de cancro colorrectal HT-29 é de 11 μm.

Genoma e ploidia: O número modal de cromossomas para a linha celular HT-29 é 71. Pode variar entre 68 e 72. Além disso, o número cromossómico simplificado para as células HT-29 é hiper-triploide, com o componente 2S a ocorrer a uma taxa de 2,4 %.

O que é o HT29 MTX? HT29 MTX é uma linha celular resistente ao metotrexato isolada da linha celular original de cancro do cólon humano HT-29 por adaptação a 10 µM de metotrexato. Estas células apresentam caraterísticas de células caliciformes maduras secretoras de muco.

Divisão e movimento das células cancerosas colorrectais ao microscópio.

2. Informações sobre a cultura de células da linha celular HT-29

Conhecer os requisitos básicos de cultura de uma linha celular pode facilitar o seu trabalho com ela. Deve saber: qual é o tempo de duplicação da linha celular HT-29? Qual é a densidade de sementeira das células HT-29? Quais os meios para as células HT-29?

Tempo de duplicação	O tempo médio de duplicação para a linha de células HT-29 é de 24 horas.
Aderente/suspensão	A HT-29 é uma linha celular aderente.
Densidade de sementeira	A densidade de sementeira recomendada para as células HT-29 é de 3 x¹⁰⁴ ^células/cm2. As células cultivadas são lavadas com 1 X PBS e destacadas após incubação com Accutase durante 8-10 minutos. Adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas. O pellet de células é ressuspendido e as células são distribuídas em novos frascos com a densidade celular recomendada.
Meio de crescimento	O Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) suplementado com 2,5 mM de L-glutamina e 10 % de FBS é utilizado para uma cultura óptima de células HT-29. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento	As células HT-29 necessitam de uma incubadora humificada com 37°C de temperatura e 5 % de_CO2 para crescerem.
Armazenamento	Estas células são armazenadas na fase de vapor do azoto líquido a uma temperatura inferior a -195°C.
Meio e processo de congelação	O meio de congelação utilizado para a linha celular HT-29 é o CM-1 ou CM-ACF. As células são congeladas através de um processo de congelação lenta que provoca uma queda de 1 °C na temperatura e protege eficazmente a viabilidade das células.
Processo de descongelação	As células HT-29 congeladas são descongeladas num banho de água a uma temperatura de 37°C. Estas células podem ser ressuspensas e diretamente distribuídas para o frasco de meio de crescimento fresco. Pelo contrário, as células descongeladas podem ser centrifugadas para remover os elementos do meio de congelação, ressuspendidas em meio fresco e cultivadas em frascos.
Nível de segurança biológica	O nível de biossegurança 1 é utilizado para manusear e manter a linha de células HT-29.

Células HT-29 com ampliação de 10x e 20x.

3. Células HT-29: Vantagens e limitações

Cada linha celular tem vantagens e desvantagens únicas que a distinguem de outras linhas celulares. Esta secção abordará as principais vantagens e limitações associadas às células HT-29.

Vantagens

As principais vantagens das células HT-29 são

Fácil de cultivar
A linha celular HT-29 é fácil de manusear e manter, sem requisitos complexos para a cultura. É amplamente cultivada em laboratórios de investigação.
Modelo in vitro de células intestinais
As células HT-29 podem diferenciar-se em células intestinais maduras (enterócitos e células produtoras de muco) em condições de cultura específicas. São utilizadas como modelo celular para estudar a digestão e a biodisponibilidade dos alimentos.
Elevada eficiência de transfecção
As células de cancro do cólon HT-29 apresentam uma elevada eficiência de transfecção, o que as torna adequadas para estudos de expressão e regulação de genes. Podem ser realizadas experiências de transfecção transiente e estável utilizando vários métodos.
Sensibilidade aos fármacos
As células HT-29 são sensíveis a fármacos quimioterapêuticos como o fluorouracilo e a oxaliplatina, normalmente utilizados no tratamento do cancro do cólon. São utilizadas para estudar a resistência aos fármacos e para selecionar potenciais fármacos terapêuticos para o carcinoma colorrectal.

Limitações

Heterogeneidade
As células HT-29, tal como outras linhas celulares de cancro, apresentam heterogeneidade e podem não formar uma população celular uniforme. Este facto pode afetar a reprodutibilidade dos resultados em determinados ensaios e conduzir a pequenas variações nos resultados experimentais.
Diferenciação limitada
As células HT-29 têm um potencial de diferenciação limitado. Não se diferenciam totalmente em células intestinais ou do cólon, mas apresentam apenas algumas caraterísticas. Esta limitação pode restringir a sua utilização no estudo de processos biológicos mais complexos.

4. células HT-29: Aplicações

A linha celular HT-29 é amplamente cultivada em laboratórios de investigação devido à sua vasta gama de aplicações. Esta secção abordará apenas algumas aplicações importantes das células HT-29.

Investigação do cancro: A HT-29 é uma linha celular de adenocarcinoma colorrectal, pelo que é utilizada para estudar a progressão e o desenvolvimento do cancro e os mecanismos moleculares subjacentes. Um estudo realizado em 2018 utilizou a linha celular HT-29 para investigar as moléculas celulares responsáveis pela metástase. Este estudo observou que os genes vimentina e CXCR4 regulam a metástase celular. Considerando que a transfecção do mímico microRNA-193a-5p pode reduzir os níveis de mRNA desses genes e diminuir com sucesso a metástase das células cancerígenas [2].

Investigação toxicológica: A linha celular HT-29 é amplamente utilizada na investigação toxicológica. Estas células de carcinoma colorrectal são utilizadas para avaliar a toxicidade de diferentes candidatos a fármacos através de diferentes ensaios. Por exemplo, um estudo explorou o potencial de toxicidade de um extrato etanólico da planta Syzygium cumini na linha celular HT-29. Os resultados mostraram uma supressão significativa do crescimento das células HT-29, indicando as propriedades anti-cancerígenas promissoras do extrato [3].

Microbiologia: A HT-29 pode ser utilizada como um sistema de células hospedeiras para investigar a patogénese de micróbios potenciais, ou seja, bactérias e vírus. Os investigadores podem infetar as células HT-29 com micróbios para investigar a sua virulência e a resposta do hospedeiro. Um estudo deste tipo utilizou células HT-29 para explorar as propriedades probióticas das bactérias do ácido lático [4]. Outro estudo utilizou células HT-29 para avaliar a eficácia e a segurança de tratamentos com bacteriófagos [5].

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5. Publicações de investigação sobre células HT-29

Esta secção apresenta algumas publicações importantes sobre as células HT-29 que o ajudarão a conceber o seu estudo de investigação.

Avaliação do efeito anti-cancerígeno do extrato etanólico de Syzygium cumini na linha de células colorrectais HT-29

Este estudo propôs o extrato etanólico de Syzygium cumini como um potencial agente anti-cancerígeno contra a linha celular de cancro colorrectal HT-29. O extrato suprimiu significativamente o crescimento das células cancerosas.

A tetrandrina inibe o crescimento das células do carcinoma do cólon HT-29 através da via Bcl-2/Caspase 3/PARP e da fase G1/S

Esta publicação na Bioscience Reports testou a atividade anticancerígena de um composto, a tetradrina, em células HT-29. Os resultados revelaram que a tetradrina inibe a proliferação e o crescimento das células cancerígenas através da regulação das vias de sinalização celular.

o microRNA-193a-5p inibe a migração de células humanas de cancro do cólon HT-29 através da supressão da via de metástases

Este estudo propôs que o miRNA-193a-5p pode potencialmente regular a metástase das células HT-29 através da regulação de genes relacionados com a metástase.

Os bacteriófagos são mais virulentos para as bactérias com células humanas do que em cultura bacteriana; perspectivas das células HT-29

Este artigo foi publicado na revista Nature Scientific Reports em 2018. Este estudo utilizou a linha celular tumorigénica HT-29 como modelo celular intestinal para avaliar a eficácia do tratamento bacteriófago proposto.

Propriedades probióticas dos lactobacilos e sua capacidade de inibir a adesão de bactérias enteropatogénicas às células Caco-2 e HT-29

Neste estudo, os investigadores utilizaram células HT-29 para investigar as actividades probióticas das bactérias do ácido lático. Curiosamente, o estudo indicou que as bactérias lactobacilos impedem a adesão de bactérias patogénicas às células do cólon.

6. Recursos das células HT-29: Protocolos, vídeos e mais

Esta secção abordará alguns recursos online disponíveis sobre as células HT-29 que ajudarão a aprender os seus protocolos de manutenção, cultura e transfecção.

Protocolos de cultura de células

Os seguintes recursos irão orientá-lo sobre a subcultura de células HT-29.

Cultura de células HT-29: Esta ligação fornecerá conhecimentos básicos sobre o meio de crescimento, descongelação e subcultura de células HT-29.
Manutenção de culturas de células HT-29: Este artigo contém todas as informações úteis sobre a cultura e manutenção de células HT-29.

Protocolos de transfecção

A linha celular HT-29 tem uma grande eficiência de transfecção e é frequentemente utilizada em estudos de expressão genética. Os seguintes recursos descrevem os possíveis protocolos de transfecção para estas células.

Transfecção de HT-29: Esta ligação do sítio Web contém o protocolo detalhado para a transfecção de células HT-29.
Transfecção da linha celular HT-29: Este documento descreve o protocolo de transfecção da linha celular HT-29 com ADN plasmídico.

Vídeos relacionados com a linha celular HT-29

Aqui estão alguns vídeos sobre a cultura e a manutenção desta linha celular tumorigénica.

Passagem de células: Este vídeo mostra o protocolo de passagem de células para linhas celulares aderentes.
Transfecção de células HT-29: Este vídeo irá guiá-lo relativamente ao método de transfecção utilizado para as células HT-29.

Esperamos que a informação contida neste artigo seja valiosa e suficiente para o manuseamento e manutenção da linha de células HT-29. Se planeia utilizar células HT-29 no seu estudo, encomende-nos.

Referências

Martínez-Maqueda, D., B. Miralles, e I. Recio, linha celular HT29. O impacto dos bioactivos alimentares na saúde: modelos in vitro e ex vivo, 2015: p. 113-124.
Shirafkan, N., et al., microRNA-193a-5p inibe a migração de células humanas de câncer de cólon HT-29 via supressão da via de metástase. Jornal de bioquímica celular, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
Khodavirdipour, A., R. Zarean e R. Safaralizadeh, Avaliação do efeito anticancerígeno do extrato etanólico de Syzygium cumini na linha de células colorretais HT-29. Jornal do cancro gastrointestinal, 2021. 52: p. 575-581.
Fonseca, H.C., et al., Probiotic properties of lactobacilli and their ability to inhibit the adhesion of enteropathogenic bacteria to Caco-2 and HT-29 cells. Probióticos e proteínas antimicrobianas, 2021. 13: p. 102-112.
Shan, J., et al., Bacteriófagos são mais virulentos para bactérias com células humanas do que em cultura bacteriana; insights de células HT-29. Relatórios científicos, 2018. 8(1): p. 5091.