Células HK-2 - Análise da função e da patologia renal com células HK-2 na investigação renal
A HK-2 é uma linha celular epitelial renal humana imortalizada, frequentemente utilizada na investigação toxicológica. Os investigadores avaliam os efeitos das toxinas ambientais nestas células renais. Além disso, também utilizam células HK-2 para investigar doenças renais e os seus mecanismos subjacentes.
- Meio de crescimento
- O meio ideal para as células HK-2 é um meio para linhas celulares de queratinócitos contendo 10% de soro fetal bovino, 0,05 mg/ml de extrato hipofisário bovino (BPE) e 5 ng/ml de fator de crescimento epidérmico (EGF). O meio deve ser substituído a cada 2 a 3 dias por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células HK-2 varia entre 47,3 h e 61,7 h.
- Tipo de crescimento
- A linha celular epitelial renal HK-2 é aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-2
- Disponível em
- Cytion — Encomendar HK-2
- Células HK-2: Origem e características gerais
- Linha celular HK-2: Informações sobre cultura
- Vantagens e limitações das células HK-2
- Aplicações da linha celular HK-2 na investigação
- 5. Células HK-2: Publicações de investigação
- Recursos para a linha celular HK-2: Protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Células HK-2: Origem e características gerais
É fundamental conhecer a origem e as características gerais de uma linha celular para o manuseamento, manutenção e utilização adequados da mesma. Esta secção do artigo abordará o seguinte: O que são as células HK-2 do rim humano 2? Qual é o papel das células HK-2? O que são as células HK-2? Qual é a origem da linha celular HK-2? Quais são o tamanho e a morfologia das células HK-2?
- As células do rim humano 2 (HK-2) são um tipo de células tubulares proximais originárias do tecido renal normal de um adulto europeu. A linha celular HK-2 foi estabelecida através da transfecção de células renais com um retrovírus recombinante que compreende os genes E6/E7 do papilomavírus humano 16. Esta experiência provocou a imortalização e o estabelecimento de uma linha celular epitelial renal HK-2 em crescimento contínuo.
- As células HK-2 apresentam uma morfologia epitelial.
- O tamanho das células HK-2 varia entre 17,4 e 18,6 µm de diâmetro. O diâmetro médio é de 18,2 µm [1].
Linha celular HK-2: Informações sobre a cultura
As informações sobre a cultura da linha celular renal humana 2 podem ser de grande ajuda antes de começar a trabalhar com ela. As informações essenciais sobre a cultura de células HK-2 são mencionadas nesta secção do artigo. Ficará a saber: As células HK-2 são aderentes? Qual é o tempo de duplicação das células HK-2? Que meio é utilizado para cultivar células HK-2?
Pontos-chave para a cultura de células HK-2
Tempo de duplicação da população:
O tempo de duplicação das células HK-2 varia entre 47,3 h e 61,7 h.
Adesivas ou em suspensão:
A linha celular epitelial renal HK-2 é aderente.
Rácio de subcultivo:
As células HK-2 são subcultivadas numa proporção de 1:2 a 1:4. As células HK-2 aderentes são lavadas com PBS 1x e incubadas à temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos após a adição da solução de Accutase. O meio de cultura é adicionado às células dissociadas e centrifugado. As células recolhidas são cuidadosamente ressuspensas e transferidas para novos frascos para cultura.
Meio de crescimento:
O meio para linhas celulares de queratinócitos contendo 10% de soro fetal bovino, 0,05 mg/ml de extrato hipofisário bovino (BPE) e 5 ng/ml de fator de crescimento epidérmico (EGF) é o meio ideal para as células HK-2. O meio deve ser substituído a cada 2 a 3 dias por semana.
Condições de crescimento:
As culturas da linha celular renal humana 2 são mantidas numa incubadora humidificada com um fornecimento de 5% de CO₂ a 37 °C.
Armazenamento:
As células congeladas são armazenadas na fase de vapor de nitrogénio líquido ou a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador de temperatura ultrabaixa.
Processo de congelação e meio:
Os meios de congelamento CM-1 ou CM-ACF são ideais para o congelamento de células HK-2. Resumidamente, opta-se por um método de congelamento lento, permitindo apenas uma descida de 1 grau Celsius por minuto na temperatura e protegendo as células de qualquer choque.
Processo de descongelação:
As células congeladas são descongeladas num banho-maria a uma temperatura de 37 graus Celsius. A estas células são adicionados meios de cultura frescos e são ressuspensas. Posteriormente, as células são transferidas para um novo frasco contendo meio de crescimento. Após 24 horas, o meio é substituído para remover os componentes do meio de congelamento.
Nível de biossegurança:
As culturas de células HK-2 são mantidas em laboratórios de nível de biossegurança 1.
Vantagens e limitações das células HK-2
A HK-2 é uma linha celular epitelial do túbulo proximal humano amplamente utilizada. Tal como outras linhas celulares, também está associada a algumas vantagens e limitações. Esta secção irá discutir alguns dos principais prós e contras da linha celular renal humana 2.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular HK-2 incluem:
Bem caracterizada
A linha celular HK-2 está amplamente caracterizada em termos de morfologia, tamanho e genoma. Foram realizados inúmeros estudos de investigação sobre estas células renais normais.
Imortalizada
A HK-2 é uma linha celular contínua com uma vida útil prolongada, o que permite a sua propagação através de várias passagens. Esta característica garante um fornecimento contínuo de células para experiências laboratoriais.
Características epiteliais do túbulo proximal
As células HK-2 apresentam um fenótipo bem diferenciado, característico das células do túbulo proximal (PTCs) encontradas no rim humano. Esta característica única torna as células HK-2 um valioso modelo in vitro para o estudo da fisiologia renal, dos processos celulares e das respostas a vários estímulos.
Limitações
Eis algumas limitações da linha celular HK-2:
Modelo in vitro
A HK-2 serve como modelo in vitro de células renais normais, exibindo particularmente características das células epiteliais do túbulo proximal. No entanto, pode não replicar totalmente a complexidade do tecido renal humano e do microambiente encontrado in vivo.
Aplicações da linha celular HK-2 na investigação
A linha celular HK-2 tem inúmeras aplicações na investigação toxicológica. Aqui, discutimos algumas utilizações específicas e significativas desta linha celular tubular proximal humana na investigação.
- Fisiologia renal: As células HK-2 são frequentemente utilizadas para estudar a fisiologia e as funções renais normais. Os investigadores utilizam estas células epiteliais do túbulo proximal para investigar canais iônicos, processos de transporte e outros mecanismos celulares que regulam a homeostasia renal. Por exemplo, os investigadores estudaram o papel dos canais Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) na morte celular induzida pelo (+)-Conocarpan (CNCP), um neolignano, nas células epiteliais renais HK-2 [2].
- Doenças renais: A linha celular renal humana 2 é utilizada para investigar diferentes doenças renais, ou seja, lesão renal aguda e nefropatia diabética, bem como os seus mecanismos celulares e moleculares subjacentes. Por exemplo, a investigação descobriu que os níveis de metilação da proteína Klotho estão associados a danos renais. A diminuição da metilação do promotor do gene Klotho pode aumentar a sua expressão e aliviar os danos renais induzidos em modelos de ratos diabéticos db/db e em células HK-2 tratadas com glicose elevada [3].
- Estudos toxicológicos: As células HK-2 são uma excelente ferramenta de investigação para avaliar os efeitos potenciais de vários fármacos, produtos químicos e poluentes ambientais. Estes estudos podem ajudar os investigadores a avaliar a segurança dos medicamentos e os efeitos secundários nas células renais. Por exemplo, um estudo publicado em 2022 avaliou os efeitos potenciais dos polissacarídeos e do extrato aquoso da erva natural Polygonatum kingianum (PK) na nefrotoxicidade induzida pelo urânio em células HK-2. Concluiu-se que o PK exerce efeitos protetores e previne o envenenamento por urânio nas células renais [4].
5. Células HK-2: Publicações científicas
Seguem-se algumas publicações de investigação interessantes que abordam as células epiteliais renais HK-2.
Este estudo publicado na revista Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) propôs que o RNA circular HIPK3 pode diminuir a inibição da proliferação das células HK-2 causada pela toxicidade da hiperglicemia. Além disso, pode inibir a morte celular através da regulação da cascata miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Esta publicação de investigação na revista Nanomedicine (2020) avaliou diferentes mecanismos de toxicidade das nanopartículas de ouro (AuNPs) em células cancerígenas 786-0 e em células epiteliais do túbulo proximal HK-2.
Este artigo foi publicado na revista Renal Failure (2022). Os resultados indicam que o microRNA-320c pode reduzir a toxicidade induzida por níveis elevados de glicose nas células renais (HK-2), atuando sobre o PTEN e inibindo a via de sinalização PI3K/AKT.
Este estudo publicado na revista Tissue Engineering Part A (2022) propôs que os exossomas derivados de células estaminais mesenquimais impedem a transição epitelial-mesenquimal das células renais HK-2.
O artigo publicado no Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) afirma que o lncRNA TapSAKI potencia a resposta inflamatória e a morte celular das células HK-2 através da regulação da via de sinalização microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
Recursos para a linha celular HK-2: protocolos, vídeos e muito mais
A HK-2 é uma linha celular famosa. Aqui estão alguns recursos que descrevem o protocolo de cultura celular da HK-2.
- Cultura celular HK-2: Este site contém informações detalhadas sobre a cultura celular HK-2. Por exemplo, fornece a receita do meio de cultura HK-2, o protocolo de passagem e o protocolo para o manuseamento e manutenção de culturas proliferativas e criopreservadas.
- Passagem de células: Este vídeo irá ajudá-lo a aprender um protocolo geral de divisão ou passagem para linhas celulares aderentes.
Referências
- Handl, J., et al., O efeito do repasse repetido na suscetibilidade das células HK-2 do túbulo proximal humano a compostos tóxicos. Physiological Research, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., A ativação dos canais TRPC6 contribui para a morte celular apoptótica induzida pelo (+)-conocarpano em células HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., O EGCG atenua os danos renais através da reversão da hipermetilação de klotho em ratos diabéticos db/db e células HK-2. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Efeitos protetores dos polissacarídeos e do extrato aquoso de Polygonatum kingianum na toxicidade induzida pelo urânio em células renais humanas (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.