Células HK-2 - Investigando a função e a patologia dos rins com células HK-2 na pesquisa renal
HK-2 é uma linhagem de células epiteliais renais humanas imortalizadas, normalmente utilizada na investigação toxicológica. Os investigadores avaliam os efeitos das toxinas ambientais nestas células renais. Além disso, também utilizam células HK-2 para investigar doenças renais e os seus mecanismos subjacentes.
Este artigo explica quase todas as informações essenciais sobre as células HK-2, incluindo as suas caraterísticas gerais, condições de cultura celular, aplicações de investigação e muito mais. Ficará a saber o seguinte:
- Células HK-2: Origem e caraterísticas gerais
- Linha celular HK-2: Informações sobre a cultura
- Vantagens e limitações das células HK-2
- Aplicações da linha celular HK-2 na investigação
- Células HK-2: Publicações de investigação
- Recursos para a linha de células HK-2: Protocolos, vídeos e muito mais
1.células HK-2: Origem e caraterísticas gerais
É imperativo conhecer a origem e as caraterísticas gerais de uma linha celular para um manuseamento, manutenção e utilização adequados da mesma. Esta secção do artigo abordará o seguinte: O que são as células HK-2 do rim humano 2? Qual é o papel das HK2? O que são células HK2? Qual é a origem da linha celular HK-2? Qual é o tamanho e a morfologia das células HK-2?
- As células Human Kidney 2 (HK-2) são um tipo de células tubulares proximais provenientes do tecido renal normal de um adulto europeu. A linha celular HK-2 foi estabelecida através da transfecção de células renais com um retrovírus recombinante que inclui os genes E6/E7 do papilomavírus humano 16. Esta experiência provocou a imortalização e o estabelecimento de uma linha de células epiteliais renais HK-2 de crescimento contínuo.
- As células HK-2 exibem uma morfologia epitelial.
- O tamanho das células HK-2 varia entre 17,4 e 18,6 µm de diâmetro. O diâmetro médio é de 18,2 µm [1].
2.linha celular HK-2: Informações sobre a cultura
A informação sobre a cultura da linha celular HK-2 pode ajudá-lo significativamente antes de trabalhar com ela. Nesta secção do artigo são mencionadas informações importantes sobre a cultura de células HK-2. Ficará a saber: As células HK-2 são aderentes? Qual é o tempo de duplicação das células HK-2? Que meio é utilizado para cultivar células HK-2?
Pontos-chave para a cultura de células HK-2
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Tempo de duplicação da população: |
O tempo de duplicação das células HK-2 varia entre 47,3 h e 61,7 h. |
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Aderentes ou em suspensão: |
A linha de células epiteliais renais HK-2 é aderente. |
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Rácio de subcultura: |
As células HK-2 são subcultivadas numa proporção de 1:2 a 1:4. As células HK-2 aderentes são lavadas com 1 x PBS e incubadas à temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos após a adição da solução de Accutase. O meio de cultura é adicionado às células dissociadas e centrifugado. As células recolhidas são cuidadosamente ressuspensas e colocadas em novos frascos para cultura. |
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Meio de cultura: |
O meio de cultura ideal para as células HK-2 é o meio de cultura da linha celular de queratinócitos que contém 10% de soro fetal bovino, 0,05 mg/ml de extrato de pituitária bovina (BPE) e 5 ng/ml de fator de crescimento epidérmico (EGF). O meio deve ser substituído a cada 2 a 3 dias por semana. |
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Condições de crescimento: |
As culturas da linha celular Human kidney 2 são mantidas numa incubadora humidificada com um fornecimento de 5% de CO2 a 37°C. |
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Armazenamento: |
As células congeladas são armazenadas na fase de vapor do azoto líquido ou a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador de temperatura ultra baixa. |
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Processo e meio de congelação: |
Os meios de congelação CM-1 ou CM-ACF são ideais para a congelação de células HK-2. Resumidamente, opta-se por um método de congelação lenta que permite uma queda de temperatura de apenas 1 grau Celsius por minuto e protege as células de qualquer choque. |
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Processo de descongelação: |
As células congeladas são descongeladas num banho de água a uma temperatura de 37 graus Celsius. Estas células são adicionadas a meios de cultura frescos e ressuspendidas. Em seguida, as células são colocadas num novo frasco com meio de cultura. Após 24 horas, o meio é substituído para remover os componentes do meio de congelação. |
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Nível de biossegurança: |
As culturas de células HK-2 são mantidas em laboratórios de nível de biossegurança 1. |
3.vantagens e limitações das células HK-2
A HK-2 é uma linha de células epiteliais do túbulo proximal humano muito utilizada. Tal como outras linhas celulares, também está associada a algumas vantagens e limitações. Nesta secção serão discutidos alguns dos principais prós e contras da linha celular de rim humano 2.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular HK-2 incluem
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Bem caracterizada |
A linha celular HK-2 está amplamente caracterizada em termos da sua morfologia, tamanho e genoma. Foram efectuados numerosos estudos de investigação sobre estas células renais normais. |
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Imortalizada |
A HK-2 é uma linha celular contínua com um tempo de vida alargado, permitindo a sua propagação através de várias passagens. Esta caraterística assegura um fornecimento contínuo de células para experiências laboratoriais. |
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Caraterísticas epiteliais do túbulo proximal |
As células HK-2 apresentam um fenótipo bem diferenciado, caraterístico das células dos túbulos proximais (PTCs) encontradas no rim humano. Esta caraterística única faz das células HK-2 um modelo in vitro valioso para estudar a fisiologia renal, os processos celulares e as respostas a vários estímulos. |
Limitações
Seguem-se algumas limitações da linha celular HK-2:
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Modelo in vitro |
A linha HK-2 serve de modelo in vitro de células renais normais, exibindo particularmente caraterísticas de células epiteliais do túbulo proximal. No entanto, pode não reproduzir totalmente a complexidade do tecido renal humano e o microambiente encontrado in vivo. |
4.aplicações da linha celular HK-2 na investigação
A linha celular HK-2 tem inúmeras aplicações na investigação toxicológica. Neste ponto, discutimos algumas utilizações específicas e significativas desta linha celular tubular proximal humana na investigação.
- Fisiologia renal: As células HK-2 são normalmente utilizadas para estudar a fisiologia e as funções renais normais. Os investigadores utilizam estas células epiteliais do túbulo proximal para investigar os canais iónicos, os processos de transporte e outros mecanismos celulares que regulam a homeostasia renal. Por exemplo, os investigadores estudaram o papel dos canais Transient Recetor Potential Channel 6 (TRPC6) na morte celular induzida por (+)-Conocarpan (CNCP), um neolignano, em células epiteliais renais, HK-2 [2].
- Doenças renais: A linha celular de rim humano 2 é utilizada para investigar diferentes doenças renais, ou seja, lesão renal aguda e nefropatia diabética, e os seus mecanismos celulares e moleculares subjacentes. A investigação descobriu, por exemplo, que os níveis de metilação da proteína klotho estão associados a lesões renais. A diminuição da metilação do promotor do gene Klotho pode aumentar a sua expressão e aliviar os danos renais induzidos em modelos de ratinhos diabéticos db/db e células HK-2 tratadas com glucose elevada [3].
- Estudos toxicológicos: As células HK-2 são uma óptima ferramenta de investigação para avaliar os efeitos potenciais de vários medicamentos, produtos químicos e poluentes ambientais. Os estudos podem ajudar os investigadores a avaliar a segurança dos medicamentos e os efeitos secundários nas células renais. Por exemplo, um estudo publicado em 2022 avaliou os efeitos potenciais dos polissacáridos e do extrato aquoso de uma erva natural Polygonatumkingianum (PK) na nefrotoxicidade induzida pelo urânio em células HK-2. Verificaram que a PK exerce efeitos protectores e previne o envenenamento por urânio nas células renais [4].
5.células HK-2: Publicações de investigação
Seguem-se algumas publicações de investigação interessantes sobre as células epiteliais renais HK-2.
Este estudo em Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) propôs que o ARN circular HIPK3 pode diminuir a inibição da proliferação das células HK-2 causada pela toxicidade da glucose elevada. Além disso, pode inibir a morte celular através da regulação da cascata miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Esta publicação de investigação em Nanomedicina (2020) avaliou diferentes mecanismos de toxicidade das nanopartículas de ouro (AuNPs) em células cancerígenas 786-0 e células epiteliais do túbulo proximal HK-2.
Este artigo foi publicado na Renal Failure (2022). Os resultados afirmam que o microRNA-320c pode reduzir a toxicidade induzida pela glicose elevada em células renais (HK-2), tendo como alvo o PTEN e inibindo a sinalização PI3K/AKT.
Este estudo na Tissue Engineering Part A (2022) propôs que os exossomas derivados de células estaminais mesenquimais impedem a transição epitelial para mesenquimal das células renais HK-2.
O artigo do Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) afirma que o lncRNA TapSAKI aumenta a resposta à inflamação HK-2 e a morte celular, regulando a via de sinalização microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
6.recursos para a linha de células HK-2: Protocolos, vídeos e muito mais
HK-2 é uma linha celular famosa. Aqui estão alguns recursos que descrevem o protocolo de cultura de células HK-2.
- Cultura de células HK-2: Este sítio Web está repleto de informações sobre a cultura de células HK-2. Por exemplo, fornece a receita do meio de cultura de células HK-2, o protocolo de passagem e o protocolo de manuseamento e manutenção de culturas proliferativas e criopreservadas.
- Passagem de células: Este vídeo ajudá-lo-á a aprender um protocolo geral de divisão ou de passagem para linhas celulares aderentes.
Referências
- Handl, J., et al., The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds. Investigação Fisiológica, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., A ativação dos canais TRPC6 contribui para a morte celular apoptótica induzida por (+) -conocarpan em células HK-2. Toxicologia alimentar e química, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., EGCG atenua o dano renal através da reversão da hipermetilação de klotho em camundongos diabéticos db / db e células HK-2. Medicina Oxidativa e Longevidade Celular, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Efeitos protectores dos polissacáridos e do extrato aquoso de Polygonatum kingianum na toxicidade induzida pelo urânio em células renais humanas (HK-2). Jornal Internacional de Macromoléculas Biológicas, 2022. 202: p. 68-79.