Células HEK293T: Desbloquear o potencial em estudos de transfecção
As células HEK293T são células renais embrionárias humanas amplamente aplicadas na biotecnologia industrial, toxicologia e investigação do cancro. Estas células imortalizadas são também utilizadas para produzir uma variedade de proteínas e vírus terapêuticos.
Caraterísticas gerais e origem das células HEK293T
Esta secção do artigo abordará a origem e informações gerais sobre a linha de células HEK293T.
- A linha de células HEK293T teve origem em células primárias de rim embrionário humano cultivadas em laboratório. Os investigadores desenvolveram estas células no início da década de 1970 através da transfecção de células renais embrionárias com fragmentos de ADN do adenovírus tipo 5. Os investigadores criaram a linha celular HEK293T introduzindo o antigénio T grande do vírus símio 40 (SV40) no genoma das células HEK293. Esta modificação permitiu aos investigadores transfectar facilmente as células 293 e tornou-as adequadas para a produção de proteínas e estudos de expressão genética [1].
- As células HEK293T possuem uma morfologia de tipo epitelial. Apresentam uma forma alongada e achatada com um limite celular definido.
- O tamanho das células HEK293T varia entre 11 e 15 µm de diâmetro.
- As células HEK293T com antigénio SV40 large-t possuem um cariótipo complexo. Estas células são hipotriplóides, contendo 3 vezes menos cromossomas do que um gâmeta haploide, e possuem um número modal de cromossomas de 64.
Qual é a diferença entre HEK293T e HEK293?
Ambas as linhas celulares HEK293 e HEK293T são de origem humana. A HEK293T é um derivado popular da linha de células HEK293. Os cientistas desenvolveram estas células a partir das células 293 originais de rim embrionário humano, transfectando-as com o antigénio SV40 large T, enquanto que estabeleceram as células HEK293 imortalizadas através da transformação e cultura de células de rim embrionário humano com fragmentos de ADN de adenovírus humano 5 cortados.
Tecnologias celulares e aplicações biomédicas das células HEK293T
Cultura de células e bancos na investigação com HEK293T
As células HEK293T, que derivam das células 293 do rim embrionário humano, são amplamente utilizadas na cultura celular devido ao seu crescimento robusto e facilidade de transfecção. Para trabalhar com estas células, os investigadores devem dar prioridade ao banco de células, que envolve o armazenamento de células para investigação alargada e utilização terapêutica. A geração de bancos de células requer a adesão a regulamentos de boas práticas de fabrico para garantir a viabilidade e a integridade das células para aplicações terapêuticas.
As boas práticas de fabrico são cruciais na produção de bancos de células HEK293T, que são fundamentais tanto para a investigação como para aplicações terapêuticas. O banco de células principal serve de ponto de referência para todos os produtos celulares subsequentes. O fabrico destas células para aplicações terapêuticas, como a produção de lentivirais para terapias genéticas, segue normas regulamentares rigorosas para garantir a segurança e a eficácia dos produtos finais.
Protocolos e ensaios com HEK293T
Em citotecnologia, são concebidos protocolos e ensaios específicos para avaliar as propriedades das células HEK293T. Estes incluem a avaliação da eficácia dos vectores de terapia genética e a interação da célula com a matriz extracelular numa placa ou numa cultura em suspensão. Para manter a integridade das células HEK293T, os investigadores escolhem com precisão os reagentes para transfecção e submetem as matérias-primas a rigorosos testes de controlo de qualidade.
Aplicações de investigação da linha de células HEK293T
- Desenvolvimento de vacinas: A linha celularHEK293T tem sido utilizada para estudar vírus e produzir vacinas baseadas em vectores virais para combater uma variedade de infecções virais. Um estudo utilizou esta linha celular de rim embrionário para investigar a base estrutural e funcional da entrada de células do vírus COVID-19 através da enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2) humana [3]. Além disso, um estudo recente utilizou células HEK93T para gerar partículas de lentivírus com pseudotipo de pico SARS-CoV-2 [4].
- Investigação toxicológica: Esta linha celular de rim embrionário humano é amplamente utilizada para testar a toxicidade e a eficácia dos medicamentos. Uma investigação realizada em 2022 utilizou a HEK293T como uma linha celular humana normal para validar o potencial citotóxico dos extractos de Caladium lindenii contra a linha celular de cancro do fígado HepG2 [5].
- Estudos de expressão génica: A linha de células HEK293T do antigénio SV40 large T é altamente passível de transfecção, sendo assim adequada para estudos de expressão genética. Um estudo utilizou células HEK293T para estudar o papel do RNA longo não-codificante SNHG16 na regulação das funções do trofoblasto. O estudo revelou que o LncRNA SNHG16 interage com o eixo miR-218-5p/LASP1 para mediar estes efeitos [6].
Inovações na terapia celular com células HEK293T
Avanços na terapia celular com células HEK293T
As células HEK293T contribuem significativamente para o panorama da terapia celular, especialmente na geração de vectores virais para terapia genética. Estas células são essenciais nos processos de fabrico que cumprem os regulamentos de boas práticas de fabrico, uma vez que asseguram a produção de produtos de terapia genética de elevada qualidade. A formação do pessoal de fabrico também se centra no manuseamento das propriedades únicas das células HEK293T e na manutenção de um elevado padrão para os medicamentos derivados destas células.
Células HEK293T em Ensaios Clínicos e Terapia Génica
A linha de células HEK293T desempenha um papel fundamental no desenvolvimento de produtos de terapia génica e é parte integrante dos ensaios clínicos destinados a introduzir novas terapias celulares no mercado. Isto implica tirar partido da elevada transfectividade da linha celular para a entrega de genes, utilizando vectores como os vectores de empacotamento lentiviral, em que a mutação D64V da integrase tem sido um avanço notável para aumentar a segurança.
Técnicas inovadoras na cultura de células HEK293T
A versatilidade das células HEK293T suporta técnicas inovadoras em culturas de células bidimensionais e de dimensões mais complexas. Esta adaptabilidade é fundamental na exploração de produtos celulares para vários tipos de investigação biomédica, incluindo a investigação do cancro, em que estas células são utilizadas para estudar processos tumorigénicos e testes de medicamentos. Além disso, a linha HEK293T é fundamental para a produção de partículas lentivirais, que são críticas tanto para a investigação como para os processos de fabrico de vectores terapêuticos.
Comprar células HEK293 para a sua investigação
Eleve a sua investigação com as nossas células HEK293, conhecidas pela sua adaptabilidade em estudos de expressão genética e produção de vacinas. As nossas ofertas incluem derivados versáteis, tais como HEK293T, a linha HEK293 adaptada à suspensão, HEK293T/17, AAV-293 e 2V6.11. Explore a nossa vasta seleção para apoiar e fazer avançar o seu trabalho experimental.
Informações de cultura para a linha de células HEK293T
As células HEK293T são amplamente cultivadas em laboratórios de investigação. Antes de desenvolver a cultura de células HEK293T, é necessário saber: Qual é o tempo de duplicação das células HEK293T? O que é o meio HEK293T? Qual é a densidade de sementeira das células HEK293T?
Pontos-chave para a cultura de células HEK293T
|
Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação registado para as células HEK293T é de 30 horas. |
|
Aderente ou em suspensão: |
A HEK293T é uma linha celular aderente. |
|
Densidade de sementeira: |
As células HEK293T são semeadas a uma densidade de 1 x104 células/cm2. Com esta densidade de sementeira, as células podem formar uma monocamada confluente em aproximadamente 4 dias. Para a sementeira, as células aderentes são destacadas utilizando a solução de dissociação de accutase. As células destacadas são centrifugadas e depois cuidadosamente ressuspendidas utilizando um meio de crescimento. Em seguida, as células são distribuídas em novos frascos para cultura. |
|
Meio de cultura: |
As células HEK293T são cultivadas em EMEM (meio essencial mínimo de Eagle) contendo 1,0 g/L de L-glucose, 2,2 g/L de NaHCO3, 2,0 mM de L-glutamina e 10% de soro fetal bovino. O meio deve ser substituído duas vezes por semana. |
|
Condições de crescimento: |
As culturas de células HEK293T são mantidas numa incubadora humidificada a 37°C com um fornecimento de 5% de CO2. |
|
Armazenamento: |
As células HEK293T de rim embrionário humano são armazenadas na fase de vapor do azoto líquido ou a uma temperatura inferior a -150°C durante mais tempo. |
|
Processo de congelação e meio: |
As células HEK293 podem ser congeladas em meios de congelação CM-1 ou CM-ACF. Para proteger a viabilidade das células HEK293T, recomendam-se processos de congelação lentos que permitam uma descida gradual da temperatura de 1°C. |
|
Processo de descongelação: |
Um frasco de células congeladas é rapidamente agitado num banho de água (37°C) até que reste um pequeno aglomerado de gelo. As células são ressuspensas no meio e centrifugadas para eliminar os componentes do meio de congelação. As células recuperadas são então cultivadas em novos frascos com meio de crescimento. |
|
Nível de Biossegurança: |
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear e manter culturas de células HEK293T. |
Linha celular HEK293T: Vantagens e limitações
Uma combinação única de vantagens e limitações está associada às células 293T de rim embrionário humano. Aqui, vamos analisar algumas das principais vantagens e desvantagens desta linha celular.
Prós e contras das células HEK293T
As vantagens significativas das células HEK293T incluem a sua elevada transfectividade, em que a linha celular apresenta uma eficiência notável na absorção de ADN estranho e na produção de proteínas abundantes. Esta qualidade torna-as amplamente favorecidas para estudos de transfecção transitória e estável. Além disso, as culturas de células HEK293T são conhecidas pela sua facilidade de manutenção, tornando-as uma excelente escolha para várias experiências laboratoriais devido à sua robustez e requisitos de manuseamento simples.
No entanto, existem limitações associadas às culturas de células HEK293T. Uma das principais preocupações é o risco de contaminação microbiana, que pode afetar significativamente a morfologia celular, a expressão genética e outras caraterísticas críticas, conduzindo potencialmente a resultados experimentais imprecisos. Além disso, embora as células HEK293T sejam adequadas para experiências a longo prazo, períodos de cultura prolongados podem comprometer a saúde das células. Isto pode afetar a sua eficiência de transfecção e taxas de crescimento, razão pela qual é geralmente recomendado limitar o seu número de passagem a 20 ou menos para manter a integridade das células.
Perguntas frequentes sobre a cultura de células HEK293T e aplicações
Células HEK293T: Publicações de investigação
Nesta secção, mencionamos algumas publicações de investigação promissoras que utilizam células HEK293T.
Esta publicação será publicada no BioRxiv em 2022. Este estudo utilizou células HEK293T para desenvolver vacinas de ARNm do vírus COVID-19 que codificam os domínios N-terminal do gene spike e RBD (domínio de ligação ao recetor).
O cancro da mama circular HER2 RNA positivo triplo negativo é sensível ao Pertuzumab
Esta investigação foi publicada na revista Molecular Cancer em 2020. O estudo propôs que a expressão circular do RNA HER2 em células de cancro da mama triplo-negativas torna-as sensíveis ao tratamento com o medicamento Pertuzumab. Os investigadores utilizaram células HEK293 para a produção de lentivírus e transfecção do gene circular HER2 neste estudo.
Papel antiviral do IFITM3 na infeção pelo protótipo do vírus foamy
Este artigo foi publicado no Virology Journal em 2022. Este estudo utilizou células HEK293T para investigar o efeito antiviral da IFITM3 (proteína transmembranar induzida por interferão 3) num protótipo de infeção por vírus espumoso (PFV).
Este trabalho de investigação na Nature Scientific Reports (2017) utilizou células HEK293T e estudou que o miRNA-21 medeia os efeitos antiangiogénicos induzidos pela metformina através da regulação da via de sinalização PI3K/AKT e da expressão dos genes SMAD7 e PTEN.
O microRNA-608 inibe a proliferação do cancro da bexiga através da via de sinalização AKT/FOXO3a
Esta investigação foi publicada na revista Molecular Cancer em 2017. Este estudo utilizou células HEK293 para investigar o potencial antiproliferativo do miRNA-608 contra o cancro da bexiga.
Recursos para a linha de células HEK293T: Protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos sobre as células HEK293T:
- Transfecção de células HEK293T.
- Transfecção de células HEK: Este vídeo mostra o protocolo geral de transfecção para a linha celular de rim embrionário humano HEK293.
- Passagem de células: Este vídeo explica o procedimento para dividir ou subculturar células aderentes.
Protocolos de cultura de células
Os protocolos de cultura de células para células HEK293T estão listados aqui.
- Divisão de células HEK293T: Este sítio fornece um guia passo-a-passo detalhado para subcultura de células HEK293.
- Cultura de células de rim embrionário humano: Esta ligação fornece-lhe o protocolo de cultura de células HEK293T.
Referências
- Tan, E., et al., HEK293 Cell Line as a Platform to Produce Recombinant Proteins and Viral Vectors. Fronteiras em Bioengenharia e Biotecnologia, 2021, 9.
- Kim, M.J., et al., AMPKα1 regula a progressão do cancro do pulmão e da mama através da regulação do eixo de sinalização TRAF6-BECN1 mediado por TLR4. Cancros (Basileia), 2020, 12(11).
- Wang, Q., et al., Base estrutural e funcional da entrada SARS-CoV-2 usando ACE2 humano. Cell, 2020. 181(4): p. 894-904.
- Gale, E.C., et al., A liberação lenta baseada em hidrogel de uma vacina de subunidade de domínio de ligação ao recetor provoca respostas de anticorpos neutralizantes contra SARS-CoV-2. bioRxiv, 2021.
- Kalsoom, A., et al., Avaliação in vitro do potencial citotóxico de extratos de Caladium lindenii em hepatocarcinoma humano HepG2 e linhas de células HEK293T normais. Biomed Res Int, 2022, p. 1279961.
- Yu, Z., et al., LncRNA SNHG16 regula as funções do trofoblasto pelo eixo miR-218-5p / LASP1. J Mol Histol, 2021. 52(5): p. 1021-1033.