Células DU-145 - Um guia completo para investigadores
A DU-145 é uma linha celular de carcinoma da próstata humano amplamente aplicada na investigação biomédica. Estas células servem de modelo inestimável para o estudo da biologia do cancro da próstata, teste e desenvolvimento de medicamentos. Além disso, os investigadores também utilizam as células DU-145 para investigar os mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento, crescimento e progressão do cancro da próstata.
Este artigo irá fornecer-lhe informações valiosas sobre as células de cancro da próstata DU-145. Em particular, abordará
- Informações gerais e origem da linha de células DU-145
- Cultura das células DU-145
- Linha celular DU-145: Vantagens e limitações
- Aplicações de investigação das células DU-145
- Publicações de investigação com células DU-145
- Recursos para a linha de células DU-145: Protocolos, vídeos e muito mais
1. Informações gerais e origem da linha celular DU-145
Compreender os atributos fundamentais e a origem de uma linha celular é essencial antes de começar a trabalhar com ela. Esta secção fornecerá uma compreensão abrangente das caraterísticas e origem da linha celular DU-145. Ficará a conhecer: O que são as células cancerígenas DU145? Qual é a morfologia das células DU145? Qual é a diferença entre PC-3 e DU145?
- A DU-145, uma linha celular de cancro da próstata humano, foi derivada do cérebro de um homem caucasiano (69 anos) com carcinoma da próstata metastático. Estas células foram depositadas pela primeira vez por K.R. Stone e colegas em 1978.
- Tal como as células de cancro da próstata PC-3, as DU-145 também exprimem receptores de androgénio. No entanto, quando estas células são submetidas a um tratamento com ligandos androgénicos, não apresentam qualquer atividade dos genes responsivos aos receptores androgénicos, pelo que são consideradas células independentes dos androgénios.
- As células DU-145 possuem uma morfologia epitelial.
- As células DU-145 são hipotriplóides e têm um número de cromossomas modal de 64. Apresentam vários cromossomas marcadores, tais como del (11) (q23), t(11q12q), 16q+, del (1) (p32) e del (9) (p11).
PC-3 Vs DU145
Ambas as linhas celulares de cancro da próstata são independentes do recetor de androgénio. Diferem em termos do seu potencial tumorigénico e metastático. Quando injectada num ratinho imunocomprometido, a linha celular PC-3 forma um adenocarcinoma de grau IV altamente metastático. Em contrapartida, a linha de células DU-145 desenvolve cancro da próstata com um potencial metastático moderado [1].
2. cultura de células DU-145
A linha celular DU-145 é muito utilizada nos laboratórios de investigação do cancro da próstata. Deve aprender os seguintes pontos-chave para facilitar a sua cultura fácil e eficiente. Esta secção inclui informações sobre o meio DU145, tempo de duplicação, condições de cultura de células e protocolos.
Pontos-chave para a cultura de células DU-145
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Tempo de duplicação da população: |
O tempo de duplicação do DU-145 varia entre 30 e 40 horas. |
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Aderente ou em suspensão: |
A DU-145 é uma linha celular aderente. |
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Densidade de sementeira: |
As células DU-145 são semeadas a uma densidade celular recomendada de 2 x104 células/cm2. A esta densidade, as células produzem uma monocamada confluente em quase 4 dias. Para a sementeira, as células são lavadas com 1 x tampão fosfato salino e incubadas com a solução de passagem, Accutase. Após 8 a 10 minutos de incubação à temperatura ambiente, as células são adicionadas com meio de cultura fresco e centrifugadas. O pellet de células recolhido é cuidadosamente ressuspendido e as células são colocadas em novos frascos de cultura para crescimento. |
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Meio de cultura: |
EMEM (Meio Essencial Mínimo de Eagle) com suplementos de meio, ou seja, 10% de Soro Fetal Bovino (FBS), 2 mM L-Glutamina, 2,2 g/L NaHCO3 e EBSS. O meio é renovado 2 a 3 vezes por semana. |
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Condições de crescimento: |
As culturas de DU-145 são mantidas numa incubadora humidificada a 37°C com uma fonte de CO2 a 5%. |
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Armazenamento: |
As células DU-145 são armazenadas na fase de vapor do azoto líquido ou a uma temperatura inferior a -150°C num congelador elétrico para manter a viabilidade celular durante um período mais longo. |
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Processo e meio de congelação: |
Os meios de congelação CM-1 ou CM-ACF são recomendados para as células de cancro da próstata DU-145. Para congelar as células, opta-se por um método de congelação lenta que permite que a temperatura desça gradualmente 1 °C. Isto evita que as células sofram qualquer choque e ajuda a manter a sua viabilidade. |
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Processo de descongelação: |
Os frascos de células DU-145 congeladas são rapidamente descongelados num banho de água a 37 °C durante 40 a 60 segundos. Em seguida, as células são adicionadas ao meio de cultura e centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação. As células colhidas são ressuspensas num meio de crescimento e colocadas no frasco para crescimento. A recuperação da congelação demora cerca de 24 horas. |
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Nível de biossegurança: |
São necessárias configurações de nível de biossegurança 1 para cultivar a linha de células independentes do recetor de androgénio DU145. |
3. linha celular DU-145: Vantagens e limitações
Tal como outras linhas celulares, a linha celular de cancro da próstata DU-145 está associada a alguns prós e contras. Estes atributos podem ajudá-lo a decidir a sua utilização na sua investigação. As principais vantagens e desvantagens das células DU-145 são mencionadas abaixo.
Vantagens
As vantagens das células DU-145 são
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Tumorigenicidade |
A DU-145 é uma linha celular de cancro da próstata tumorigénica agressiva com um potencial metastático moderado. Utilizada para desenvolver o modelo de xenoenxerto DU145 em ratos imunocomprometidos para estudar a biologia, o desenvolvimento e o crescimento do cancro da próstata in vitro e in vivo. |
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Independência do recetor de androgénio |
As células de cancro da próstata DU-145 são independentes do recetor de androgénio. Não dependem dos androgénios para crescer e não apresentam qualquer resposta a nível celular e molecular quando tratadas com androgénios. Ideal para a investigação dos mecanismos do cancro da próstata independente de hormonas. |
Limitações
As limitações da linha celular DU-145 são
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Modelo in vitro |
A DU-145 é um modelo celular in vitro de carcinoma da próstata metastático, pelo que pode não representar totalmente a complexidade dos tumores primários da próstata. Além disso, pode não implicar todos os tipos e subtipos de cancro da próstata devido a caraterísticas específicas como a independência do recetor de androgénio. |
4. aplicações de investigação das células DU-145
A linha celular de cancro da próstata DU-145 tem uma vasta gama de aplicações de investigação. Algumas aplicações prometedoras são aqui enumeradas.
- Biologia do cancro da próstata: A DU-145 é um modelo relevante para estudar a biologia do cancro da próstata. Os investigadores utilizam estas células para investigar os mecanismos moleculares que determinam o desenvolvimento, a progressão e as metástases do cancro. Além disso, são também exploradas as alterações genéticas habitualmente associadas ao cancro da próstata. Uma investigação realizada em 2021 examinou as células DU-145 para identificar potenciais biomarcadores com implicações diagnósticas e terapêuticas eficazes. O estudo sugeriu a actina gama 1 (ACTG1) como um potencial biomarcador do cancro da próstata, uma vez que promove a proliferação de células cancerígenas e regula a metástase através da ativação da via MAPK/ERK [2].
- Rastreio e desenvolvimento de medicamentos: As células de cancro da próstata DU-145 são amplamente utilizadas para testar a citotoxicidade e a eficácia de potenciais medicamentos anticancerígenos. Isto ajuda os investigadores a identificar novos medicamentos, a compreender a resistência aos medicamentos e os mecanismos moleculares subjacentes. Um estudo realizado em 2022 explorou o efeito citotóxico de uma mistura resinosa, própolis ou cola de abelha, nas linhas celulares de cancro da próstata PC-3 e DU-145. O estudo mostrou efeitos inibidores do crescimento desta substância natural em ambas as linhas celulares e propôs o seu potencial anti-cancro [3]. Outro estudo foi realizado em 2019 que investigou os efeitos anti-proliferativos de um composto natural, Betaine em células de cancro da próstata DU-145. A investigação mostrou que a betaína exerce actividades anti-proliferativas ao elevar a morte celular mediada pelo stress oxidativo e a inflamação nas células DU-145 [4].
5.publicações de investigação com células DU-145
Seguem-se algumas publicações de investigação sobre a linha de células DU-145.
Este estudo na Biological Trace Element Research, 2020, propôs que o sulfato de zinco (ZnSo4) exerce efeitos anti-proliferativos nas células DU-145 através da indução de apoptose, alterações morfológicas, danos oxidativos e inflamação.
Este artigo de pesquisa foi publicado na BMC Complementary Medicine and Therapies em 2020. Este estudo explorou o potencial citotóxico e anti-metastático de uma planta, o extrato de casca de Annona muricata L., e o seu bioativo annonacin na linha celular DU-145.
Esta publicação na IUBMB Life (2019) propôs que a interação do RNA longo não codificante LOXL1-AS1 com o miR-let-7a-5p e a via EGFR regulam a resistência à doxorrubicina em células de câncer de próstata DU-145.
Este artigo na revista Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2020) afirma que a regulação negativa do gene Discoidin Domain Receptor1 (DDR1) provoca a morte das células DU-145 e inibe a transição epitelial para mesenquimal (EMT) através da ativação da via Pyk2/MKK7.
Este estudo no Journal of Food Biochemistry (2019) propôs que a Casticina, uma polimetoxiflavona, inibe a migração e a invasão de células DU-145 regulando a sinalização Ras/Akt/NF-κB.
6. recursos para a linha de células DU-145: Protocolos, vídeos e muito mais
Estão disponíveis muitos recursos online sobre a linha celular de cancro da próstata DU-145. Esta secção menciona alguns recursos que explicam o protocolo de manuseamento, manutenção e transfecção destas células:
- Transfecção de DU-145: Este vídeo tutorial é um guia passo a passo para aprender o protocolo de transfecção das células DU-145.
O protocolo de cultura de células DU-145 é mencionado aqui.
- Subcultura de células DU-145: Esta ligação ajudá-lo-á a aprender o protocolo de subcultura ou subcultura de células DU-145.
- Células DU-145: Este sítio Web contém muitas informações úteis sobre a linha de células DU-145, incluindo o meio DU145, o protocolo de subcultura e o manuseamento de culturas proliferativas e criopreservadas.
Referências
- Lima, A.R., et al., Discriminação entre o exometaboloma de células normais e cancerígenas da próstata humana por GC-MS. Relatórios científicos, 2018. 8(1): p. 5539.
- Xiao, L., et al., Silenciar a expressão de ACTG1 induz a transição epitelial mesenquimal do câncer de próstata através da via de sinalização MAPK / ERK. DNA e Biologia Celular, 2021. 40(11): p. 1445-1455.
- Gogacz, M., et al., Efeitos anticancerígenos de extratos de própolis obtidos com o método de separação a frio em linhas celulares de câncer de próstata PC-3 e DU-145. Molecules, 2022. 27(23): p. 8245.
- Kar, F., et al., Betaine suprime a proliferação celular aumentando a apoptose mediada pelo stress oxidativo e a inflamação na linha celular de cancro da próstata humano DU-145. Stress celular e chaperones, 2019. 24: p. 871-881.