Células DU-145 - Um guia completo para investigadores
A DU-145 é uma linha celular de carcinoma da próstata humana amplamente utilizada na investigação biomédica. Estas células servem como um modelo inestimável para o estudo da biologia do cancro da próstata, testes de medicamentos e desenvolvimento. Além disso, os investigadores também utilizam as células DU-145 para investigar os mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento, crescimento e progressão do cancro da próstata.
- Meio de crescimento
- EMEM (Meio Essencial Mínimo de Eagle) com suplementos de meio, ou seja, 10% de soro fetal bovino (FBS), 2 mM de L-glutamina, 2,2 g/L de NaHCO3 e EBSS. O meio é renovado 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação da DU-145 varia entre 30 a 40 horas.
- Tipo de crescimento
- A DU-145 é uma linha celular aderente.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar DU-145
- Informações gerais e origem da linha celular DU-145
- Cultura de células DU-145
- Linha celular DU-145: Vantagens e limitações
- Aplicações de investigação das células DU-145
- 5. Publicações de investigação sobre as células DU-145
- Recursos para a linha celular DU-145: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Informações gerais e origem da linha celular DU-145
É essencial compreender os atributos fundamentais e a origem de uma linha celular antes de começar a trabalhar com ela. Esta secção irá proporcionar uma compreensão abrangente das características e da origem da linha celular DU-145. Irá ficar a saber: O que são as células cancerígenas DU-145? Qual é a morfologia das células DU-145? Qual é a diferença entre PC-3 e DU145?
- A DU-145, uma linha celular de cancro da próstata humano, foi derivada do cérebro de um homem caucasiano (69 anos) com carcinoma da próstata metastático. Estas células foram depositadas pela primeira vez por K.R. Stone e colegas em 1978.
- Tal como as células de cancro da próstata PC-3, as DU-145 também expressam recetores de androgénios. No entanto, quando estas células são submetidas a tratamento com ligantes androgénicos, não apresentam qualquer atividade dos genes responsivos aos recetores de androgénios, sendo, por isso, consideradas células androgénio-independentes.
- As células DU-145 possuem uma morfologia epitelial.
- As células DU-145 são hipotriploides e têm um número modal de cromossomas de 64. Apresentam vários cromossomas marcadores, tais como del (11) (q23), t(11q12q), 16q+, del (1) (p32) e del (9) (p11).
PC-3 vs. DU145
Ambas as linhas celulares de cancro da próstata são independentes do recetor de androgénios. Elas diferem em termos do seu potencial tumorigénico e metastático. Quando injetada num rato imunocomprometido, a linha celular PC-3 forma um adenocarcinoma de grau IV altamente metastático. Em contrapartida, a linha celular DU-145 desenvolve cancro da próstata com potencial metastático moderado [1].
Cultura de células DU-145
A linha celular DU-145 é amplamente utilizada em laboratórios de investigação do cancro da próstata. Deve aprender os seguintes pontos-chave para facilitar a sua cultura de forma fácil e eficiente. Esta secção incluirá informações sobre o meio de cultura DU-145, o tempo de duplicação, as condições de cultura celular e os protocolos.
Pontos-chave para a cultura de células DU-145
Tempo de duplicação da população:
O tempo de duplicação das células DU-145 varia entre 30 e 40 horas.
Adesivas ou em suspensão:
A DU-145 é uma linha celular aderente.
Densidade de sementeira:
As células DU-145 são semeadas a uma densidade celular recomendada de 2 x 10⁴ células/cm². A esta densidade, as células formam uma monocamada confluente em cerca de 4 dias. Para a sementeira, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato 1x e incubadas com solução de passagem, Accutase. Após 8 a 10 minutos de incubação à temperatura ambiente, adiciona-se às células meio de cultura fresco e centrifuga-se. O sedimento celular recolhido é cuidadosamente ressuspenso e as células são transferidas para novos frascos de cultura para crescimento.
Meio de crescimento:
EMEM (Meio Mínimo Essencial de Eagle) com suplementos do meio, ou seja, 10% de soro fetal bovino (FBS), 2 mM de L-glutamina, 2,2 g/L de NaHCO3 e EBSS. O meio é renovado 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As culturas de DU-145 são mantidas numa incubadora humidificada a 37 °C com uma fonte de 5% de CO2.
Armazenamento:
As células DU-145 são armazenadas na fase de vapor de nitrogénio líquido ou a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador elétrico para manter a viabilidade celular a longo prazo.
Processo de congelação e meio:
Recomenda-se a utilização dos meios de congelação CM-1 ou CM-ACF para as células de cancro da próstata DU-145. Opta-se por um método de congelação lenta, que permite que a temperatura desça gradualmente 1 °C, para congelar as células. Isto evita que as células sofram qualquer choque e ajuda a manter a sua viabilidade.
Processo de descongelação:
Os frascos de células DU-145 congeladas são rapidamente descongelados num banho-maria a 37 °C durante 40 a 60 segundos. Posteriormente, são adicionados meios de cultura às células e estas são centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento. As células colhidas são ressuspensas num meio de crescimento e vertidas no frasco para crescimento. A recuperação do congelamento demora cerca de 24 horas.
Nível de biossegurança:
São necessárias condições de nível de biossegurança 1 para cultivar a linha celular DU145 independente do recetor de androgénios.
Linha celular DU-145: Vantagens e limitações
Tal como outras linhas celulares, a linha celular de cancro da próstata DU-145 apresenta alguns prós e contras. Estas características podem ajudá-lo a decidir sobre a sua utilização na sua investigação. As principais vantagens e desvantagens das células DU-145 são mencionadas abaixo.
Vantagens
As vantagens das células DU-145 são:
Tumorigenicidade
A DU-145 é uma linha celular de cancro da próstata tumorigénica agressiva com potencial metastático moderado. É utilizada para desenvolver o modelo de xenoenxerto DU-145 em ratos imunocomprometidos, com o objetivo de estudar a biologia, o desenvolvimento e o crescimento do cancro da próstata in vitro e in vivo.
Independência do recetor de androgénios
As células de cancro da próstata DU-145 são independentes do recetor de androgénios. Não dependem de androgénios para o crescimento e não apresentam resposta a nível celular e molecular quando tratadas com androgénios. Ideais para a investigação dos mecanismos do cancro da próstata independente de hormonas.
Limitações
As limitações da linha celular DU-145 são:
Modelo in vitro
A DU-145 é um modelo celular in vitro de carcinoma da próstata metastático, pelo que pode não representar totalmente a complexidade dos tumores primários da próstata. Além disso, pode não abranger todos os tipos e subtipos de cancro da próstata devido a características específicas, tais como a independência do recetor de androgénios.
Aplicações de investigação das células DU-145
A linha celular de cancro da próstata DU-145 tem uma vasta gama de aplicações de investigação. Algumas aplicações promissoras estão listadas aqui.
- Biologia do cancro da próstata: A DU-145 é um modelo relevante para estudar a biologia do cancro da próstata. Os investigadores utilizam estas células para investigar os mecanismos moleculares que impulsionam o desenvolvimento, a progressão e a metástase do cancro. Além disso, são também exploradas as alterações genéticas comumente associadas ao cancro da próstata. Uma investigação realizada em 2021 analisou as células DU-145 para identificar potenciais biomarcadores com implicações diagnósticas e terapêuticas eficientes. O estudo sugeriu a actina gama 1 (ACTG1) como um potencial biomarcador do cancro da próstata, uma vez que promove a proliferação das células cancerígenas e regula a metástase através da ativação da via MAPK/ERK [2].
- Triagem e desenvolvimento de medicamentos: as células de cancro da próstata DU-145 são amplamente utilizadas para testar a citotoxicidade e a eficácia de potenciais medicamentos anticancerígenos. Isto ajuda os investigadores a identificar novos medicamentos, compreender a resistência aos medicamentos e os mecanismos moleculares subjacentes. Um estudo realizado em 2022 explorou o efeito citotóxico de uma mistura resinosa, a própolis ou cola de abelha, nas linhas celulares de cancro da próstata PC-3 e DU-145. O estudo demonstrou efeitos inibidores do crescimento desta substância natural em ambas as linhas celulares e sugeriu o seu potencial anticancerígeno [3]. Em 2019, foi realizado outro estudo que investigou os efeitos antiproliferativos de um composto natural, a betaína, nas células de cancro da próstata DU-145. A investigação demonstrou que a betaína exerce atividades antiproliferativas ao aumentar a morte celular mediada pelo stress oxidativo e a inflamação nas células DU-145 [4].
5. Publicações científicas sobre as células DU-145
Seguem-se algumas publicações de investigação sobre a linha celular DU-145.
Este estudo, publicado na revista Biological Trace Element Research, em 2020, propôs que o sulfato de zinco (ZnSO₄) exerce efeitos antiproliferativos nas células DU-145 através da indução de apoptose, alterações morfológicas, danos oxidativos e inflamação.
Este artigo de investigação foi publicado na revista BMC Complementary Medicine and Therapies em 2020. Este estudo explorou o potencial citotóxico e antimetastático de uma planta, o extrato da casca de Annona muricata L., e da sua annonacina bioativa na linha celular DU-145.
Esta publicação na IUBMB Life (2019) propôs que a interação do RNA não codificante longo LOXL1-AS1 com o miR-let-7a-5p e a via EGFR regula a resistência à doxorrubicina nas células de cancro da próstata DU-145.
Este artigo publicado na revista Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2020) afirmou que a regulação negativa do gene do Recetor do Domínio Discoidina 1 (DDR1) provoca a morte das células DU-145 e inibe a transição epitelial-mesenquimal (EMT) através da ativação da via Pyk2/MKK7.
Este estudo publicado no Journal of Food Biochemistry (2019) propôs que a casticina, uma polimetoxiflavona, inibe a migração e a invasão das células DU-145 através da regulação da sinalização Ras/Akt/NF-κB.
Recursos para a linha celular DU-145: protocolos, vídeos e muito mais
Estão disponíveis muitos recursos online sobre a linha celular de cancro da próstata DU-145. Nesta secção, serão mencionados alguns recursos que explicam o manuseamento, a manutenção e o protocolo de transfecção destas células:
- Transfecção de DU-145: Este tutorial em vídeo é um guia passo a passo para aprender o protocolo de transfecção de células DU-145.
O protocolo de cultura celular DU-145 é mencionado aqui.
- Subcultivo de DU-145: Esta ligação irá ajudá-lo a aprender o protocolo para o subcultivo de células DU-145.
- Células DU-145: Este site contém muitas informações úteis sobre a linha celular DU-145, incluindo o meio de cultura DU-145, o protocolo de subcultura e o manuseamento de culturas proliferativas e criopreservadas.
Referências
- Lima, A.R., et al., Discriminação entre o exometaboloma de células normais e cancerosas da próstata humana por GC-MS. Scientific reports, 2018. 8(1): p. 5539.
- Xiao, L., et al., O silenciamento da expressão de ACTG1 induz a transição epitelial-mesenquimal do cancro da próstata através da via de sinalização MAPK/ERK. DNA and Cell Biology, 2021. 40(11): p. 1445-1455.
- Gogacz, M., et al., Efeitos anticancerígenos de extratos de própolis obtidos pelo método de separação a frio nas linhas celulares de cancro da próstata PC-3 e DU-145. Molecules, 2022. 27(23): p. 8245.
- Kar, F., et al., A betaína suprime a proliferação celular ao aumentar a apoptose mediada pelo stress oxidativo e a inflamação na linha celular de cancro da próstata humana DU-145. Cell Stress and Chaperones, 2019. 24: p. 871-881.