Wilms8-celler

800,00 €*

Produktene sendes frosset på tørris i kryorør. Hvert kryorør inneholder vanligvis 3 × 10 ⁶ celler for vedheftende linjer eller 5 × 10⁶ celler for suspensjonslinjer (se batch-CoA for detaljer).

Priser ekskl. avgifter pluss fraktkostnader

cryovial

Produktnummer: 300416

Sikkerhetsdatablad

Produktark

Avtale om materialoverføring

Beskrivelse	Wilms8-cellelinjen ble avledet fra en primær Wilms-svulst hos en pediatrisk pasient med en WT1-mutasjon i kimbanen. Denne cellelinjen er karakterisert av en homozygot nonsensmutasjon i WT1-genet (c.1168 C>T, p.R390X), noe som fører til et fullstendig tap av WT1-funksjon. WT1 er avgjørende for normal nyreutvikling, og inaktivering av WT1 er et vanlig trekk ved visse aggressive undertyper av Wilms-svulster, særlig de som viser mesenkymal differensiering. Wilms8 er derfor en verdifull modell for å studere effekten av WT1-tap på tumorigenese, spesielt i forbindelse med Wilms-svulster som oppstår med en utpreget stromal komponent. I tillegg til WT1-mutasjonen har Wilms8-celler en mutasjon i CTNNB1-genet (p.S45A), som koder for β-katenin, en viktig regulator av Wnt-signalveien. Mutasjonen på serin 45 forstyrrer den normale fosforyleringsprosessen som fører til nedbrytning av β-Catenin, noe som fører til at β-Catenin stabiliseres og akkumuleres i kjernen. Dette resulterer i en konstitutiv aktivering av Wnt-signalering, noe som driver celleproliferasjon og bidrar til de onkogene egenskapene til Wilms8-cellelinjen. Samspillet mellom tap av WT1 og avvikende Wnt-signalering i Wilms8 gjør denne cellelinjen til en viktig modell for å forstå de molekylære mekanismene som ligger til grunn for disse signalveiene i Wilms' tumorbiologi. Wilms8-celler viser en mesenkymal fenotype, karakterisert ved uttrykk av vimentin og fravær av epitelmarkører som cytokeratin. Dette samsvarer med den stromale differensieringen som ble observert i den opprinnelige svulsten. Cellene viser en begrenset evne til å gjennomgå ytterligere mesenkymal differensiering, for eksempel til å danne muskellignende celler under spesifikke betingelser. Proteomanalyser av Wilms8 har avdekket aktivering av flere reseptortyrosinkinaser (RTK-er), blant annet PDGFRβ og AXL, som er involvert i viktige prosesser som celleoverlevelse, migrasjon og proliferasjon. Aktiveringen av nedstrøms signalveier, særlig MAPK- og PI3K/AKT-veiene, bidrar ytterligere til Wilms8-cellenes aggressive egenskaper. Wilms8-cellelinjen er et viktig verktøy for å undersøke det molekylære grunnlaget for Wilms-svulster som skyldes tap av WT1 og avvikende Wnt-signalering. Cellelinjens genetiske og fenotypiske egenskaper gjør den til en robust plattform for å studere samspillet mellom disse kritiske signalveiene og for å identifisere potensielle terapeutiske mål i Wilms-svulster med en stromal komponent.
Organisme	Menneskelig
Vev	Nyre
Sykdom	Wilms-svulst
Bruksområder	In vitro-cellekulturmodell. Biokjemiske studier

Alder	8 måneder
Kjønn	Mann
Etnisitet	Kaukasisk
Morfologi	Spindelformet
Celletype	Wilms-celler
Vekstegenskaper	Vedhengende

Sitat	Wilms8 (Cytion katalognummer 300416)
Biosikkerhetsnivå	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_A5SJ
Innskyter	B. Royer-Pokora

Mutasjonsprofil	WT1-mutasjonsstatus: homozygot c.1168C>T, p.390x, LOH: , CTNNB1-mutasjonsstatus: heterozygot TCT>GCT, p.S45A

Kulturmedium	MSCGM-sett (fra Lonza)
Dissosiasjonsreagens	Accutase
Subkulturer	Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Frys medium	Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Opptining og dyrking av celler	Kontroller at hetteglasset er dypfryst ved levering, ettersom cellene sendes på tørris for å opprettholde optimale temperaturer under transport. Ved mottak skal hetteglasset enten oppbevares umiddelbart ved temperaturer under -150 °C for å sikre at cellenes integritet bevares, eller gå videre til trinn 3 hvis umiddelbar dyrking er nødvendig. Ved umiddelbar dyrking tiner du hetteglasset raskt ved å senke det ned i et 37 °C varmt vannbad med rent vann og et antimikrobielt middel, og røre forsiktig i 40-60 sekunder til det blir en liten isklump igjen. Utfør alle påfølgende trinn under sterile forhold i en strømningshette, og desinfiser kryoflasken med 70 % etanol før du åpner den. Åpne det desinfiserte hetteglasset forsiktig, og overfør cellesuspensjonen til et 15 ml sentrifugerør som inneholder 8 ml romtemperert dyrkingsmedium, og bland forsiktig. Sentrifuger blandingen ved 300 x g i 3 minutter for å separere cellene, og kast supernatanten som inneholder rester av frysemedium, forsiktig. Resuspender cellepelleten forsiktig i 10 ml nytt dyrkningsmedium. For adherente celler, del suspensjonen mellom to T25-kulturkolber; for suspensjonskulturer, overfør alt mediet til én T25-kolbe for å fremme effektiv celleinteraksjon og vekst. Følg etablerte subkulturprotokoller for fortsatt vekst og vedlikehold av cellelinjen, noe som sikrer pålitelige eksperimentelle resultater.
Inkubasjonsatmosfære	37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.
Flaskebelegg	Ingen
Fryseprosedyre	Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.
Leveringsbetingelser	Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.
Lagringsforhold	For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Sterilitet	Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma. For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.
STR-profil	Amelogenin: x,y CSF1PO: 11,12 D13S317: 8,9 D16S539: 13,13 D5S818: 12,13 D7S820: 8,10 TH01: 8,8 TPOX: 8,9 vWA: 18,18 D3S1358: 16,18 D21S11: 29,33.2 D18S51: 12,12 Penta E: 12,17 Penta D: 10,12 D8S1179: 8,13 FGA: 20,21
HLA-alleler	A: '02:01:01, '03:01:01 B: '15:01:01, '37:01:01 C: '04:01:01, '06:02:01 DRB1: '08:01:01G, '11:01:01 DQA1: '04:01:01, '05:05:01 DQB1: '03:01:01, '04:02:01 DPB1*: '03:01:01, '06:01:01 E: '01:03:02

Hvis du har tenkt å bruke Cytion-cellelinjer utelukkende til intern forskning på ett enkelt forskningssted, må du fylle ut og signere vår materialoverføringsavtale (MTA) og sende den sammen med bestillingen din.

For alle kommersielle anvendelser – inkludert, men ikke begrenset til, betaling for tjenester, kvalitetskontrolltesting, produktutgivelse, diagnostisk bruk eller regulatoriske studier – vennligst fyll ut skjemaet for tiltenkt bruk, slik at vi kan utarbeide en avtale som er tilpasset prosjektet ditt.

Merk: MTA gjelder kun for visse cellelinjer. Hvis denne merknaden og MTA-dokumentet vises på en produktside, gjelder avtalen. For cellelinjer som ikke dekkes av MTA, vil det ikke vises noen henvisning til avtalen. MTA er ikke gyldig for kunder i Amerika, Kina eller Taiwan. Kontakt vårt amerikanske selskap for å motta den aktuelle avtalen.

Wilms8-celler

Generell informasjon

Kjennetegn

Regulatoriske data

Biomolekylære data

Håndtering

Kvalitetskontroll / Genetisk profil / HLA

Avtale om materialoverføring