Skysto azoto saugos patarimai, kaip saugiai saugoti ląsteles

Ląstelių kultūrų laboratorijose skystas azotas yra būtinas ilgalaikiam vertingų ląstelių linijų saugojimui ir išsaugojimui. "Cytion" pirmenybę teikiame tiek savo ląstelių linijų kokybei, tiek laboratorijos darbuotojų, dirbančių su kriogeninėmis medžiagomis, saugai. Šiame išsamiame vadove pateikiamos svarbiausios saugos priemonės ir geriausi darbo su skystuoju azotu ląstelių saugojimui taikomi metodai.

Būtiniausios asmeninės apsaugos priemonės (AAP) dirbant su skystuoju azotu

Dirbant su skystuoju azotu ląstelių linijoms, tokioms kaip HeLa ar MCF-7 ląstelės, išsaugoti, būtina naudoti tinkamas asmenines apsaugos priemones. Visą veidą dengiantis skydelis yra privalomas norint apsisaugoti nuo purslų ir garų, kurie gali smarkiai pažeisti akis ir veido audinius. Termoizoliacinės kriogeninės pirštinės turi siekti gerokai aukščiau dilbio, nes standartinės laboratorinės pirštinės nepakankamai apsaugo nuo didelio šalčio. Kaip išorinį apsauginį sluoksnį reikėtų dėvėti laboratorinį chalatą, kurį geriausia papildyti purslams atsparia plastikine prijuoste, kad būtų užtikrinta papildoma apsauga nuo atsitiktinio išsiliejimo. Perkeldami ląsteles iš mūsų užšaldymo terpės CM-1 į skysto azoto saugyklą, įsitikinkite, kad jūsų asmeninės apsaugos priemonės yra geros būklės, be nusidėvėjimo ar pažeidimų požymių. Atminkite, kad net ir nedidelis skysto azoto poveikis gali iš karto pažeisti audinius, todėl išsamios asmeninės apsaugos priemonės yra būtinos kiekvienai sąveikai su LN2 laikymo sistemomis.

Ventiliacijos reikalavimai ir deguonies stebėsena

Tinkamas vėdinimas yra labai svarbus, kai skystame azote laikomos vertingos mokslinių tyrimų medžiagos, pavyzdžiui, U937 ir RAJI ląstelės. LN2 garuodamas sparčiai plečiasi - iš vieno litro skysto azoto susidaro apie 700 litrų azoto dujų, kurios uždarose patalpose gali greitai išstumti deguonį. Jūsų skysto azoto laikymo vietoje turi būti įrengtos mechaninės vėdinimo sistemos ir deguonies stebėjimo prietaisai. Patalpose, kuriose saugomos kelios ląstelių linijos ir dideli kiekiai užšaldymo terpės CM-1 - 500 ml, rekomenduojame įrengti nuolatinius deguonies monitorius su garsiniais signalais, nustatytais suveikti esant 18 % deguonies koncentracijai. Sandėliavimo vietoje turėtų būti aukšto lygio vėdinimo taškai, nes sušildytos azoto dujos yra šiek tiek lengvesnės už orą. Niekada nepasikliaukite vien natūraliu vėdinimu - mechaninės vėdinimo sistemos turėtų būti reguliariai tikrinamos ir prižiūrimos pagal gamintojo specifikacijas, kad būtų užtikrintas pastovus oro apykaitos greitis.

Dviejų asmenų saugos protokolas

Dirbdami su skystuoju azotu ir kriokonservuodami jautrias ląstelių linijas, pavyzdžiui, HUVEC ląsteles arba žmogaus mezenchimines kamienines ląsteles - kaulų čiulpus, visada dirbkite dviese. Ši draugų sistema ypač svarbi atliekant svarbiausias operacijas, pavyzdžiui, perkeliant mėginius į saugyklą, pripildant kriogeninius indus arba tvarkant didelius kiekius užšaldymo terpės CM-1. Antrasis asmuo atlieka saugos stebėtojo funkciją ir gali nedelsdamas reaguoti į avarines situacijas, pavyzdžiui, išsiliejimą, deguonies išsekimą ar asmens sužalojimą. Jie turėtų būti netoli išėjimo iš laboratorijos, palaikyti vizualinį ryšį, tačiau nesiartinti prie artimiausios darbo zonos. Abu komandos nariai turi būti visiškai apmokyti avarinių procedūrų ir žinoti, kur yra saugos įranga. Skystojo azoto tvarkymo operacijas planuokite įprastomis darbo valandomis, kai yra pagalbinis personalas, ir niekada nebandykite atlikti kriogeninių operacijų ne darbo valandomis arba savaitgaliais.

Privalomojo mokymo reikalavimai, susiję su LN2 tvarkymu

Prieš pradedant dirbti su skystojo azoto laikymo sistemomis, kuriose yra vertingų mėginių, pavyzdžiui, HeLa ląstelių, arba naudojant užšaldymo terpę CM-ACF, kurioje nėra serumo, privalomi išsamūs mokymai. Šie mokymai turi apimti tinkamus tvarkymo būdus, kriogeninių pavojų supratimą ir avarijų likvidavimo procedūras. Darbuotojai, dirbantys su mūsų ląstelių linijomis, turi įrodyti, kad moka saugiai pildyti, tinkamai naudoti asmenines apsaugos priemones ir supranta deguonies išsekimo pavojus. Prieš pradedant dirbti su didesniais kiekiais, į mokymus turėtų būti įtraukta praktinė praktika su mažesniais kiekiais prižiūrint. Turi būti saugomi mokymų baigimo dokumentai ir planuojami reguliarūs kvalifikacijos kėlimo kursai. Nauji darbuotojai, prieš pradėdami savarankiškai dirbti komandoje, turėtų stebėti patyrusius darbuotojus bent tris visas LN2 tvarkymo procedūras. Atminkite, kad net patyrusiems darbuotojams reikia periodiškai persikvalifikuoti, kad saugos protokolai išliktų švieži ir aktualūs.

Deguonies stebėjimo ir signalizacijos sistemos

Laikant svarbias mokslinių tyrimų medžiagas, tokias kaip žmogaus mezenchiminės kamieninės ląstelės - riebalinis audinys ir žmogaus mezenchiminės kamieninės ląstelės - Whartono želė skystame azote, patikimos deguonies stebėjimo sistemos yra neginčijamos. Turi būti įrengti stacionarūs deguonies monitoriai su signalizacija, nustatyta taip, kad suveiktų esant 18 % deguonies koncentracijai (V/V). Šias sistemas reikia strategiškai išdėstyti: netoli grindų lygio, kur iš pradžių susikaupia už orą sunkesnės dujos, darbo aukštyje ir šalia LN2 laikymo indų. Kai mėginiai saugomi užšaldymo terpėje CM-ACF - be serumo - 500 ml, užtikrinkite, kad saugojimo vietose būtų įrengti garsiniai ir regimieji pavojaus signalai, kurie būtų atpažįstami per laboratorijos foninį triukšmą. Įgyvendinkite mėnesinį visų deguonies stebėsenos sistemų testavimo tvarkaraštį, saugokite kalibravimo įrašus ir nustatykite aiškias evakuacijos procedūras, kai suveikia pavojaus signalai. Darbuotojai niekada neturi bandyti panaikinti ar išjungti šių saugos sistemų, neatsižvelgiant į planuojamo darbo su skystuoju azotu trukmę.