Paskelbta: 2023 m. | Paskutinis peržiūrėjimas: 2026 m. gegužė

„Pasėlių skaičiaus“ supratimas

„Pasėlio numerio“ sąvoka yra esminė ląstelių kultūrai ir reiškia, kiek kartų ląstelių linija buvo subkultivuota arba perkelta į šviežią auginimo terpę po jos pirminio atgaivinimo iš kriokonservacijos arba gavimo iš etaloninio ląstelių banko. Šis rodiklis yra labai svarbus sekant ląstelių kultūros kilmę ir istoriją.

Proceso apžvalga

• Įprastoje ląstelių kultūros praktikoje, kai ląstelės pasiekia tam tikrą tankį, jos perkeliama į naują terpę, kad būtų išlaikytas augimas ir išvengta per didelio susikaupimo. Kiekvienas toks perkėlimas registruojamas kaip pasėlis.
• Tradiciškai, kai, pavyzdžiui, iš deponento gaudavome ląstelių liniją, esant 60-ajam pasėliui, mes tęsdavome skaičiavimą nuo šio pasėlių skaičiaus, jį didindami po kiekvieno subkultivavimo. Ši praktika, nors ir išlaikydama istorinę grandinę, dažnai lėmė didelius pasėlių skaičius nuo pat pradžių. Atsižvelgiant į tam tikrų ląstelių linijų, pavyzdžiui, 1951 m. sukurtos HeLa linijos, plačią ir dažnai dešimtmečius trunkantį naudojimą, neįmanoma nustatyti bendro pasėlių skaičiaus nuo ląstelių linijos sukūrimo.
• Siekiant padidinti mūsų ląstelių kultūrų procesų aiškumą ir kokybę, 2023 m. pradžioje peržiūrėjome šį metodą. Dabar, kai pradedame kultūrą iš naujo buteliuko, nepriklausomai nuo deponuotojo nurodyto pasėlių skaičiaus, mes iš naujo nustatome skaičių ir pradedame skaičiuoti nuo pirmojo pasėlio kiekvienai pagamintai partijai.

Pagrindimas

Perkėlimas yra gyvybiškai svarbi procedūra, užtikrinanti ląstelių kultūrų sveikumą ir tinkamumą tyrimams. Kai ląstelės perauga, jos patiria kontaktinį slopinimą, dėl kurio sumažėja jų proliferacijos greitis, o tai gali neigiamai paveikti eksperimentų rezultatus. Siekiant sumažinti šias problemas, „Cytion“ taiko griežtą ląstelių tankio, kuriuo atliekamas subkultūravimas, kontrolę, taip išlaikydama mažą pasėlių skaičių gaminant savo ląstelių linijas. Ši atsargumo priemonė padeda išvengti pernelyg dažno perauginimo neigiamų padarinių, tokių kaip morfologinės anomalijos, augimo greičio pokyčiai ir genetinė dreifo, dėl kurių ląstelės gali smarkiai skirtis nuo savo pradinės būklės. Ilgalaikis subkultūravimas taip pat gali padidinti mikrobų užteršimo riziką.

Mūsų pažadas

Mes užtikriname, kad mokslininkams tiekiamos ląstelės kuo labiau atitiktų pradinę genetinę sudėtį ir fenotipines savybes, taip didindami eksperimentinių duomenų patikimumą. Be to, kruopščiai dokumentuodama kiekvieną pasėlio kartą, „Cytion“ prisideda prie tyrimų atsekamumo ir pakartojamumo – tai įsipareigojimas, atspindintis aukštus ląstelių kultūros praktikos standartus. Mokslininkai raginami tiksliai registruoti pasėlių numerius tiek ant kultūros indų, tiek savo laboratorijos užrašuose, kad turėtų informaciją apie savo ląstelių kultūrų būklę ir istoriją.

Patarimai ir dažniausiai pasitaikančios klaidos

Būtina laikytis teisingo protokolo, tačiau ne mažiau svarbu suprasti dažniausiai pasitaikančias klaidas. Ląstelių kultūrų procedūros yra jautrios nedideliams nukrypimams nuo technikos, laiko ir reagentų kokybės. Toliau pateikti patarimai atspindi geriausią praktiką, kurią rekomenduoja „Cytion“ mokslininkų komanda, remdamasi ilgamete ląstelių kultūrų auginimo patirtimi.

• Prieš naudojimą visada pašildykite reagentus iki 37 °C, kad sumažintumėte šiluminį šoką ląstelėms.
• Dirbkite greitai, bet atsargiai – sumažinkite laiką, kurį ląstelės praleidžia už inkubatoriaus ribų.
• Naudokite sertifikuotus, mikoplazmų atžvilgiu patikrintus reagentus, kad išvengtumėte užteršimo, kuris gali pakenkti eksperimentų rezultatams.
• Užfiksuokite kiekvieną žingsnį, įskaitant pasėlio numerį, datą ir ląstelių morfologijos stebėjimus.
• Prieš didindami eksperimento mastą, patikrinkite savo protokolą atlikdami nedidelį bandomąjį eksperimentą, kad išvengtumėte brangių reagentų švaistymo.

Rekomenduojami „Cytion“ reagentai

„Cytion“ siūlo įvairius patvirtintus ląstelių kultūros reagentus, specialiai sukurtus šiam protokolui. Visi reagentai yra išbandyti su dažniausiai naudojamomis ląstelių linijomis ir pateikiami su išsamia dokumentacija. Apsilankykite cytion.com/Media-Reagents, kad peržiūrėtumėte visą asortimentą.