Hep3B ląstelės: kepenų ląstelių karcinomos tyrimai ir atradimai
HEP3B yra nemirtinga žmogaus kilmės hepatocitų karcinomos ląstelių linija. Ji plačiai naudojama hepatotoksiškumo ir vaistų metabolizmo tyrimuose. HEP3B transfekcijos efektyvumas yra didelis, todėl šios ląstelės dažnai naudojamos kepenų vėžio vystymosi, progresavimo ir terapinių intervencijų tyrimams. Šiame straipsnyje pateikiama visa būtina informacija apie HEP3B ląstelių liniją, kad jums būtų lengviau su ja dirbti. Pagrindinė informacija:
- Auginimo terpė
- HEP3B ląstelėms auginti naudojama EMEM terpė, kurioje yra 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamino ir Earle's Balanced Salt Solution (EBSS).
- Padvigubėjimo laikas
- HEP3B ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 36 valandos.
- Augimo tipas
- Ši hepatomos ląstelių linija yra adhezyvinė.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsakyti HEP3B
- Bendrosios HEP3B ląstelių charakteristikos ir kilmė
- Informacija apie HEP3B ląstelių linijos kultivavimą
- HEP3B ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- HEP3B ląstelių pritaikymas moksliniuose tyrimuose
- Publikacijos apie HEP3B ląstelių liniją
- Ištekliai, susiję su HEP3B ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Bendrosios HEP3B ląstelių charakteristikos ir kilmė
- Informacija apie HEP3B ląstelių linijos kultivavimą
- HEP3B ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- HEP3B ląstelių pritaikymas moksliniuose tyrimuose
- 5. Publikacijos apie HEP3B ląstelių liniją
- Ištekliai, susiję su HEP3B ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
Bendrosios HEP3B ląstelių charakteristikos ir kilmė
Pagrindinė informacija, kurios jums reikia apie ląstelių liniją, yra jos kilmė ir bendrosios charakteristikos. Tai gali padėti jums nuspręsti, kaip ją naudoti savo tyrimuose, ir padėti jums dirbti su ja. Šiame straipsnio skyriuje pateikiama visa būtina informacija apie HEP3B kilmę ir charakteristikas. Čia sužinosite: Kas yra Hep 3B ląstelių linijos? Kokia yra Hep3B ląstelių kilmė? Kokia yra HEP3B ląstelių morfologija?
- HEP3B – tai nuolatinė žmogaus hepatomos ląstelių linija, kilusi iš 8 metų amžiaus afrikiečių berniuko, sergančio kepenų ląstelių karcinoma (HCC), kepenų audinio. Ją 1979 m. sukūrė Adenas ir kolegos Barbaros B. Knowles laboratorijoje, Wistar Institute, Filadelfijoje, JAV [1].
- HEP3B ląstelėse chromosomose integruotas hepatito B viruso (HBV) genomas.
- Šios hepatocitų karcinomos ląstelės pasižymi epiteline morfologija.
- HEP3B ląstelių modalusis chromosomų skaičius yra 60. Skirtingai nei HepG2, jos neturi pertvarkytos 1 chromosomos.
Kuo skiriasi HepG2 ir Hep3B?
HepG2 ir HEP3B skiriasi chromosomų skaičiumi vienoje ląstelėje. HEP3B turi 60 chromosomų, o HepG2 ląstelės vidutiniškai turi 55 chromosomas. Be to, HepG2 yra netumorigeninės ir hepatito B neigiamos, o HEP3B yra tumorigeninės ir HBV teigiamos.
Informacija apie HEP3B ląstelių linijos auginimą
Žinios apie ląstelių linijos kultivavimą gali palengvinti jūsų darbą. Šiame skyriuje aptariami visi pagrindiniai HEP3B HBV ląstelių linijos kultivavimo aspektai, įskaitant: koks yra Hep3B ląstelių dvigubėjimo laikas? Kokios yra HEP3B kultivavimo sąlygos? Kaip kultivuoti HEP3B HCC ląsteles?
Svarbiausi HEP3B ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
HEP3B ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 36 valandos.
Adhezyvinės ar suspensinės:
Ši hepatomos ląstelių linija yra adhezyvinė.
Padalijimo santykis:
HEP3B ląstelės subkultivuojamos santykiu nuo 1:2 iki 1:4. Prisijungusios HEP3B ląstelės nuplaunamos 1 x PBS tirpalu, tada inkubuojamos su Accutase disociacijos tirpalu. Po 8–10 min. įpilama šviežios terpės, o ląstelės centrifuguojamos. Surinktos ląstelės atsargiai resuspenduojamos ir supilamos į kolbas su kultūrinėmis terpėmis rekomenduojamu dalijimo santykiu.
Auginimo terpė:
HEP3B ląstelėms kultivuoti naudojama EMEM terpė, kurioje yra 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamino ir Earle's Balanced Salt Solution (EBSS).
Auginimo sąlygos:
HEP3B ląstelės auginamos 37 °C drėgname inkubatoriuje, kuriame nuolat tiekiamas 5 % CO2.
Laikymas:
Užšaldytos HEP3B ląstelės laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje elektrinėje šaldymo kameroje arba skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
HEP3B ląstelėms rekomenduojama šaldymo terpė yra CM-1 arba CM-ACF. Ląstelės šaldomos taikant lėto šaldymo procesą, kurio metu temperatūra mažėja tik 1 °C per minutę, siekiant išsaugoti ląstelių gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Užšaldytos ląstelės atšildomos 37 °C temperatūroje nustatytame vandens vonioje 40–60 sekundžių. Vėliau šios ląstelės įdedamos į šviežią auginimo terpę ir centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės elementai. Surinktos ląstelės resuspenduojamos ir išpilamos į naujas kolbas auginimui.
Biologinio saugumo lygis:
HEP3B ląstelių kultūrai reikalinga 1 biologinio saugumo lygio laboratorija.
HEP3B ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
HEP3B yra plačiai naudojama hepatoceliulinės karcinomos ląstelių linija. Šiame skyriuje bus aptarti kai kurie pagrindiniai šių hepatomos ląstelių privalumai ir trūkumai.
Privalumai
Pagrindiniai HEP3B ląstelių privalumai yra šie:
Lengva auginti
HEP3B ląstelėms nereikalingos sudėtingos auginimo sąlygos, todėl jas lengva tvarkyti ir prižiūrėti mokslinių tyrimų laboratorijoje. Tai supaprastina eksperimentines procedūras.
Didelis transfekcijos efektyvumas
HEP3B ląstelės pasižymi puikiu transfekcijos efektyvumu, todėl jos plačiai naudojamos genetinių manipuliacijų ir genų ekspresijos tyrimuose.
Tumorigeniškumas
HEP3B yra navikų formavimo hepatoceliulinės karcinomos ląstelių linija, galinti formuoti navikus, kai yra įšvirkšta į imuninės sistemos sutrikimų turinčią pelę. Tai padeda tirti vėžio progresavimą ir vystymąsi naudojant HEP3B ksenotransplantacijos modelius.
HEP3B P53 būklė
HEP3B ląstelės turi P53 geno mutaciją, panašią į hepatoceliulinę karcinomą (HCC) ir kitus vėžius, todėl jos yra tinkamos tirti P53 mutacijos poveikį vėžio augimui, vystymuisi ir progresavimui.
Apribojimai
Su HEP3B ląstelių linija susijęs apribojimas yra:
In vitro ląstelių modelis
HEP3B ląstelių linija naudojama kaip in vitro hepatoceliulinės karcinomos (HCC) ląstelių modelis. Tačiau ji gali nevisiškai atspindėti HCC sudėtingumą, būdingą gyviems organizmams. Todėl eksperimentų in vitro rezultatai gali skirtis nuo tų, kurie stebimi in vivo.
HEP3B ląstelių pritaikymas moksliniuose tyrimuose
HEP3B ląstelių linija siūlo keletą taikymo galimybių biomedicininiuose tyrimuose. Kai kurios pagrindinės HEP3B ląstelių taikymo sritys moksliniuose tyrimuose yra:
- Vėžio biologija: HEP3B yra žmogaus hepatoceliulinės karcinomos ląstelių linija. Tai yra neįkainojamas ląstelių modelis, skirtas tirti ląstelių ir molekulinės mechanizmus, lemiančius HCC vystymąsi ir progresavimą. Tyrėjai naudoja šias ląsteles, kad ištirtų genetines mutacijas, ląstelių procesus ir ląstelių signalizacijos kelius, susijusius su kepenų vėžiu. Pavyzdžiui, viename tyrime, kuriame buvo naudojamos HEP3B ląstelės, nustatyta, kad mikroRNR-223-3p reguliuoja NLRP3 inflammasomo komponentus, slopina proliferaciją ir stiprina HEP3B hepatocarcinomos ląstelių apoptozę [2].
- Vaistų atranka ir kūrimas: HEP3B ląstelių linija taip pat naudojama naujų vaistų nuo kepenų karcinomos bandymams, atrankai ir kūrimui. Be to, ji naudojama įvairių vaistų nuo vėžio ir gydymo būdų toksiškumui bei veiksmingumui įvertinti. Mokslininkai taip pat naudojo šias hepatomos ląsteles vaistų metabolizmui tirti. Mokslininkai naudojo HEP3B ląsteles ir įvertino Cotinus coggygria augalo ekstrakto citotoksinį potencialą HEP3B hepatocitų karcinomos ląstelėse [3].
- Virusinės infekcijos: HEP3B yra hepatito B viruso teigiama ląstelių linija; todėl ji naudojama virusinėms infekcijoms, kurios gali sukelti kepenų vėžio vystymąsi, t. y. HBV ir HCV, tirti. Tai gali padėti geriau suprasti virusines infekcijas ir sukurti potencialius antivirusinius gydymo būdus. Pavyzdžiui, viename tyrime buvo naudojamos HEP3B hepatocitų vėžio ląstelės ir tirta ubikvitinacijos svarba hepatito C viruso plitimui. Rezultatai parodė, kad ubikvitinui specifinė proteazė 15 (USP15) dalyvauja HCV plitimo procese, reguliuodama hepatocitams būdingas funkcijas, įskaitant lipidinių lašelių susidarymą ir HCV RNR transliaciją [4].
5. Publikacijos apie HEP3B ląstelių liniją
Šioje straipsnio dalyje bus aptarti keli įdomūs moksliniai leidiniai apie HEP3B ląsteles.
Apoptozės ir autofagijos reguliavimas luteolinu žmogaus kepenų ląstelių vėžio Hep3B ląstelėse
Šiame leidinyje „Biochemical and Biophysical Research Communications“ (2019) teigiama, kad luteolino junginio sukeltas endoplazminio tinklo stresas gali turėti priešvėžinį poveikį P53-neigiamose HEP3B ląstelėse P53 nepriklausomu būdu.
Galimas Hep3B kepenų vėžio ląstelių taikymas lupeoliu, išskirtu iš Avicennia marina
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Archiv der Pharmazie“ (2021 m.), siūloma pentaciklinė triterpenoidinė medžiaga lupeolis kaip potencialus priešvėžinis agentas, veikiantis HEP3B ląsteles.
Šis straipsnis paskelbtas žurnale „Molecular Medicine Reports“ (2017 m.). Tyrimo rezultatai rodo, kad Cnidium monnieri (L.) Cusson etanolio ekstraktas sukelia ląstelių mirtį (apoptozę) ir ląstelių ciklo sustabdymą hepatocarcinoma ląstelėse HepG2 ir HEP3B reguliuodamas p53 ir Akt/GSK-3β signalizacijos kelią.
Šiame žurnale „Biomolecules and Therapeutics“ (2020 m.) paskelbtame tyrime teigiama, kad auranofinas pasižymi sinergetiniu poveikiu ir skatina sulforafano sukeltą HEP3B ląstelių apoptozę per PI3K/AKT kelio aktyvaciją.
Cirkuliuojantis RNR-0072309 turi priešvėžinį poveikį Hep3B ląstelių linijai, veikdamas mikroRNR-665
Šiame „BioFactors“ (2023) žurnale paskelbtame moksliniame straipsnyje teigiama, kad cirkuliarinė RNR-0072309 turi priešvėžinį poveikį HEP3B kepenų ląstelių karcinomos ląstelėms, veikdama mikroRNR-665.
Ištekliai, susiję su HEP3B ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami keli ištekliai, susiję su HEP3B ląstelėmis:
- HEP3B transfekcija: šiame vaizdo įraše paaiškinamas HEP3B ląstelių transfekcijos protokolas.
- HEP3B transfekcijos efektyvumas: Ši nuoroda padės jums susipažinti su HEP3B DMEM terpės sudėtimi, ląstelių perėjimu ir HEP3B ląstelių transfekcijos protokolu. Be to, joje pateikiama informacija, kaip optimizuoti HEP3B lipofektamino 3000 reagentą jūsų transfekcijos protokole.
Šioje nuorodoje pateikiamas HEP3B ląstelių kultivavimo protokolas:
- HEP3B kultivavimo sąlygos: Ši nuoroda padės jums susipažinti su Huh7 ir HEP3B kultūrų tvarkymo ir priežiūros protokolu.
- HEP3B ląstelės: šioje svetainėje pateikiama daug informacijos apie HEP3B ląsteles, įskaitant HEP3B terpes, ląstelių dalijimo, atšildymo ir proliferacinių bei kriokonservuotų kultūrų tvarkymo protokolą.
Nuorodos
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Hepatoceliulinio karcinomo ląstelių linijų kilmė ir savybės. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguliuoja NLRP3, skatindamas apoptozę ir slopindamas Hep3B ląstelių proliferaciją. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. ir S. Selen-Isbilir, Cotinus coggygria ekstrakto citotoksinis poveikis Hep3B vėžio ląstelių linijai. Natural Product Research, 2022: p. 1-4.
- Kusakabe, S. ir kt., USP15 dalyvauja hepatito C viruso plitimą reguliuodamas viruso RNR transliaciją ir lipidinių lašelių susidarymą. Journal of Virology, 2019. 93(6): p. 10.1128/jvi. 01708-18.