Žmogaus bambos venos endotelio ląstelės (HUVEC)
HUVEC yra pirminės endotelio ląstelės, kurios yra svarbus įrankis biomedicininiuose tyrimuose. Jos padeda mokslininkams tirti angiogenezę, kraujagyslių biologiją ir tokias ligas kaip aterosklerozė bei vėžys. HUVEC naudojamos endotelio ląstelių elgsenos, ląstelių signalizacijos mechanizmų tyrimams bei vaistų bandymams, suteikdamos vertingos informacijos apie galimus širdies ir kraujagyslių ligų bei vėžio gydymo būdus. Jos taip pat naudojamos kaip modelinė sistema kraujagyslių biologijos tyrimams.
HUVEC ląstelių kilmė ir bendrosios savybės
Žinios apie ląstelių linijos kilmę ir bendruosius požymius yra labai svarbios sprendžiant, ar ji tinka jūsų tyrimui. Šiame skyriuje rasite šią svarbią informaciją apie HUVEC endotelio ląsteles: Kam naudojamos HUVEC ląstelės? Kokia yra pilna HUVEC ląstelių forma? Kokios yra HUVEC ląstelių išskirtinės savybės? Kokia yra HUVEC ląstelių morfologija? Koks yra HUVEC ląstelių skersmuo? Koks yra HUVEC ląstelių dydis?
- HUVEC ląstelės yra išskiriamos iš žmogaus virkštelės venos endotelio.
- HUVEC morfologija yra panaši į endotelio. Jos paprastai yra daugiakampės formos ir turi apvalų branduolį centre.
- HUVEC ląstelių dydis yra 17 μm skersmens.
- Šios endotelio ląstelės yra diploidinės. Jos turi 46 chromosomų.
HUVEC TERT2
HUVEC TERT2 yra nemirtinga ląstelių linija, gauta iš pirminių žmogaus virkštelės venos endotelio ląstelių (HUVEC). Ji buvo sukurta įterpiant žmogaus telomerazės atvirkštinės transkriptazės (TERT) geną į HUVEC ląstelių genomą. Ši modifikacija padėjo prailginti jų gyvenimo trukmę kultūroje, leidžiant atlikti ilgesnius eksperimentus be apribojimų, susijusių su pirminėmis HUVEC.
Kuo skiriasi HUVEC ir HMEC-1?
HUVEC ir HMEC-1 endotelio ląstelių linijų struktūra ir sudėtingumas yra panašūs. Tačiau HMEC-1 ląstelės, palyginti su HUVEC, yra labiau homogeniškos ląstelių dydžio ir granuliariškumo atžvilgiu. Tai gali sumažinti eksperimentinių duomenų variacijas.
Informacija apie HUVEC ląstelių linijos kultivavimą
Ši straipsnio dalis skirta suteikti jums svarbiausių žinių apie HUVEC ląstelių kultūrą. Tai labai padės jums dirbant su jomis. Čia rasite atsakymus į šiuos dažnai užduodamus klausimus: Koks yra HUVEC ląstelių dvigubėjimo laikas? Koks yra HUVEC sėjimo tankis? Kiek yra HUVEC pasėlių? Kas yra HUVEC ląstelių terpė? Kaip auginti HUVEC?
Svarbiausi HUVEC ląstelių kultivavimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
HUVEC ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 23,5 valandos. Vis dėlto jis gali skirtis priklausomai nuo ląstelių kultivavimo sąlygų ir pasėlių skaičiaus.
Adhezinės ar suspensinės:
HUVEC yra adhezyvinė ląstelių linija. Ląstelės auga ir sudaro monosluoksnius.
Padalijimo santykis:
HUVEC subkultivavimo santykis yra nuo 1:2 iki 1:4. Sėjimui ląstelės nuplaunamos 1x fosfato buferiniu tirpalu ir įpilama disociacijos tirpalo (Accutase) 8–10 minučių kambario temperatūroje. Po to įpilama kultūrinės terpės, o atsiskyrusios ląstelės centrifuguojamos. Supernatantas išpilamas, o ląstelių nuosėdos atsargiai resuspenduojamos. Ląstelės perpilamos į naują kultūrinę kolbą augimui.
Auginimo terpė:
HUVEC ląstelėms kultivuoti naudojama endotelio ląstelių auginimo terpė. Terpė keičiama kas 2–3 dienas. HUVEC ląsteles galima naudoti iki 8–10 kartų.
Auginimo sąlygos:
Žmogaus endotelio ląstelių linija (HUVEC) laikoma drėgname inkubatoriuje su 5 % CO2 esant 37 °C temperatūrai.
Laikymas:
HUVEC ląstelės paprastai laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje ultražemos temperatūros šaldiklyje arba skysto azoto garų fazėje. Tai užtikrina ląstelių gyvybingumą ilgesnį laiką.
Užšaldymo procesas ir terpė:
HUVEC ląstelėms konservuoti rekomenduojama naudoti CM-1 arba CM-ACF užšaldymo terpę. Paprastai rekomenduojamas lėtas užšaldymo procesas, nes jis leidžia temperatūrai sumažėti tik 1 °C per minutę, taip apsaugant ląsteles nuo šoko ir išlaikant jų gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Norėdami atšildyti užšaldytas ląsteles, įdėkite jas į iš anksto įkaitintą 37 °C vandens vonią 40–60 sekundžių, kol liks tik nedidelis ledo gabalėlis. Tada į ląsteles įpilkite šviežios terpės ir centrifuguokite. Šis žingsnis būtinas, kad būtų pašalinti šaldymo terpės likučiai. Pakartotinai suspenduokite ląstelių nuosėdas ir perkelkite ląsteles į naują kolbą su kultūrinės terpės.
Biologinio saugumo lygis:
Norint tinkamai dirbti su HUVEC ląstelių kultūromis, reikalinga 1 biologinio saugumo lygio laboratorija.
Paskelbta: 2023 m. | Paskutinis peržiūrėjimas: 2026 m. gegužė
- Privalumai ir trūkumai
- HUVEC ląstelių pritaikymas moksliniuose tyrimuose
- Publikacijos apie HUVEC ląsteles
- Informacija apie HUVEC ląstelių linijos kultivavimą
- HUVEC ląstelių kilmė ir bendrosios savybės
- 6. Ištekliai, susiję su HUVEC ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
Privalumai ir trūkumai
Kaip ir kitos žmogaus ląstelių linijos, HUVEC ląstelės turi savų privalumų ir trūkumų. Šiame skyriuje aptarsime keletą svarbiausių, kurie daro didelę įtaką jų naudojimui moksliniuose tyrimuose.
Privalumai
Pagrindiniai HUVEC ląstelių privalumai yra šie:
-
Endotelio ląstelių modelis
Labai tinkami modeliai angiogenezei, kraujagyslių biologijai ir su endotelio funkcija susijusioms ligoms tirti.
-
Lengva auginti
Palyginti lengvai izoliuojamos iš žmogaus virkštelės. Neturi sudėtingų ląstelių kultivavimo reikalavimų ir jas lengva išlaikyti mokslinių tyrimų laboratorijose.
Apribojimai
Su HUVEC endotelio ląstelių linija susiję apribojimai yra šie:
-
Ribotas gyvenimo trukmė
HUVEC ląstelės turi ribotą gyvavimo trukmę, paprastai tinka 8–10 pasėlių, o tai yra apribojimas atliekant ilgalaikius eksperimentus. Didėjant pasėlių skaičiui, jos gali senėti.
HUVEC ląstelių pritaikymas moksliniuose tyrimuose
HUVEC ląstelės turi didelį potencialą įvairiems pritaikymams biomedicinos srityje. Čia pabrėšime keletą svarbių HUVEC ląstelių pritaikymų moksliniuose tyrimuose.
- Širdies ir kraujagyslių ligų tyrimai: HUVEC ląstelių linija yra vertingas endotelio ląstelių modelis, suteikiantis įžvalgų apie širdies ir kraujagyslių ligų, tokių kaip aterosklerozė, trombozė ir hipertenzija, mechanizmus. Tyrėjai naudoja šias ląsteles, kad ištirtų endotelio disfunkcijos, oksidacinio streso ir uždegimo mechanizmus. Pavyzdžiui, 2020 m. atliktame tyrime buvo naudojamos HUVEC ląstelės ir nustatyta, kad ilga nekoduojanti RNR TTTY15 atlieka lemiamą vaidmenį mažinant hipoksijos sukeltą kraujagyslių endotelio ląstelių pažeidimą, veikdama miRNA-186-5p ašį [1].
- Vėžio tyrimai: HUVEC ląstelės yra idealios kraujagyslių biologijos tyrimams. Todėl jos naudojamos navikų angiogenezei ir endotelio ląstelių sąveikai tirti. Tai padeda mokslininkams suprasti, kaip navikai gauna perteklinį kraujo tiekimą ir dauginasi. Pavyzdžiui, Hui Wang ir kolegos nustatė, kad burnos plokščialąstelinio karcinomo (OSCC) ląstelės išskiria eksosomas, kurios padidina miRNA-210-3p lygį ir sumažina efrino A3 ekspresiją HUVEC ląstelėse bei skatina vamzdelių formavimąsi reguliuodamos PI3K/AKT kaskadą, kaip patvirtinta HUVEC vamzdelių formavimo tyrimu [2].
- Vaistų tyrimai: HUVEC endotelio ląstelės plačiai naudojamos vaistų tyrimams. Naudodami HUVEC ląsteles, mokslininkai gali in vitro įvertinti natūralių junginių, nanodalelių ir kitų terapinių medžiagų veiksmingumą, toksiškumą bei galimus šalutinius poveikius. Pavyzdžiui, viename tyrime buvo vertinamas Rheum ribes ekstrakto sintezuotų sidabro nanodalelių toksiškumas naudojant HUVEC ląsteles [3].
Publikacijos apie HUVEC ląsteles
Šioje straipsnio dalyje bus pateikta keletas dažnai cituojamų ir įdomių mokslinių publikacijų, kuriose aptariamos HUVEC ląstelės.
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology“ (2019 m.). Jame teigiama, kad neurotransmiteris gama-aminobutyro rūgštis (GABA) slopina H2O2 sukeltą oksidacinį stresą HUVEC ląstelėse; taigi, ji galėtų būti veiksmingas farmakologinis agentas kovojant su oksidacinės žalos sukeltomis širdies ir kraujagyslių ligomis.
Šiame tyrime, paskelbtame leidinyje „Biochemical and Biophysical Research Communications“ (2020 m.), buvo tirta, kaip estrogenas reguliuoja signalo perdavimo medžiagą, glikoproteiną 130 (gp130), HUVEC ląstelėse.
Substrato standumas reguliavo A549 ląstelių ir HUVEC migraciją bei angiogenezės potencialą
Šiame moksliniame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Journal of Cellular Physiology“ (2017 m.), buvo tiriamas kintančio substrato standumo poveikis endotelio ląstelių (A549 ir HUVEC) migracijai ir angiogenezei. Šiems poveikiams įvertinti buvo atlikti HUVEC migracijos ir HUVEC angiogenezės tyrimai.
Vario oksido nanodalelių nusėdimas lizosomose sukelia HUVEC ląstelių mirtį
Šiame „Biomaterials“ (2018 m.) žurnale paskelbtame tyrime nagrinėjami galimi mechanizmai, lemiantys vario oksido nanodalelių toksiškumą kraujagyslių endotelio ląstelėse.
Šiame „Medicine“ (2020 m.) paskelbtame tyrime teigiama, kad natūralus junginys kvercetinas slopina TNF-alfa sukeltą HUVEC apoptozę ir uždegimą, reguliuodamas AP-1 ir NF-kB signalinius kelius.
6. Ištekliai, skirti HUVEC ląstelių linijai: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami keli internetiniai ištekliai, susiję su HUVEC ląstelėmis.
- HUVEC transfekcija: Ši svetainė suteiks išsamią informaciją apie HUVEC transfekciją. Pavyzdžiui, joje pateikiama informacija apie transfekcijos reagentus ir in vitro HUVEC transfekcijos protokolas.
Šioje nuorodoje pateikiamas HUVEC ląstelių kultūros protokolas.
- HUVEC ląstelių kultūra: Šis dokumentas padės jums susipažinti su HUVEC ląstelių kultūros protokolais, skirtais subkultūrai ir kriokonservuotų kultūrų tvarkymui.
Nuorodos
- Zheng, J., et al., LncRNA TTTY15 reguliuoja hipoksijos sukeltą kraujagyslių endotelio ląstelių pažeidimą, veikdamas miR-186-5p širdies ir kraujagyslių ligų atveju. European Review for Medical & Pharmacological Sciences, 2020. 24(6).
- Wang, H., et al., OSCC eksosomos reguliuoja miR-210-3p, nukreipdamos EFNA3, kad skatintų burnos vėžio angiogenezę per PI3K/AKT kelią. BioMed research international, 2020. 2020.
- Unal, İ. ir S. Egri, Sidabro nanodalelių biosintezė naudojant Rheum ribes vandeninį ekstraktą, charakteristika ir toksiškumo HUVEC ir Artemia salina vertinimas. Inorganic and Nano-Metal Chemistry, 2022: p. 1-14.