HT22 ląstelių linija
HT22 yra pelių neuronų ląstelių linija, dažnai naudojama neurologijos moksliniuose tyrimuose. Ji yra vertinga tyrinėjant neurodegeneracinius sutrikimus ir bandant potencialius neuroprotektyvinius gydymo būdus ar terapijas. Be to, HT22 ląstelės yra jautrios glutamatui, todėl naudojamos tirti glutamato sukeltą toksiškumą ar neuronų pažeidimus.
- Auginimo terpė
- HT22 ląstelėms auginti naudojama DMEM terpė. Siekiant užtikrinti optimalų ląstelių augimą, ji papildoma 10 % FBS, 4,5 g/l gliukozės, 4 mM L-glutamino, 1,5 g/l NaHCO3 ir 1,0 mM natrio piruvato.
- Padvigubėjimo laikas
- HT22 ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 15 valandų.
- Augimo tipas
- HT22 ląstelės yra adhezyvinės.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsisakykite HT22
Šiame straipsnyje pabrėžiami svarbiausi HT22 ląstelių aspektai, kurie gali padėti jūsų moksliniuose tyrimuose. Jame daugiausia bus aptariama:
- Bendrieji HT22 ląstelių požymiai ir kilmė
- HT22 ląstelių linijos auginimo informacija
- HT22 ląstelių linijos privalumus ir trūkumus
- HT22 ląstelių linijos taikymą moksliniuose tyrimuose
- Moksliniai leidiniai, kuriuose aptariamos HT22 ląstelės
- Ištekliai, susiję su HT22 ląstelėmis: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Bendrieji HT22 ląstelių požymiai ir kilmė
Šiame straipsnio skyriuje bus aptarta HT22 ląstelių kilmė ir bendrosios charakteristikos. Prieš pradedant dirbti su ląstelių linija, būtina žinoti šią informaciją. Čia sužinosite: Kas yra HT22 ląstelės? Kokia yra HT22 hipokampo ląstelių morfologija? Koks yra HT22 ląstelių dydis?
HT22 yra nuolatinė ląstelių linija, gauta iš pelių smegenų hipokampo srities. Tai yra pirminės HT-4 ląstelių linijos subklonas, sukurtas imortalizavus pelių neuroninius audinius naudojant temperatūrai jautrų poliomaviruso simian virus 40 (SV40) T antigeną.
Šios ląstelės skiriasi nuo subrendusių hipokampo ląstelių, nes jose nėra glutamato ir cholinerginių receptorių, būdingų subrendusiems hipokampo kilmės neuronams. Todėl jos netinka atminties tyrimams [1].
HT22 ląstelės išvaizda primena epitelines ląsteles.
Informacija apie HT22 ląstelių linijos auginimą
HT22 ląstelės naudojamos neurologijos mokslinių tyrimų laboratorijose. Prieš pradėdami kultivuoti šias ląsteles, mokslininkai ieško svarbios informacijos apie ląstelių kultūrą, kuri palengvintų jų darbą ir padidintų jo efektyvumą. Šiame skyriuje aptariami visi pagrindiniai HT22 ląstelių kultivavimo aspektai. Sužinosite: koks yra HT22 ląstelių padvigubėjimo laikas? Kaip kultivuoti HT22 ląsteles? Koks yra HT22 ląstelių kultivavimo protokolas? Kokia yra HT22 ląstelių terpė?
Svarbiausi HT22 ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
HT22 ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 15 valandų.
Adhezinės ar suspensijos:
HT22 ląstelės yra adhezyvinės.
Subkultivavimo santykis:
HT22 hipokampo ląstelių subkultivavimo santykis yra nuo 1:3 iki 1:6. Trumpai tariant, terpė pašalinama, o adhezinės ląstelės nuplaunamos 1 x PBS. Į kolbą įpilamas „Accutase“ disociacijos tirpalas, o ląstelės inkubuojamos 8–10 minučių kambario temperatūroje. Po to įpilama šviežia kultūrinė terpė, o ląstelės surenkamos į buteliuką centrifugavimui. Gautas ląstelių nuosėdas atsargiai resuspenduojamas, o ląstelės išpilamos į kultūrinę kolbą augimui.
Auginimo terpė:
HT22 ląstelėms kultivuoti naudojama DMEM terpė. Ji papildoma 10 % FBS, 4,5 g/l gliukozės, 4 mM L-glutamino, 1,5 g/l NaHCO3 ir 1,0 mM natrio piruvato, siekiant užtikrinti optimalų ląstelių augimą.
Auginimo sąlygos:
HT22 ląstelių kultūros laikomos drėgname inkubatoriuje (37 °C temperatūroje) su 5 % CO2 tiekimu.
Laikymas:
Užšaldytos HT22 ląstelės gali būti ilgą laiką laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje skysto azoto garų fazėje arba itin žemos temperatūros elektrinėje šaldymo kameroje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
HT22 ląstelės gali būti užšaldomos CM-1 arba CM-ACF terpėse, naudojant lėto užšaldymo metodą. Šis procesas leidžia mėginio temperatūrai per minutę sumažėti tik 1 °C, apsaugo ląsteles nuo šoko ir padeda išlaikyti jų gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Ląstelės atšildomos 37 °C vandens vonioje 40–60 sekundžių, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Po to į ląsteles įpilama kultūrinės terpės ir jos centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės komponentai. Ląstelių nuosėdos resuspenduojamos ir ląstelės supilamos į naują kolbą su kultūrine terpe. Po to ląstelės inkubuojamos 37 °C temperatūroje inkubatoriuje ne mažiau kaip 24 valandas.
Biologinio saugumo lygis:
HT22 ląstelėms kultivuoti būtina 1 biologinio saugumo lygio laboratorija.
HT22 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
HT22 hipokampo ląstelės turi tam tikrų privalumų ir trūkumų, kurie jas išskiria iš kitų neuroninių ląstelių linijų. Čia paminėti kai kurie reikšmingi šios ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.
Privalumai
HT22 pelių neuronų ląstelių linijos privalumai yra šie:
-
Spartus augimo tempas
HT22 ląstelių dvigubėjimo laikas yra 15 valandų, todėl galima greitai ir efektyviai atlikti eksperimentus bei laiku gauti tyrimų rezultatus.
-
Nemirtingumas
HT22 yra nemirtinga ląstelių linija, užtikrinanti nuolatinį augimą ilgą laiką. Tai užtikrina nuolatinį ląstelių prieinamumą, sumažina laiką ir išlaidas bei palengvina ilgalaikius eksperimentus su nuosekliais rezultatais.
Trūkumai
HT22 ląstelių trūkumai yra šie:
-
Pelių kilmė
HT22 ląstelių linija buvo gauta iš pelių smegenų hipokampo audinio, kuris gali nevisiškai atspindėti žmogaus neuronų ląstelių fiziologijos ir elgsenos sudėtingumą, o tai riboja jų taikymo praktikoje aktualumą.
4. HT22 ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose
HT22 ląstelės plačiai naudojamos neurobiologijos tyrimuose. Šiame straipsnio skyriuje aptariami keli perspektyvūs šios ląstelių linijos pritaikymo atvejai:
- Neurologijos tyrimai: HT22 ląstelės plačiai naudojamos neurodegeneracinių ligų, t. y. Alzheimero ir Parkinsono ligų, tyrimuose. Jos laikomos vertinga tyrimo priemone, padedančia tirti su šiomis ligomis susijusius neurotoksinio poveikio ir oksidacinio streso mechanizmus. 2020 m. atliktas tyrimas parodė, kad PI3K/AKT/CREB signalinis kelias yra susijęs su hiperglikemijos sukeltu nervų toksiškumu HT22 ląstelėse [2]. Panašiai, neseniai atliktame tyrime buvo iškelta hipotezė, kad Nrf2/HO-1 signalinis kelias ir NF-κB signalinė ašis vaidina svarbų vaidmenį HT22 ląstelių amiloido beta toksiškumui [3].
- Vaistų atranka: HT22 ląstelės plačiai naudojamos vaistų bandymams ir atrankai. Jos padeda tyrėjams identifikuoti potencialius terapinius agentus, pasižyminčius neuroprotektyviu poveikiu kovojant su neurodegeneracinėmis ligomis. 2019 m. atliktame tyrime buvo tiriamas tetrahidrokurkumino junginio neuroprotektyvus potencialas glutamatu apdorotose HT22 hipokampo ląstelėse. Šiuo atveju glutamatas sukelia oksidacinį stresą HT22 ląstelėse ir sukelia ląstelių mirtį, aktyvuodamas mitogenu aktyvuojamas proteinkinazes [4].
5. Moksliniai straipsniai, kuriuose nagrinėjamos HT22 ląstelės
Štai keletas įdomių mokslinių straipsnių, kuriuose aptariama HT22 ląstelių linija:
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „International Journal of Molecular Medicine“ (2019 m.), buvo iškelta hipotezė apie krokinio, iš Crocus sativus L. išskirto junginio, neuroprotektyvų potencialą L-glutamato pažeistose HT22 ląstelėse.
Šiame leidinyje „Neuropharmacology“ (2018 m.) pranešta, kad oksindolio dariniai apsaugo nuo oksidacinio streso sukelto HT22 ląstelių mirimo.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Journal of Ginseng Research“ 2019 m. Šiame tyrime buvo tiriamas natūralaus produkto, ginsenozido Rb2, neuroprotektyvus poveikis, naudojant HT22 ląstelių liniją. Tyrimas parodė, kad ginsenozidas Rb2 veiksmingai sumažino glutamato sukeltą oksidacinį stresą ir ląstelių mirtį pelių hipokampo ląstelėse HT22.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Ecotoxicology and Environmental Safety“ (2021 m.), buvo įvertintas sidabro nanodalelių citotoksinis potencialas HT22 ląstelių linijoje.
Ferrostatinas-1 apsaugo HT-22 ląsteles nuo oksidacinio toksiškumo
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2020 m. žurnale „Neural regeneration research“. Jame teigiama, kad ferrostatin-1, ferroptozės inhibitorius, apsaugo HT22 hipokampo ląsteles nuo oksidacinio toksiškumo.
Ištekliai apie HT22 ląsteles: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Kai kuriuose internetiniuose ištekliuose apie HT22 ląsteles paaiškinami jų transfekcijos, diferenciacijos ir ląstelių kultūros protokolai:
- HT22 transfekcija: Šiame dokumente pateikiamas optimizuotas HT22 transfekcijos protokolas 24 ir 96-duobių ląstelių kultūros lėkštelėse.
- HT22 ląstelių diferenciacija: Šis straipsnis išsamiai supažindins jus su HT22 diferenciacijos protokolu.
Šioje nuorodoje pateikiamas HT22 ląstelių kultivavimo protokolas:
- HT22 ląstelių subkultūravimas: Ši nuoroda padės jums susipažinti su HT22 ląstelių linijos subkultūravimo protokolu. Be to, ji padės jums susipažinti su protokolu, skirtu neurotoksiniam poveikiui ląstelėse sukelti.
- HT22 hipokampo ląstelės: Šioje svetainėje pateikiama daug naudingos informacijos apie HT22 ląstelių dvigubėjimo laiką, terpes ir ląstelių kultūros protokolus.
Nuorodos
- He, M., et al., Diferenciacija sukelia HT22 neuronų jautrumą eksitotoksiniam poveikiui. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetinas apsaugo HT22 ląsteles nuo aukšto gliukozės lygio sukelto neurotoksinio poveikio per PI3K/Akt/CREB signalizacijos kelią. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Berberino apsauginis poveikis nuo β-amiloido sukelto neurotoksinio poveikio HT22 ląstelėse per Nrf2/HO‐1 kelią. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Tetrahidrokurkumino neuroprotektyvus poveikis glutamato sukeltam oksidaciniam stresui hipokampo HT22 ląstelėse. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.