HT22 ląstelių linija
HT22 yra pelės neuronų ląstelių linija, dažnai naudojama neurobiologiniuose tyrimuose. Ji vertinga tiriant neurogeneracinius sutrikimus ir bandant galimus neuroprotekcinius gydymo būdus. Be to, HT22 ląstelės yra jautrios glutamatui, todėl jos naudojamos tiriant glutamato sukeltą toksiškumą ar neuronų pažeidimus.
Šiame straipsnyje pabrėžiami svarbiausi HT22 ląstelių aspektai, kurie gali padėti jums atliekant mokslinius tyrimus. Jame daugiausia aptariama:
- Bendrieji HT22 ląstelių požymiai ir kilmė
- HT22 ląstelių linijos kultivavimo informacija
- HT22 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
- HT22 ląstelių linijos mokslinių tyrimų pritaikymas
- Mokslinių tyrimų publikacijos, kuriose naudojamos HT22 ląstelės
- Šaltiniai, susiję su HT22 ląstelėmis: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt
1. Bendrieji HT22 ląstelių požymiai ir kilmė
Šioje straipsnio dalyje bus paaiškinta HT22 ląstelių kilmė ir bendrosios savybės. Žinoti šią informaciją apie ląstelių liniją būtina prieš pradedant su ja dirbti. Čia sužinosite: Kas yra HT22 ląstelės? Kokia HT22 hipokampo ląstelių morfologija? Koks yra HT22 ląstelių dydis?
HT22 yra ištisinė ląstelių linija, gauta iš pelių smegenų hipokampo srities. Tai tėvinės HT-4 ląstelių linijos subklonas, sukurtas imortalizuojant pelių neuronų audinius, naudojant temperatūrai jautrų T antigeną - simpatinio viruso 40 (SV40) poliomavirusą.
Šios ląstelės skiriasi nuo subrendusių hipokampo ląstelių, nes neturi glutamato ir cholinerginių receptorių, kaip ir subrendę hipokampo kilmės neuronai. Todėl jos netinka su atmintimi susijusiems tyrimams [1].
HT22 ląstelės yra panašios į epitelio ląsteles.
2. HT22 ląstelių linijos kultivavimo informacija
HT22 ląstelės naudojamos neurobiologinių tyrimų laboratorijose. Prieš kultivuodami šias ląsteles tyrėjai ieško svarbiausios ląstelių kultūrų informacijos, kuri palengvintų ir pagerintų jų darbą. Šiame skyriuje aptariami visi svarbiausi HT22 ląstelių kultivavimo klausimai. Sužinosite: Koks yra HT22 ląstelių padvigubėjimo laikas? Kaip auginti HT22 ląsteles? Koks yra HT22 ląstelių kultivavimo protokolas? Kas yra HT22 ląstelių terpė?
Pagrindiniai HT22 ląstelių kultivavimo aspektai
|
Padvigubėjimo laikas: |
HT22 ląstelių padvigubėjimo laikas yra maždaug 15 valandų. |
|
Prigludusios arba suspenduotos: |
HT22 ląstelės yra prigludusios. |
|
Subkultivavimo santykis: |
HT22 hipokampo ląstelių subkultūracijos santykis yra nuo 1:3 iki 1:6. Trumpai, terpė pašalinama, o prilipusios ląstelės nuplaunamos 1 x PBS. Į kolbą įpilama akutazės disociacijos tirpalo ir ląstelės inkubuojamos 8-10 minučių aplinkos temperatūroje. Po to įpilama šviežios terpės ir ląstelės surenkamos į buteliuką centrifugavimui. Gautos ląstelių granulės atsargiai resuspenduojamos ir ląstelės paskirstomos į auginimo kolbą. |
|
Augimo terpė: |
HT22 ląstelėms auginti naudojama DMEM terpė. Kad ląstelės optimaliai augtų, ji papildyta 10 % FBS, 4,5 g/l gliukozės, 4 mM L-glutamino, 1,5 g/l NaHCO3 ir 1,0 mM natrio piruvato. |
|
Augimo sąlygos: |
HT22 ląstelių kultūros laikomos drėkinamajame inkubatoriuje (37 °C temperatūra) su 5 %CO2 . |
|
Laikymas: |
Sušaldytas HT22 ląsteles galima ilgai laikyti žemesnėje nei -150 °C temperatūroje skysto azoto garų fazėje arba itin žemos temperatūros elektriniame šaldiklyje. |
|
Šaldymo procesas ir terpė: |
HT22 ląstelės gali būti užšaldomos CM-1 arba CM-ACF terpėje taikant lėto užšaldymo metodą. Šis procesas leidžia sumažinti mėginio temperatūrą tik 1 °C per minutę, apsaugo ląsteles nuo šoko ir padeda išlaikyti jų gyvybingumą. |
|
Atšildymo procesas: |
Ląstelės atšildomos 37 °C temperatūros vandens vonelėje 40-60 sekundžių, kol lieka nedidelis ledo gabalėlis. Po to į ląsteles įpilama kultūrinės terpės ir jos centrifuguojamos, kad būtų pašalinti šaldymo terpės komponentai. Ląstelių granulės resuspenduojamos ir ląstelės supilamos į naują kolbą su kultūrine terpe. Po to ląstelės inkubatoriuje 37 °C temperatūroje inkubuojamos mažiausiai 24 valandas. |
|
Biologinės saugos lygis: |
HT22 ląstelėms auginti privaloma taikyti 1 biologinės saugos lygį atitinkančias laboratorines sąlygas. |
3. HT22 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai
HT22 hipokampo ląstelės yra susijusios su tam tikrais privalumais ir trūkumais, kurie jas skiria nuo kitų neuronų ląstelių linijų. Čia paminėti kai kurie svarbūs šios ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.
Privalumai
HT22 pelės neuronų ląstelių linijos privalumai:
-
Greitas augimo greitis
HT22 ląstelių padvigubėjimo trukmė - 15 valandų, todėl eksperimentai atliekami greitai ir efektyviai, o tyrimų rezultatai gaunami laiku.
-
Imortalizacija
HT22 yra imortalizuota ląstelių linija, todėl užtikrinamas ilgalaikis augimas. Tai užtikrina nuolatinį ląstelių prieinamumą, sumažina laiko sąnaudas ir išlaidas bei palengvina ilgalaikius eksperimentus su pastoviais rezultatais.
Trūkumai
HT22 ląstelių trūkumai:
-
Kiaulių kilmė
HT22 ląstelių linija buvo gauta iš pelių smegenų hipokampo audinio, kuris gali nevisiškai atspindėti sudėtingą žmogaus neuronų ląstelių fiziologiją ir elgseną, o tai riboja jų pritaikomąją reikšmę.
4. HT22 ląstelių linijos pritaikymas moksliniams tyrimams
HT22 ląstelės plačiai naudojamos neurobiologiniuose tyrimuose. Šiame straipsnio skyriuje aptariami keli perspektyvūs šios ląstelių linijos taikymo būdai:
- Neurobiologijos tyrimai: HT22 ląstelės plačiai naudojamos neurodegeneracinių ligų, t. y. Alzheimerio ir Parkinsono ligų, tyrimams. Jos laikomos vertinga mokslinių tyrimų priemone tiriant su šiomis ligomis susijusį neurotoksiškumą ir oksidacinio streso mechanizmus. 2020 m. atliktais tyrimais nustatyta, kad PI3K/AKT/CREB kelias yra susijęs su hiperglikemijos sukeltu nerviniu toksiškumu HT22 ląstelėse [2]. Panašiai neseniai atliktame tyrime pasiūlyta, kad Nrf2/HO-1 kelias ir NF- κB signalizavimo ašis vaidina svarbų vaidmenį HT22 amyloido beta toksiškumo procese [3].
- Vaistų atranka: HT22 ląstelės plačiai naudojamos vaistų testavimo ir atrankinės patikros tikslais. Jos padeda mokslininkams nustatyti galimus terapinius preparatus, pasižyminčius neuroprotekciniu poveikiu kovojant su neurodegeneracinėmis ligomis. 2019 m. atliktame tyrime buvo tiriamas neuroprotekcinis tetrahidrokurkumino junginio potencialas glutamatu apdorotose HT22 hipokampo ląstelėse. Čia glutamatas sukelia oksidacinį stresą HT22 ląstelėse ir sukelia ląstelių žūtį aktyvuodamas mitogeno aktyvuotas baltymų kinazes [4].
5. Mokslinių tyrimų publikacijos su HT22 ląstelėmis
Pateikiame keletą įdomių mokslinių tyrimų straipsnių, kuriuose naudojama HT22 ląstelių linija:
Šiame 2019 m. žurnale "International Journal of Molecular Medicine" paskelbtame tyrime pasiūlytas krocino, junginio, išskirto iš Crocus sativus L., neuroprotekcinis potencialasHT22 ląstelėse,pažeistoseL-glutamato.
Šioje publikacijoje žurnale "Neuropharmacology" (2018 m.) pranešama, kad oksindolo dariniai apsaugo nuo oksidacinio streso sukeltos HT22 ląstelių žūties.
Ginsenozidas Rb2 slopina glutamato sukeltą oksidacinį stresą ir neuronų ląstelių žūtį HT22 ląstelėse
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2019 m. žurnale "Journal of Ginseng Research". Šiame tyrime buvo nagrinėjamas natūralaus produkto, ginsenozido Rb2, neuroprotekcinis poveikis naudojant HT22 ląstelių liniją. Tyrimo metu nustatyta, kad ginsenozidas rb2 veiksmingai sumažino glutamato sukeltą oksidacinį stresą ir ląstelių žūtį pelių hipokampo HT22 ląstelėse.
Šiame žurnale "Ecotoxicology and Environmental Safety" (2021) atliktame tyrime įvertintas sidabro nanodalelių citotoksinis potencialas HT22 ląstelių linijoje.
Ferrostatinas-1 apsaugo HT-22 ląsteles nuo oksidacinio toksiškumo
Šis mokslinis straipsnis paskelbtas 2020 m. žurnale Neural regeneration research. Jame siūloma, kad ferrostatinas-1, ferroptozės inhibitorius, apsaugo nuo oksidacinio toksiškumo HT22 hipokampo ląstelėse.
6. Šaltiniai, skirti HT22 ląstelėms: HT22 šaltiniai: protokolai, vaizdo įrašai ir kt
Kai kuriuose internetiniuose šaltiniuose apie HT22 ląsteles paaiškinami jų transfekcijos, diferenciacijos ir ląstelių kultūrų protokolai:
- HT22 transfekcija: Šiame dokumente pateikiamas optimizuotas HT22 transfekcijos 24 ir 96 duobučių ląstelių kultūrų plokštelėse protokolas.
- HT22 ląstelių diferenciacija: Šiame straipsnyje išsamiai aprašomas HT22 diferencijavimo protokolas.
Šioje nuorodoje pateikiamas HT22 ląstelių auginimo protokolas:
- HT22 ląstelių subkultūrinimas: Šioje nuorodoje rasite HT22 ląstelių linijos subkultūrinimo protokolą. Be to, ji padės jums sužinoti ląstelių neurotoksiškumo sukėlimo protokolą.
- HT22 hipokampo ląstelės: Šioje svetainėje pateikiama daug naudingos informacijos apie HT22 ląstelių padvigubėjimo laiką, terpę ir ląstelių auginimo protokolus.
Nuorodos
- He, M., et al., Differentiation renders susceptibility to excitotoxicity in HT22 neurons (Diferenciacija lemia HT22 neuronų jautrumą eksitotoksiškumui ). Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin prevents HT22 cells from high glucose-induced neurotoxicity via PI3K/Akt/CREB signal way. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Protective effects of berberine against β-amyloid-induced neurotoxicity in HT22 cells via the Nrf2/HO-1 pathway. Bioorganinė chemija, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Neuroprotective effects of tetrahydrocurcumin against glutamate-induced oxidative stress in hippocampal HT22 cells. Molekulės, 2019. 25(1): p. 144.