HK-2 ląstelės – inkstų funkcijos ir patologijos tyrimas naudojant HK-2 ląsteles inkstų tyrimuose
HK-2 yra nemirtinga žmogaus inkstų epitelio ląstelių linija, dažnai naudojama toksikologijos tyrimuose. Tyrėjai vertina aplinkos toksinų poveikį šioms inkstų ląstelėms. Be to, jie taip pat naudoja HK-2 ląsteles inkstų ligų ir jų pagrindinių mechanizmų tyrimams.
- Auginimo terpė
- Keratinocitų ląstelių linijos terpė, kurioje yra 10 % veršelių serumo, 0,05 mg/ml galvijų hipofizės ekstrakto (BPE) ir 5 ng/ml epiderminio augimo faktoriaus (EGF), yra ideali HK-2 ląstelių terpė. Terpę reikia keisti kas 2–3 dienas per savaitę.
- Padvigubėjimo laikas
- HK-2 ląstelių dvigubėjimo laikas svyruoja nuo 47,3 val. iki 61,7 val.
- Augimo tipas
- HK-2 inkstų epitelio ląstelių linija yra adhezyvinė.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-2
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsisakyti HK-2
- HK-2 ląstelės: kilmė ir bendrosios charakteristikos
- HK-2 ląstelių linija: informacija apie auginimą
- HK-2 ląstelių privalumai ir trūkumai
- HK-2 ląstelių linijos pritaikymas moksliniuose tyrimuose
- 5. HK-2 ląstelės: moksliniai leidiniai
- Ištekliai, susiję su HK-2 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
HK-2 ląstelės: kilmė ir bendrosios charakteristikos
Norint tinkamai tvarkyti, prižiūrėti ir naudoti ląstelių liniją, būtina žinoti jos kilmę ir bendrąsias charakteristikas. Šiame straipsnio skyriuje bus aptariama: Kas yra HK-2 ląstelės žmogaus inkstuose 2? Koks yra HK2 vaidmuo? Kas yra HK2 ląstelės? Kokia yra HK-2 ląstelių linijos kilmė? Koks yra HK-2 ląstelių dydis ir morfologija?
- Žmogaus inkstų 2 (HK-2) ląstelės yra proksimalinių kanalėlių ląstelių tipas, kilęs iš normalaus Europos suaugusiojo inkstų audinio. HK-2 ląstelių linija buvo sukurta transfekuojant inkstų ląsteles rekombinuotu retrovirusu, sudarytu iš žmogaus papilomos viruso 16 E6/E7 genų. Šis eksperimentas lėmė nemirtingumą ir nuolat augančios HK-2 inkstų epitelio ląstelių linijos sukūrimą.
- HK-2 ląstelės pasižymi epiteline morfologija.
- HK-2 ląstelių skersmuo svyruoja nuo 17,4 iki 18,6 µm. Vidutinis skersmuo yra 18,2 µm [1].
HK-2 ląstelių linija: informacija apie auginimą
Informacija apie žmogaus inkstų 2 ląstelių linijos kultivavimą gali būti labai naudinga prieš pradedant su ja dirbti. Šiame straipsnio skyriuje pateikiama būtina informacija apie HK-2 ląstelių kultūrą. Sužinosite: ar HK-2 ląstelės yra adhezyvios? Koks yra HK-2 ląstelių dvigubėjimo laikas? Kokioje terpėje kultivuojamos HK-2 ląstelės?
Svarbiausi HK-2 ląstelių auginimo aspektai
Populiacijos dvigubėjimo laikas:
HK-2 ląstelių dvigubėjimo laikas svyruoja nuo 47,3 val. iki 61,7 val.
Adhezyvios ar suspensijos:
HK-2 inkstų epitelio ląstelių linija yra adhezyvinė.
Subkultivavimo santykis:
HK-2 ląstelės subkultivuojamos santykiu nuo 1:2 iki 1:4. Adhezinės HK-2 ląstelės nuplaunamos 1 x PBS ir inkubuojamos kambario temperatūroje 8–10 minučių po Accutase tirpalo įpylimo. Kultūrinė terpė įpilama į atskirtas ląsteles ir centrifuguojama. Surinktos ląstelės atsargiai resuspenduojamos ir supilamos į naujas kolbas kultivavimui.
Auginimo terpė:
Keratinocitų ląstelių linijos terpė, kurioje yra 10 % veršelių serumo, 0,05 mg/ml galvijų hipofizės ekstrakto (BPE) ir 5 ng/ml epiderminio augimo faktoriaus (EGF), yra ideali HK-2 ląstelių terpė. Terpę reikia keisti kas 2–3 dienas per savaitę.
Auginimo sąlygos:
Žmogaus inkstų 2 ląstelių linijos kultūros laikomos drėgname inkubatoriuje su 5 % CO2 tiekimu 37 °C temperatūroje.
Laikymas:
Užšaldytos ląstelės laikomos skysto azoto garų fazėje arba žemesnėje nei -150 °C temperatūroje ultražemos temperatūros šaldiklyje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
CM-1 arba CM-ACF užšaldymo terpės yra idealios HK-2 ląstelių užšaldymui. Trumpai tariant, pasirenkamas lėto užšaldymo metodas, leidžiantis temperatūrai kristi tik 1 laipsniu Celsijaus per minutę ir apsaugantis ląsteles nuo bet kokio šoko.
Atšildymo procesas:
Užšaldytos ląstelės atšildomos vandens vonioje, nustatytos 37 laipsnių Celsijaus temperatūroje. Į šias ląsteles įpilama šviežios auginimo terpės ir jos vėl suspenduojamos. Po to ląstelės perpilamos į naują kolbą, kurioje yra auginimo terpė. Po 24 valandų terpė pakeičiama, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės komponentai.
Biologinio saugumo lygis:
HK-2 ląstelių kultūros laikomos 1 biologinio saugumo lygio laboratorijose.
HK-2 ląstelių privalumai ir trūkumai
HK-2 yra plačiai naudojama žmogaus proksimalinių kanalėlių epitelio ląstelių linija. Kaip ir kitos ląstelių linijos, ji taip pat turi tam tikrų privalumų ir trūkumų. Šiame skyriuje aptarsime keletą pagrindinių žmogaus inkstų 2 ląstelių linijos privalumų ir trūkumų.
Privalumai
Pagrindiniai HK-2 ląstelių linijos privalumai yra šie:
Gerai apibūdinta
HK-2 ląstelių linija yra išsamiai apibūdinta morfologijos, dydžio ir genomo atžvilgiu. Šios normalios inkstų ląstelės buvo tiriamos daugybėje mokslinių tyrimų.
Nemirtinga
HK-2 yra nuolatinė ląstelių linija su ilgu gyvenimo ciklu, leidžianti ją dauginti per kelis pasėlius. Ši savybė užtikrina nuolatinį ląstelių tiekimą laboratoriniams eksperimentams.
Proksimalinių kanalėlių epitelio savybės
HK-2 ląstelės pasižymi gerai diferencijuotu fenotipu, būdingu proksimalinių kanalėlių ląstelėms (PTC), randamoms žmogaus inkstuose. Ši unikali savybė daro HK-2 ląsteles vertingu in vitro modeliu inkstų fiziologijos, ląstelių procesų ir reakcijų į įvairius dirgiklius tyrimams.
Apribojimai
Štai keletas HK-2 ląstelių linijos apribojimų:
In vitro modelis
HK-2 tarnauja kaip in vitro modelis normalioms inkstų ląstelėms, ypač pasižymėdamas proksimalinių kanalėlių epitelio ląstelių savybėmis. Tačiau jis gali nevisiškai atkartoti žmogaus inkstų audinio ir in vivo esančios mikroaplinkos sudėtingumą.
HK-2 ląstelių linijos pritaikymas moksliniuose tyrimuose
HK-2 ląstelių linija turi daugybę pritaikymų toksikologijos tyrimuose. Čia aptarėme keletą konkrečių ir reikšmingų šios žmogaus proksimalinių kanalėlių ląstelių linijos pritaikymų moksliniuose tyrimuose.
- Inkstų fiziologija: HK-2 ląstelės dažnai naudojamos normalios inkstų fiziologijos ir funkcijų tyrimams. Mokslininkai naudoja šias proksimalinių kanalėlių epitelio ląsteles jonų kanalų, transporto procesų ir kitų ląstelių mechanizmų, reguliuojančių inkstų homeostazę, tyrimams. Pavyzdžiui, mokslininkai tyrė laikinojo receptoriaus potencialo kanalo 6 (TRPC6) vaidmenį (+)-konokarpano (CNCP), neolignano, sukeltame inkstų epitelio ląstelių, HK-2, ląstelių mirtyje [2].
- Inkstų ligos: Žmogaus inkstų 2 ląstelių linija naudojama įvairioms inkstų ligoms, t. y. ūminiam inkstų pažeidimui ir diabetinei nefropatijai, bei jų pagrindiniams ląstelių ir molekuliniams mechanizmams tirti. Pavyzdžiui, tyrimai parodė, kad klotho baltymo metilinimo lygis yra susijęs su inkstų pažeidimais. Sumažinus Klotho geno promotoriaus metilinimą, galima sustiprinti jo ekspresiją ir sumažinti inkstų pažeidimus, sukeltus diabeto db/db pelių modeliuose ir HK-2 ląstelėse, veiktose dideliu gliukozės kiekiu [3].
- Toksikologiniai tyrimai: HK-2 ląstelės yra puiki tyrimo priemonė įvairių vaistų, cheminių medžiagų ir aplinkos teršalų galimo poveikio vertinimui. Tyrimai gali padėti mokslininkams įvertinti vaistų saugumą ir šalutinį poveikį inkstų ląstelėms. Pavyzdžiui, 2022 m. paskelbtame tyrime buvo vertinamas natūralios žolės Polygonatumkingianum (PK) polisacharidų ir vandeninio ekstrakto potencialus poveikis urano sukeltam nefrotoksiniam poveikiui HK-2 ląstelėse. Jie nustatė, kad PK turi apsauginį poveikį ir apsaugo inkstų ląsteles nuo urano apsinuodijimo [4].
5. HK-2 ląstelės: moksliniai straipsniai
Toliau pateikiami keli įdomūs moksliniai straipsniai, kuriuose aptariamos HK-2 inkstų epitelio ląstelės.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity“ (2022 m.), teigiama, kad cirkuliarinė RNR HIPK3 gali sumažinti HK-2 ląstelių proliferacijos slopinimą, kurį sukelia didelio gliukozės kiekio toksiškumas. Be to, ji gali slopinti ląstelių mirtį, reguliuodama miR-326/miR-487a-3p/SIRT1 kaskadą.
Šiame „Nanomedicine“ (2020) paskelbtame tyrime buvo įvertinti skirtingi aukso nanodalelių (AuNPs) toksiškumo mechanizmai 786-0 vėžio ląstelėse ir HK-2 proksimalinių kanalėlių epitelio ląstelėse.
Aukšto gliukozės lygio sukeltą toksiškumą HK-2 ląstelėse galima sumažinti slopinant miRNA-320c
Šis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Renal Failure“ (2022 m.). Tyrimo rezultatai rodo, kad mikroRNR-320c gali sumažinti aukšto gliukozės lygio sukeltą toksiškumą inkstų ląstelėse (HK-2), veikdama PTEN ir slopindama PI3K/AKT signalizaciją.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Tissue Engineering Part A“ (2022 m.), teigiama, kad iš mezenchiminių kamieninių ląstelių gautos eksosomos užkerta kelią HK-2 inkstų ląstelių epitelio-mezenchiminiam perėjimui.
Žurnalo „Journal of Pharmacy and Pharmacology“ (2019) straipsnyje teigiama, kad lncRNA TapSAKI stiprina HK-2 uždegiminį atsaką ir ląstelių mirtį, reguliuodamas mikroRNR-22/PTEN/TLR4/NF-κB signalizacijos kelią.
Ištekliai, susiję su HK-2 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
HK-2 yra žinoma ląstelių linija. Čia pateikiami ištekliai, aprašantys HK-2 ląstelių kultūros protokolą.
- HK-2 ląstelių kultūra: Šioje svetainėje gausu informacijos apie HK-2 ląstelių kultūrą. Joje pateikiami HK-2 ląstelių terpės receptas, perauginimo protokolas ir protokolas, kaip elgtis su proliferacinėmis ir kriokonservuotomis kultūromis bei jas prižiūrėti.
- Ląstelių perėjimas: Šis vaizdo įrašas padės jums išmokti bendrą adhezyvinių ląstelių linijų dalijimo arba perėjimo protokolą.
Nuorodos
- Handl, J., et al., Pakartotinio perėjimo poveikis žmogaus proksimalinių tubulų HK-2 ląstelių jautrumui toksiniams junginiams. Fiziologiniai tyrimai, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., TRPC6 kanalų aktyvacija prisideda prie (+)-konokarpano sukeltos apoptozinės ląstelių mirties HK-2 ląstelėse. Maisto ir cheminė toksikologija, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., EGCG silpnina inkstų pažeidimus, atstatydamas klotho hipermetilinimą diabetu sergančiose db/db pelėse ir HK-2 ląstelėse. Oksidacinė medicina ir ląstelių ilgaamžiškumas, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Polygonatum kingianum polisacharidų ir vandeninio ekstrakto apsauginis poveikis urano sukeltam toksiškumui žmogaus inkstų (HK-2) ląstelėse. International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.