DU-145 ląstelės – išsamus vadovas tyrėjams
DU-145 yra žmogaus prostatos karcinomos ląstelių linija, plačiai taikoma biomedicininiuose tyrimuose. Šios ląstelės yra neįkainojamas modelis prostatos vėžio biologijos tyrimams, vaistų bandymams ir kūrimui. Be to, mokslininkai naudoja DU-145 ląsteles prostatos vėžio atsiradimo, augimo ir progresavimo molekulinėms mechanizmams tirti.
- Auginimo terpė
- EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) su terpės priedais, t. y. 10 % veršelių serumo (FBS), 2 mM L-glutamino, 2,2 g/l NaHCO3 ir EBSS. Terpė keičiama 2–3 kartus per savaitę.
- Padvigubėjimo laikas
- DU-145 ląstelių skaičiaus padvigubėjimo laikas svyruoja nuo 30 iki 40 valandų.
- Augimo tipas
- DU-145 yra adhezyvinė ląstelių linija.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsisakykite DU-145
- Bendra informacija ir DU-145 ląstelių linijos kilmė
- DU-145 ląstelių kultivavimas
- DU-145 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- DU-145 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
- 5. Moksliniai straipsniai apie DU-145 ląsteles
- Ištekliai, susiję su DU-145 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
Bendra informacija ir DU-145 ląstelių linijos kilmė
Prieš pradedant dirbti su ląstelių linija, būtina suprasti jos pagrindines savybes ir kilmę. Šiame skyriuje pateikiama išsami informacija apie DU-145 ląstelių linijos savybes ir kilmę. Sužinosite: Kas yra DU145 vėžio ląstelės? Kokia yra DU145 ląstelių morfologija? Kuo skiriasi PC-3 ir DU145?
- DU-145, žmogaus prostatos vėžio ląstelių linija, buvo gauta iš metastazavusio prostatos karcinomos sergančio kaukaziečio (69 metų) smegenų. Šias ląsteles pirmą kartą 1978 m. išskyrė K.R. Stone ir kolegos.
- Kaip ir PC-3 prostatos vėžio ląstelės, DU-145 taip pat ekspresuoja androgenų receptorius. Tačiau, kai šios ląstelės yra veikiama androgenų ligandais, jos neparodo jokios androgenų receptoriams jautrių genų aktyvumo, todėl yra laikomos androgenų nepriklausomomis ląstelėmis.
- DU-145 ląstelės turi epitelinę morfologiją.
- DU-145 ląstelės yra hipotriploidinės, o jų modalusis chromosomų skaičius yra 64. Jos pasižymi keliais žymekliais chromosomomis, pvz., del (11) (q23), t(11q12q), 16q+, del (1) (p32) ir del (9) (p11).
PC-3 prieš DU145
Abi prostatos vėžio ląstelių linijos yra nepriklausomos nuo androgenų receptorių. Jos skiriasi savo tumorigeniniu ir metastaziniu potencialu. Įšvirkštus į imuninės sistemos sutrikimų turinčią pelę, PC-3 ląstelių linija suformuoja labai metastazinę IV laipsnio adenokarcinomą. Priešingai, DU-145 ląstelių linija sukelia prostatos vėžį su vidutiniu metastazavimo potencialu [1].
DU-145 ląstelių auginimas
DU-145 ląstelių linija plačiai naudojama prostatos vėžio tyrimų laboratorijose. Norint užtikrinti lengvą ir efektyvų jų auginimą, reikia išmokti šiuos pagrindinius dalykus. Šiame skyriuje pateikiama informacija apie DU-145 terpę, dvigubėjimo laiką, ląstelių auginimo sąlygas ir protokolus.
Svarbiausi aspektai, susiję su DU-145 ląstelių kultivavimu
Populiacijos dvigubėjimo laikas:
DU-145 ląstelių populiacijos padvigubėjimo laikas svyruoja nuo 30 iki 40 valandų.
Adhezinės ar suspensijos:
DU-145 yra adhezyvinė ląstelių linija.
Sėjimo tankis:
DU-145 ląstelės sėjamos rekomenduojamu tankumu – 2 x 104 ląstelės/cm2. Esant šiam tankumui, ląstelės suformuoja konfluentinį monosluoksnį beveik per 4 dienas. Sėjimui ląstelės nuplaunamos 1 x fosfato buferiniu tirpalu ir inkubuojamos su perėjimo tirpalu „Accutase“. Po 8–10 minučių inkubacijos kambario temperatūroje į ląsteles įpilama šviežios auginimo terpės ir jos centrifuguojamos. Surinktas ląstelių nuosėdas atsargiai resuspenduojamas, o ląstelės supilamos į naujas auginimo kolbas augimui.
Auginimo terpė:
EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) su terpės priedais, t. y. 10 % veršelių serumu (FBS), 2 mM L-glutaminu, 2,2 g/l NaHCO3 ir EBSS. Terpė keičiama 2–3 kartus per savaitę.
Auginimo sąlygos:
DU-145 kultūros laikomos 37 °C drėgname inkubatoriuje su 5 % CO2 šaltiniu.
Laikymas:
DU-145 ląstelės laikomos skysto azoto garų fazėje arba elektrinėje šaldymo kameroje, esant temperatūrai žemiau -150 °C, siekiant išlaikyti ląstelių gyvybingumą ilgesnį laiką.
Užšaldymo procesas ir terpė:
DU-145 prostatos vėžio ląstelėms rekomenduojamos CM-1 arba CM-ACF užšaldymo terpės. Ląstelėms užšaldyti pasirenkamas lėtas užšaldymo metodas, leidžiantis temperatūrai palaipsniui kristi 1 °C. Tai apsaugo ląsteles nuo šoko ir padeda išlaikyti jų gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Užšaldyti DU-145 ląstelių buteliukai greitai atšildomi 37 °C vandens vonioje 40–60 sekundžių. Po to į ląsteles įpilama auginimo terpės ir jos centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės komponentai. Surinktos ląstelės resuspenduojamos auginimo terpėje ir supilamos į kolbą augimui. Atšildymas trunka beveik 24 valandas.
Biologinio saugumo lygis:
DU145 androgenų receptorių nepriklausomai ląstelių linijai kultivuoti reikalingos 1 biologinio saugumo lygio sąlygos.
DU-145 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
Kaip ir kitos ląstelių linijos, prostatos vėžio ląstelių linija DU-145 turi tam tikrų privalumų ir trūkumų. Šios savybės gali padėti jums nuspręsti, ar ją naudoti savo tyrimuose. Pagrindiniai DU-145 ląstelių privalumai ir trūkumai nurodyti toliau.
Privalumai
DU-145 ląstelių privalumai yra šie:
Tumorigeniškumas
DU-145 yra agresyvi, navikų formavimo savybių turinti prostatos vėžio ląstelių linija su vidutiniu metastazavimo potencialu. Naudojama DU145 ksenotransplantacijos modelio kūrimui imuninės sistemos sutrikimų turinčiose pelėse, siekiant tirti prostatos vėžio biologiją, vystymąsi ir augimą in vitro ir in vivo.
Nepriklausomybė nuo androgenų receptorių
DU-145 prostatos vėžio ląstelės yra nepriklausomos nuo androgenų receptorių. Jos augimui nereikia androgenų ir, gydant androgenais, ląstelių bei molekuliniu lygmeniu nereaguoja. Idealiai tinka hormonų nepriklausomo prostatos vėžio mechanizmų tyrimams.
Apribojimai
DU-145 ląstelių linijos apribojimai yra šie:
In vitro modelis
DU-145 yra metastazinio prostatos karcinomos in vitro ląstelių modelis, todėl jis gali nevisiškai atspindėti pirminių prostatos navikų sudėtingumą. Be to, dėl specifinių savybių, pvz., nepriklausomybės nuo androgenų receptorių, jis gali neatspindėti visų prostatos vėžio tipų ir potipių.
DU-145 ląstelių taikymas moksliniuose tyrimuose
DU-145 prostatos vėžio ląstelių linija turi platų mokslinių tyrimų pritaikymų spektrą. Čia išvardyti keli perspektyvūs pritaikymo pavyzdžiai.
- Prostatos vėžio biologija: DU-145 yra tinkamas modelis prostatos vėžio biologijai tirti. Mokslininkai naudoja šias ląsteles, kad ištirtų molekulinius mechanizmus, skatinančius vėžio vystymąsi, progresavimą ir metastazavimą. Be to, tiriamos ir genetinės mutacijos, dažniausiai siejamos su prostatos vėžiu. 2021 m. atliktame tyrime buvo tiriamos DU-145 ląstelės, siekiant nustatyti potencialius biomarkerius, kurie būtų naudingi veiksmingai diagnostikai ir terapijai. Tyrimas parodė, kad aktino gama 1 (ACTG1) baltymas gali būti potencialus prostatos vėžio biomarkeris, nes jis skatina vėžio ląstelių proliferaciją ir reguliuoja metastazavimą per MAPK/ERK kelio aktyvaciją [2].
- Vaistų atranka ir kūrimas: DU-145 prostatos vėžio ląstelės plačiai naudojamos potencialių priešvėžinių vaistų citotoksiškumui ir veiksmingumui tirti. Tai padeda mokslininkams atrasti naujus vaistus, suprasti atsparumą vaistams ir pagrindinius molekulinius mechanizmus. 2022 m. atliktame tyrime buvo tiriamas dervų mišinio, propolio arba bičių klijų, citotoksinis poveikis prostatos vėžio ląstelių linijose PC-3 ir DU-145. Tyrimas parodė šios natūralios medžiagos augimą slopinančius poveikius abiejose ląstelių linijose ir pasiūlė jos priešvėžinį potencialą [3]. 2019 m. buvo atliktas kitas tyrimas, kurio metu buvo tiriamas natūralaus junginio betaino antiproliferacinis poveikis DU-145 prostatos vėžio ląstelėse. Tyrimas parodė, kad betainas slopina ląstelių dauginimąsi, didindamas oksidacinio streso sukeltą ląstelių mirtį ir uždegimą DU-145 ląstelėse [4].
5. Moksliniai straipsniai apie DU-145 ląsteles
Toliau pateikiami kai kurie moksliniai leidiniai apie DU-145 ląstelių liniją.
Šiame 2020 m. žurnale „Biological Trace Element Research“ paskelbtame tyrime teigiama, kad cinko sulfatas (ZnSO4) DU-145 ląstelėse sukelia antiproliferacinį poveikį, indukuodamas apoptozę, morfologinius pokyčius, oksidacinį pažeidimą ir uždegimą.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „BMC Complementary Medicine and Therapies“ 2020 m. Šiame tyrime buvo tiriamas augalo Annona muricata L. žievės ekstrakto ir jo biologiškai aktyvios medžiagos annonacino citotoksinis ir antimetastatinis potencialas DU-145 ląstelių linijoje.
Šiame leidinyje „IUBMB Life“ (2019 m.) buvo pasiūlyta, kad ilgo nekoduojančio RNR LOXL1-AS1 sąveika su miR-let-7a-5p ir EGFR keliu reguliuoja doxorubicino atsparumą DU-145 prostatos vėžio ląstelėse.
Šiame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry“ (2020 m.), teigiama, kad Discoidin Domain Receptor1 (DDR1) geno ekspresijos sumažėjimas sukelia DU-145 ląstelių mirtį ir slopina epitelio-mezenchiminį perėjimą (EMT) aktyvuodamas Pyk2/MKK7 signalinį kelią.
Šiame „Journal of Food Biochemistry“ (2019 m.) paskelbtame tyrime teigiama, kad polimetoksiflavonas kasticinas slopina DU-145 ląstelių migraciją ir invaziją, reguliuodamas Ras/Akt/NF-κB signalizaciją.
Ištekliai, susiję su DU-145 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Internete galima rasti daug išteklių apie DU-145 prostatos vėžio ląstelių liniją. Šiame skyriuje paminėsime keletą išteklių, kuriuose paaiškinama, kaip elgtis su šiomis ląstelėmis, jas prižiūrėti ir taikyti transfekcijos protokolą:
- DU-145 transfekcija: Šis vaizdo įrašas yra žingsnis po žingsnio vadovas, skirtas susipažinti su DU-145 ląstelių transfekcijos protokolu.
DU-145 ląstelių kultūros protokolas pateikiamas čia.
- DU-145 subkultūravimas: Ši nuoroda padės jums susipažinti su DU-145 ląstelių subkultūravimo protokolu.
- DU-145 ląstelės: šioje svetainėje pateikiama daug naudingos informacijos apie DU-145 ląstelių liniją, įskaitant DU145 terpę, subkultivavimo protokolą ir informaciją apie proliferacinių bei kriokonservuotų kultūrų tvarkymą.
Nuorodos
- Lima, A.R., et al., Žmogaus prostatos normalių ir vėžinių ląstelių eksometabolomo atskyrimas GC-MS metodu. Moksliniai pranešimai, 2018. 8(1): p. 5539.
- Xiao, L., et al., ACTG1 ekspresijos slopinimas indukuoja prostatos vėžio epitelio-mezenchiminį perėjimą per MAPK/ERK signalizacijos kelią. DNR ir ląstelių biologija, 2021. 40(11): p. 1445-1455.
- Gogacz, M., et al., Šaltojo atskyrimo metodu gautų propolio ekstraktų priešvėžinis poveikis PC-3 ir DU-145 prostatos vėžio ląstelių linijoms. Molecules, 2022. 27(23): p. 8245.
- Kar, F. ir kt., Betainas slopina ląstelių proliferaciją, didindamas oksidacinio streso sukeltą apoptozę ir uždegimą DU-145 žmogaus prostatos vėžio ląstelių linijoje. Ląstelių stresas ir chaperonai, 2019. 24: p. 871–881.