DLD-1 ląstelės: DLD-1 ląstelių taikymas ir įžvalgos storosios žarnos vėžio tyrimuose
DLD-1 yra žmogaus storosios žarnos karcinomos ląstelių linija, dažnai naudojama vėžio tyrimams. Tai vertingas įrankis įvairiems storosios žarnos vėžio aspektams, įskaitant naviko vystymąsi, progresavimą, pagrindinius molekulinius mechanizmus ir atsaką į gydomuosius preparatus, tirti. Taigi DLD-1 yra išskirtinė priemonė, padedanti suprasti ligą ir kurti galimas gydymo strategijas.
Šiame straipsnyje pateikiama svarbi informacija apie DLD-1 ląstelių liniją, kurią turėtumėte žinoti prieš pradėdami su ja dirbti. Jame bus aptarta:
- DLD-1 ląstelių bendrosios savybės ir kilmė
- DLD-1 ląstelių linijos kultivavimo informacija
- DLD-1 ląstelių linija: DLD-1 DLD viruso privalumai ir apribojimai
- DLD-1 ląstelių linijos pritaikymas moksliniams tyrimams
- Mokslinės publikacijos apie DLD-1 ląstelių liniją
- DLD-1 ląstelių linijos šaltiniai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt
1. DLD-1 ląstelių bendrosios savybės ir kilmė
Prieš pradėdamas dirbti su ląstelių linija, tyrėjas pirmiausia atsižvelgia į jos kilmę ir bendrąsias savybes. Šiame straipsnio skyriuje išsamiai pristatoma DLD-1 ląstelių linija. Jame aptariami šie dažniausiai užduodami klausimai: Kas yra DLD-1 ląstelės? Kas yra DLD-1 vėžio ląstelių linija? Kokios yra DLD-1 ląstelių linijos mutacijos? Koks yra DLD-1 ląstelės dydis? Kokia yra DLD-1 ląstelių morfologija?
- DLD-1 - storosios žarnos vėžio ląstelių linija, gauta iš 67 metų vyro, sergančio storosios žarnos adenokarcinoma, storosios žarnos. Ją 1977-1979 m. išskyrė D. L. Dexteris su kolegomis. Ši ląstelių linija yra tos pačios kilmės kaip ir HCT-8, HCT-15 ir HRT-18 ląstelių linijos.
- Kaip ir storosios žarnos vėžys, DLD-1 ląstelės pasižymi mikrosatelitinio nestabilumo fenotipu [1].
- DLD-1 ląstelėse yra KRAS, P53, BRAF, BRCA1 ir BRCA2 mutacijų. Dėl DLD-1 P53 statuso, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 ir DLD-1 KRAS mutacijos šios ląstelės laikomos idealiomis vėžio tyrimams.
- Šių ląstelių morfologija panaši į epitelio.
- DLD-1 ląstelių linijos dydis yra maždaug 15 µm.
- DLD-1 žmogaus storosios žarnos vėžio ląstelių linija turi pseudodiploidinį kariotipą. Apie 86 % ląstelių turi 46 chromosomų skaičių. Tačiau 17,1 % ląstelių populiacijos gali būti ir poliploidinių.
2.dLD-1 ląstelių linijos kultivavimo informacija
Prieš kultivuodami bet kurią ląstelių liniją, turite žinoti pagrindinius jos ląstelių kultivavimo reikalavimus. Šiame skyriuje bus išskirti svarbūs dalykai, kuriuos turite sužinoti prieš pradėdami dirbti su DLD-1 ląstelių linija. Tai apima: Kas yra DLD-1 padvigubėjimo laikas? Kokia yra DLD-1 kultivavimo terpė? Koks yra DLD-1 ląstelių sėjos tankis? Kaip auginti DLD-1 ląsteles?
Pagrindiniai DLD-1 ląstelių kultivavimo aspektai
|
Padvigubėjimo laikas: |
DLD-1 ląstelių padvigubėjimo laikas yra maždaug 15 valandų. |
|
Prigludusios arba suspenduotos: |
DLD-1 yra adherentinė žmogaus storosios žarnos vėžio ląstelių linija. Ląstelės auga vienaląsčiais sluoksniais. |
|
Sėjimo tankis: |
DLD-1 ląstelės sėjamos 1-2 x104 ląstelių/cm2 tankumu. Adheravusios ląstelės plaunamos 1x fosfatinio buferinio druskos tirpalo (PBS) tirpalu ir kambario temperatūroje inkubuojamos su perėjimo tirpalu ("Accutase"). Po 8-10 minučių inkubacijos atsiskyrusios ląstelės sudedamos į mitybinę terpę ir centrifuguojamos. Tada ląstelių granulės atsargiai resuspenduojamos ir ląstelės supilamos į naujus auginimo indus su augimo terpe. |
|
Augimo terpė: |
DLD-1 ląstelėms auginti naudojama RPMI 1640 su terpės priedais, įskaitant 10 % galvijų fetalinio serumo FBS, 2,1 mM stabilaus glutamino ir 2,0 g/l NaHCO3. Medžiaga turėtų būti keičiama 2-3 kartus per savaitę. |
|
Augimo sąlygos: |
DLD-1 kultūros palaikomos 37 °C temperatūros drėkinamame inkubatoriuje su 5 % CO2. |
|
Laikymas: |
DLD-1 ląstelės laikomos skysto azoto garų fazėje arba elektriniame itin žemos temperatūros šaldiklyje (žemesnėje nei -150 °C temperatūroje). |
|
Šaldymo procesas ir terpė: |
DLD-1 ląstelėms užšaldyti galima naudoti CM-1 arba CM-ACF šaldymo terpę. Visada rekomenduojamas lėtas šaldymo procesas, leidžiantis palaipsniui sumažinti temperatūrą 1 °C, taip apsaugant ląsteles nuo šoko ir išsaugant jų gyvybingumą. |
|
Atšildymo procesas: |
Užšaldytos ląstelės 40-60 sekundžių atšildomos vandens vonelėje, iš anksto nustatytoje 37 °C temperatūroje, kol lieka nedidelis ledo gabalėlis. Po to ląstelės sudedamos į šviežią terpę ir centrifuguojamos. Šis etapas būtinas, kad iš ląstelių būtų pašalinti užšaldymo terpės komponentai. Surinktos ląstelės resuspenduojamos augimo terpėje ir išpilstomos į kolbą augimui. |
|
Biologinės saugos lygis: |
DLD-1 ląstelių linija laikoma 1 biologinės saugos lygio laboratorijose. |
3.dLD-1 ląstelių linija: Privalumai ir apribojimai
Šioje straipsnio dalyje apžvelgsime DLD-1 storosios žarnos vėžio ląstelių linijos privalumus ir trūkumus.
Privalumai
Pagrindiniai DLD-1 ląstelių linijos privalumai yra šie:
|
Storosios žarnos vėžio modelis |
DLD-1 ląstelėms būdingos mutacijos, dažniausiai aptinkamos sergantiesiems storosios žarnos vėžiu, pavyzdžiui, DLD-1 KRAS mutacija, DLD-1 BRCA ir DLD-1 BRCA2. Dėl šios priežasties jos yra kliniškai tinkamas ląstelių modelis šiai ligai tirti. |
|
Navikinių ląstelių linija |
DLD-1 ląstelės yra navikinės. Įšvirkštos į nuogas peles jos gali sukelti auglius. Todėl mokslininkai šias ląsteles naudoja ksenograftiniams navikų modeliams kurti, kurie padeda tirti navikų susidarymą, vystymąsi ir progresavimą in vivo. |
Apribojimai
Su DLD-1 ląstelėmis susiję šie apribojimai:
|
Heterogeniškumas |
DLD-1 storosios žarnos vėžio ląstelių populiacijos pasižymi genetiniu ir fenotipiniu heterogeniškumu. Tai gali turėti įtakos tyrimų rezultatų apibendrinimui. |
4.dLD-1 ląstelių linijos pritaikymas moksliniams tyrimams
DLD-1 ląstelių linija gali būti įvairiai taikoma vėžio tyrimams. Šiame skyriuje aptariami kai kurie svarbiausi taikymo būdai.
- Vėžio tyrimai: DLD-1 ląstelės yra vertingas in vitro modelis, padedantis suprasti molekulinius mechanizmus, kuriais grindžiamas storosios žarnos vėžio augimas, vystymasis ir progresavimas. Be to, jos naudojamos genų raiškai, signaliniams keliams ir specifinių genetinių mutacijų įtakai vėžio ląstelių elgsenai tirti. 2022 m. atliktų tyrimų metu pastebėta, kad PI3K/Akt/YAP signalinė kaskada reguliuoja DLD-1 storosios žarnos vėžio ląstelių linijos DLD-1 migraciją ir invaziją [2].
- Vaistų kūrimas: Mokslininkai naudoja DLD-1 ląstelių liniją priešvėžiniams vaistams išbandyti ir įvertinti jų potencialą storosios žarnos vėžiui gydyti. Tai padeda kurti vaistus ir veiksmingai kovoti su liga. 2022 m. atliktame tyrime buvo naudojama DLD-1 vėžio ląstelių linija ir tiriamas chemiškai susintetintų silicio ftalocianinų, chemiškai susintetintų junginių, priešvėžinis aktyvumas. Tyrimo rezultatai parodė, kad šie junginiai yra stiprūs priešvėžiniai preparatai [3]. Įdomu tai, kad kito tyrimo metu, naudojant DLD-1 ląsteles, buvo nustatytas probiotinio P8 baltymo priešvėžinis potencialas [4].
5.mokslinės publikacijos apie DLD-1 ląsteles
Šiame skyriuje bus išskirti keli įdomūs ir dažnai cituojami leidiniai apie DLD-1 storosios žarnos karcinomos ląstelių liniją.
Ši publikacija paskelbta žurnale "Journal of Biologically Active Products from Nature" (2022 m.). Tyrimo metu nustatyta, kad flavonoidas diosminas sukėlė DLD-1 ląstelių mirtį ir taip pat ląstelės ciklo sustojimą; taigi jis gali būti potenciali priešvėžinė medžiaga.
Bromelainas veiksmingai slopina Kras mutavusį storosios žarnos vėžį, skatindamas feroptozę
Šiame "Animal Cells and Systems" (2018 m.) atliktame tyrime siūloma, kad fermentas bromelainas slopina DLD-1 KRAS mutaciją ir pasižymi stipriu citotoksiniu poveikiu.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2019 m. žurnale "Environmental Toxicology". Tyrime buvo nagrinėjamas priešvėžinis natūralaus junginio bergapteno poveikis naudojant DLD-1 storosios žarnos ląstelių liniją.
Šiame žurnale "Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials" (2023) paskelbtame tyrime nustatyta, kad kurkumino ir geležies oksido nanokompozitai yra labai veiksmingi prieš DLD-1 storosios žarnos vėžio ląsteles.
Šis mokslinis straipsnis paskelbtas 2020 m. žurnale "Turkish Journal of Biology". Tyrime siūloma, kad natūralus produktas, epibrassinolidas, tarpininkaujant AKT aktyvinimui DLD-1 ląstelėse, skatina autofagiją, susijusią su poliaminais.
6.dLD-1 ląstelių linijos ištekliai: Duomenų šaltiniai: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami keli šaltiniai apie DLD-1 ląsteles:
- DLD-1 transfekcija: Šis vaizdo įrašas yra išsamus DLD-1 in vitro transfekcijos protokolo vadovas.
- DLD-1 ląstelės: Šiame moksliniame straipsnyje trumpai aprašomi DLD-1 ląstelių auginimo reikalavimai, įskaitant terpę ir auginimo sąlygas. Be to, jis gali padėti sužinoti DLD-1 ląstelėms naudojamą transfekcijos protokolą.
Toliau pateiktose nuorodose pateikiamas DLD-1, iš žmogaus gauto storosios žarnos vėžio ląstelių, kultivavimo protokolas.
- DLD-1 ląstelių linija: Šioje svetainėje pateikiama pagrindinė informacija apie DLD-1 ląstelių liniją. Ji padės jums susipažinti su įvairiais DLD-1 ląstelių kultivavimo protokolais, įskaitant subkultūravimą ir darbą su kriokonservuotomis bei proliferuojančiomis kultūromis.
Nuorodos
- Gavrilas, L. I., ir kt. proapoptoziniai genai kaip nauji taikiniai pavieniam ir kombinuotam gydymui resveratroliu ir kurkuminu sergant storosios žarnos vėžiu. Maistas ir funkcijos, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al, PI3K/Akt/YAP signalas skatinaDLD-1storosios žarnos vėžio ląstelių migraciją ir invaziją. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Anticancer activity of novel silicon phthalocyanines against the colorectal adenocarcinoma cell line (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022 m. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al, Anti-Cancer Roles of Probiotic-Derived P8 Protein in Colorectal Cancer Cell Line DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.