CHO-K1 ląstelės: pagrindinis elementas biotechnologinių tyrimų srityje

CHO-K1 ląstelės yra kilusios iš kinų žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląstelių linijos. Jos plačiai naudojamos pramoninėje biotechnologijoje biotechnologinių vaistų ir kitų rekombinantinių baltymų gamybai. Be to, CHO-K1 ląstelių linija taip pat naudojama toksikologiniuose tyrimuose. Mokslininkai genetiškai modifikuoja šias ląsteles, siekdami pagerinti glikozilinimą, sumažinti apoptozę ir padidinti bendrą produktyvumą.

📋 CHO-K1 ląstelių linija — trumpi faktai

Auginimo terpė: CHO-K1 ląstelėms auginti naudojama Ham's F12 auginimo terpė, papildyta 10 % FBS, 1,0 mM stabiliu glutaminu, 1,0 mM natrio piruvatu ir 1,1 g/l NaHCO3. Terpę reikia keisti 2–3 kartus per savaitę.
Padvigubėjimo laikas: CHO-K1 ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 22 valandos.
Augimo tipas: CHO-K1 ląstelės yra adhezyvinės. Tačiau jas galima genetiškai modifikuoti, kad taptų CHO-K1 suspensijos ląstelėmis.
Biologinio saugumo lygis: BSL-1
Galima įsigyti iš: Cytion — Užsisakykite CHO-K1

📋 Turinys

Kilmė ir bendrosios charakteristikos: CHO-K1 ląstelės
CHO-K1 ląstelių linija: informacija apie kultivavimą
CHO-K1 ląstelių privalumai ir trūkumai
CHO-K1 ląstelių linijos pritaikymas moksliniuose tyrimuose
5. CHO-K1 ląstelės: moksliniai leidiniai
Ištekliai, susiję su CHO-K1 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Dažnai užduodami klausimai

Kilmė ir bendrosios charakteristikos: CHO-K1 ląstelės

Ląstelių linijos bendrosios charakteristikos ir kilmė lemia jos naudojimą moksliniuose tyrimuose. Šiame skyriuje sužinosite apie žinomos CHO-K1 ląstelių linijos kilmę ir savybes. Sužinosite: iš kur atsirado CHO-K1 ląstelės? Kiek yra didelės CHO-K1 ląstelės? Kokia yra pilna CHO-K1 ląstelių linijos forma? Kokia yra CHO-K1 ląstelių morfologija?

CHO-K1 arba kinų žiurkėno kiaušidžių ląstelių linija K1 yra tėvinių CHO ląstelių subklonas, kilęs iš 1957 m. atliktos suaugusios kinų žiurkėno patelės kiaušidžių biopsijos. Pirminę ląstelių liniją sukūrė T.T. Puck ir kolegos Kolorado universiteto medicinos mokykloje, Denveryje, JAV [1].
CHO-K1 ląstelių linija pasižymi epitelio tipo morfologija.
CHO-K1 ląstelių skersmuo yra maždaug 0,001 milimetro. Įdomu tai, kad ląstelės iš pradžių yra didelės, tačiau laikui bėgant tampa mažesnės.
CHO-K1 genomas susideda iš panašaus chromosomų skaičiaus kaip ir žmogaus ląstelės. Jos turi diploidinius kariotipus ir tik keletą chromosomų anomalijų.

CHO-K1 ir CHO-S ląstelių linijos

Abi ląstelių linijos yra CHO dariniai. Jos skiriasi tuo, kaip šios ląstelės auga ir dauginasi. CHO-S ląstelės yra pritaikytos augti kultūrose, o CHO-K1 galima genetiškai modifikuoti, kad jos gamintų adhezyvines ir suspensines ląsteles.

Suspensijų kultūra farmacijos pramonėje.

CHO-K1 ląstelių linija: informacija apie auginimą

CHO-K1 ląstelių linija plačiai naudojama pramoninės biotechnologijos tyrimuose. Tai lengvai prižiūrimos ląstelių linijos. Žinant pagrindinius CHO-K1 ląstelių kultivavimo aspektus, galėsite lengviau susidoroti su šia užduotimi. Šiame skyriuje sužinosite: Ar CHO-K1 ląstelės yra adhezyvios? Koks yra CHO-K1 ląstelių padvigubėjimo laikas? Kokios terpės naudojamos CHO ląstelių kultūrai? Koks yra CHO-K1 sėjimo tankis?

Pagrindiniai CHO-K1 ląstelių auginimo aspektai

Populiacijos dvigubėjimo laikas:: CHO-K1 ląstelių dvigubėjimo laikas yra maždaug 22 valandos.
Adhezyvinės ar suspensinės:: CHO-K1 ląstelės yra adhezinės. Tačiau jas galima genetiškai modifikuoti, kad taptų CHO-K1 suspensijos ląstelėmis.
Sėjimo tankis:: CHO-K1 sėjimo tankis yra 1 x 10⁴ ląstelės/cm². Esant šiam tankiui, ląstelės gali suformuoti konfluentinį sluoksnį per maždaug 6 dienas. Adhezyvinių ląstelių atveju ląstelės nuplaunamos 1 x PBS ir inkubuojamos 8–10 minučių kambario temperatūroje. Disocijuotos ląstelės įdedamos į šviežią terpę ir centrifuguojamos. Surinktos ląstelės resuspenduojamos ir supilamos į naują kolbą augimui.
Auginimo terpė:: CHO-K1 ląstelėms auginti naudojama Ham's F12 auginimo terpė, papildyta 10 % FBS, 1,0 mM stabiliu glutaminu, 1,0 mM natrio piruvatu ir 1,1 g/l NaHCO3. Terpę reikia keisti 2–3 kartus per savaitę.
Auginimo sąlygos:: CHO-K1 kultūros laikomos 37 °C drėgname inkubatoriuje su 5 % CO2 tiekimu.
Laikymas:: Užšaldytos CHO-K1 ląstelės laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje arba skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo procesas ir terpė:: CHO-K1 ląstelių užšaldymui naudojamos CM-1 arba CM-ACF užšaldymo terpės. CHO-K1 ląstelės užšaldomos taikant lėto užšaldymo procesą, kurio metu temperatūra palaipsniui mažėja 1 °C.
Atšildymo procesas:: Užšaldytos CHO-K1 ląstelės laikomos 37 °C vandens vonioje, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Atšildytos ląstelės sumaišomos su šviežia auginimo terpe ir supilamos į naują kolbą, kurioje yra auginimo terpė, 5 x 10⁴ ląstelių/cm² tankiu. Ląstelėms tinkamai atsigauti reikia beveik 24–48 valandų.
Biologinio saugumo lygis:: CHO-K1 kultūros tvarkomos ir laikomos 1 biologinio saugumo lygio laboratorijose.

CHO K1 cells

CHO-K1 ląstelės suspensinėje kultūroje, kurioje prisitvirtinusių ląstelių yra mažiau nei 10 % (kairėje) ir susibūrusios į grupes (dešinėje).

CHO-K1 ląstelių privalumai ir trūkumai

CHO-K1 yra neįkainojama mokslinių tyrimų priemonė. Jos unikalus privalumų ir trūkumų derinys leidžia ją išskirti iš kitų ląstelių linijų. Šiame skyriuje aptarti keli CHO-K1 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.

Privalumai

Pagrindiniai CHO-K1 ląstelių linijos privalumai yra šie:

Tinkamumas transfekcijai: CHO-K1 ląstelės plačiai naudojamos transfekcijos tyrimuose. Jos gali būti transfekuojamos laikinai ir stabiliai, taikant įvairias fizines ir chemines procedūras. Dėl didelio transfekcijos tinkamumo CHO-K1 ląstelės plačiai naudojamos rekombinantinių baltymų ir kitų biotechnologinių vaistų gamybai.
Spartus augimas ir lengvas auginimas: CHO-K1 ląstelių padvigubėjimo laikas yra tik 22 valandos, todėl jos pasižymi dideliu augimo greičiu ir yra idealios pramoniniam biotechnologijų naudojimui. Be to, CHO-K1 suspensijos adaptacija leidžia jas naudoti dideliems biotechnologinių vaistų kiekiams gaminti. Be to, jas lengva auginti ir prižiūrėti laboratorijose, o jų auginimui nereikia sudėtingų sąlygų ir procedūrų.
Mažas chromosomų anomalijų dažnis: CHO-K1 yra gerai apibūdinta ir įsitvirtinusi modelinė sistema. CHO-K1 genomas yra stabilus ir turi tik keletą chromosomų anomalijų. Todėl jos yra idealios šeimininkės rekombinantinių baltymų gamybai.

Apribojimai

Štai keletas CHO-K1 ląstelių linijos apribojimų:

Nežmogiška kilmė: Nors CHO-K1 ląstelės gali vykdyti žmogaus ląstelėms būdingus glikozilinimo procesus, jos yra ne žmogaus kilmės. Tai gali kelti susirūpinimą tiriant labai žmogui būdingus ląstelių procesus ir terapinių agentų imunogeniškumą.
Heterogeniškumas: CHO-K1 ląstelės gali pasižymėti šiek tiek skirtingomis genetinėmis savybėmis toje pačioje populiacijoje, dėl ko atsiranda genetinė heterogeniškumas. Tai gali paveikti ląstelių funkcijas ir sukelti baltymų ekspresijos lygių variabilumą, o tai gali turėti įtakos eksperimentinių rezultatų atkuriamumui.

CHO-K1 ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose

CHO-K1 ląstelių linija turi daugybę pritaikymų pramoninėje biotechnologijoje ir toksikologijos tyrimuose. Čia aptarėme keletą konkrečių pavyzdžių.

Rekombinantinių baltymų gamyba: CHO-K1 ląstelės yra neįkainojamos mokslinių tyrimų priemonės rekombinantinių baltymų, įskaitant antikūnus, terapinius baltymus ir fermentus, gamybai. Dėl jų greito augimo ir lengvų auginimo sąlygų galima pagaminti didelius kiekius rekombinantinių baltymų su tinkamu susilankstymu ir glikozilinimu. Pavyzdžiui, Kritika Gupta atliktame tyrime buvo naudojamos CHO-K1 ląstelės, kurios buvo stabiliai transfekuotos, siekiant pagaminti rekombinantinį monokloninį antikūną prieš naviko nekrozės faktorių alfa (TNF-α) [2]. CHO-K1 antikūnų gamyba yra gana patikima ir patogi. Mokslininkai taip pat modifikuoja šias ląsteles, siekdami pagerinti CHO-K1 antikūnų gamybą. Pavyzdžiui, viename tyrime genetiškai modifikuotos CHO-K1 ląstelės buvo naudojamos antikūnams su dideliu a-fukozilintų Fc-prikabintų N-glikanų santykiu gaminti, o tai yra svarbu jų efektorinei funkcijai [3].
Toksikologiniai tyrimai: CHO-K1 ląstelės dažnai naudojamos vaistų atradimui ir atrankos tyrimams. Jos gali būti naudojamos potencialių vaistų toksiškumui ir veiksmingumui įvertinti. Be to, mokslininkai naudoja CHO-K1 ląsteles vaistų ir taikinio sąveikoms tirti bei vaistų metabolizmui tirti. Buvo atlikti keli tyrimai, siekiant įvertinti galimą augalų ekstraktų, junginių, nanodalelių, terapinių baltymų ir kitų medžiagų terapinį poveikį naudojant CHO-K1 ląstelių liniją. Panašus tyrimas buvo atliktas 2022 m., kurio metu mokslininkai matavo flavonoidais turtingų augalų ekstraktų citotoksinį potencialą CHO-K1 ląstelėse [4]. Taip pat Ryan Deweese ir kolegos atliktame tyrime buvo vertinamas Baptisia australis, Trifolium pratense ir Rubus idaeus ekstraktų citotoksiškumas kinų žiurkių kiaušidžių CHO-K1 ląstelėse [5].

430,00 €*

Turinys: 1.5 milliliter

Kainos be mokesčių ir pristatymo išlaidų

cryovial

Produkto numeris: 603480

5. CHO-K1 ląstelės: moksliniai straipsniai

Toliau pateikiami keli įdomūs moksliniai straipsniai apie CHO-K1 ląsteles.

SIRT6 perprodukcija sumažina apoptozę ir padidina ląstelių gyvybingumą bei monokloninių antikūnų ekspresiją CHO-K1 ląstelėse

Šiame tyrime, paskelbtame leidinyje „Molecular Biology Reports“ (2023 m.), buvo pateikta hipotezė, kad SIRT6 geno perteklius daro teigiamą poveikį CHO-K1 ląstelių gyvybingumui ir antikūnų ekspresijai.

CHO-K1 ląstelėse gaminamų defukozilintų antikūnų išeigos ir aktyvumo didinimas naudojant Cas13d tarpininkaujamą daugialypį genų taikymą

Šis straipsnis paskelbtas žurnale „Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers“ (2021 m.). Tyrimo rezultatai rodo CRISPR-Cas13d potencialą genetiškai modifikuoti CHO-K1 ląsteles, siekiant pagerinti antikūnų gamybą kokybės ir kiekybės atžvilgiu.

Maltozės kaip energijos šaltinio naudojimas baltymų neturinčioje CHO-K1 kultūroje, siekiant pagerinti rekombinantinių monokloninių antikūnų gamybą

Šiame moksliniame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Nature Scientific Reports“ (2018 m.), maltozė siūloma kaip perspektyvus energijos šaltinis CHO-K1 ląstelių kultūrai baltymų neturinčioje terpėje ir rekombinantinių monokloninių antikūnų gamybos didinimui.

Piper nigrum L. etanolinio ekstrakto ir jo derinio su doksorubicinu citotoksiškumo ir antigenotoksiškumo nustatymas CHO-K1 ląstelėse

Šiame „Indonesian Journal of Cancer Chemoprevention“ (2018 m.) paskelbtame tyrime, naudojant CHO-K1 ląsteles, buvo vertinamas juodųjų pipirų etanolinio ekstrakto, vartojamo atskirai ir kartu su doksorubicinu, potencialus citotoksinis ir antigenotoksinis poveikis.

Sidabro nanodalelių citotoksiškumas ir genotoksiškumas kinų žiurkėno kiaušidžių ląstelių linijos (CHO-K1) ląstelėse

Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „The Nucleus“ 2019 m. Jame mokslininkai įvertino sidabro nanodalelių citotoksinį ir genotoksinį potencialą CHO-K1 ląstelių linijoje.

Ištekliai, susiję su CHO-K1 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita

CHO-K1 yra žinoma ląstelių linija. Čia paminėti ištekliai, kuriuose pateikiami CHO-K1 kultivavimo ir transfekcijos protokolai.

CHO-K1 transfekcija: Šioje nuorodoje aprašomas CHO-K1 transfekcijos protokolas. Tai yra žingsnis po žingsnio vadovas, kaip transfekuoti plazmidinę DNR į CHO-K1 ląsteles naudojant „Lipofectamine LTX“ reagentą.
CHO-K1 transfekcijos pamoka: šiame vaizdo įraše išsamiai paaiškinama laikina CHO-K1 transfekcijos procedūra.

Čia pateikiami šaltiniai, aprašantys CHO-K1 ląstelių kultivavimo protokolą.

CHO-K1 ląstelės: Šioje svetainės nuorodoje pateikiama naudinga informacija apie CHO-K1 ląsteles, įskaitant CHO-K1 terpės receptūrą, subkultūravimo ir atšildymo protokolą.

Nuorodos

Gamper, N., J.D. Stockand ir M.S. Shapiro, Kinijos žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląstelių naudojimas jonų kanalų tyrimuose. J Pharmacol Toxicol Methods, 2005. 51(3): p. 177-85.
Gupta, K. ir kt., Stabili CHO K1 ląstelių linija, skirta rekombinantinių monokloninių antikūnų prieš TNF-α gamybai. Molecular Biotechnology, 2021. 63(9): p. 828–839.
Popp, O., et al. Iš anksto glikoinžineriniu būdu modifikuotos CHO-K1 šeimininkės ląstelių linijos, skirtos antikūnams su sustiprinta Fc tarpininkaujama efektorine funkcija, kūrimas. MAbs. 2018. Taylor & Francis.
Kurchatova, M., et al., Flavonoidų turinčių augalų ekstraktų citotoksiškumas CHO ląstelių linijai: lyginamasis tyrimas. Ląstelių ir audinių biologija, 2022. 16(1): p. 80–85.
Deweese, R., et al., Trifolium pratense, Baptisia australis ir Rubus idaeus ekstraktų citotoksinis poveikis CHO-K1 ląstelėms. GSC Advanced Research and Reviews, 2021. 8(1): p. 128-139.