CHO-K1 ląstelės: Pagrindinės biotechnologinių tyrimų priemonės

CHO-K1 ląstelės yra Kinijos žiurkėnų kiaušidžių (CHO) ląstelių linijos darinys. Jos plačiai naudojamos pramoninėje biotechnologijoje biofarmaciniams preparatams ir kitiems rekombinantiniams baltymams gaminti. Be to, CHO-K1 ląstelių linija taip pat naudojama toksikologiniuose tyrimuose. Mokslininkai genetiškai manipuliuoja šiomis ląstelėmis, kad pagerintų glikozilinimą, sumažintų apoptozę ir padidintų bendrą produktyvumą.

Šiame straipsnyje rasite beveik visas vertingas žinias apie CHO-K1 ląstelių liniją, kurios palengvins jūsų darbą su ja. Konkrečiai, jame bus aptarta:

Kilmė ir bendrosios savybės: CHO-K1 ląstelės
CHO-K1 ląstelių linija: Kultivavimo informacija
CHO-K1 ląstelių privalumai ir trūkumai
CHO-K1 ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose
CHO-K1 ląstelės: Mokslinės publikacijos
CHO-K1 ląstelių linijos šaltiniai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt

1.kilmė ir bendrosios savybės: CHO-K1 ląstelės

Ląstelių linijos bendrosios savybės ir kilmė lemia jos naudojimą moksliniuose tyrimuose. Šiame skyriuje sužinosite apie garsiosios CHO-K1 ląstelių linijos kilmę ir savybes. Sužinosite: Iš kur atsirado CHO-K1 ląstelė? Kokio dydžio yra CHO-K1 ląstelės? Kokia yra pilnoji CHO-K1 ląstelių linijos forma? Kokia yra CHO-K1 ląstelių morfologija?

CHO-K1 arba Kinijos žiurkėnų kiaušidžių ląstelių linija K1 yra tėvinių CHO ląstelių subklonas, atsiradęs 1957 m. atlikus suaugusių Kinijos žiurkėnų kiaušidžių patelės biopsiją. Pirminę ląstelių liniją sukūrė T. T. Puckas su kolegomis Kolorado universiteto Medicinos mokykloje, Denveryje, JAV [1].
CHO-K1 ląstelių linija pasižymi į epitelį panašia morfologija.
CHO-K1 ląstelių skersmuo yra maždaug 0,001 milimetro. Įdomu tai, kad iš pradžių ląstelės yra didelės, tačiau laikui bėgant jos mažėja.
CHO-K1 genomą sudaro panašus chromosomų skaičius kaip ir žmogaus ląstelių. Jos turi diploidinį kariotipą ir tik mažiau chromosomų anomalijų.

CHO-K1 ir CHO-S ląstelių linija

Abi ląstelių linijos yra CHO dariniai. Jos skiriasi tuo, kaip šios ląstelės auga ir dauginasi. CHO-S ląstelės pritaikytos augti kultūrose, o CHO-K1 gali būti genetiškai manipuliuojama, kad būtų gaminamos adherentinės ir suspensinės ląstelės.

Suspensinės kultūros farmacijos gamyboje.

2.cHO-K1 ląstelių linija: Informacija apie kultivavimą

CHO-K1 ląstelių linija plačiai naudojama pramoniniuose biotechnologiniuose tyrimuose. Tai lengvai palaikomos ląstelių linijos. Žinios apie pagrindinius CHO-K1 ląstelių kultivavimo dalykus gali padėti jums lengvai su jomis dirbti. Šis skyrius padės jums sužinoti: Ar CHO-K1 ląstelės yra lipnios? Koks yra CHO-K1 ląstelių padvigubėjimo laikas? Kokia terpė naudojama CHO ląstelių kultūrai? Koks yra CHO-K1 pasėlio tankis?

Pagrindiniai CHO-K1 ląstelių kultivavimo aspektai

Populiacijos padvigubėjimo laikas:	CHO-K1 ląstelių padvigubėjimo laikas yra maždaug 22 valandos.
Prigludusios arba suspenduotos:	CHO-K1 ląstelės yra prigludusios. Tačiau jos gali būti genetiškai modifikuotos į CHO-K1 suspensijos ląsteles.
Sėjimo tankis:	CHO-K1 sėjimo tankis yra 1 x¹⁰⁴ ^{ląstelės/cm2}. Esant tokiam tankumui, ląstelės gali sudaryti susiliejantį sluoksnį maždaug per 6 dienas. Kad ląstelės sukibtų, jos skalaujamos 1 x PBS ir inkubuojamos 8-10 minučių aplinkos temperatūroje. Disocijuotos ląstelės sudedamos į šviežią terpę ir centrifuguojamos. Surinktos ląstelės resuspenduojamos ir supilamos į naują kolbą augimui.
Augimo terpė:	CHO-K1 ląstelėms auginti naudojama Hamo F12 augimo terpė, papildyta 10 % FBS, 1,0 mM stabilaus glutamino, 1,0 mM natrio piruvato ir 1,1 g/l NaHCO3. Medžiaga turėtų būti keičiama 2-3 kartus per savaitę.
Augimo sąlygos:	CHO-K1 kultūros laikomos 37 °C temperatūros drėkinamame inkubatoriuje su 5 % CO2.
Laikymas:	CHO-K1 ląstelės laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje arba skysto azoto garų fazėje.
Šaldymo procesas ir terpė:	CHO-K1 ląstelėms užšaldyti naudojama CM-1 arba CM-ACF šaldymo terpė. CHO-K1 ląstelėms užšaldyti naudojamas lėtas šaldymo procesas, leidžiantis palaipsniui sumažinti temperatūrą 1 °C.
Atšildymo procesas:	Užšaldytos CHO-K1 ląstelės laikomos 37 °C temperatūros vandens vonelėje, kol lieka nedidelis ledo gabalėlis. Atšildytos ląstelės užpilamos šviežia terpe ir supilamos į naują kolbą su terpe, kurioje yra 5 x¹⁰⁴ ^{ląstelių/cm2} tankis. Ląstelėms tinkamai atgimti prireikia beveik 24-48 valandų.
Biologinės saugos lygis:	CHO-K1 kultūros tvarkomos ir laikomos 1 biologinės saugos lygio laboratorijose.

CHO-K1 ląstelės suspensijos kultūroje, kuriose matyti mažiau nei 10 % sukibusių ląstelių (kairėje) ir jų susitelkimas (dešinėje).

3.cHO-K1 ląstelių privalumai ir trūkumai

CHO-K1 yra neįkainojama mokslinių tyrimų priemonė. Unikalus jos privalumų ir apribojimų derinys leidžia ją išskirti iš kitų ląstelių linijų. Šiame skyriuje aptarti keli CHO-K1 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.

Privalumai

Pagrindiniai CHO-K1 ląstelių linijos privalumai yra šie:

Galimybė atlikti transfekciją	CHO-K1 ląstelės plačiai naudojamos transfekcijos tyrimams. Jas galima transfekuoti laikinai ir stabiliai taikant įvairias fizines ir chemines procedūras. Dėl didelio transfekcijos patogumo CHO-K1 ląstelės plačiai naudojamos rekombinantiniams baltymams ir kitiems biofarmaciniams preparatams gaminti.
Greitas augimas ir lengvas kultivavimas	CHO-K1 ląstelių padvigubėjimo laikas yra tik 22 valandos, todėl jos pasižymi dideliu augimo greičiu ir idealiai tinka naudoti pramoninėje biotechnologijoje. Be to, dėl CHO-K1 suspensijos pritaikymo jos yra naudingos dideliems biofarmacinių preparatų kiekiams gaminti. Be to, jas lengva auginti ir prižiūrėti laboratorijose, joms nereikia sudėtingų auginimo sąlygų ir procedūrų.
Mažas chromosomų anomalijų dažnis	CHO-K1 yra gerai apibūdinta ir nusistovėjusi modelinė sistema. CHO-K1 genomas yra stabilus ir turi tik nedaug chromosomų anomalijų. Todėl jie yra idealūs šeimininkai rekombinantiniams baltymams gaminti.

Apribojimai

Štai keletas CHO-K1 ląstelių linijos apribojimų:

Nežmogiškos kilmės	Nors CHO-K1 ląstelės geba atlikti panašius į žmogaus glikozilinimo modelius, jos nėra žmogaus kilmės. Tai gali kelti susirūpinimą tiriant labai specifinius žmogui būdingus ląstelių procesus ir gydomųjų medžiagų imunogeniškumą.
Heterogeniškumas	CHO-K1 ląstelės toje pačioje populiacijoje gali pasižymėti šiek tiek skirtingomis genetinėmis savybėmis, todėl jos yra genetiškai nevienalytės. Tai gali turėti įtakos ląstelių funkcijoms ir lemti baltymų raiškos lygių kintamumą, galintį turėti įtakos eksperimentinių rezultatų atkuriamumui.

4.cHO-K1 ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose

CHO-K1 ląstelių linija turi daugybę pritaikymo galimybių pramoninėje biotechnologijoje ir toksikologiniuose tyrimuose. Čia aptarėme keletą konkrečių.

Rekombinantinių baltymų gamyba: CHO-K1 ląstelės yra neįkainojama mokslinių tyrimų priemonė rekombinantiniams baltymams, įskaitant antikūnus, terapinius baltymus ir fermentus, gaminti. Didelis jų augimo greitis ir lengvos kultivavimo sąlygos padeda pagaminti didelius kiekius rekombinantinių baltymų su tinkamu sulankstymu ir glikozilinimu. Pavyzdžiui, Kritika Gupta (Kritika Gupta) atliko tyrimą, kuriame panaudojo CHO-K1 ląsteles ir stabiliai transfekavo jas, kad pagamintų rekombinantinį monokloninį antikūną prieš naviko nekrozės faktorių alfa (TNF-α) [2]. CHO K1 antikūnų gamyba yra gana patikima ir patogi. Mokslininkai taip pat modifikuoja šias ląsteles, siekdami pagerinti CHO K1 antikūnų gamybą. Pavyzdžiui, tyrimo metu buvo genetiškai manipuliuojama CHO K1 ląstelėmis, kad būtų gaminami antikūnai su dideliu a-fukozilintų Fc prijungtų N-glikanų santykiu, kuris yra svarbus jų efektorinei funkcijai [3].
Toksikologiniai tyrimai: CHO-K1 ląstelės dažnai naudojamos vaistų atradimui ir atrankiniams tyrimams. Jos gali būti naudojamos potencialių vaistų toksiškumui ir veiksmingumui įvertinti. Be to, mokslininkai CHO-K1 ląsteles naudoja vaistų ir taikinio sąveikai tirti ir vaistų metabolizmui tirti. Buvo atlikta keletas tyrimų, siekiant įvertinti galimą augalų ekstraktų, junginių, nanodalelių, terapinių baltymų ir kitų medžiagų terapinį poveikį naudojant CHO-K1 ląstelių liniją. Panašus tyrimas buvo atliktas 2022 m., kai mokslininkai CHO-K1 ląstelėse išmatavo flavonoidų turtingų augalų ekstraktų citotoksinį potencialą [4]. Taip pat Ryano Deweese'o ir kolegų atliktame tyrime buvo vertinamas Baptisia australis, Trifolium pratense ir Rubus idaeus ekstraktų citotoksiškumas CHO-K1 kiaulytės CHO-K1 ląstelėms [5].

430,00 €*

Turinys: 1.5 milliliter

Kainos be mokesčių ir pristatymo išlaidų

cryovial

Produkto numeris: 603480

5.cHO-K1 ląstelės: Mokslinės publikacijos

Toliau pateikiama keletas įdomių mokslinių publikacijų apie CHO-K1 ląsteles.

SIRT6 hiperekspresija sumažina apoptozę ir padidina ląstelių gyvybingumą bei monokloninių antikūnų ekspresiją CHO-K1 ląstelėse

Šiame tyrime, paskelbtame žurnale "Molecular Biology Reports" (2023), siūlomas teigiamas SIRT6 geno perteklinės ekspresijos poveikis CHO-K1 ląstelių gyvybingumui ir antikūnų raiškai.

CHO-K1 ląstelėse gaminamų defukozilintų antikūnų išeigos ir aktyvumo didinimas naudojant Cas13d tarpininkaujamą daugkartinį genų nukreipimą

Ši publikacija paskelbta Taivano chemijos inžinierių instituto žurnale (2021 m.). Tyrimo išvadose teigiama, kad CRISPR-Cas13d potencialas genetiškai modifikuojant CHO-K1 ląsteles, kad būtų pagerinta antikūnų gamyba, susijusi su kokybe ir kiekiu.

Maltozės kaip energijos šaltinio taikymas CHO-K1 kultūroje be baltymų, siekiant pagerinti rekombinantinių monokloninių antikūnų gamybą

Šiame moksliniame straipsnyje iš žurnalo "Nature Scientific Reports" (2018 m.) maltozė siūloma kaip perspektyvus energijos šaltinis kultivuojant CHO-K1 ląsteles terpėje be baltymų ir gerinant rekombinantinių monokloninių antikūnų gamybą.

Piper nigrum l. etanolinio ekstrakto ir jo derinio su doksorubicinu citotoksiškumo ir antigenotoksiškumo CHO-K1 ląstelėms atskleidimas

Šiame tyrime, paskelbtame žurnale "Indonesian Journal of Cancer Chemoprevention" (2018 m.), CHO-K1 ląstelėms naudotas galimas citotoksinis ir antigenotoksinis juodųjų pipirų etanolinės ištraukos atskirai ir kartu su doksorubicinu poveikis.

Sidabro nanodalelių citotoksiškumas ir genotoksiškumas Kinijos žiurkėnų kiaušidžių ląstelių linijos (CHO-K1) ląstelėse

Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale "The Nucleus" 2019 m. Jame mokslininkai įvertino sidabro nanodalelių citotoksinį ir genotoksinį potencialą CHO-K1 ląstelių linijoje.

6.šaltiniai, skirti CHO-K1 ląstelių linijai: ChO1-CO1 šaltiniai: protokolai, vaizdo įrašai ir kt

CHO-K1 yra garsi ląstelių linija. Čia paminėti turimi šaltiniai, kuriuose pateikiami CHO-K1 kultivavimo ir transfekcijos protokolai.

CHO-K1 transfekcija: Šioje nuorodoje aprašomas CHO-K1 transfekcijos protokolas. Tai yra žingsnis po žingsnio pateiktas plazmidinės DNR transfekcijos į CHO-K1 ląsteles naudojant "Lipofectamine LTX" reagentą vadovas.
CHO-K1 transfekcijos vadovėlis: Šiame vaizdo įraše išsamiai paaiškinama pereinamojo CHO-K1 transfekcijos procedūra.

Čia pateikiami kai kurie šaltiniai, kuriuose aprašomas CHO-K1 ląstelių auginimo protokolas.

CHO-K1 ląstelės: Šioje svetainės nuorodoje pateikiama naudinga informacija apie CHO-K1 ląsteles, įskaitant CHO-K1 terpės receptą, subkultūravimo ir atšildymo protokolą.

Nuorodos

Gamper, N., J.D. Stockand ir M.S. Shapiro, The use of Chinese hamster ovary (CHO) cells in the study of ion channels. J Pharmacol Toxicol Methods, 2005. 51(3): p. 177-85.
Gupta, K., et al., A Stable CHO K1 Cell line for producing recombinant monoclonal antibody against TNF-α. Molecular Biotechnology, 2021. 63(9): p. 828-839.
Popp, O., et al. Pre-glycoengineered CHO-K1 šeimininko ląstelių linijos, skirtos antikūnų su sustiprinta Fc tarpininkaujančia efektorine funkcija raiškai, sukūrimas. in MAbs. 2018. Taylor & Francis.
Kurchatova, M., et al., Flavonoidų turinčių augalų ekstraktų citotoksiškumas CHO ląstelių linijai: lyginamasis tyrimas. Cell and Tissue Biology, 2022. 16(1): p. 80-85.
Deweese, R., et al., Trifolium pratense, Baptisia australis ir Rubus idaeus ekstraktų citotoksinis poveikis CHO-K1 ląstelėms. GSC Advanced Research and Reviews, 2021. 8(1): p. 128-139.