ARPE-19 ląstelės - specializuotas žvilgsnis į tinklainės pigmentinių epitelio ląstelių tyrimus su ARPE-19

ARPE-19 yra spontaniškai atsiradusios žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelės. Jos naudojamos įvairiems tinklainės biologijos, patologinių būklių ir terapinių intervencijų (farmakologijos) aspektams tirti. Šio straipsnio tikslas - pateikti išsamią informaciją apie ARPE-19 imortalizuotas ląsteles. Daugiausia bus aptariamos bendrosios ląstelių linijos charakteristikos, auginimo sąlygos ir įvairūs jos pritaikymo tyrimams būdai. Todėl skaitydami šį straipsnį įgysite išsamų supratimą apie:

ARPE-19 ląsteles: Kilmę ir bendrąsias savybes
ARPE-19 ląstelių liniją: Kultivavimo informacija
ARPE-19 ląstelių privalumus ir trūkumus
ARPE-19 ląstelių linijos taikymas moksliniams tyrimams
ARPE-19 ląstelės: Mokslinės publikacijos
ARPE-19 ląstelių linijos ištekliai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt

1. ARPE-19 ląstelės: Kilmė ir bendrieji požymiai

Norint veiksmingai naudoti ląstelių liniją moksliniams tyrimams, būtina žinoti jos kilmę ir bendrąsias savybes. Šiame straipsnio skyriuje bus pateikta visa informacija apie ARPE ląstelių liniją. Pavyzdžiui, kas yra ARPE-19 ląstelių linija? Kodėl reikia naudoti ARPE-19 ląsteles? Kas yra ARPE-19/HPV-16 ląstelių linija? Ar ARPE-19 ląstelės yra nemirtingos? Kokia yra ARPE 19 ląstelių morfologija ir dydis?

Nemortizuotų tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių linija ARPE-19 buvo gauta iš 19 metų amžiaus vyro, kuris mirė nuo galvos traumos avarijos metu, akių. Ją 1986 m. sukūrė Amy Aotaki-Keen.
Šios ląstelės ekspresuoja tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių žymenis, t. y. CRALBP ir RPE-65, o tai rodo, kad jos gali sudaryti stabilius monosluoksnius, pasižyminčius morfologiniu ir funkciniu poliškumu.
ARPE-19 ląstelės pasižymi į epitelines ląsteles panašia morfologija.
ARPE-19 ląstelės dažniausiai turi normalų kariotipą, išskyrus po vieną deleciją ir papildymą atitinkamai 9 ir 19 chromosomos ilgajame raumenyje. Be to, pastebėta ir keletas aneuploidijų [1].

Tinklainės lazdelių ir kūgelių skenavimo elektroninė mikrografija (SEM).

2.aRPE-19 ląstelių linija: Kultivavimo informacija

Pagrindinė ląstelių kultivavimo informacija yra labai svarbi norint tinkamai tvarkyti ir prižiūrėti ląstelių liniją. Šis skyrius padės jums sužinoti pagrindinius ARPE-19 ląstelių linijos kultivavimo aspektus. Sužinosite: kas yra ARPE-19 padvigubėjimo laikas? Koks yra ARPE-19 sėjimo tankis? Koks yra ARPE-19 ląstelių tankis? Kas yra ARPE-19 šaldymo terpė? Kaip auginti ARPE-19 ląstelių liniją?

Pagrindiniai ARPE-19 ląstelių kultivavimo punktai

Populiacijos padvigubėjimo laikas:	ARPE-19 ląstelių padvigubėjimo laikas yra maždaug 55-65 valandos. Jų populiacija gali padvigubėti iki 48 kartų.
Prisitvirtinusios arba suspenduotos:	ARPE-19 yra adherentinė ląstelių linija.
Subkultivavimo santykis:	ARPE-19 subkultūracijos santykis yra nuo 1:3 iki 1:5. Adherentinės ląstelės skalaujamos 1x PBS ir 8-10 min. inkubuojamos su disociacijos tirpalu, akutazės tirpalu. Atsiskyrusios ląstelės užpilamos šviežia terpe ir centrifuguojamos. Ląstelių granulės vėl resuspenduojamos ir supilamos į kolbą su šviežia terpe.
Auginimo terpė:	ARPE-19 ląstelių linijai auginti naudojama DMEM arba Hamo F12 terpė. ARPE-19 terpė papildyta 5 % FBS, 3,1 g/l gliukozės, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamino, 1,0 mM natrio piruvato ir 1,2 g/l NaHCO3. Medžiaga keičiama 2-3 kartus per savaitę.
Augimo sąlygos:	ARPE-19 ląstelės laikomos drėkinamajame inkubatoriuje 37 °C temperatūroje, tiekiamas 5 % CO2.
Laikymas:	Ląstelių liniją galima laikyti skysto azoto garų fazėje arba žemesnėje nei -150 °C temperatūroje, kad ląstelės būtų gyvybingos ilgą laiką.
Šaldymo procesas ir terpė:	CM-1 arba CM-ACF naudojamos kaip ARPE-19 užšaldymo terpės. Trumpai tariant, ląstelės užšaldomos taikant lėto užšaldymo metodą, kuris leidžia sumažinti temperatūrą tik 1 °C per minutę ir apsaugo ląsteles nuo šoko.
Atšildymo procesas:	Ląstelės atšildomos vandens vonelėje, kurios temperatūra iš anksto nustatyta 37 °C. Kai lieka nedidelis ledo gabalėlis, ląstelės sudedamos į šviežią terpę ir centrifuguojamos. Taip pašalinami užšaldymo terpės elementai. Tada ląstelių granulės resuspenduojamos ir ląstelės išpilstomos į kolbą kultivavimui.
Biologinės saugos lygis:	ARPE-19 ląstelės apdorojamos 1 biologinės saugos lygio laboratorijose.

ARPE-19 ląstelės 10 kartų padidintos po subkultūrinimo ir pusiau susilpnėjusios.

3.aRPE-19 ląstelių privalumai ir apribojimai

ARPE-19 ląstelės plačiai naudojamos tinklainės ląstelių biologijos tyrimuose. Kaip ir kitos ląstelės, jos taip pat turi tam tikrų privalumų ir trūkumų. Keletas jų išvardyti šiame skyriuje:

Privalumai

Pagrindiniai ARPE-19 ląstelių linijos privalumai:

Tinklainės ląstelių modelis	ARPE-19 ląstelės labai panašios į žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląsteles, todėl idealiai tinka tinklainės ligoms tirti ir vaistams bandyti.
Stabilus augimo greitis	Šios ląstelės pasižymi stabiliu augimu ir gali būti palaikomos ilgą laiką, o tai palengvina ilgalaikius eksperimentus.
Galimybė atlikti transfekciją	ARPE-19 ląstelių linija yra puiki transfekcijos šeimininkė, plačiai naudojama tiek trumpalaikiams, tiek stabiliems raiškos tyrimams.

Apribojimai

Toliau pateikiami kai kurie su ARPE-19 ląstelių linija susiję apribojimai:

Ribota diferenciacija

ARPE-19 diferenciacija yra ribota, palyginti su pirminėmis tinklainės ląstelėmis. Tai gali turėti įtakos tam tikriems su diferenciacija susijusiems tyrimams.

4.aRPE-19 ląstelių linijos taikymas moksliniams tyrimams

ARPE-19 ląstelių linija turi daugybę pritaikymo galimybių tinklainės tyrimuose. Čia aptarėme keletą konkrečių ir svarbių šios tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių linijos panaudojimo tyrimams atvejų.

Tinklainės ligų tyrimai: ARPE-19 ląstelės suteikia vertingų įžvalgų apie tinklainės patogenezę. Mokslininkai ląsteles naudoja ligų mechanizmams ir galimiems gydymo būdams tirti. 2020 m. atliktame tyrime nustatyta, kad žiedinė RNR hsa_circ_0041795 sąveikauja su miRNA-646 ir VEGFC, kad palengvintų didelės gliukozės sukeltą žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių ARPE-19 pažeidimą. Todėl šiame tyrime ši žiedinė RNR siūloma kaip veiksmingas terapinis ir diagnostinis taikinys kovojant su diabetine retinopatija [2]. Panašiai Jing Yang su kolegomis panaudojo ARPE-19 ląsteles ir pateikė įžvalgų apie diabetinės retinopatijos patogenezę. Jie ištyrė, kad slopinant lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) galima slopinti dideliu gliukozės kiekiu apdorotų ARPE-19 ląstelių uždegiminį atsaką ir epitelio perėjimą į mezenchiminį [3].
Vaistų tyrimas: ARPE-19 ląstelės naudojamos vaistų ir junginių veiksmingumui ir saugumui vertinti, padedant kurti tinklainės ligų gydymo ar terapijos būdus. Pavyzdžiui, 2019 m. atliktame tyrime nustatytas apsauginis Syzygium malaccense bioaktyviųjų medžiagų poveikis nuo vandenilio peroksido sukelto streso žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelėse ARPE-19 [4]. Po to atliktame tyrime nustatytas Prunella vulgaris var. L ekstrakto terapinis vaidmuo nuo mėlynos šviesos sukelto pažeidimo ARPE-19 ląstelėse ir pelių modelyje [5].

650,00 €*

Turinys: 1.5 milliliter

Kainos be mokesčių ir pristatymo išlaidų

cryovial

Produkto numeris: 305025

5.aRPE-19 ląstelės: Mokslinės publikacijos

Toliau pateikiamos įdomios mokslinių tyrimų publikacijos, susijusios su tinklainės pigmentinio epitelio ląstelėmis ARPE-19.

ARPE-19 ląstelių mikro RNR atsako į oksidacinį stresą įvertinimas

Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2018 m. žurnale "Cutaneous and Ocular Toxicology". Šiame tyrime buvo vertinama miRNA raiška reaguojant į oksidacinį stresą, sukeltą ARPE-19 žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelėse veikiant vandenilio peroksidu.

ARPE-19 kondicionuota terpė skatina riebalinės kilmės mezenchiminių kamieninių ląstelių nervinę diferenciaciją

Šioje publikacijoje žurnale "World Journal of Stem Cells" (2021 m.) siūloma, kad ARPE-19 ląstelių kondicionuojamoje terpėje yra augimo veiksnių, skatinančių iš riebalinio audinio gautų mezenchiminių kamieninių ląstelių nervinę diferenciaciją.

Kvercetinas slopina IL-1β sukeltų uždegiminių citokinų ir chemokinų gamybą ARPE-19 ląstelėse per MAPK ir NF-κB signalinius kelius

Šis tyrimas paskelbtas žurnale "International Journal of Molecular Sciences" (2019 m.). Jame teigiama, kad kvercetinas apsaugo nuo IL-1β stimuliuojamo chemokinų išsiskyrimo ARPE-19 ląstelėse, užkirsdamas kelią MAPK ir NF-κB kaskadų aktyvacijai ir taip pagerindamas uždegiminį atsaką.

Resveratrolis moduliuoja SIRT1 ir DNMT funkcijas ir atkuria LINE-1 metilinimo lygį ARPE-19 ląstelėse, patiriančiose oksidacinį stresą ir uždegimą

Šis mokslinis straipsnis paskelbtas žurnale "International Journal of Molecular Sciences" (2018 m.). Šiame tyrime įvertintas galimas oksidacinio streso ir uždegimo poveikis SIRT1 (sirtuino 1) ir DNMT (DNMT (DNR metiltransferazės) funkcijoms, taip pat LINE-1 (long interspersed nuclear element-1) metilinimui ARPE-19 ląstelėse.

Apsauginis Chrysanthemum boreale žiedų ekstraktų poveikis nuo A2E sukelto tinklainės pažeidimo ARPE-19 ląstelėse

Šiame straipsnyje, išspausdintame žurnale "Antioxidants" (2022 m.), nustatyta, kad Chrysanthemum boreale žiedų ekstraktai turi apsauginį poveikį nuo N-retinilideno-N-retiniletanolamino (A2E) sukelto tinklainės pažeidimo ARPE-19 ląstelėse.

6.aRPE-19 ląstelių linijos šaltiniai: Protokolai, vaizdo įrašai ir kt

ARPE-19 yra plačiai naudojama tinklainės epitelio ląstelių linija. Čia pateikiami turimi šaltiniai, apimantys ARPE-19 ląstelių kultivavimo ir transfekcijos protokolus:

ARPE-19 transfekcija: Šiame vaizdo įraše žingsnis po žingsnio aprašomas ARPE-19 ląstelių linijos transfekcijos protokolas.

Čia pateikiami kai kurie šaltiniai, kuriuose aprašomas ARPE-19 ląstelių kultivavimo protokolas:

ARPE-19 ląstelių kultūros protokolas: Šioje nuorodoje pateikiama informacija apie ARPE-19 ląstelių kultivavimą ir priežiūrą. Ją sudaro informacija apie ARPE-19 terpę, kultivavimo sąlygas, subkultūrinimo protokolus, proliferacinių ir kriokonservuotų kultūrų tvarkymą.

Nuorodos

Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Ląstelių kultūros, tinklainės eksplantai ir gyvūnų modeliai, skirti dažnoms tinklainės ligoms. Tinklainės ir akių tyrimų pažanga, 2021. 81: p. 100880.
Sun, H. ir X. Kang, hsa_circ_0041795 prisideda prie žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių (ARPE 19) sužalojimo, kurį sukelia didelis gliukozės kiekis, per miR-646 sūkį ir VEGFC aktyvavimą. Genas, 2020 m. 747: p. 144654.
Yang, J., et al., Silenced SNHG1 Inhibited Epithelial-Mesenchymal Transition and Inflammatory Response of ARPE-19 Cells Induced by High Glucose. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
Arumugam, B., et al, Protective effect of myricetin derivatives from Syzygium malaccense against hydrogen peroxide-induced stress in ARPE-19 cells. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
Kim, J., K. Cho ir S.-Y. Choung, Protective effect of Prunella vulgaris var. L extract against blue light induced damages in ARPE-19 cells and mouse retina. Laisvųjų radikalų biologija ir medicina, 2020. 152: p. 622-631.