ARPE-19 ląstelės – specializuotas žvilgsnis į tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių tyrimus naudojant ARPE-19

ARPE-19 yra spontaniškai susidariusios žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelės. Jos naudojamos įvairiems tinklainės biologijos, patologinių būklių ir terapinių intervencijų (farmakologijos) aspektams tirti. Šio straipsnio tikslas – pateikti išsamią informaciją apie ARPE-19 nemirtingas ląsteles. Daugiausia bus aptariamos bendrosios charakteristikos, kultivavimo sąlygos ir įvairūs šios ląstelių linijos taikymo tyrimams atvejai. Taigi, perskaitę šį straipsnį, jūs įgysite išsamių žinių apie:

📋 ARPE-19 ląstelių linija — trumpi faktai

Auginimo terpė: ARPE-19 ląstelių linijai kultivuoti naudojama DMEM arba Ham’s F12 terpė. ARPE-19 terpė papildoma 5 % FBS, 3,1 g/l gliukozės, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamino, 1,0 mM natrio piruvato ir 1,2 g/l NaHCO3. Terpė keičiama 2–3 kartus per savaitę.
Padvigubėjimo laikas: ARPE-19 ląstelių skaičiaus padvigubėjimo laikas yra maždaug 55–65 valandos. Jos gali padvigubėti iki 48 kartų.
Augimo tipas: ARPE-19 yra adhezyvinė ląstelių linija.
Biologinio saugumo lygis: BSL-1
Galima įsigyti iš: Cytion — Užsakyti ARPE-19

ARPE-19 ląstelės: kilmė ir bendrieji požymiai
ARPE-19 ląstelių linija: informacija apie kultivavimą
ARPE-19 ląstelių privalumai ir trūkumai
ARPE-19 ląstelių linijos pritaikymas moksliniuose tyrimuose
ARPE-19 ląstelės: moksliniai straipsniai
Ištekliai, susiję su ARPE-19 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita

📋 Turinys

ARPE-19 ląstelės: kilmė ir bendrosios savybės
ARPE-19 ląstelių linija: informacija apie kultivavimą
ARPE-19 ląstelių privalumai ir trūkumai
ARPE-19 ląstelių linijos pritaikymas moksliniuose tyrimuose
5. ARPE-19 ląstelės: moksliniai leidiniai
ARPE-19 ląstelių linijos ištekliai: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Dažnai užduodami klausimai

ARPE-19 ląstelės: kilmė ir bendrosios savybės

Norint veiksmingai naudoti ląstelių liniją moksliniuose tyrimuose, būtina žinoti jos kilmę ir bendruosius požymius. Šioje straipsnio dalyje pateikiama visa informacija apie ARPE ląstelių liniją. Pavyzdžiui, kas yra ARPE-19 ląstelių linija? Kodėl verta naudoti ARPE-19 ląsteles? Kas yra ARPE-19/HPV-16 ląstelių linija? Ar ARPE-19 ląstelės yra nemirtingos? Kokia yra ARPE 19 ląstelių morfologija ir dydis?

Nemirtingų tinklainės pigmentinių epitelio ląstelių linija ARPE-19 buvo gauta iš 19 metų vyro, mirusio dėl galvos traumos nelaimingo atsitikimo metu, akių. Ją 1986 m. sukūrė Amy Aotaki-Keen.
Šios ląstelės išreiškia tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių žymenis, t. y. CRALBP ir RPE-65, o tai rodo, kad jos gali sudaryti stabilius monosluoksnius, kuriems būdinga morfologinė ir funkcinė polarizacija.
ARPE-19 ląstelės turi epitelio ląstelių morfologiją.
ARPE-19 ląstelės daugiausia turi normalų kariotipą, išskyrus vieną deleciją ir adiciją atitinkamai 9 ir 19 chromosomų ilgosiose rankose. Be to, taip pat stebimos kai kurios aneuploidijos [1].

Tinklainės lazdelių ir kolbelių skenuojančiojo elektroninio mikroskopo (SEM) nuotrauka.

ARPE-19 ląstelių linija: informacija apie auginimą

Pagrindinė informacija apie ląstelių kultūrą yra labai svarbi tinkamam ląstelių linijos tvarkymui ir priežiūrai. Šiame skyriuje sužinosite pagrindinius ARPE-19 ląstelių linijos kultivavimo aspektus. Sužinosite: koks yra ARPE-19 ląstelių padvigubėjimo laikas? Koks yra ARPE-19 sėjos tankis? Koks yra ARPE-19 ląstelių tankis? Kas yra ARPE-19 užšaldymo terpė? Kaip auginti ARPE-19 ląstelių liniją?

Pagrindiniai ARPE-19 ląstelių kultivavimo aspektai

Populiacijos dvigubėjimo laikas:: ARPE-19 ląstelių skaičiaus padvigubėjimo laikas yra maždaug 55–65 valandos. Jos gali padvigubėti iki 48 kartų.
Adhezyvinės ar suspensinės:: ARPE-19 yra adhezyvinė ląstelių linija.
Subkultivavimo santykis:: ARPE-19 subkultivavimo santykis yra 1:3–1:5. Prisijungusios ląstelės nuplaunamos 1x PBS ir inkubuojamos su disociacijos tirpalu, accutase, 8–10 min. Atsiskyrusios ląstelės įpilamos į šviežią terpę ir centrifuguojamos. Ląstelių nuosėdos vėl resuspenduojamos ir supilamos į kultūros kolbą, kurioje yra šviežia terpė.
Auginimo terpė:: ARPE-19 ląstelių linijai kultivuoti naudojama DMEM arba Ham’s F12 terpė. ARPE-19 terpė papildoma 5 % FBS, 3,1 g/l gliukozės, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamino, 1,0 mM natrio piruvato ir 1,2 g/l NaHCO3. Terpė keičiama 2–3 kartus per savaitę.
Auginimo sąlygos:: ARPE-19 ląstelės laikomos drėgname inkubatoriuje 37 °C temperatūroje su 5 % CO2 tiekimu.
Laikymas:: Ląstelių liniją galima laikyti skysto azoto garų fazėje arba žemesnėje nei -150 °C temperatūroje, siekiant ilgam laikui išsaugoti ląstelių gyvybingumą.
Užšaldymo procesas ir terpė:: ARPE-19 užšaldymo terpėms naudojamos CM-1 arba CM-ACF. Trumpai tariant, ląstelės užšaldomos taikant lėto užšaldymo metodą, kuris leidžia temperatūrai mažėti tik 1 °C per minutę ir apsaugo ląsteles nuo šoko.
Atšildymo procesas:: Ląstelės atšildomos vandens vonioje, iš anksto nustatytos 37 °C temperatūrai. Kai lieka tik nedidelis ledo gabalėlis, ląstelės įdedamos į šviežią kultūrinę terpę ir centrifuguojamos. Taip pašalinami užšaldymo terpės elementai. Toliau ląstelių nuosėdos vėl suspenduojamos, o ląstelės išpilamos į kolbą kultūrai auginti.
Biologinio saugumo lygis:: ARPE-19 ląstelės tvarkomos 1 biologinio saugumo laboratorijose.

Arpe 19 cells

ARPE-19 ląstelės, padidintos 10 kartų, po subkultivavimo ir esant pusiau konfluentiniam būviui.

ARPE-19 ląstelių privalumai ir trūkumai

ARPE-19 ląstelės plačiai naudojamos tinklainės ląstelių biologijos tyrimuose. Kaip ir kitos ląstelės, jos taip pat turi tam tikrų privalumų ir trūkumų. Keletas iš jų išvardyti šiame skyriuje:

Privalumai

Pagrindiniai ARPE-19 ląstelių linijos privalumai:

Tinklainės ląstelių modelis: ARPE-19 ląstelės labai panašios į žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląsteles, todėl jos idealiai tinka tinklainės ligų tyrimams ir vaistų bandymams.
Stabilus augimo tempas: Šios ląstelės auga stabiliai ir gali būti išlaikomos ilgą laiką, todėl palengvina ilgalaikius eksperimentus.
Tinkamumas transfekcijai: ARPE-19 ląstelių linija yra puikus transfekcijos šeimininkas, plačiai naudojamas tiek laikinosios, tiek stabiliosios ekspresijos tyrimuose.

Apribojimai

Štai keletas su ARPE-19 ląstelių linija susijusių apribojimų:

Ribotas diferencijavimas: ARPE-19 diferenciacija yra ribota, palyginti su pirminėmis tinklainės ląstelėmis. Tai gali turėti įtakos tam tikriems su diferenciacija susijusiems tyrimams.

ARPE-19 ląstelių linijos pritaikymas moksliniuose tyrimuose

ARPE-19 ląstelių linija turi daugybę pritaikymų tinklainės tyrimuose. Čia aptarėme keletą konkrečių ir reikšmingų šios tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių linijos pritaikymų moksliniuose tyrimuose.

Tinklainės ligų tyrimai: ARPE-19 ląstelės suteikia vertingos informacijos apie tinklainės patogenezę. Tyrėjai naudoja ląsteles ligų mechanizmams ir galimiems gydymo būdams tirti. 2020 m. atliktas tyrimas parodė, kad cirkuliarinė RNR hsa_circ_0041795 sąveikauja su miRNA-646 ir VEGFC, skatindama aukšto gliukozės lygio sukeltą žalą žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelėse ARPE-19. Todėl tyrime siūloma šią cirkuliarią RNR laikyti veiksmingu terapiniu ir diagnostiniu taikiniu kovojant su diabetine retinopatija [2]. Panašiai Jing Yang ir kolegos naudojo ARPE-19 ląsteles ir pateikė įžvalgų apie diabetinės retinopatijos patogenezę. Jie nustatė, kad lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) slopinimas gali slopinti uždegiminį atsaką ir epitelio į mezenchiminį perėjimą ARPE-19 ląstelėse, veiktose aukštu gliukozės kiekiu [3].
Vaistų bandymai: ARPE-19 ląstelės naudojamos vaistų ir junginių veiksmingumui bei saugumui įvertinti, padedant kurti tinklainės ligų gydymo būdus ar terapijas. Pavyzdžiui, 2019 m. atliktas tyrimas nustatė Syzygium malaccense biologiškai aktyvių medžiagų apsauginį poveikį nuo vandenilio peroksido sukelto streso žmogaus tinklainės pigmentiniame epitelio ląstelėse, ARPE-19 [4]. Po to atliktas tyrimas nustatė Prunella vulgaris var. L ekstrakto terapinį poveikį mėlynosios šviesos sukeltam pažeidimui ARPE-19 ląstelėse ir pelių modelyje [5].

650,00 €*

Turinys: 1.5 milliliter

Kainos be mokesčių ir pristatymo išlaidų

cryovial

Produkto numeris: 305025

5. ARPE-19 ląstelės: moksliniai straipsniai

Toliau pateikiami keli įdomūs moksliniai straipsniai, kuriuose aptariamos ARPE-19 tinklainės pigmentinio epitelio ląstelės.

MikroRNR reakcijų į oksidacinį stresą vertinimas ARPE-19 ląstelėse

Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2018 m. žurnale „Cutaneous and Ocular Toxicology“. Šiame tyrime buvo vertinama mikroRNR ekspresija reaguojant į oksidacinį stresą, sukeltą ARPE-19 žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelėse, jas veikiant vandenilio peroksidu.

ARPE-19 kondicionuota terpė skatina iš riebalinio audinio gautų mezenchiminių kamieninių ląstelių nervų diferenciaciją

Šiame leidinyje „World Journal of Stem Cells“ (2021 m.) buvo pasiūlyta, kad ARPE-19 ląstelių kondicionuota terpė turi augimo veiksnių, kurie skatina iš riebalinio audinio gautų mezenchiminių kamieninių ląstelių nervų diferenciaciją.

Kvercetinas slopina IL-1β indukuotų uždegiminių citokinų ir chemokinų gamybą ARPE-19 ląstelėse per MAPK ir NF-κB signalizacijos kelius

Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „International Journal of Molecular Sciences“ (2019 m.). Jame teigiama, kad kvercetinas apsaugo nuo IL-1β stimuliuoto chemokinų išsiskyrimo ARPE-19 ląstelėse, užkertant kelią MAPK ir NF-κB kaskadų aktyvacijai, siekiant pagerinti uždegiminį atsaką.

Resveratrolis moduliuoja SIRT1 ir DNMT funkcijas ir atkuria LINE-1 metilinimo lygį ARPE-19 ląstelėse esant oksidaciniam stresui ir uždegimui

Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „International Journal of Molecular Sciences“ (2018 m.). Šiame tyrime buvo vertinamas galimas oksidacinio streso ir uždegimo poveikis SIRT1 (Sirtuin 1) ir DNMT (DNR metiltransferazių) funkcijoms, taip pat LINE-1 (ilgasis tarpinis branduolinis elementas-1) metilinimui ARPE-19 ląstelėse.

Chrysanthemum boreale gėlių ekstraktų apsauginis poveikis nuo A2E sukelto tinklainės pažeidimo ARPE-19 ląstelėse

Šiame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Antioxidants“ (2022 m.), nustatyta, kad Chrysanthemum boreale gėlių ekstraktai turi apsauginį poveikį nuo N-retiniliden-N-retiniletanolamino (A2E) sukelto tinklainės pažeidimo ARPE-19 ląstelėse.

Ištekliai, skirti ARPE-19 ląstelių linijai: protokolai, vaizdo įrašai ir kita

ARPE-19 yra plačiai naudojama tinklainės epitelio ląstelių linija. Čia pateikiami ištekliai, apimantys ARPE-19 ląstelių kultivavimo ir transfekcijos protokolus:

ARPE-19 transfekcija: Šis vaizdo įrašas yra žingsnis po žingsnio vadovas, skirtas susipažinti su ARPE-19 ląstelių linijos transfekcijos protokolu.

Čia pateikiami ištekliai, aprašantys ARPE-19 ląstelių kultivavimo protokolą:

ARPE-19 ląstelių kultivavimo protokolas: Šioje nuorodoje pateikiama informacija apie ARPE-19 ląstelių kultivavimą ir priežiūrą. Ji apima informaciją apie ARPE-19 terpę, kultivavimo sąlygas, subkultivavimo protokolus ir proliferacinių bei kriokonservuotų kultūrų tvarkymą.

Nuorodos

Schnichels, S., et al., Tinklainė lėkštelėje: ląstelių kultūros, tinklainės eksplantatai ir gyvūnų modeliai dažnoms tinklainės ligoms tirti. Tinklainės ir akių tyrimų pažanga, 2021. 81: p. 100880.
Sun, H. ir X. Kang, hsa_circ_0041795 prisideda prie žmogaus tinklainės pigmentinio epitelio ląstelių (ARPE 19) pažeidimo, kurį sukelia didelis gliukozės kiekis, per miR-646 sugėrimą ir VEGFC aktyvaciją. Gene, 2020. 747: p. 144654.
Yang, J. ir kt., „SNHG1 slopinimas stabdė epitelio-mezenchiminį perėjimą ir ARPE-19 ląstelių uždegiminį atsaką, kurį sukėlė didelis gliukozės kiekis“. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
Arumugam, B. ir kt., Syzygium malaccense miricetino darinių apsauginis poveikis nuo vandenilio peroksido sukelto streso ARPE-19 ląstelėse. Molecular vision, 2019. 25: p. 47.
Kim, J., K. Cho ir S.-Y. Choung, Prunella vulgaris var. L ekstrakto apsauginis poveikis nuo mėlynosios šviesos sukeltų pažeidimų ARPE-19 ląstelėse ir pelių tinklainėje. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: p. 622-631.