AGS ląstelės – skrandžio adenokarcinomos AGS ląstelių tyrimai vėžio studijose
AGS ląstelės sudaro žmogaus skrandžio adenokarcinomos ląstelių liniją, kuri plačiai naudojama biomedicininiuose tyrimuose. Visų pirma ji naudojama skrandžio vėžio biologijai tirti, įskaitant naviko augimą, vystymąsi, progresavimą ir terapines intervencijas. Be to, ji naudojama tirti šeimininko ir patogeno sąveiką.
- Auginimo terpė
- AGS ląstelėms kultivuoti naudojama DMEM terpė, kurioje yra 10 % FBS, 4 mM L-glutamino, 4,5 g/l gliukozės, 1,5 g/l NaHCO3 ir 1,0 mM natrio piruvato. Terpę reikia keisti 2–3 kartus per savaitę.
- Padvigubėjimo laikas
- AGS ląstelių dvigubėjimo laikas svyruoja nuo 24 iki 48 valandų.
- Augimo tipas
- AGS ląstelės yra adhezyvinės. Jos auga į monosluoksnius.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-2
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsakyti AGS
- AGS ląstelių bendrosios charakteristikos ir kilmė
- AGS ląstelių linijos auginimo informacija
- AGS ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- AGS ląstelių pritaikymas
- 5. Moksliniai straipsniai apie AGS ląstelių liniją
- Ištekliai, susiję su AGS ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
Bendrosios AGS ląstelių charakteristikos ir kilmė
Prieš pradedant dirbti su ląstelių linija, būtina žinoti jos kilmę ir bendrąsias charakteristikas. Šiame skyriuje bus aptariama: Kas yra AGS ląstelės? Kokia yra AGS ląstelių kilmė? Kokia yra AGS vėžio ląstelių linijos morfologija?
- AGS ląstelių linija buvo gauta iš 54 metų amžiaus kaukazietės moters, sergančios skrandžio adenokarcinoma, skrandžio audinio. Ji buvo izoliuota 1979 m. [1].
- AGS ląstelės turi epitelio tipo morfologiją.
- Skrandžio epitelinės AGS ląstelės yra hiperdiploidinės. Modalinis AGS ląstelių chromosomų skaičius yra 49, kuris pasitaiko beveik 60 % ląstelių. Poliploidija taip pat pasitaiko maždaug 3,6 % ląstelių.
Informacija apie AGS ląstelių linijos auginimą
Norint tinkamai elgtis su ląstelių linija ir ją valdyti, būtina žinoti pagrindines jos kultivavimo sąvokas. Visų pirma turėtumėte sužinoti: koks yra AGS ląstelių dvigubėjimo laikas? Kas yra AGS ląstelių terpė? Kaip atliekamas AGS ląstelių subkultivavimas? Kokios šaldymo terpės naudojamos skrandžio epitelio AGS ląstelėms?
Svarbiausi AGS ląstelių kultivavimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
AGS ląstelių dvigubėjimo laikas svyruoja nuo 24 iki 48 valandų.
Adhezinės ar suspensinės:
AGS ląstelės yra adhezyvinės. Jos auga į monosluoksnius.
Sėjimo tankis:
AGS ląstelės sėjamos 1 x 104 ląstelių/cm2 tankumu. Esant šiam tankumui, ląstelės per 3–5 dienas sudaro konfluentinį monosluoksnį. Pašalinus seną terpę, ląstelės nuplaunamos 1 x PBS ir inkubuojamos su Accutase disociacijos tirpalu. Atsiskyrusios ląstelės buvo resuspenduotos kultūrinėje terpėje ir centrifuguotos. Ląstelių nuosėdos buvo vėl resuspenduotos, o po AGS ląstelių suskaičiavimo jos buvo išpilamos į naują kolbą augimui.
Auginimo terpė:
AGS ląstelėms kultivuoti naudojama DMEM terpė, kurioje yra 10 % FBS, 4 mM L-glutamino, 4,5 g/l gliukozės, 1,5 g/l NaHCO3 ir 1,0 mM natrio piruvato. Terpę reikia keisti 2–3 kartus per savaitę.
Auginimo sąlygos:
AGS ląstelės laikomos drėgname inkubatoriuje (37 °C temperatūroje) su 5 % CO2 tiekimu.
Laikymas:
Užšaldytos AGS ląstelės laikomos elektrinėse šaldyklose, kurių temperatūra yra žemesnė nei -150 °C, arba ilgesnį laiką – skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
AGS ląstelėms užšaldyti naudojama CM-1 arba CM-ACF terpė. Ląstelės užšaldomos taikant lėto užšaldymo procesą, kurio metu temperatūra per minutę nukrinta tik 1 °C, taip apsaugant ląstelių gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Užšaldytos skrandžio epitelio ląstelės greitai maišomos 37 °C vandens vonioje 40–60 sekundžių. Atšildytos ląstelės resuspenduojamos šviežioje auginimo terpėje ir supilamos į naujas kolbas augimui. Po 24 valandų inkubacijos terpė atnaujinama, siekiant pašalinti užšaldymo terpės komponentus. Priešingai, atšildytos ląstelės centrifuguojamos, o užšaldymo terpės elementai pašalinami. Tada surinktos ląstelės vėl resuspenduojamos ir išpilamos į kolbą, kurioje yra kultūrinė terpė.
Biologinio saugumo lygis:
AGS ląstelių kultūrai būtina 2 lygio biologinio saugumo laboratorija.
AGS ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
Šioje straipsnio dalyje bus aptarti kai kurie pagrindiniai AGS ląstelių privalumai ir trūkumai.
Privalumai
Pagrindiniai skrandžio epitelio AGS ląstelių privalumai yra šie:
Lengva auginti
AGS skrandžio karcinomos ląstelių liniją lengva išlaikyti ląstelių kultūros laboratorijose. Ji neturi jokių sudėtingų ir reiklų ląstelių kultūros reikalavimų. Be to, ji pasižymi geromis augimo savybėmis, todėl yra idealus pasirinkimas skrandžio vėžio biologijos tyrimams.
Ryšys su skrandžio vėžiu
AGS ląstelės buvo gautos iš žmogaus skrandžio adenokarcinomos, todėl jos plačiai naudojamos skrandžio karcinomos biologijai ir terapinėms intervencijoms tirti.
Apribojimai
Su AGS ląstelių linija susijęs apribojimas yra:
In vitro ląstelių modelis
AGS ląstelės yra auginamos biomedicininių tyrimų laboratorijose dirbtinėmis sąlygomis. Todėl jos gali nevisiškai atkurti in vivo skrandžio vėžio mikroaplinką ir kitas ląstelių bei molekulių sąveikas.
AGS ląstelių pritaikymas
AGS ląstelės yra specialiai naudojamos skrandžio vėžio biologijai tirti. Jos turi daug kitų perspektyvių pritaikymų biomedicinos srityje. Kai kurie įdomūs AGS ląstelių pritaikymo tyrimams pavyzdžiai:
- Skrandžio vėžio tyrimai: AGS ląstelės yra puiki tyrimo priemonė, leidžianti tirti ląstelių ir molekulių mechanizmus, lemiančius skrandžio vėžio augimą, metastazavimą ir invaziją. Tyrėjai taip pat naudoja skrandžio epitelio AGS ląsteles, kad ištirtų įvairius ląstelių procesus, genetines mutacijas ir signalų perdavimo kelius skrandžio vėžio vystymosi metu. „Oncology Reports“ (2019) tyrime nustatyta, kad mikroRNR-183-5p.1 skatina naviko ląstelių proliferaciją, migraciją ir invaziją, slopindama Bcl 2/P53 signalų kaskadą. Be to, ji taip pat slopina TPM1 geną, kad pasiektų šiuos efektus. Taigi, tiek mikroRNR, tiek TPM1 yra siūlomi kaip veiksmingi molekuliniai taikiniai kuriant tikslinį skrandžio vėžio gydymą [2].
- Vaistų atranka: AGS ląstelės dažnai naudojamos naujų ir veiksmingų vaistų nuo skrandžio vėžio atrankai. Tyrėjai vertina potencialių vaistų citotoksiškumą ir veiksmingumą naudodami AGS ląstelių liniją. Taip pat buvo atlikti tyrimai, skirti naujų molekulinių taikinių identifikavimui ir naujų tikslinio gydymo metodų, skirtų kovai su skrandžio karcinomomis, kūrimui. 2021 m. atliktuose tyrimuose buvo naudojamos AGS skrandžio vėžio ląstelės ir tiriamas paklitakselio vaisto terapinis poveikis. Rezultatai parodė, kad paklitakselis sukelia mitozinę katastrofą – neatskiriamą apoptozės arba ląstelių mirties mechanizmą AGS ląstelėse. Be to, jis taip pat skatino autofagiją skrandžio vėžio ląstelėse [3].
- Šeimininko ir patogeno sąveika: AGS vėžio ląstelių linija taip pat naudojama šeimininko ir patogeno sąveikos tyrimams. Tai padeda mokslininkams suprasti ląstelių mechanizmus ir reakcijas, susijusias su infekcija. Pavyzdžiui, 2020 m. atliktame tyrime pastebėta, kad mažos nekoduojančios RNR, esančios Helicobacter pylori išorinės membranos vezikulėse, sumažina interleukino 8 sekreciją žmogaus AGS ląstelėse [4].
5. Moksliniai straipsniai apie AGS ląstelių liniją
Šioje straipsnio dalyje bus aptarti keli įdomūs ir dažniausiai cituojami moksliniai straipsniai apie AGS ląsteles.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2020 m.), teigiama, kad salidrosidas, natūralus junginys, skatina apsauginę autofagiją ir ląstelių mirtį skrandžio epitelio AGS ląstelėse, moduliuodamas PI3K/AKT/mTOR signalizacijos kelią.
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2018 m.). Jame buvo tiriamas sinergetinis astragalo polisacharido ir vaisto apatinibo priešvėžinis poveikis AGS ląstelėse. Tyrimo rezultatai parodė, kad astragalus stiprina apatinibo priešvėžinį poveikį slopindamas AKT signalizaciją.
Šiame „Journal of Ethnopharmacology“ (2018 m.) paskelbtame tyrime teigiama, kad kurkuzedoalidas, natūralus junginys iš Curcuma zedoaria Roscoe augalo, prisideda prie jo citotoksiškumo potencialo AGS ląstelėms.
FOXA1 perprodukcija slopina žmogaus skrandžio vėžio AGS ląstelių proliferaciją ir EMT
Šiame leidinyje „Gene“ (2018 m.) teigiama, kad FOXA1 ekspresijos padidėjimas slopina AGS skrandžio adenokarcinomos ląstelių proliferaciją, epitelio į mezenchiminį perėjimą (EMT) ir invaziją.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „International Journal of Medical Microbiology“ 2020 m. Šiame tyrime AGS ląstelės buvo naudojamos šeimininko ir patogeno sąveikos tyrimams. Rezultatai parodė, kad Helicobacter pylori išorinės membranos vezikulėse yra nekoduojančių RNR, kurios veikia IL-8 lygį AGS ląstelėse.
Ištekliai apie AGS ląstelių liniją: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami keli ištekliai, susiję su AGS ląstelėmis.
- AGS ląstelių transfekcijos protokolas: Šis vaizdo įrašas yra žingsnis po žingsnio vadovas, skirtas susipažinti su skrandžio epitelio AGS ląstelių transfekcijos protokolu.
Šioje nuorodoje pateikiamas AGS ląstelių kultivavimo protokolas.
- AGS ląstelių kultūros protokolas: šioje svetainėje pateikiama naudinga informacija apie AGS ląstelių terpes ir ląstelių kultūros protokolus. Trumpai tariant, čia pateikiamas skrandžio epitelio AGS ląstelių subkultūravimo protokolas ir nurodymai, kaip elgtis su besidauginančiomis ir kriokonservuotomis AGS kultūromis.
- AGS ląstelių subkultūravimas: Šioje svetainėje išsamiai paaiškinama AGS ląstelių subkultūravimo procedūra.
Nuorodos
- Phuc, B.H. ir kt., Dviejų Vietnamo Helicobacter pylori štamų, CHC155 iš paciento, sergančio skrandžio vėžiu ne kardijos srityje, ir VN1291 iš paciento, sergančio dvylikapirštės žarnos opa, lyginamoji genomika. Scientific Reports, 2023. 13(1): p. 8869.
- Lin, J. ir kt., miRNA‑183‑5p. 1 skatina skrandžio vėžio AGS ląstelių migraciją ir invaziją, veikdamas TPM1. Pataisa in/10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): p. 2371-2381.
- Khing, T.M. ir kt., Paklitakselio poveikis AGS ląstelių apoptozei, autofagijai ir mitotinei katastrofai. „Scientific Reports“, 2021. 11(1): p. 23490.
- Zhang, H., et al., Helicobacter pylori išorinės membranos vezikulėse supakuoti sncRNA slopina IL-8 sekreciją žmogaus ląstelėse. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): p. 151356.