A375 ląstelių linija – melanomos tyrimų vadovas

A375 yra žmogaus melanomos ląstelių linija, plačiai naudojama toksikologijos ir imunoonkologijos tyrimuose. Tyrėjai naudoja šią ląstelių liniją vėžio biologijai ir signalizacijos keliams tirti, potencialiems priešvėžiniams preparatams bandyti ar atrinkti bei naujiems ir veiksmingiems vaistams kurti.

A375 ląstelių kilmė ir bendrosios charakteristikos

Žinios apie ląstelių linijos kilmę ir bendrąsias charakteristikas gali padėti jums planuoti jos naudojimą moksliniuose tyrimuose. Šiame straipsnio skyriuje bus aptariama A375 ląstelių linijos kilmė ir savybės. Pavyzdžiui, kas yra A375 ląstelių linija? Kokios yra A375 ląstelių linijos charakteristikos? Iš kur kilusios A375 ląstelės? Kokia yra A375 melanomos ląstelių morfologija? Koks yra A375 ląstelių dydis?

• Odų vėžio ląstelių linija A375 kilusi iš 54 metų moters, sergančios piktybine melanoma, kieto naviko eksplantato kultūros [1].
• A375 ląstelės turi epitelio tipo morfologiją.
• A375 ląstelių dydis yra santykinai mažesnis, palyginti su kitomis ląstelių linijomis. Jų skersmuo yra maždaug 12 µm.
• A375 melanomos ląstelės yra hipotriploidinės. Modalinis chromosomų skaičius šioje ląstelių linijoje yra 62. Paprastai kiekviena ląstelė turi devynias žymeklines chromosomas ir po vieną kopiją normalių N2, N6 ir N22 chromosomų.

A375 ląstelės: informacija apie ląstelių kultūrą

A375 ląstelių kultūras lengva prižiūrėti. Jos neturi jokių sudėtingų ląstelių kultūros reikalavimų. Šiame skyriuje rasite reikiamą informaciją apie ląstelių kultūrą. Pavyzdžiui, koks yra A375 ląstelių dvigubėjimo laikas. Kokia yra A375 ląstelių linijos terpė? Koks yra A375 ląstelių sėjimo tankis? Ar A375 melanomos ląstelės yra adhezyvios?

Svarbiausi A375 ląstelių kultivavimo aspektai

Populiacijos dvigubėjimo laikas:

A375 ląstelių populiacijos padvigubėjimo laikas yra 20 valandų.

Adhezyvinės ar suspensinės:

A375 yra adhezyvinė žmogaus melanomos ląstelių linija.

Sėjimo tankis:

1 x 10⁴ ląstelių/cm² tankis yra idealus A375 ląstelių kultūroms. Prisijungusios ląstelės nuplaunamos 1 x fosfato buferiniu tirpalu (PBS) ir inkubuojamos su perkelimo tirpalu (Accutase). Po to į ląsteles įpilama auginimo terpės ir jos centrifuguojamos. Surinktos ląstelės vėl suspenduojamos auginimo terpėje ir perpilamos į naujas kolbas augimui.

Auginimo terpė:

DMEM rekomenduojama kaip ideali A375 terpė, kai ji papildoma 10 % veršelių serumu (FBS), 4,5 g/l gliukozės, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutaminu ir 1,0 mM natrio piruvatu. A375 terpė turėtų būti keičiama 2–3 kartus per savaitę.

Auginimo sąlygos:

A375 melanomos ląstelės auginamos drėgname inkubatoriuje (37 °C) su 5 % CO2 tiekimu.

Laikymas:

Užšaldytos A375 ląstelės turi būti laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje skysto azoto garų fazėje arba elektrinėje šaldymo kameroje.

Užšaldymo procesas ir terpė:

A375 ląstelių linijai užšaldyti naudojamos CM-1 arba CM-ACF terpės. Siekiant apsaugoti ląstelių gyvybingumą, pasirenkamas lėtas užšaldymo procesas, kurio metu temperatūra palaipsniui mažinama 1 °C.

Atšildymo procesas:

Užšaldytų A375 melanomos ląstelių buteliukas greitai maišomas vandens vonioje 40–60 sekundžių, kol lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Į ląsteles įpilama šviežios terpės ir jos centrifuguojamos, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės elementai. Gautas ląstelių nuosėdas vėl resuspenduojamas ir supilamas į naujus kolbelius.

Biologinio saugumo lygis:

A375 kultūros tvarkomos ir laikomos 1 biologinio saugumo lygio laboratorijose.

A375 ląstelių linijos taikymas moksliniuose tyrimuose

A375 ląstelių linija plačiai taikoma vėžio tyrimuose. Štai keletas sričių, kuriose dažniausiai naudojamos A375 ląstelės.

• Vėžio tyrimai: A375 ląstelės plačiai naudojamos melanomos tyrimuose. Tyrėjai naudojo šias ląsteles odos vėžio biologijai, procesams ir pagrindiniams ląstelių signalizacijos mechanizmams, įskaitant ląstelių proliferaciją, migraciją ir invaziją, tirti. Tai taip pat gali padėti tyrėjams identifikuoti naujus molekulinius terapinius tikslus. 2019 m. Lin Zhu ir kolegų atliktame tyrime buvo naudojamos labai agresyvios melanomos ląstelės A375 ir nustatytas mikroRNR-3662 vaidmuo A375 melanomos ląstelių augimui ir invazijai. Tyrimo rezultatai rodo, kad mikroRNR-3662 veikia ZEB1 geną ir reguliuoja melanomos ląstelių augimą in vitro ir in vivo A375 naviko modelyje [2]. Panašiai, 2018 m. atliktas tyrimas nustatė, kad PI3K/AKT ir MAPK/ERK signaliniai keliai dalyvauja A375 ląstelių linijos proliferacijoje ir metastazavime [3].
• Vaistų atradimas ir bandymai: A375 ląstelių linija yra naudingas in vitro naviko modelis, skirtas potencialių priešvėžinių vaistų bandymams ir atrankai. Mokslininkai, naudodami šias A375 melanomos ląsteles, vertina naujų chemoterapinių vaistų, junginių ir kitų terapijų toksiškumą bei veiksmingumą. Pavyzdžiui, viename tyrime buvo tiriamos greipfrutų kilmės mikro- ir nanovesikulių priešvėžinės savybės, veikiančios A375 žmogaus melanomos vėžio ląsteles. Rezultatai parodė, kad mikro- ir nanovesikulės sukelia ląstelių ciklo sustabdymą ir apoptozę bei slopina genų ekspresiją ląstelių proliferacijos, migracijos ir invazijos procesuose [4].

A375 ląstelės: publikacijos

Čia paminėtos kelios svarbios mokslinės publikacijos, kuriose aptariamos A375 ląstelės.

Vitaminas D ir jo mažai kalcio kiekį turintys analogai moduluoja cisplatino ir dakarbazino priešvėžines savybes žmogaus melanomos A375 ląstelių linijoje

Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Journal of Oncology“ 2019 m. Tyrime teigiama, kad bendras gydymas vitaminu D ir jo analogais pagerina cisplatino ir dakarbazino priešvėžinį aktyvumą A375 melanomos ląstelėse.

In vitro vertinimas pasirinktų alavijo rūšių gelio ir visų lapų ekstraktų priešmelanominio poveikio (A375 ląstelių linija)

Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Journal of Herbal Medicine“ 2022 m. Šiame tyrime buvo tiriamas aloe vera gelio poveikis A375 melanomos ląstelėms.

Fermitino šeimos narys 2 skatina melanomos progresavimą, stiprindamas p-α-Pix jungimąsi prie Rac1, kad aktyvuotų MAPK kelią

Šiame „Oncogene“ (2021 m.) paskelbtame tyrime buvo iškelta hipotezė, kad fermitino šeimos narys 2 (FERMT2 arba kindlin-2) skatina melanomos progresavimą, aktyvuodamas MAPK per jungimąsi su p-α-Pix ir Rac1.

FARP1 skatina ląstelių proliferaciją, moduliuodamas MAPK signalizacijos kelią odos melanomoje

Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „The American Journal of Dermatopathology“ (2019 m.), teigiama, kad FARP1 gali palengvinti odos melanomos vystymąsi ir progresavimą. Taigi, jis gali būti naudingas terapinis taikinys.

Phyllodium elegans ekstraktų citotoksinis ir apoptozinis potencialas žmogaus vėžio ląstelių linijose

Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Bioengineered“ (2019 m.). Šiame tyrime buvo tiriamas augalo Phyllodium elegans ekstrakto citotoksinis ir apoptozinis aktyvumas žmogaus karcinomos ląstelių linijose, įskaitant A375.

Ištekliai, susiję su A375 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita

Toliau pateikiami keli internetiniai ištekliai, susiję su A375 ląstelėmis.

• A375 ląstelių transfekcija: Šis vaizdo įrašas padės jums žingsnis po žingsnio išmokti A375 ląstelių transfekcijos.
• Ląstelių kultivavimas: šiame vaizdo įraše pateikiama labai naudinga informacija apie ląstelių linijų kultivavimą.

A375 ląstelių kultivavimo protokolai pateikiami čia.

• A375 ląstelių linija: Šioje nuorodoje pateikiama naudinga informacija apie A375 ląstelių linijos kultivavimą ir priežiūrą, įskaitant A375 terpius bei sušaldytų ir besidauginančių A375 kultūrų tvarkymą.

Literatūra

1. Avram, S., et al., A375 žmogaus melanomos modelių standartizavimas ant vištienos embriono chorioallantoinės membranos ir Balb/c nude pelių. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MikroRNR-3662 veikia ZEB1 ir slopina labai agresyvios melanomos ląstelių linijos A375 invaziją. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C slopina melanomos A375 ląstelių proliferaciją ir metastazavimą, slopindamas PI3K/Akt ir MAPK/ERK signalinius kelius. Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Iš greipfrutų gautos mikro- ir nanovesikulės pasižymi skirtingais metabolomų profiliais ir priešvėžiniu poveikiu žmogaus melanomos ląstelių linijoje A375. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.