4T1 ląstelės – esminė informacija apie krūties vėžio ląstelių tyrimus ir pritaikymą
4T1 yra persodinama pelių krūties vėžio ląstelių linija. Ji plačiai naudojama kaip genetiškai identiškas in vitro naviko modelis žmogaus krūties vėžiui tirti. 4T1 ląstelės yra labai invazinės ir tumorigeninės; jos linkusios metastazuoti iš pirminės naviko vietos pieno liaukoje į kitas vietas, įskaitant kepenis, limfmazgius, plaučius, kaulus ir smegenis, todėl yra idealios krūties vėžio metastazių tyrimams [1].
- Auginimo terpė
- 4T1 ląstelėms auginti naudojama RPMI 1640 terpė. Idealiam ląstelių augimui užtikrinti į auginimo terpę įdedama 10 % veršelių serumo (FBS), 2,0 g/l NaHCO3 ir 2,1 mM stabilaus glutamino.
- Padvigubėjimo laikas
- Vidutinis 4T1 krūties vėžio ląstelių populiacijos dvigubėjimo laikas yra 14 valandų.
- Augimo tipas
- 4T1 yra adhezyvinė ląstelių linija.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsakyti 4T1
- Bendrosios 4T1 ląstelių charakteristikos ir kilmė
- 4T1 ląstelių linijos auginimo informacija
- T1 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- Įsigykite 4T1 ląstelių liniją: aukštos kokybės krūties vėžio modelis
- T1 ląstelių linija: pritaikymas vėžio tyrimuose
- 4T1 ląstelės: mokslinių tyrimų publikacijos
- Ištekliai, susiję su 4T1 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai apie 4T1 ląstelių liniją
- Nuorodos
- Dažnai užduodami klausimai
Bendrosios 4T1 ląstelių charakteristikos ir kilmė
Prieš pradedant dirbti su ląstelių linija, būtina žinoti jos kilmę ir bendrąsias charakteristikas. Šiame skyriuje pateikiame pagrindinę informaciją apie 4T1 krūties vėžio ląsteles. Pavyzdžiui, kas yra 4T1 ląstelės? Kokios yra 4T1 ląstelių linijos charakteristikos? Kokia yra 4T1 ląstelių linijos kilmė? Kokia yra 4T1 ląstelių linijos morfologija?
- 4T1 yra krūties naviko ląstelių linija, kilusi iš pieno liaukos naviko, kuris savaime atsirado BALB/c veislės pelėms. Šios labai invazinės ir naviką sukeliančios ląstelės savo augimu ir metastazavimu labai primena žmogaus krūties vėžio elgseną. Konkrečiai, 4T1 naviko modelis tiria trigubai neigiamą krūties vėžį (TNBC).
- 4T1 ląstelės yra adhezyvinės ir turi epitelinių ląstelių morfologiją.
4T1 ir EMT-6 ląstelių linijos
4T1 ir EMT-6 yra neimunogeniniai pelių ląstelių modeliai, skirti trigubo neigiamo krūties vėžio tyrimams. Šiuo atveju 4T1 yra agresyvesnės ir invazinesnės naviko ląstelės nei EMT-6, kurios turi mažiau invazinių savybių [2].
4T1 ir 4T07 ląstelės
4T07 taip pat yra pelių vėžio ląstelių linija. Pagrindinis skirtumas tarp 4T1 ir 4T07 ląstelių yra tas, kad 4T1 ląstelės gali palikti pirminę naviko vietą ir išplisti, suformuodamos matomas antrines metastazes, o 4T07 ląstelės, nepaisant to, kad palieka pirminę vietą, negali suformuoti matomų metastazių [3].
4T1 ląstelių linijos auginimo informacija
4T1 krūties vėžio ląstelių linija siūlo plačias mokslinių tyrimų galimybes biomedicinos srityje. Norėdami kultivuoti šias ląsteles, turėtumėte susipažinti su šiais pagrindiniais punktais: kas yra 4T1 ląstelių dvigubėjimo laikas? Kaip kultivuojamos 4T1 ląstelės? Koks yra 4T1 ląstelių sėjimo tankis?
Pagrindiniai 4T1 ląstelių auginimo aspektai
Padvigubėjimo laikas:
Vidutinis 4T1 krūties vėžio ląstelių populiacijos dvigubėjimo laikas yra 14 valandų.
Adhezyvinės ar suspensinės:
4T1 yra adhezyvinė ląstelių linija.
Subkultivavimo santykis:
4T1 trigubo neigiamo krūties vėžio ląstelių linijai rekomenduojamas padalijimo santykis 1:6 ir 1:8. Padalijimui ląstelės nuplaunamos PBS ir inkubuojamos su Accutase fermentu 8–10 minučių. Atsiskyrusios ląstelės surenkamos centrifugavimo būdu ir resuspenduojamos šviežioje terpėje. Resuspenduotos ląstelės supilamos į naują kolbą augimui.
Auginimo terpė:
4T1 ląstelėms kultivuoti naudojama RPMI 1640 terpė. Idealiam ląstelių augimui užtikrinti į kultūrinę terpę įdedama 10 % veršelių serumo (FBS), 2,0 g/l NaHCO3 ir 2,1 mM stabilaus glutamino.
Auginimo sąlygos:
4T1 naviko ląstelės laikomos 37 °C drėgname inkubatoriuje su 5 % CO2 tiekimu.
Laikymas:
4T1 ląstelės turi būti laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje, t. y. elektrinėje šaldymo kameroje arba skysto azoto garų fazėje, siekiant išlaikyti ląstelių gyvybingumą.
Užšaldymo procesas ir terpė:
4T1 ląstelių linijai rekomenduojama naudoti CM-1 arba CM-ACF. Rekomenduojamas lėtas užšaldymo metodas, nes jis apsaugo ląstelių gyvybingumą, leidžiant temperatūrai palaipsniui kristi 1 °C.
Atšildymo procesas:
Užšaldytų ląstelių buteliukas laikomas 37 °C vandens vonioje keletą sekundžių, kol ląstelės atšyla ir lieka tik nedidelis ledo gabalėlis. Šios ląstelės resuspenduojamos šviežioje terpėje ir supilamos į kolbą kultivavimui. Po 24 valandų inkubacijos terpė pakeičiama, kad būtų pašalinti užšaldymo terpės komponentai.
Biologinio saugumo lygis:
4T1 krūties vėžio ląstelių kultūrai rekomenduojama 1 biologinio saugumo lygio laboratorija.
T1 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
Šioje straipsnio dalyje bus aptariami 4T1 metastazės modelio privalumai ir trūkumai.
Privalumai
Pagrindiniai 4T1 ląstelių linijos privalumai yra šie:
- Tumorigeniškumas:
4T1 yra labai tumorigeninė ląstelių linija. Šios ląstelės, įšvirkštos pelėms, gali suformuoti 4T1 singeninį pelių modelį krūties vėžio tyrimams. Todėl 4T1 modelis idealiai tinka naviko vystymosi, augimo ir metastazių tyrimams. Be to, jis naudingas vaistų atrankai ir vertinimui.
- In vitro metastazavimo modelis:
4T1 modelis turi natūralų polinkį į metastazes, todėl mokslininkai gali veiksmingai tirti pagrindinius mechanizmus ir procesus, susijusius su metastazių plitimu. Be to, 4T1 ląstelės yra atsparios 6-tioguaninui. Tai padeda veiksmingai aptikti mikrometastazines ląsteles su didesniu tikslumu, palyginti su kitais modeliais, nes nereikia sverti tikslinių organų ir skaičiuoti mazgelių.
Trūkumai
Su 4T1 ląstelių linija susijęs trūkumas yra:
- Agresyvumas/greitas augimo tempas:
4T1 ląstelių linija yra labai agresyvi trigubai neigiama krūties vėžio ląstelių linija. Dėl greito augimo tempo šios ląstelių linijos naudojimas ilgalaikiuose eksperimentuose ir eksperimentinių kintamųjų kontrolė tampa sudėtinga.
Įsigykite 4T1 ląstelių liniją: aukštos kokybės krūties vėžio modelis
T1 ląstelių linija: pritaikymas vėžio tyrimuose
Pelės modelio ląstelių linija 4T1 yra vertinga tyrimo priemonė vėžio biologijai tirti ir naujiems gydymo būdams vertinti. Pagrindiniai 4T1 ląstelių pritaikymo atvejai išvardyti čia:
Vėžio biologija
4T1 ląstelių linija plačiai naudojama vėžio vystymosi ir augimo tyrimams. Tai idealus in vitro modelis, skirtas tirti ir nagrinėti įvairius ląstelių ir molekulių mechanizmus, susijusius su naviko progresavimu ir metastazavimu. Be to, ji gali atskleisti ląstelių signalizacijos kelių, mikroaplinkos ir genų ekspresijos vaidmenį šiuose procesuose. 2019 m. atliktuose tyrimuose 4T1 ląstelės buvo naudojamos siekiant atrasti vėžio ląstelių invazijos ir migracijos varomąsias jėgas. Rezultatai parodė, kad šiuose procesuose dalyvauja STAT3, MMP2 ir MMP9 genai, o šių genų slopinimas gali žymiai apriboti vėžio ląstelių migraciją ir invaziją [4]. Panašūs tyrimai taip pat nurodė keletą kitų signalizacijos kelių, susijusių su naviko vystymusi ir metastazavimu.
Be to, 4T1 modelis yra labai svarbus siekiant suprasti krūties vėžio mikroaplinką, įskaitant imuninių ląstelių infiltraciją ir pirminio naviko augimą. Tyrimai, skirti 4T1 naviko mikroaplinkai, suteikė svarbių įžvalgų apie imuninių ląstelių ir citokinų, pvz., CXCL13 ekspresijos, vaidmenį naviko progresavime. Šis modelis taip pat padeda tirti metastazines nišas ir naviko metastazes, ypač vėlyvosios stadijos krūties vėžio atveju, kai paplitusi pieno liaukos karcinoma.
Vėžio terapijos tyrimai
4T1 ląstelių linija plačiai taikoma vėžio terapijos tyrimuose naujų gydymo būdų atrankai ir vertinimui. Viename tyrime buvo tiriamas žalios spalvos sintetinių geležies nanodalelių iš rozmarino ekstrakto (Rosemary-FeNPs) ir gryno rozmarino ekstrakto citotoksinis potencialas 4T1 ląstelių linijoje. Tyrimo rezultatai parodė, kad Rosemary-FeNPs yra perspektyvesnės nei grynas ekstraktas [5]. Panašiai, 2021 m. atliktame tyrime buvo tiriamas imbiero ekstrakto priešvėžinis potencialas 4T1 krūties vėžio ląstelėse ir 4T1 pelių modelyje [6].
Be natūralių ekstraktų, 4T1 ląstelių linija naudojama tradicinių chemoterapinių vaistų veiksmingumui įvertinti. Pavyzdžiui, tyrimai, kuriuose cisplatinas buvo derinamas su kitomis terapijomis, parodė padidėjusį naviko ląstelių žuvimą ir sumažėjusį naviko progresavimą 4T1 modelyje. Į 4T1 ląsteles įvedus jonvabalių liuciferazę, tapo įmanoma realiuoju laiku stebėti naviko augimą ir metastazavimo fenotipą, todėl lengviau įvertinti įvairių gydymo būdų poveikį.
Be to, 4T1 ląstelių linijos atsparumas 6-tioguaninui palengvino tyrimus dėl mikrometastazinių ląstelių, pagerindamas metastazių aptikimą ir analizę. Ši ląstelių linija taip pat atlieka lemiamą vaidmenį tiriant priešvėžinį imunitetą ir imunoterapijos poveikį, ypač ortotopinių pelių modelių kontekste, kur mokslininkai gali tiksliai imituoti žmogaus vėžį.
Apskritai, 4T1 ląstelių linija išlieka nepakeičiama priemonė onkologijos tyrimuose, pradedant vėžio biologijos pagrindinių mechanizmų supratimu ir baigiant naujų terapinių strategijų kūrimu bei bandymu.
4T1 ląstelės: mokslinių tyrimų publikacijos
Šioje straipsnio dalyje bus aptarti keli įdomūs ir dažniausiai cituojami leidiniai apie 4T1 ląsteles.
Šis straipsnis buvo paskelbtas 2018 m. žurnale „Journal of Photochemistry and Photobiology“. Tyrime buvo teigiama, kad iš Madhuca longifolia sintezuotos sidabro nanodalelės daro antiproliferacinį poveikį 4T1 naviko ląstelėms per ląstelių sienelių irimą ir ROS susidarymą.
Verbaskosido citotoksiškumas ir apoptozės poveikis krūties vėžio 4T1 ląstelių linijai
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „BMC Pharmacology and Toxicology“ (2021 m.), teigiama, kad natūralus junginys verbaskosidas sukėlė apoptozinį poveikį 4T1 krūties vėžio ląstelėse per TLR4 signalizaciją.
Eupatorinas slopino naviko progresavimą ir stiprino imunitetą 4T1 pelių krūties vėžio modelyje
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Integrative Cancer Therapies“ 2020 m. Šiame tyrime buvo naudojamos 4T1 ląstelės, siekiant sukurti 4T1 singeninį pelių modelį, ir naudojant jį buvo tiriamas eupatorino priešvėžinis potencialas. Eupatorinas sulėtino naviko vystymąsi 4T1 pelių modelyje.
Šiame tyrime, paskelbtame žurnale „Iranian Journal of Pharmaceutical Research“ (2018 m.), buvo iškelta hipotezė, kad vaistinė žolė Viola odorata turi potencialų citotoksinį poveikį 4T1 ląstelėms.
Šiame tyrime teigiama, kad docetakselio prisotintos kietosios lipidinės nanodalelės (DTX-prisotintos SLN) gali būti perspektyvus vaistas krūties vėžiui gydyti ir metastazėms užkirsti kelią, nes jos riboja 4T1 ląstelių augimą ir metastazes plaučiuose.
Ištekliai apie 4T1 ląstelių liniją: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
Toliau pateikiami keli ištekliai apie 4T1 ląsteles:
- 4T1 transfekcijos pamoka: Šis vaizdo įrašas yra žingsnis po žingsnio vadovas, kaip atlikti 4T1 ląstelių linijos transfekciją.
- Ląstelių linijos subkultūravimas: šiame vaizdo įraše paaiškinamas adhezyvinių ląstelių linijų subkultūravimo protokolas.
Šioje nuorodoje pateikiamas 4T1 ląstelių kultivavimo protokolas:
- 4T1 ląstelių linija: Šioje svetainės nuorodoje pateikiama visa naudinga informacija apie 4T1 kultūrų tvarkymą. Joje yra informacija apie kultūrinę terpę, kriokonservuotų kultūrų ir besidauginančių kultūrų tvarkymo protokolai.
Dažniausiai užduodami klausimai apie 4T1 ląstelių liniją
Tinklaraštyje „4T1“ pateikiama informacija, naujausi tyrimų duomenys ir eksperimentinės metodikos, susijusios su 4T1 pieno liaukos karcinomos ląstelių linija, kuri dažnai naudojama krūties vėžio augimo ir metastazių tyrimuose.
Pieno liaukos karcinomos ląstelių linija, įskaitant 4T1 modelį, yra nepakeičiama tiriant naviko augimą ir metastazavimą, taip pat imuninių ląstelių įsiskverbimą į krūties vėžio mikroaplinką.
CXCL13 ekspresija yra itin svarbi krūties vėžio tyrimuose, nes ji susijusi su imuninių ląstelių įsiskverbimu ir metastazinių nišų susidarymu, o tai leidžia geriau suprasti naviko progresavimą ir metastazavimą.
Liaukų naviko modelis, pavyzdžiui, 4T1 modelis, naudojamas vėlyvosios stadijos krūties vėžiui ir krūties karcinomos plitimui imituoti, padėdamas mokslininkams suprasti ligos eigą ir galimus gydymo būdus.
Pirminio naviko augimas yra lemiamas veiksnys vėžio metastazių tyrimuose, sudarantis pagrindą tyrimams, kaip navikai plinta į kitus organus, pavyzdžiui, pelėms taikant intraduktalinį modelį.
Pelių 4T1 krūties vėžio modelis naudojamas priešvėžiniam imunitetui, kombinuotam gydymui su cisplatinu ir naviko ląstelių žūčiai tirti, suteikiant išsamų vaizdą apie krūties vėžio gydymo veiksmingumą.
Ortotopiniai pelių modeliai, įskaitant 4T1 modelį, yra nepaprastai svarbūs tiriant naviko mikroaplinką, imuninį atsaką ir metastazes sąlygomis, kurios labai primena žmogaus krūties vėžį.
Vaizduojamasis 4T1 modelis leidžia mokslininkams realiuoju laiku stebėti naviko augimą ir metastazių plitimą, o tai palengvina tyrimus, susijusius su kaulų metastazėmis, 4T1 navikų tūriu ir tokių gydymo būdų kaip cisplatinas veiksmingumu.
Vėžio imunoterapija veikia metastazių nišas, stiprindama imuninės sistemos gebėjimą kovoti su vėžio ląstelėmis; dažnai ji taikoma kartu su kitais gydymo būdais, pavyzdžiui, cisplatinu, siekiant padidinti bendrą gydymo veiksmingumą.
„Firefly“ liuciferazė naudojama įterpiant ją į 4T1 ląsteles, siekiant stebėti naviko augimą ir metastazavimo fenotipą; tai suteikia mokslininkams galingą priemonę vėžio progresavimo ir terapinių intervencijų tyrimams.
Literatūra
- Pulaski, B.A. ir S. Ostrand-Rosenberg, Pelės 4T1 krūties naviko modelis. Curr Protoc Immunol, 2001. 20 skyrius: p. 20.2.
- Maxwell, K.G., Krūties vėžio ląstelių imunomoduliacija visos naviko vakcinacijos tikslais. 2016.
- Walker, I. ir kt., Krūties navikai sukelia centrinę proinflamacinių citokinų ekspresiją, bet ne elgesio sutrikimus Balb/C pelėms. Scientific Reports, 2017. 7(1): p. 1-13.
- Li, Y., et al., Stat3 signalinio kelio slopinimas natūraliu produktu pektolinarigeninu silpnina krūties vėžio metastazes. „Frontiers in Pharmacology“, 2019. 10: p. 1195.
- Farshchi, H.K. ir kt., Žalioji geležies nanodalelių sintezė naudojant rozmarino ekstraktą ir citotoksiškumo poveikio vertinimas vėžio ląstelių linijose. Biocatalysis and agricultural biotechnology, 2018. 16: p. 54–62.
- Gholizadeh, A.P. ir kt., Imbiero ekstrakto poveikis 4T1 krūties vėžio ląstelių linijai Balb/c pelėse. Clinical Cancer Drugs, 2021. 8(1): p. 43-49.