3T3-L1 ląstelių linija: raktas į nutukimo supratimą
3T3-L1 ląstelių linija, gauta iš pelių preadipocitų, plačiai naudojama tyrimuose, kuriuose nagrinėjami pagrindiniai ląsteliniai mechanizmai, susiję su nutukimu, cukriniu diabetu ir kitomis susijusiomis sveikatos problemomis. Be to, 3T3-L1 ląstelės yra labai svarbios tyrinėjant sudėtingus subląstelinio lygmens procesus, kurie skatina adipogenezę – procesą, kurio metu preadipocitai virsta subrendusiais adipocitais.
- Auginimo terpė
- DMEM (Dulbecco modifikuota Eagle terpė) naudojama optimaliam 3T3-L1 ląstelių augimui. Ši terpė paprastai papildoma 4,0 mM L-glutaminu, 3,7 g/l NaHCO3, 4,5 g/l gliukozės ir 10 % veršelių serumu.
- Padvigubėjimo laikas
- Apytikslis 3T3-L1 ląstelių populiacijos dvigubėjimo laikas yra 28 valandos.
- Augimo tipas
- 3T3-L1 yra adhezyvinė ląstelių linija.
- Biologinio saugumo lygis
- BSL-1
- Galima įsigyti iš
- Cytion — Užsakykite 3T3-L1
- 3T3-L1 ląstelių linijos istorija ir kilmė
- T3-L1 adipocitai: dažnai užduodami klausimai apie jų vaidmenį riebalinio audinio biologijoje ir metabolizmo tyrimuose
- Nuorodos
- 3T3-L1 ląstelių kultivavimas
- 3T3-L1 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
- Privalumai
- Trūkumai
- 3T3-L1 ląstelių taikymas
- Moksliniai straipsniai apie 3T3-L1 ląsteles
- Ištekliai, susiję su 3T3-L1 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
- Dažnai užduodami klausimai
3T3-L1 ląstelių linijos istorija ir kilmė
Šiame skyriuje gilinamasi į esminius 3T3-L1 ląstelių linijos aspektus, pvz., jos pobūdį, 3T3-L1 adipocitų dydį ir kilmę, kurie yra labai svarbūs tyrėjams, pradedantiems dirbti su šia ląstelių linija.
- Kilusi iš pelių fibroblastų ląstelių, 3T3-L1 linija buvo subklonuota iš Šveicarijos albinų pelių 3T3 ląstelių, atrinktų dėl jų gebėjimo kaupti lipidus. Pirminės 3T3 ląstelės buvo gautos iš pelių embrionų.
- Iš pradžių 3T3-L1 ląstelės pasižymi fibroblastų tipo struktūra, tačiau tam tikromis sąlygomis jos diferencijuojasi ir įgyja adipocitų savybių.
- 3T3-L1 adipocitų dydis skiriasi skirtingose diferenciacijos stadijose: nediferencijuotų ląstelių vidutinis skersmuo paprastai yra 15,4 μm, o po diferenciacijos 7-ąją ir 14-ąją dieną po diferenciacijos vidutinis skersmuo yra atitinkamai apie 18,8 μm ir 20,3 μm [1].
- 3T3-L1 ląstelėms būdingas nestabilus kariotipas, chromosomų skaičius yra 2n = 40.
3T3-L1 ląstelių auginimas
3T3-L1 ląstelės plačiai kultivuojamos mokslinių tyrimų laboratorijose. Šiame skyriuje pateikta informacija apie kultivavimą gali padėti jums veiksmingai tvarkyti ir prižiūrėti 3T3-L1 kultūras. Čia sužinosite: koks yra 3T3-L1 ląstelių dvigubėjimo laikas? Ar 3T3-L1 yra adhezyvinė, ar suspensinė ląstelių linija? Koks yra 3T3-L1 ląstelių sėjimo tankis?
Svarbiausi 3T3-L1 ląstelių kultivavimo aspektai
Populiacijos dvigubėjimo laikas:
Apytikslis 3T3-L1 ląstelių populiacijos dvigubėjimo laikas yra 28 valandos.
Adhezyvinė ar suspensinė:
3T3-L1 yra adhezyvinė ląstelių linija.
Sėjimo tankis:
3T3-L1 ląstelėms rekomenduojamas 3 x 103 ląstelių/cm2 sėjimo tankis. Ląstelės turėtų būti perkeliamos, kai jų tankis pasiekia 6 x 104 ląstelių/cm2 ir konfluencija yra 70–80 %. Sėjimui ląstelės nuplaunamos 1 x PBS, atskiriamos naudojant Accutase tirpalą, įpilama terpės ir centrifuguojamos. Atgautos ląstelės resuspenduojamos šviežioje terpėje ir išpilamos į naują kolbą.
Auginimo terpė:
DMEM (Dulbecco modifikuota Eagle terpė) naudojama optimaliam 3T3-L1 ląstelių augimui. Ši terpė paprastai papildoma 4,0 mM L-glutaminu, 3,7 g/l NaHCO3, 4,5 g/l gliukozės ir 10 % veršelių serumu.
Auginimo sąlygos:
3T3-L1 ląstelių kultūros laikomos drėgname inkubatoriuje 37 °C temperatūroje ir su 5 % CO2 tiekimu.
Laikymas:
3T3-L1 ląstelės laikomos žemesnėje nei -150 °C temperatūroje elektrinėje šaldymo kameroje arba skysto azoto garų fazėje.
Užšaldymo procesas ir terpė:
3T3-L1 adipocitų užšaldymui taikant lėto užšaldymo metodą naudojamos CM-1 arba CM-ACF terpės. Šis metodas leidžia ląstelių temperatūrai nukristi tik 1 °C ir apsaugo jų gyvybingumą.
Atšildymo procesas:
Užšaldytos 3T3-L1 ląstelės greitai atšildomos 37 °C temperatūros vandens vonioje. Atšildytos ląstelės nedelsiant resuspenduojamos kultūrinėje terpėje ir gali būti tiesiogiai perpilamos į kolbą auginimui. Priešingai, ląstelės gali būti centrifuguojamos, kad būtų pašalinta sena užšaldymo terpė, resuspenduojamos šviežioje terpėje ir kultivuojamos.
Biologinio saugumo lygis:
3T3-L1 pelių ląstelių linijai rekomenduojamos 1 biologinio saugumo lygio laboratorijos sąlygos.
3T3-L1 ląstelių linija: privalumai ir trūkumai
Su šia fibroblastų ląstelių linija susiję daug privalumų ir trūkumų. Čia aptariami keli svarbūs 3T3-L1 ląstelių linijos privalumai ir trūkumai.
Privalumai
- Lengva prižiūrėti: 3T3-L1 ląsteles lengva auginti laboratorijose, todėl jos yra patogios atliekant įvairius su ląstelėmis susijusius eksperimentus.
- Maža kaina: 3T3-L1 ląstelių linija yra pigesnė nei šviežiai izoliuotos adipocitų ląstelės, todėl tai yra ekonomiška alternatyva diferencijavimo ir kitų ląstelių procesų tyrimams.
- Diferenciacijos gebėjimas: Pelės fibroblastų 3T3-L1 ląstelės turi gebėjimą diferencijuotis. Jos gali įgyti adipocitų fenotipą ir kitas charakteristines savybes, kai yra veikiamos specifinių stimulių.
Apribojimai
- Fiziologinio aktualumo stoka: iš pelių gautos 3T3-L1 adipocitinės ląstelės neturi fiziologinio aktualumo žmogaus adipocitams ir riebaliniam audiniui. Jos nevisiškai atspindi riebalinio audinio heterogeniškumą ir sudėtingumą in vivo, todėl riboja eksperimentinių rezultatų tiesioginį pritaikomumą žmonėms.
3T3-L1 ląstelių pritaikymas
3T3-L1 adipocitų diferenciacija
3T3-L1 ląstelių linija dažniausiai naudojama riebalinių ląstelių biologijai, riebalinių ląstelių diferenciacijai ir susijusiems ląstelinėms bei molekulinėms mechanizmams tirti. 3T3-L1 ląstelių diferenciacija į riebalines ląsteles labai panaši į riebalinių ląstelių diferenciacijos kelią in vivo. Riebaliniame audinyje stromos kraujagyslių frakcijoje esančios pirmtakų ląstelės gali diferencijuotis į subrendusius adipocitus, reaguodamos į įvairius fiziologinius signalus, įskaitant mitybos būklę ir hormoninius signalus. 3T3-L1 modelis leidžia išsamiai tirti adipocitų pirmtakų diferenciacijos kelius, suteikdamas įžvalgų apie molekulinius mechanizmus, reguliuojančius adipogenezę ir jos reguliavimą išorinių veiksnių.
Diferenciacijos procesą galima indukuoti kultūroje, veikiant konfluentines 3T3-L1 preadipocitus specifiniu induktorių kokteiliu, paprastai sudarytu iš insulino, deksametazono ir izobutilmetilksantino (IBMX). Indukcija sukelia seriją transkripcinių ir ląstelių procesų, kurie veda prie adipocitų fenotipo įgijimo, kuriam būdingas lipidų lašelių kaupimasis, jautrumas insulinui ir adipocitams būdingų baltymų, tokių kaip peroksisomų proliferatorių aktyvuojamas receptorius gama (PPARγ) ir CCAAT/stipriklio jungiantis baltymas alfa (C/EBPα).
Subrendusių 3T3-L1 adipocitų funkcinės charakteristikos
Diferencijuoti 3T3-L1 adipocitai ekspresuoja adipogeninius genus ir pasižymi daugeliu brandžių adipocitų funkcinių savybių: gebėjimu kaupti ir mobilizuoti lipidus, išskirti adipokinus bei reaguoti į insuliną. Šios ląstelės įgyja gebėjimą sintezuoti ir skaidyti trigliceridus, taip atliekant vaidmenį energijos homeostazėje. 3T3-L1 adipocitų tyrimai taip pat atskleidė riebalinio audinio endokrininę funkciją, pabrėždami įvairių biologiškai aktyvių peptidų ir baltymų, kurie daro įtaką sisteminiam metabolizmui, sekreciją.
Diabeto ir nutukimo tyrimai
3T3-L1 preadipocitai naudojami kaip in vitro modelis diabeto ir nutukimo molekulinėms grandinėms tirti. Be to, tai gali padėti atrinkti vaistus ar kitus terapinius agentus šioms ligoms gydyti. Pavyzdžiui, 2022 m. atliktame tyrime, naudojant 3T3-L1 ląsteles, buvo tiriamas tradicinės žolės Ocimum forskolei Benth antidiabetinis poveikis. Mokslininkai įvertino gliukozės įsisavinimą, adipogeninius žymeklius ir transkripcijos žymeklius, t. y. DGAT1, CEBP/α ir PPARγ, apdorotose ląstelėse. Atitinkamai, viename tyrime buvo vertinamas augalinio junginio kaempferolio poveikis nutukimui, naudojant 3T3-L1 ląsteles. Mokslininkai nustatė, kad šis junginys pasižymi anti-nutukimo potencialu, slopindamas adipogenezę ir skatindamas lipolizę šiuose preadipocituose.
Moksliniai leidiniai, kuriuose aptariamos 3T3-L1 ląstelės
Čia pateikiami žymiausi ir dažniausiai cituojami naujausi leidiniai, kuriuose aptariamos 3T3-L1 ląstelės.
Apigetrinas slopina adipogenezę 3T3-L1 ląstelėse, mažindamas PPARγ ir CEBP-α
Šiame leidinyje „Lipids in Health and Disease“ (2018) teigiama, kad flavonoidas apigetrinas slopina adipogenezę, mažindamas transkripcijos faktorių, t. y. CEBP-α ir PPARγ, lygį 3T3-L1 ląstelėse.
Loganino rūgšties antiadipogeninis poveikis 3T3-L1 preadipocituose ir kiaušidžių pašalintoms pelėms
Šis tyrimas buvo paskelbtas žurnale „Molecules“ 2018 m. Jame teigiama, kad Gentiana lutea L. (GL) šaknies junginys loganinė rūgštis turi potencialą kovoti su nutukimu, nes ji daro adipogeninį poveikį 3T3-L1 ląstelėse.
Šiame straipsnyje, paskelbtame žurnale „Toxicology reports“ (2018 m.), buvo tiriamas dimetilsulfoksido potencialus poveikis 3T3-L1 ląstelių lipidų kiekiui, oksidaciniam stresui ir gyvybingumui dozės priklausomu būdu.
Adropino poveikis 3T3-L1 ląstelių ir žiurkių pirminių preadipocitų proliferacijai ir diferenciacijai
Šis straipsnis buvo paskelbtas žurnale „Molecular and Cellular Endocrinology“ 2019 m. Šiame tyrime mokslininkai įvertino galimą adropino baltymo poveikį 3T3-L1 ląstelių proliferacijai ir diferenciacijai bei žiurkių pirminiams adipocitams.
Šiame „Nutrition Research“ (2019 m.) tyrime buvo tiriamas sulfatuoto polisacharido, fukoidano, gauto iš Undaria pinnatifida, antidiabetinis potencialas. Rezultatai parodė, kad fucoidanas stimuliuoja gliukozės įsisavinimą, mažina bazinę lipolizę 3T-L1 preadipocituose ir daro šį poveikį.
Šis mokslinis straipsnis buvo paskelbtas 2019 m. žurnale „Food and Function“. Jame teigiama, kad natūralus produktas ginsenozidas Rg2 daro poveikį kovai su nutukimu, slopindamas adipogenezę 3T3-L1 ląstelėse ir nutukusiose pelėse, reguliuodamas AMPK kaskadą.
Ištekliai, susiję su 3T3-L1 ląstelių linija: protokolai, vaizdo įrašai ir kita
3T3-L1 yra žinoma pelių fibroblastų ląstelių linija. Yra daug išteklių apie šios ląstelių linijos kultivavimo, transfekcijos, užšaldymo ir atšildymo protokolus.
Čia paminėti keli iš jų.
- 3T3-L1 ląstelių diferenciacija: Ši nuoroda pateikia išsamų protokolą, kaip diferencijuoti 3T3-L1 preadipocitus.
- 3T3-L1 ląstelių transfekcija: Šis vaizdo įrašas yra mokomasis vadovas, skirtas 3T3-L1 ląstelių transfekcijai.
- 3T3 ląstelių perėjimas: Šiame vaizdo įraše paaiškinama 3T3 pelių fibroblastų ląstelių perėjimo procedūra.
Čia rasite keletą protokolų, skirtų 3T3-L1 ląstelių linijos kultivavimui.
- 3T3-L1 ląstelių kultivavimas: Šioje nuorodoje pateikiamas išsamus žingsnis po žingsnio vadovas, kaip dalyti 3T3-L1 ląsteles. Be to, čia pateikiamas ląstelių užšaldymo ir diferenciacijos protokolas.
- 3T3-L1 ląstelių kultūra ir diferenciacija: Šioje nuorodoje pateikiamas 3T3-L1 ląstelių kultivavimo ir diferenciacijos protokolas.
T3-L1 riebalinės ląstelės: dažniausiai užduodami klausimai apie jų vaidmenį riebalinio audinio biologijoje ir metabolizmo tyrimuose
3T3-L1 ląstelės, gautos iš pelių embrioninių fibroblastų, plačiai naudojamos kaip baltųjų adipocitų modelis. Jos yra labai svarbios tiriant adipocitų diferenciaciją, metabolines funkcijas ir adipocitų vaidmenį nutukimo ir atsparumo insulinui procesuose, nes gali tiksliai imituoti natūralaus riebalinio audinio elgesį.
Auginant 3T3-L1 ląsteles 3D agarozės kultūroje, sukuriama fiziologiškai tinkamesnė aplinka nei tradicinėse 2D kultūrose. Šis metodas leidžia mokslininkams stebėti adipocitus konfigūracijoje, kuri labiau primena natūralią jų būseną audiniuose, o tai gali turėti įtakos adipokinų sekrecijai ir ląstelių sąveikai.
Adipokinai yra labai svarbios adipocitų išskiriamos signalinės molekulės, darančios įtaką medžiagų apykaitos reguliavimui, uždegimui ir jautrumui insulinui. Šių adipokinų sekrecijos profilių tyrimas 3T3-L1 ląstelėse atskleidžia riebalinio audinio endokrinines funkcijas ir jų sisteminį poveikį medžiagų apykaitai.
Šis metodas naudojamas baltymų ir baltymų sąveikai 3T3-L1 ląstelėse tirti ir leidžia suprasti sudėtingus signalinius tinklus, susijusius su adipocitų diferenciacija, lipidų metabolizmu ir insulino signalų keliais.
Nuorodos
- Greita žmogaus riebalinio audinio kamieninių ląstelių ir 3T3-L1 diferenciacijos į adipocitus analizė naudojant Scepter™ 2.0 ląstelių skaitiklį. BioTechniques, 2012. 53(2): p. 109-111.
- Xu, J. ir kt., mikroRNR-16–5p skatina 3T3-L1 adipocitų diferenciaciją reguliuodama EPT1. Biocheminių ir biofizinių tyrimų komunikatai, 2019. 514(4): p. 1251–1256.
- Zhang, L., et al., Diferenciacijos ir lipidų metabolizmo skatinimas yra pagrindiniai DINP poveikio 3T3-L1 preadipocitams padariniai. Environmental pollution, 2019. 255: p. 113154.
- Khalil, H.E. ir kt., Ocimum forskolei Benth teigiamas poveikis diabeto, apoptozės ir adipogenezės biomarkeriams sergančiose diabetu žiurkėse ir 3T3-L1 fibroblastuose, pasitelkiant in silico metodą. Molecules, 2022. 27(9): p. 2800.
- Torres-Villarreal, D. ir kt., Kaempferolio poveikis kovai su nutukimu, slopinant adipogenezę ir didinant lipolizę 3T3-L1 ląstelėse. Fiziologijos ir biochemijos žurnalas, 2019. 75: p. 83-88.