Kultur Sel Mamalia: Dasar-dasar dan Teknik
Kultur sel mamalia adalah teknik dasar dalam penelitian biologi, yang memungkinkan para ilmuwan untuk mempelajari sel dalam lingkungan yang terkendali di luar organisme hidup. Proses ini melibatkan isolasi sel dari jaringan, memeliharanya dalam kondisi yang dikontrol dengan cermat, dan memperbanyaknya untuk berbagai tujuan eksperimental. Kultur sel mamalia sangat penting untuk memahami proses seluler, mekanisme penyakit, dan mengembangkan terapi baru, termasuk yang menggunakan garis sel abadi
Poin-poin penting:
- Sel dapat diisolasi dari jaringan menggunakan pencernaan enzimatik atau metode kultur eksplan
- Sel primer memiliki umur yang terbatas, sementara garis sel yang diawetkan dapat berkembang biak tanpa batas
- Kondisi kultur, termasuk komposisi media pertumbuhan, sangat penting untuk kelangsungan hidup dan proliferasi sel
- Sel dapat ditumbuhkan dalam suspensi atau sebagai kultur yang melekat, tergantung pada jenis dan kebutuhan penelitiannya
- Media kultur yang umum termasuk MEM, DMEM, dan RPMI 1640, masing-masing disesuaikan untuk jenis sel tertentu
- Kondisi pertumbuhan yang umum adalah suhu 37°C, 5% CO2, dan kelembaban relatif 95%
- Alternatif serum seperti human platelet lysate (hPL) semakin banyak digunakan untuk menghindari potensi masalah kontaminasi
Teknik Isolasi Sel
Proses pembuatan kultur sel dimulai dengan mengisolasi sel dari jaringan. Ada beberapa metode untuk mencapai hal ini, masing-masing sesuai dengan jenis jaringan dan tujuan penelitian yang berbeda. Untuk sampel darah, isolasi sel relatif mudah, dengan sel darah putih menjadi fokus utama untuk kultur karena kemampuan pertumbuhannya. Jaringan padat membutuhkan teknik isolasi yang lebih kompleks. Salah satu metode yang umum digunakan adalah pencernaan enzimatik, di mana enzim seperti kolagenase, tripsin, atau pronase digunakan untuk memecah matriks ekstraseluler, melepaskan sel-sel individual ke dalam suspensi. Sebagai alternatif, para peneliti dapat menggunakan metode kultur eksplan, di mana potongan-potongan kecil jaringan ditempatkan langsung ke dalam media pertumbuhan, yang memungkinkan sel bermigrasi dan berkembang biak. Pilihan di antara metode-metode ini sering kali bergantung pada jenis jaringan tertentu, populasi sel yang diinginkan, dan penggunaan eksperimental yang dimaksudkan. Penting untuk dicatat bahwa sel yang diisolasi langsung dari organisme disebut sel primer dan, dengan beberapa pengecualian seperti sel yang berasal dari tumor, biasanya memiliki umur yang terbatas dalam kultur sebelum mengalami penuaan
Produk Penting untuk Kultur Sel Mamalia
| Nama Produk | Nomor Produk | Kategori | Aplikasi |
|---|---|---|---|
| DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat | 820300a | Media Kultur | Media tujuan umum untuk berbagai jenis sel mamalia |
| DMEM: Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glukosa, w: 1,6 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natrium piruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 | 820400a | Media Kultur | Cocok untuk berbagai macam sel mamalia, terutama sel epitel |
| RPMI 1640, w: 2,1 mM Glutamin stabil, w: 2,0 g/L NaHCO3 | 820700a | Media Kultur | Umumnya digunakan untuk sel limfoid dan garis sel hibrida |
| Accutase | 830100 | Disosiasi Sel | Larutan pelepas sel yang lembut untuk sel yang melekat |
| Media Pembekuan CM-1 | 800150 | Kriopreservasi | Untuk pembekuan dan penyimpanan jangka panjang sel mamalia |
| Media pembekuan CM-ACF, bebas serum | 800650 | Kriopreservasi | Media bebas komponen hewan untuk pembekuan sel |
| PBS | 860015 | Larutan Penyangga | Untuk mencuci sel dan menjaga keseimbangan pH |
| Media Pertumbuhan Sel Endotel | 820731 | Media Khusus | Dioptimalkan untuk kultur sel endotel |
| Pengujian mikoplasma | 900159 | Kontrol Kualitas | Penting untuk mendeteksi kontaminasi mikoplasma dalam kultur |
| Otentikasi garis sel - Manusia | 900154 | Kontrol Kualitas | Memverifikasi identitas garis sel manusia |
Tabel ini mewakili pilihan produk penting untuk kultur sel mamalia. Untuk rangkaian lengkap produk kultur sel kami, termasuk media dan reagen khusus, silakan kunjungi halaman kategori Media dan Reagen.
- Alternatif Lembut untuk Tripsin
Accutase adalah solusi pemisahan sel yang merevolusi industri kultur sel. Ini adalah campuran enzim proteolitik dan kolagenolitik yang meniru aksi tripsin dan kolagenase. Tidak seperti tripsin, Accutase tidak mengandung komponen mamalia atau bakteri dan jauh lebih lembut pada sel, menjadikannya solusi ideal untuk pelepasan sel secara rutin dari peralatan plastik kultur jaringan standar dan peralatan plastik berlapis adhesi. Dalam posting blog ini, kami akan mengeksplorasi manfaat dan penggunaan Accutase dan bagaimana hal itu mengubah permainan dalam kultur sel.
Keuntungan dari Accutase
Accutase memiliki beberapa keunggulan dibandingkan larutan tripsin tradisional. Pertama, ini dapat digunakan setiap kali diperlukan pelepasan yang lembut dan efisien dari setiap garis sel yang melekat, menjadikannya pengganti langsung untuk tripsin. Kedua, Accutase bekerja sangat baik pada sel punca embrionik dan neuron, dan telah terbukti mempertahankan kelangsungan hidup sel-sel ini setelah dilewati. Ketiga, Accutase mempertahankan sebagian besar epitop untuk analisis flow cytometry selanjutnya, sehingga ideal untuk analisis penanda permukaan sel.
Selain itu, Accutase tidak perlu dinetralkan saat melewati sel yang melekat. Penambahan lebih banyak media setelah sel dibelah akan mengencerkan Accutase sehingga tidak lagi dapat melepaskan sel. Hal ini menghilangkan kebutuhan akan langkah inaktivasi dan menghemat waktu bagi teknisi kultur sel. Akhirnya, Accutase tidak perlu diakuisisi, dan botol stabil di lemari es selama 2 bulan.
Aplikasi Accutase
Accutase adalah pengganti langsung untuk larutan tripsin dan dapat digunakan untuk melewatkan garis sel. Selain itu, Accutase berkinerja baik saat melepaskan sel untuk analisis banyak penanda permukaan sel menggunakan flow cytometry dan untuk pemilahan sel. Aplikasi hilir lainnya dari perawatan Accutase termasuk analisis penanda permukaan sel, uji pertumbuhan virus, proliferasi sel, uji migrasi sel tumor, perjalanan sel rutin, peningkatan produksi (bioreaktor), dan sitometri aliran.
Komposisi Accutase
Accutase tidak mengandung komponen mamalia atau bakteri dan merupakan campuran enzim alami dengan aktivitas enzim proteolitik dan kolagenolitik. Ini diformulasikan pada konsentrasi yang jauh lebih rendah daripada tripsin dan kolagenase, membuatnya kurang beracun dan lebih lembut, tetapi sama efektifnya.
Efisiensi Accutase
Accutase telah terbukti efisien dalam melepaskan sel punca dan sel induk serta mempertahankan viabilitas sel yang tinggi dibandingkan dengan enzim yang berasal dari hewan seperti tripsin. 100% sel dipulihkan setelah 10 menit, dan tidak ada salahnya membiarkan sel dalam Accutase hingga 45 menit, berkat pencernaan otomatis Accutase.
Singkatnya
Kesimpulannya, Accutase adalah solusi ampuh yang mengubah permainan dalam kultur sel. Dengan sifatnya yang lembut, efisiensi, dan keserbagunaannya, Accutase adalah alternatif ideal untuk tripsin. Jika Anda mencari solusi yang andal dan efisien untuk pelepasan sel, Accutase adalah solusi untuk Anda.
Phosphate-buffered saline (PBS) adalah larutan penyangga yang banyak digunakan dalam penelitian biologi dan kimia. Larutan ini memainkan peran penting dalam menjaga keseimbangan pH dan osmolaritas selama berbagai prosedur eksperimental, termasuk pemrosesan jaringan dan kultur sel. Larutan PBS kami diformulasikan secara cermat dengan bahan-bahan dengan kemurnian tinggi untuk memastikan stabilitas dan keandalan dalam setiap percobaan. Osmolaritas dan konsentrasi ion PBS kami sangat mirip dengan tubuh manusia, membuatnya isotonik dan tidak beracun bagi sebagian besar sel.
Komposisi Larutan PBS Kami
Larutan PBS kami adalah campuran yang disesuaikan dengan pH dari buffer fosfat tingkat ultra murni dan larutan garam. Pada konsentrasi kerja 1X, larutan ini mengandung:
8000 mg/L Natrium klorida (NaCl)
200 mg/L Kalium klorida (KCl)
1150 mg/L Natrium fosfat dibasa anhidrat (Na2HPO4)
200 mg/L Kalium fosfat monobasa anhidrat (KH2PO4)
Komposisi ini memastikan pH dan keseimbangan ionik yang optimal, cocok untuk berbagai aplikasi biologis.
Aplikasi Solusi PBS Kami
Larutan PBS kami ideal untuk berbagai aplikasi dalam penelitian biologi. Sifatnya yang isotonik dan tidak beracun membuatnya cocok untuk pengenceran zat dan pembilasan wadah sel. Larutan PBS yang mengandung EDTA efektif untuk melepaskan sel yang melekat dan menggumpal. Namun, logam divalen seperti seng tidak boleh ditambahkan ke dalam PBS, karena dapat menyebabkan pengendapan. Dalam kasus seperti itu, buffer Good direkomendasikan. Selain itu, larutan PBS kami merupakan alternatif yang dapat diterima untuk media transpor virus untuk transpor dan penyimpanan virus RNA, termasuk SARS-CoV-2.
Kontrol Kualitas
Disaring dengan steril
Penyimpanan dan Umur Simpan
Simpan pada suhu +2°C hingga +25°C, terlindung dari cahaya.
Setelah dibuka, simpan pada suhu 2°C hingga 25°C dan gunakan dalam waktu 24 bulan.
Ketentuan Pengiriman
Suhu lingkungan
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C di tempat gelap. Hindari pembekuan dan pemanasan yang sering hingga +37°C, karena dapat mengurangi kualitas produk.
Jangan memanaskan media melebihi 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali seperti peralatan microwave.
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah yang diperlukan dan hangatkan ke suhu kamar sebelum digunakan.
Komposisi
Kategori
Komponen
Konsentrasi (mg/L)
Garam
Kalium klorida
200
Kalium fosfat monobasa anhidrat
200
Natrium klorida
8000
Natrium fosfat dibasa anhidrat anhidrat
1150
Metode analisis
CLS menawarkan pengujian jangka pendek dan jangka panjang untuk deteksi mikoplasma. Dalam pengujian jangka pendek, sampel diuji segera setelah tiba, sedangkan dalam pengujian jangka panjang, kultur sel dimulai dan sel diuji setelah 14 hari kultivasi bebas antibiotik. Pengujian mikoplasma dilakukan dengan menggunakan sistem deteksi dua titik dengan PlasmoTest ™
- Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) dan Certus QC
- mycoADVANCED detection kit (Certus).
Sampel
Untuk tes cepat, harap sediakan minimal 50 μl suspensi sel yang mengandung 50.000 sel. Suspensi sel dapat dikirim pada suhu kamar.
Untuk tes premium, harap sediakan minimal 1 juta sel dalam media pembekuan yang sesuai untuk memastikan kultur yang kuat dan sehat untuk kultivasi dan pengujian sel selanjutnya. Harap kirimkan sampel di atas es kering.
Silakan isi Formulir Sampel Pengujian Mycoplasma dan sertakan dengan pengiriman sampel Anda.
Uji Reporter Kolorimetri
Tes ini adalah tes kolorimetri berbasis sel. Dengan adanya mikoplasma, garis sel reporter menginduksi kaskade pensinyalan yang memicu perubahan warna pada medium dari merah menjadi biru. Pengujian dilakukan dalam pelat multi-sumur 96 sumur. Sinyal terdeteksi dalam spektrofotometer lempeng mikro pada 620-655 nm. Semua spesies mikoplasma dan acholeplasma, tetapi juga kontaminan lain dalam kultur sel seperti bakteri, terdeteksi.
Amplifikasi isotermal
Amplifikasi isotermal adalah tes yang cepat dan andal berdasarkan amplifikasi isotermal DNA spesifik mikoplasma yang dikombinasikan dengan deteksi waktu nyata menggunakan pewarna penghubung DNA. Pengujian ini mampu mendeteksi enam spesies paling umum yang menyumbang> 95% kontaminasi: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis dan A.laidlawii. Karena homologi sekuens, spesies mikoplasma lainnya juga akan terdeteksi (M.pneumoniae, M.gallisepticum dan M.synoviae). Untuk mengidentifikasi apakah sampel tersebut positif atau negatif Mycoplasma, suhu leleh (Tm) dipelajari.
Kesimpulan: Peran Penting Kultur Sel Mamalia dalam Penelitian Modern
Kultur sel mamalia telah merevolusi penelitian biologi dan medis, memberikan para ilmuwan alat yang ampuh untuk mempelajari proses seluler yang kompleks, mekanisme penyakit, dan intervensi terapeutik yang potensial. Mulai dari isolasi sel primer hingga pengembangan garis sel yang diawetkan, teknik ini telah menjadi bagian tak terpisahkan dari perangkat ilmiah modern
Perjalanan kultur sel mamalia dimulai dengan teknik isolasi yang cermat, berkembang melalui pemeliharaan sel yang cermat dalam media khusus, dan berujung pada beragam aplikasi di berbagai bidang studi. Baik itu penelitian kanker, penemuan obat, atau biologi seluler dasar, kemampuan untuk menumbuhkan dan memanipulasi sel mamalia secara in vitro telah membuka jalan yang belum pernah ada sebelumnya untuk eksplorasi ilmiah
Kunci keberhasilan kultur sel mamalia adalah kondisi yang dikontrol dengan cermat untuk memelihara sel. Dari komposisi media pertumbuhan hingga parameter lingkungan yang tepat dalam inkubator, setiap aspek dioptimalkan untuk meniru kondisi alami sel semirip mungkin. Perhatian terhadap detail ini memastikan keandalan dan reproduktifitas eksperimen, yang merupakan landasan praktik ilmiah yang baik
Pengembangan garis sel yang diabadikan, seperti sel HeLa yang banyak digunakan, telah memperluas kemungkinan kultur sel. Garis sel ini menyediakan model seluler yang konsisten dan tersedia yang telah mempercepat penelitian di berbagai disiplin ilmu
Ketika kita melihat ke masa depan, kultur sel mamalia terus berkembang. Kemajuan dalam teknik kultur 3D, pengembangan organoid, dan penggunaan media yang ditentukan secara kimiawi mendorong batas-batas dari apa yang mungkin dilakukan dalam kultur sel. Perkembangan ini menjanjikan untuk membawa model in vitro lebih dekat dengan kompleksitas sistem in vivo, yang berpotensi merevolusi penemuan obat, pengobatan yang dipersonalisasi, dan pemahaman kita tentang biologi manusia
Sebagai kesimpulan, kultur sel mamalia tetap menjadi teknik yang dinamis dan penting dalam penelitian ilmu hayati. Penyempurnaan dan penerapannya yang berkelanjutan tidak diragukan lagi akan memainkan peran penting dalam menjawab beberapa pertanyaan paling mendesak dalam biologi dan kedokteran, mendorong kemajuan ilmiah di tahun-tahun mendatang