Volume: 100 ml
Penyimpanan: ≤ –15°C
Sterilitas: Disaring steril
Larutan Glutamin Stabil (L-Alanyl-L-Glutamin, 200 mM) adalah bentuk dipeptida yang sangat stabil dari L-glutamin, dirancang sebagai pengganti langsung untuk L-glutamin konvensional dalam media kultur sel. L-glutamin adalah asam amino esensial dan sumber energi utama bagi sel yang dikultur, memainkan peran kritis dalam pertumbuhan sel, metabolisme, dan sintesis protein.
Aplikasi dan Manfaat
Dalam media cair standar, L-glutamine terdegradasi relatif cepat pada 37°C, menyebabkan pembentukan produk samping beracun seperti ion amonium yang dapat merugikan viabilitas sel dan hasil eksperimen. Glutamine stabil mengatasi keterbatasan ini dengan menyediakan bentuk dipeptida yang tidak terdegradasi dan tetap utuh dalam kondisi kultur.
Sel memecah ikatan dipeptida secara enzimatis untuk melepaskan L-glutamine sesuai kebutuhan, memastikan pasokan segar yang berkelanjutan sambil mencegah penumpukan produk limbah berbahaya. Hal ini membuat solusi ini sangat menguntungkan untuk kultur sel jangka panjang dan sistem pertumbuhan kepadatan tinggi.
Formulasi dan Penggunaan
Larutan L-Alanyl-L-Glutamine disiapkan dalam air berkualitas kultur sel dengan konsentrasi 200 mM dan disaring steril untuk aplikasi yang sensitif terhadap kontaminasi. Larutan ini dapat dilarutkan langsung ke dalam media lengkap sesuai kebutuhan eksperimental. Simpan pada suhu ≤ –15°C dan hindari siklus pembekuan-pencairan berulang untuk menjaga stabilitas produk.
Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 100 ml
Penyimpanan: +2°C hingga +8°C
Sterilitas: Disaring steril
Larutan Buffer HEPES (1 M), yang juga dikenal sebagai N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid, adalah agen penyangga organik zwitterionik yang banyak digunakan dalam media kultur sel. Larutan ini dirancang untuk menjaga kondisi pH yang stabil dalam rentang fisiologis 6,7 hingga 8,6, mendukung fungsi sel yang optimal selama aplikasi in vitro.
Aplikasi dan Manfaat
HEPES menyediakan kapasitas penyangga yang andal dalam sistem kultur sel, terutama saat sel ditangani di luar inkubator CO₂. Penambahan 10–25 mM HEPES ke dalam media kultur memberikan stabilitas pH yang lebih baik selama periode manipulasi yang panjang, membantu mempertahankan kondisi eksperimental yang konsisten.
Buffer ini tidak dapat menembus membran, memiliki gangguan minimal terhadap reaksi biokimia, dan menunjukkan stabilitas kimia dan enzim yang kuat. Sifat-sifat ini membuatnya cocok untuk berbagai aplikasi kultur sel dan biokimia.
Formulasi dan Penggunaan
Larutan ini disediakan sebagai konsentrat 1 M yang disiapkan dalam air berkualitas kultur sel dan disaring steril untuk penggunaan di lingkungan yang sensitif terhadap kontaminasi. Larutan ini dapat dilarutkan hingga konsentrasi kerja yang diinginkan sesuai dengan persyaratan aplikasi. Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C dan tangani dalam kondisi aseptik untuk menjaga integritas produk.
Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 50 ml
Penyimpanan: +2°C hingga +8°C
Sterilitas: Disterilkan dengan penyaringan
Larutan D-(+)-Glukosa (Larutan Dextrosa) adalah suplemen steril siap pakai yang mengandung gula alami D-(+)-glukosa, komponen utama metabolisme seluler. Glukosa terlibat dalam proses biologis esensial seperti produksi energi, glikosilasi, dan pembentukan glikan yang berkontribusi pada struktur dan fungsi seluler.
Aplikasi dan Manfaat
Larutan glukosa ini secara luas digunakan sebagai suplemen dalam media kultur sel dan dalam berbagai aplikasi biologi seluler dan molekuler. Sebagai sumber karbon dan energi utama, glukosa mendukung pertumbuhan sel, proliferasi, dan aktivitas metabolik. Perannya dalam jalur biosintesis juga menjadikannya kritis untuk mempertahankan fisiologi seluler normal dan konsistensi eksperimental.
Formulasi dan Penggunaan
Larutan ini disediakan dengan konsentrasi tinggi 250 g/L glukosa, memungkinkan pencairan fleksibel ke dalam media kultur sesuai kebutuhan eksperimental. Larutan ini disaring steril untuk memastikan kesesuaiannya untuk aplikasi yang sensitif terhadap kontaminasi. Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C dan tangani secara aseptik untuk menjaga kualitas dan stabilitas produk.
Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 10 ml
Penyimpanan: +2°C hingga +8°C
Sterilitas: Disaring steril
Larutan Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) (100x) adalah suplemen yang didefinisikan secara kimiawi yang dirancang untuk berbagai aplikasi kultur sel. Larutan ini paling sering digunakan sebagai aditif pada media kultur sel dasar untuk mendukung pertumbuhan sel dalam kondisi serum rendah atau bebas serum.
Aplikasi dan Manfaat
Suplemen ITS kami menyediakan komponen esensial yang diperlukan untuk kinerja optimal media bebas serum. Dengan menambahkan ITS ke media nutrisi konvensional, kebutuhan serum sapi janin (FBS) untuk pemeliharaan rutin banyak garis sel dapat dikurangi secara signifikan. Hal ini membantu meminimalkan variabilitas yang terkait dengan penggunaan serum sambil mempertahankan pertumbuhan dan viabilitas sel yang konsisten.
Insulin mendukung penyerapan seluler dan metabolisme nutrisi utama, transferrin memfasilitasi transportasi zat besi, dan selenium berkontribusi pada pertahanan antioksidan dan aktivitas enzimatik. Bersama-sama, komponen-komponen ini mendorong metabolisme sel yang seimbang dan meningkatkan reproduktifitas dalam sistem kultur yang terdefinisi.
Formulasi dan Penggunaan
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) disediakan sebagai larutan terkonsentrasi 100x dalam Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) tanpa fenol merah. Untuk aplikasi standar, encerkan dengan perbandingan 1:100 ke dalam media dasar yang sesuai untuk mencapai konsentrasi kerja yang direkomendasikan. Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C dan tangani dalam kondisi aseptik untuk menjaga stabilitas dan sterilitas produk.
Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 5 ml
Penyimpanan: +2°C hingga +8°C
Sterilitas: Disaring steril
Larutan Insulin Rekombinan Manusia adalah suplemen yang didefinisikan secara kimiawi yang umum digunakan untuk kultur sel mamalia, termasuk sel ovarium hamster Cina (CHO). Larutan berkualitas kultur sel ini mengandung insulin rekombinan manusia yang diekspresikan dalam Saccharomyces cerevisiae, memastikan kemurnian tinggi dan kinerja yang konsisten dalam aplikasi penelitian.
Aplikasi dan Manfaat
Insulin secara rutin ditambahkan ke media bebas serum dan yang didefinisikan secara kimiawi untuk mendorong pertumbuhan dan produktivitas sel. Sebagai hormon pengatur utama, insulin mendukung penyerapan, pemanfaatan, dan penyimpanan glukosa, asam amino, dan asam lemak oleh sel. Insulin juga menghambat pemecahan glikogen, protein, dan lipid, sehingga berkontribusi pada peningkatan viabilitas sel dan stabilitas metabolik dalam sistem kultur. Formulasi yang didefinisikan secara kimiawi mendukung reproduktifitas dan meminimalkan variabilitas dalam alur kerja kultur sel yang sensitif.
Sifat Biologis dan Penggunaan
Insulin adalah hormon polipeptida berantai ganda yang diproduksi secara alami oleh sel β pulau pankreas. Berat molekulnya sekitar 5.800 Da. Rantai α dan β dihubungkan oleh dua ikatan disulfida antar-rantai, dan rantai α mengandung satu ikatan disulfida intra-rantai. Untuk aplikasi kultur sel, larutan harus ditangani dalam kondisi aseptik dan disimpan pada suhu +2°C hingga +8°C untuk menjaga stabilitas dan kinerjanya.
Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 100 ml
Penyimpanan: +2°C hingga +8°C
Sterilitas: Disterilkan dengan penyaringan
Larutan Sodium Pyruvate (100 mM) adalah suplemen steril, siap pakai yang dirancang untuk menyediakan sumber energi tambahan yang mudah diakses untuk media kultur sel. Sodium pyruvate memainkan peran kunci dalam metabolisme energi seluler dan mendukung pertumbuhan sel-sel yang aktif secara metabolik dan berkembang biak dengan cepat, seperti sel tumor. Penambahan suplemen ini dapat meningkatkan viabilitas sel dan membantu menjaga stabilitas metabolik dalam sistem kultur.
Aplikasi dan Manfaat
Larutan ini secara luas digunakan dalam kultur sel rutin untuk memperkaya media dengan piruvat dan mempromosikan kondisi pertumbuhan optimal. Ia mendukung produksi ATP, mungkin membantu mengurangi stres oksidatif, dan berkontribusi pada peningkatan kinerja metabolik sel yang dikultur. Diproduksi dalam air berkualitas kultur sel dan disterilkan dengan penyaringan, produk ini memastikan kualitas konsisten dan reproduktifitas dalam alur kerja penelitian.
Penggunaan dan Kompatibilitas
Konsentrasi akhir yang direkomendasikan untuk sebagian besar aplikasi kultur sel adalah 1 mM natrium piruvat, dicapai dengan mengencerkan larutan stok 100 mM dengan perbandingan 1:100 ke dalam medium kultur lengkap. Solusi ini kompatibel dengan berbagai jenis medium dasar dan garis sel mamalia. Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C dan lindungi dari kontaminasi untuk menjaga stabilitas produk.
Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 100 ml Penyimpanan: ≤-15°C Kemandulan: Disaring dengan steril
Larutan Antibiotik / Antimikotik (100x ) adalah konsentrat steril dan siap pakai yang dirancang untuk mengurangi risiko kontaminasi mikroba dalam kultur sel dan aplikasi laboratorium terkait. Larutan 100x ini mengandung kombinasi penisilin, streptomisin, dan amfoterisin B yang telah teruji dengan baik
- memberikan aktivitas antimikroba spektrum luas terhadap bakteri Gram positif dan Gram negatif, ragi, dan jamur berserabut. Formulasi ini cocok untuk digunakan dalam kultur sel eukariotik, media bakteri, dan sistem yang sensitif terhadap kontaminasi lainnya, yang mendukung operasi laboratorium yang bersih dan konsisten.
Aplikasi dan Manfaat Dioptimalkan untuk protokol penelitian rutin, solusi ini banyak digunakan untuk menjaga kondisi aseptik dalam alur kerja kultur sel. Solusi ini menawarkan kinerja yang andal di lingkungan yang sensitif terhadap kontaminasi, membantu peneliti mengurangi risiko pertumbuhan mikroba yang berlebihan tanpa mengorbankan kesehatan sel atau kemampuan reproduksi eksperimental. Formulasi yang disaring steril menghilangkan kebutuhan akan langkah-langkah pelarutan tambahan, mendukung persiapan media yang efisien dan mengurangi variabilitas dalam prosedur laboratorium sehari-hari.
Penggunaan dan Kompatibilitas Untuk mencapai konsentrasi kerja standar, encerkan larutan 1:100 ke dalam media kultur lengkap Anda. Produk ini kompatibel dengan berbagai macam garis sel mamalia dan media basal. Dengan ketersediaan stok yang konsisten, para peneliti mendapat manfaat dari kontinuitas pasokan yang dapat diandalkan dan perencanaan logistik yang disederhanakan. Larutan harus disimpan pada suhu ≤ -15 ° C dan terlindung dari siklus pembekuan-pencairan berulang untuk menjaga stabilitas. Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
Volume: 100 ml Penyimpanan: +2°C hingga +8°C Kemandulan: Disaring dengan steril
MEM Asam Amino Non-Esensial (100x ) adalah suplemen steril yang dirancang untuk meningkatkan pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel dalam sistem kultur sel mamalia. Formulasinya sesuai dengan konsentrat 100x dari asam amino non-esensial yang ditemukan dalam Minimum Essential Medium (MEM) standar, memungkinkan suplementasi langsung media basal dengan persiapan minimal.
Aplikasi dan Manfaat Suplemen ini menyediakan kumpulan asam amino tambahan untuk sel yang berkembang biak dengan cepat atau untuk garis sel yang telah kehilangan kapasitas untuk mensintesis asam amino non-esensial secara de novo. Dengan mengurangi beban metabolisme biosintesis, ini mendukung peningkatan kinetika pertumbuhan, kelangsungan hidup yang lebih lama, dan konsistensi eksperimental yang lebih besar
- terutama dalam kultur yang peka terhadap nutrisi atau kultur dengan kepadatan tinggi.
Komposisi dan Penggunaan Solusinya meliputi glisin, L-alanin, L-asparagin, asam L-aspartat, asam L-glutamat, L-prolin, dan L-serin. Larutan ini kompatibel dengan MEM dan sebagian besar media standar lainnya. Untuk menggunakannya, encerkan 1:100 ke dalam media kultur akhir. Produk ini disaring secara steril dan siap digunakan tanpa langkah penanganan tambahan. Hanya untuk penggunaan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik atau terapeutik. Tidak untuk digunakan pada manusia atau hewan.
- Alternatif Lembut untuk Tripsin
Accutase adalah solusi pemisahan sel yang merevolusi industri kultur sel. Ini adalah campuran enzim proteolitik dan kolagenolitik yang meniru aksi tripsin dan kolagenase. Tidak seperti tripsin, Accutase tidak mengandung komponen mamalia atau bakteri dan jauh lebih lembut pada sel, menjadikannya solusi ideal untuk pelepasan sel secara rutin dari peralatan plastik kultur jaringan standar dan peralatan plastik berlapis adhesi. Dalam posting blog ini, kami akan mengeksplorasi manfaat dan penggunaan Accutase dan bagaimana hal itu mengubah permainan dalam kultur sel.
Keuntungan dari Accutase
Accutase memiliki beberapa keunggulan dibandingkan larutan tripsin tradisional. Pertama, ini dapat digunakan setiap kali diperlukan pelepasan yang lembut dan efisien dari setiap garis sel yang melekat, menjadikannya pengganti langsung untuk tripsin. Kedua, Accutase bekerja sangat baik pada sel punca embrionik dan neuron, dan telah terbukti mempertahankan kelangsungan hidup sel-sel ini setelah dilewati. Ketiga, Accutase mempertahankan sebagian besar epitop untuk analisis flow cytometry selanjutnya, sehingga ideal untuk analisis penanda permukaan sel.
Selain itu, Accutase tidak perlu dinetralkan saat melewati sel yang melekat. Penambahan lebih banyak media setelah sel dibelah akan mengencerkan Accutase sehingga tidak lagi dapat melepaskan sel. Hal ini menghilangkan kebutuhan akan langkah inaktivasi dan menghemat waktu bagi teknisi kultur sel. Akhirnya, Accutase tidak perlu diakuisisi, dan botol stabil di lemari es selama 2 bulan.
Aplikasi Accutase
Accutase adalah pengganti langsung untuk larutan tripsin dan dapat digunakan untuk melewatkan garis sel. Selain itu, Accutase berkinerja baik saat melepaskan sel untuk analisis banyak penanda permukaan sel menggunakan flow cytometry dan untuk pemilahan sel. Aplikasi hilir lainnya dari perawatan Accutase termasuk analisis penanda permukaan sel, uji pertumbuhan virus, proliferasi sel, uji migrasi sel tumor, perjalanan sel rutin, peningkatan produksi (bioreaktor), dan sitometri aliran.
Komposisi Accutase
Accutase tidak mengandung komponen mamalia atau bakteri dan merupakan campuran enzim alami dengan aktivitas enzim proteolitik dan kolagenolitik. Ini diformulasikan pada konsentrasi yang jauh lebih rendah daripada tripsin dan kolagenase, membuatnya kurang beracun dan lebih lembut, tetapi sama efektifnya.
Efisiensi Accutase
Accutase telah terbukti efisien dalam melepaskan sel punca dan sel induk serta mempertahankan viabilitas sel yang tinggi dibandingkan dengan enzim yang berasal dari hewan seperti tripsin. 100% sel dipulihkan setelah 10 menit, dan tidak ada salahnya membiarkan sel dalam Accutase hingga 45 menit, berkat pencernaan otomatis Accutase.
Singkatnya
Kesimpulannya, Accutase adalah solusi ampuh yang mengubah permainan dalam kultur sel. Dengan sifatnya yang lembut, efisiensi, dan keserbagunaannya, Accutase adalah alternatif ideal untuk tripsin. Jika Anda mencari solusi yang andal dan efisien untuk pelepasan sel, Accutase adalah solusi untuk Anda.
Apa yang ada di EMEM?
EMEM adalah versi modifikasi dari media esensial minimum Eagle, yang mengandung Larutan Garam Seimbang Earle, asam amino non-esensial, L-glutamin, natrium piruvat, dan natrium bikarbonat. Penting untuk dicatat bahwa tingkat natrium bikarbonat ini dimaksudkan untuk digunakan dalam 5% CO2 di udara. Untuk menjaga efektivitasnya, disarankan untuk menyimpan media pada suhu 2°C hingga 8°C di tempat gelap saat tidak digunakan.
Untuk apa EMEM digunakan?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) adalah medium kultur sel yang dapat mempertahankan sel dalam kultur jaringan. Medium ini mengandung konsentrasi asam amino yang lebih tinggi, sehingga memungkinkan perkiraan yang lebih akurat tentang komposisi protein sel mamalia yang dikultur. EMEM dapat digunakan untuk menumbuhkan berbagai sel, termasuk fibroblas, sel kanker hati manusia (HepG2) dan sel astrosit yang diturunkan dari progenitor otak janin manusia (PDA). Ini biasanya digunakan dengan adanya serum sapi janin (FBS), anak sapi, atau serum kuda.
Apa perbedaan EMEM dengan media kultur sel lainnya?
Meskipun EMEM dan media Eagle yang dimodifikasi Dulbecco (DMEM) memiliki beberapa kesamaan, keduanya juga berbeda. Kedua media tersebut kekurangan protein dan mengandung asam amino, garam, glukosa, dan vitamin yang diperlukan untuk menyediakan energi bagi sel dan mempertahankannya dalam kultur jaringan. Namun, formulasi DMEM dimodifikasi untuk mengandung hingga empat kali lebih banyak vitamin dan asam amino serta dua hingga empat kali lebih banyak glukosa daripada EMEM. Perlu dicatat bahwa EMEM juga berbeda dengan formulasi MEM yang asli.
Kontrol Kualitas
Disaring dengan steril
Penyimpanan dan Umur Simpan
Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C, terlindung dari cahaya.
Setelah dibuka, simpan pada suhu 4°C dan gunakan dalam waktu 6-8 minggu.
Ketentuan Pengiriman
Suhu lingkungan
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C di tempat gelap. Hindari pembekuan dan pemanasan yang terlalu sering hingga +37°C, karena dapat mengurangi kualitas produk.
Jangan memanaskan media melebihi 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali seperti peralatan microwave.
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah yang diperlukan dan hangatkan ke suhu kamar sebelum digunakan.
Komposisi
Kategori
Komponen
Konsentrasi (mg/L)
Asam Amino
L-Arginin HCl
126.00
L-Sistin 2 HCl
31.30
L-Glutamin
292.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-Isoleusin
52.00
L-Leusin
52.00
L-Lisin HCl
72.50
L-Metionin
15.00
L-Fenilalanin
32.00
L-Treonin
48.00
L-Tryptophan
10.00
L-Tirosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valine
46.00
Vitamin
Kolin Klorida
1.00
Vitamin
D-Kalsium Pantotenat
1.00
Asam Folat
1.00
myo-Inositol
2.00
Nikotinamida
1.00
Pyridoxal HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Tiamin HCl
1.00
Garam Anorganik
CaCl2 2H2O
265.00
Garam Anorganik
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Komponen Lainnya
D-Glukosa
1000.00
Komponen Lainnya
Garam Natrium Fenol Merah
11.00
Fitur utama dari Freeze Medium CM-1 meliputi:
Kompatibilitas Luas: Efektif untuk berbagai jenis sel, termasuk sel primer, sel punca, dan garis sel yang sudah mapan.
Viabilitas Tinggi: Dioptimalkan untuk memaksimalkan pemulihan dan viabilitas sel pasca-pencairan, memastikan hasil eksperimental yang andal.
Siap Digunakan: Disiapkan dan disterilkan dengan mudah untuk aplikasi langsung, mengurangi waktu persiapan dan risiko kontaminasi.
Stabilitas yang Ditingkatkan: Mempertahankan kinerja yang konsisten dalam kondisi kriopreservasi standar, memastikan hasil yang dapat direproduksi.
Umur simpan yangpanjang: CM-1 adalah media kriopreservasi siap pakai yang mengandung serum dan siap pakai yang dapat disimpan di lemari es hingga satu tahun.
Menggunakan CM-1 untuk Membekukan Sel
Untuk menggunakan CM-1 untuk membekukan sel yang melekat dan suspensi, ikuti langkah-langkah berikut
Untuk sel yang melekat, cuci dan pisahkan dari substrat kultur. Untuk sel suspensi, lanjutkan langsung ke langkah berikutnya.
Hitung sel untuk memastikan mereka berada pada konsentrasi yang tepat.
Sentrifus sel untuk membuat pelet, lalu resuspensi dalam media beku CM-1.
Pindahkan sel yang telah diresuspensi ke dalam kriovial.
Gunakan metode pembekuan lambat sebelum memindahkan sel ke penyimpanan jangka panjang
Metode
Deskripsi
Langkah-langkah
❄️
Pembekuan Manual
Metode langkah demi langkah yang melibatkan penurunan suhu secara bertahap untuk memastikan kelangsungan hidup sel
1️⃣ Tempatkan sel dalam media pembekuan di dalam freezer 4°C selama 40 menit.
2️⃣ Pindahkan ke dalam freezer -80°C selama 24 jam.
3️⃣ Simpan sel dalam nitrogen cair untuk pengawetan jangka panjang
❄️
Menggunakan Tn. Frosty
Alat yang nyaman yang memungkinkan laju pembekuan terkontrol tanpa daya listrik
1️⃣ Siapkan sel dalam kriovial dengan media pembekuan.
2️⃣ Tempatkan cryovial dalam wadah Mr.
3️⃣ Simpan pada suhu -80°C selama 24 jam sebelum dipindahkan ke nitrogen cair
❄️
Pembeku Laju Terkendali
Pembeku presisi tinggi dari Thermo Fisher atau produsen lain yang dirancang untuk penurunan suhu terkontrol
1️⃣ Memprogram perangkat untuk menurunkan suhu secara bertahap.
2️⃣ Tempatkan sel yang telah disiapkan di dalam freezer.
3️⃣ Setelah siklus pembekuan, pindahkan sel ke nitrogen cair
Simpan kriovial pada suhu di bawah -130°C atau dalam nitrogen cair untuk pengawetan jangka panjang.
Bahan
Mengandung FBS, DMSO, Glukosa, Garam
Kapasitas penyangga: pH = 7,2 hingga 7,6
Freeze Medium CM-1 dari Cytion menawarkan solusi yang dapat diandalkan untuk kriopreservasi, memastikan kelangsungan hidup sel yang tinggi dan fungsionalitas pasca-pencairan untuk berbagai aplikasi penelitian.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium diformulasikan dengan hati-hati untuk mengoptimalkan kondisi kultur sel. Media ini memiliki komposisi yang diperkaya, memberikan peningkatan kadar komponen penting seperti asam amino dan natrium piruvat, serta elemen tambahan termasuk putrescine, timidin, hipoksantin, dan seng. Penambahan ini memungkinkan para peneliti untuk melengkapi media dengan serum minimal atau komponen yang ditentukan untuk jenis sel tertentu, memfasilitasi kondisi eksperimental yang tepat.
Khususnya, Ham's F-12K (Kaighn's) Medium tidak mengandung protein atau faktor pertumbuhan. Oleh karena itu, suplementasi dengan faktor pertumbuhan dan Fetal Bovine Serum (FBS) sering kali diperlukan, yang memungkinkan para peneliti untuk menyesuaikan media dengan kebutuhan garis sel spesifik mereka. Untuk kinerja yang optimal, konsentrasi FBS harus dioptimalkan secara hati-hati untuk setiap lini sel, memastikan pertumbuhan dan fungsionalitas yang optimal.
Untuk mempertahankan pH fisiologis, Ham's F-12K (Kaighn's) Medium menggunakan sistem penyangga natrium bikarbonat (2,5 g / L), yang membutuhkan lingkungan 5-10% CO2 yang terkendali selama budidaya. Hal ini memastikan pH medium tetap berada dalam kisaran ideal untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel
Kontrol kualitas
pH = 7,2 +/
- 0,02 pada 20-25 ° C.
Setiap lot telah diuji sterilitasnya dan tidak adanya mikoplasma dan bakteri.
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C dalam keadaan gelap. Pembekuan dan pemanasan hingga +37°C akan menurunkan kualitas produk.
Jangan memanaskan media hingga lebih dari 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali (misalnya, peralatan microwave).
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah ini dari botol dan hangatkan pada suhu kamar.
Umur simpan untuk media apa pun kecuali media dasar adalah 8 minggu dari tanggal pembuatan.
Komposisi
Komponen
mg / L
Garam Anorganik
Kalsium klorida x 2H2O
135,24
Tembaga (II) sulfat x 5H2O
0,00
Besi (II) sulfat x 7H2O
0,83
Magnesium klorida x 6H2O
105,72
Magnesium sulfat x 7H2O
394,49
Kalium klorida
283,29
Kalium dihidrogen fosfat
58,52
Natrium klorida
7597,20
di-Natrium hidrogen fosfatanhidrat
115,02
Seng sulfat x 7H2O
0,14
Komponen Lainnya
D (+)
- Glukosa anhidrat
1260,00
Hipoksantin
4,08
Asam DL-α-Lipoat
0,21
Fenol merah
3,00
Putrescine x 2HCl
0,32
Natrium piruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidin
0,73
Asam Amino
L-Alanin
17,82
L-Arginin x HCl
421,40
L-Asparagin x H2O
30,02
Asam L-Aspartat
26,62
L-Sistein x HCl x H2O
70,24
L-Glutamin
292,20
Asam L-Glutamat
29,42
Glisin
15,01
L-Histidin x HCl x H2O
41,92
L-Isoleusin
7,87
L-Leusin
26,24
L-Lisin x HCl
73,04
L-Metionin
8,95
L-Fenilalanin
9,91
L-Prolin
69,06
L-Serine
21,02
L-Treonin
23,82
L-Tryptophan
4,08
L-Tirosin
10,87
L-Valine
23,42
Vitamin
D (+)
- Biotin
0,07
D-Kalsium pantotenat
0,48
Kolin klorida
13,96
Asam folat
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamida
0,04
Piridoksin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Tiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
Phosphate-buffered saline (PBS) adalah larutan penyangga yang banyak digunakan dalam penelitian biologi dan kimia. Larutan ini memainkan peran penting dalam menjaga keseimbangan pH dan osmolaritas selama berbagai prosedur eksperimental, termasuk pemrosesan jaringan dan kultur sel. Larutan PBS kami diformulasikan secara cermat dengan bahan-bahan dengan kemurnian tinggi untuk memastikan stabilitas dan keandalan dalam setiap percobaan. Osmolaritas dan konsentrasi ion PBS kami sangat mirip dengan tubuh manusia, membuatnya isotonik dan tidak beracun bagi sebagian besar sel.
Komposisi Larutan PBS Kami
Larutan PBS kami adalah campuran yang disesuaikan dengan pH dari buffer fosfat tingkat ultra murni dan larutan garam. Pada konsentrasi kerja 1X, larutan ini mengandung:
8000 mg/L Natrium klorida (NaCl)
200 mg/L Kalium klorida (KCl)
1150 mg/L Natrium fosfat dibasa anhidrat (Na2HPO4)
200 mg/L Kalium fosfat monobasa anhidrat (KH2PO4)
Komposisi ini memastikan pH dan keseimbangan ionik yang optimal, cocok untuk berbagai aplikasi biologis.
Aplikasi Solusi PBS Kami
Larutan PBS kami ideal untuk berbagai aplikasi dalam penelitian biologi. Sifatnya yang isotonik dan tidak beracun membuatnya cocok untuk pengenceran zat dan pembilasan wadah sel. Larutan PBS yang mengandung EDTA efektif untuk melepaskan sel yang melekat dan menggumpal. Namun, logam divalen seperti seng tidak boleh ditambahkan ke dalam PBS, karena dapat menyebabkan pengendapan. Dalam kasus seperti itu, buffer Good direkomendasikan. Selain itu, larutan PBS kami merupakan alternatif yang dapat diterima untuk media transpor virus untuk transpor dan penyimpanan virus RNA, termasuk SARS-CoV-2.
Kontrol Kualitas
Disaring dengan steril
Penyimpanan dan Umur Simpan
Simpan pada suhu +2°C hingga +25°C, terlindung dari cahaya.
Setelah dibuka, simpan pada suhu 2°C hingga 25°C dan gunakan dalam waktu 24 bulan.
Ketentuan Pengiriman
Suhu lingkungan
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C di tempat gelap. Hindari pembekuan dan pemanasan yang sering hingga +37°C, karena dapat mengurangi kualitas produk.
Jangan memanaskan media melebihi 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali seperti peralatan microwave.
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah yang diperlukan dan hangatkan ke suhu kamar sebelum digunakan.
Komposisi
Kategori
Komponen
Konsentrasi (mg/L)
Garam
Kalium klorida
200
Kalium fosfat monobasa anhidrat
200
Natrium klorida
8000
Natrium fosfat dibasa anhidrat anhidrat
1150
Awalnya dirancang untuk mendukung pertumbuhan sel leukemia manusia dalam kultur suspensi dan monolayer, RPMI 1640 Medium telah berevolusi melalui modifikasi oleh para peneliti dan pemasok komersial agar sesuai untuk berbagai macam sel mamalia. Ini sangat kompatibel dengan garis sel seperti HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrosit, dan karsinoma.
Media RPMI 1640 berbeda dari media kultur sel lainnya karena komposisinya yang unik. Media ini mengandung sejumlah besar fosfat, asam amino, dan vitamin. Khususnya, ini mencakup biotin, vitamin B12, dan PABA, yang tidak ada dalam Eagle's Minimal Essential Medium atau Dulbecco's Modified Eagle Medium. Selain itu, RPMI 1640 Medium menunjukkan konsentrasi vitamin inositol dan kolin yang meningkat secara signifikan. Namun, tidak mengandung protein, lipid, atau faktor pertumbuhan. Oleh karena itu, suplementasi dengan 10% Fetal Bovine Serum (FBS) umumnya diperlukan untuk memberikan kondisi optimal untuk pertumbuhan sel.
Sistem penyangga RPMI 1640 Medium bergantung pada natrium bikarbonat dan membutuhkan lingkungan 5-10% CO2 untuk mempertahankan pH yang sesuai secara fisiologis. Dimasukkannya agen pereduksi glutathione semakin membedakan media ini dari yang lain.
Kontrol Kualitas
Disaring dengan steril
Penyimpanan dan Umur Simpan
Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C, terlindung dari cahaya.
Setelah dibuka, simpan pada suhu 4°C dan gunakan dalam waktu 6-8 minggu.
Ketentuan Pengiriman
Suhu lingkungan
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C di tempat gelap. Hindari pembekuan dan pemanasan yang terlalu sering hingga +37°C, karena dapat mengurangi kualitas produk.
Jangan memanaskan media melebihi 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali seperti peralatan microwave.
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah yang diperlukan dan hangatkan ke suhu kamar sebelum digunakan.
Komposisi
Kategori
Komponen
Konsentrasi (mg/L)
Asam Amino
Glisin
10.00
L-Alanyl-L-Glutamin
434.40
L-Arginin
200.00
L-AsparaginH2O
56.82
Asam L-Aspartat
20.00
L-Sistin 2HCl
65.20
Asam L-Glutamat
20.00
L-Histidin HClH2O
20.27
L-Hidroksi-L-Prolin
20.00
L-Isoleusin
50.00
L-Leusin
50.00
L-Lisin HCl
40.00
L-Metionin
15.00
L-Fenilalanin
15.00
L-Proline
20.00
L-Serine
30.00
L-Treonin
20.00
L-Tryptophan
5.00
L-Tirosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valine
20.00
Vitamin
p-Amino Benzoic Acid
1.00
D-Biotin
0.20
Kolin Klorida
3.00
D-Kalsium Pantotenat
0.25
Asam Folat
1.00
myo-Inositol
35.00
Nikotinamida
1.00
Piridoksin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Tiamin HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Garam Anorganik
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Komponen Lainnya
D-Glukosa
2000.00
L-Glutathione Berkurang
1.00
Garam Natrium Fenol Merah
5.30
Formulasi unik ini menggabungkan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) dan Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) dengan rasio 1:1 yang tepat. Penambahan L-glutamin semakin menyempurnakan komposisinya.
DMEM, yang berasal dari Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), menawarkan peningkatan konsentrasi asam amino dan vitamin dibandingkan dengan pendahulunya. Sebaliknya, Ham's F-12 didasarkan pada medium Ham's F-10, menyediakan serangkaian komponen esensial yang saling melengkapi.
Untuk mendukung pertumbuhan sel yang optimal, merupakan praktik umum untuk melengkapi DMEM: Ham's F12 dengan FBS pada konsentrasi khas 5-10%. Penambahan ini diperlukan karena media tidak memiliki hormon pertumbuhan, lipid, dan protein yang penting untuk perkembangan sel.
DMEM: Ham's F12 menggabungkan sistem penyangga pH dan sering kali dilengkapi dengan fenol merah, indikator pH. Sel yang dikultur dalam DMEM: Ham's F12, atau media apa pun yang menggunakan sistem penyangga bikarbonat, memerlukan lingkungan CO2 terkontrol 5-10% untuk mempertahankan tingkat pH yang sesuai.
Kontrol Kualitas
Disaring dengan steril
Penyimpanan dan Umur Simpan
Simpan pada suhu +2°C hingga +8°C, terlindung dari cahaya.
Setelah dibuka, simpan pada suhu 4°C dan gunakan dalam waktu 6-8 minggu.
Ketentuan Pengiriman
Suhu lingkungan
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C di tempat gelap. Hindari pembekuan dan pemanasan yang terlalu sering hingga +37°C, karena dapat mengurangi kualitas produk.
Jangan memanaskan media melebihi 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali seperti peralatan microwave.
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah yang diperlukan dan hangatkan ke suhu kamar sebelum digunakan.
Komposisi
Kategori
Komponen
Konsentrasi (mg/L)
Asam Amino
Glisin
18.75
L-Alanin
4.45
L-Arginin HCl
147.50
L-Asparagin H₂O
7.50
Asam L-Aspartat
6.65
L-Sistein HCl H₂O
17.56
L-Sistin 2 HCl
31.29
Asam L-Glutamat
7.35
L-Glutamin
365.00
L-Histidin HCl H₂O
31.48
L-Isoleusin
54.47
L-Leusin
59.05
L-Lisin HCl
91.25
L-Metionin
17.24
L-Fenilalanin
35.48
L-Proline
17.25
L-Serine
26.25
L-Treonin
53.45
L-Tryptophan
9.02
Garam Disodium L-Tirosin
48.10
L-Valine
52.85
Vitamin
D-Biotin
0.0035
Kolin Klorida
8.98
D-Kalsium Pantotenat
2.24
Asam Folat
2.66
myo-Inositol
12.60
Nikotinamida
2.02
Piridoksin HCl
0.031
Piridoksal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Tiamin HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Garam Anorganik
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe (NO₃) ₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Komponen Lainnya
D-Glukosa
3151.00
Hipoksantin
2.40
HEPES
3574.50
Asam Linoleat
0.042
Asam Lipoat
0.105
Garam Natrium Fenol Merah
8.63
Putrescine 2 HCl
0.081
Natrium Piruvat
55.00
Timidin
0.365
Medium 199 menawarkan berbagai aplikasi di lapangan. Secara efektif dapat mempertahankan kompleks kumulus-ovum (COC) dan mendukung pematangan oosit secara in vitro. Selain itu, ini digunakan dalam pembilasan garis aspirasi selama pengumpulan sel telur dari sapi Holstein Jerman. Selain itu, Medium 199 berfungsi sebagai media yang sangat baik untuk kultur sel endotel jantung yang berasal dari tikus. Aplikasi ini menunjukkan keserbagunaan dan kemampuan beradaptasi Medium 199 untuk berbagai kebutuhan eksperimental.
Sejarah
Pengembangan Medium 199 pada tahun 1950-an menandai kemajuan yang signifikan dalam media kultur jaringan. Sebelum diperkenalkan, banyak media kultur yang mengandalkan produk turunan hewan dan ekstrak jaringan. Namun, Morgan dan rekannya merevolusi bidang ini dengan memformulasikan sumber nutrisi yang sepenuhnya terdefinisi untuk kultur sel. Melalui eksperimen mereka yang melibatkan berbagai kombinasi vitamin, asam amino, dan faktor lainnya, mereka menemukan sifat pemacu pertumbuhan yang luar biasa dari Medium 199.
Kontrol kualitas
pH = 7,2 +/
- 0,02 pada suhu 20-25°C.
Setiap lot telah diuji sterilitasnya dan tidak adanya mikoplasma dan bakteri.
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C dalam keadaan gelap. Pembekuan dan pemanasan hingga +37°C akan menurunkan kualitas produk.
Jangan memanaskan media hingga lebih dari 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali (misalnya, peralatan microwave).
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah ini dari botol dan hangatkan pada suhu kamar.
Umur simpan untuk media apa pun kecuali media dasar adalah 8 minggu sejak tanggal pembuatan.
Komposisi
Komponen
mg / L
Garam Anorganik
Kalsium klorida x 2H2O
264,92
Besi (III) nitrat x 9H2O
0,72
Magnesium sulfat
97,67
Kalium klorida
400,00
Natrium asetat x 3H2O
82,95
Natrium klorida
6,800.00
Natrium dihidrogen fosfat x H2O
140,00
Komponen Lainnya
Adenin sulfat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Kolesterol
0,20
2'-Deoksiribosa
0,50
D (+)
- Glukosa anhidrat
1,000.00
Glutathione (merah)
0,05
Guanin x HCl
0,30
Hipoksantin
0,30
Fenol merah
10,00
D-Ribosa
0,50
Timin
0,30
Tween 80
4,90
Urasil
0,30
Xanthine
0,30
NaHCO3
2,200.00
Asam Amino
L-Alanin
25,00
L-Arginin x HCl
70,00
Asam L-Aspartat
30,00
L-Sistein x HCl x H2O
0,10
L-Sistin
20,00
L-Glutamin stabil
149,00
Asam L-Glutamat
67,00
Glisin
50,00
L-Histidin x HCl x H2O
21,88
L-Hidroksiprolin
10,00
L-Isoleusin
20,00
L-Leusin
60,00
L-Lisin x HCl
70,00
L-Metionin
15,00
L-Fenilalanin
25,00
L-Prolin
40,00
L-Serine
25,00
L-Treonin
30,00
L-Tryptophan
10,00
L-Tirosin
40,00
L-Valine
25,00
Vitamin
asam benzoat 4-Amino
0,05
Asam askorbat
0,05
D (+)
- Biotin
0,01
Kalsiferol
0,10
D-Kalsium pantotenat
0,01
Kolin klorida
0,50
Asam folat
0,01
myo-Inositol
0,05
Menadione
0,01
Asam nikotinat
0.025
Nikotinamida
0.025
Piridoksal x HCl
0.025
Piridoksol x HCl
0.025
Riboflavin
0,01
Garam disodium disodium DL-α-Tokoferol fosfat
0,01
Tiamin x HCl
0,01
Vitamin A asetat
0,14
IMDM sangat cocok untuk kultur sel yang berkembang biak dengan cepat dan berkepadatan tinggi, termasuk sel Jurkat, COS-7, dan sel makrofag. Berbagai modifikasi IMDM yang tersedia untuk berbagai aplikasi kultur sel dapat ditemukan dengan menggunakan alat pemilih media. Media cair menyediakan nutrisi penting untuk semua aplikasi kultur sel. Setiap media kultur sel berkualitas tinggi kami diproduksi sesuai dengan formula yang diterbitkan pada awalnya atau modifikasi yang diperlukan untuk kinerja dan stabilitas media kultur yang konsisten.
IMDM vs DMEM
IMDM mengandung kalium nitrat sebagai pengganti ferri nitrat dan HEPES serta natrium piruvat. Komponen tambahan dalam IMDM membuatnya lebih cocok untuk jenis sel khusus dan aplikasi spesifik daripada DMEM.
IMDM vs RPMI
IMDM dan RPMI memiliki formulasi yang berbeda yang mungkin relevan untuk stimulasi PMA/ionomisin. Salah satu perbedaan yang signifikan adalah konsentrasi Ca2+. Sementara RPMI mengandung 0,42 mM Ca2+, IMDM mengandung 1,49 mM.
Kontrol kualitas
pH = 7,2 +/
- 0,02 pada suhu 20-25°C.
Setiap lot telah diuji sterilitasnya dan tidak adanya mikoplasma dan bakteri.
Pemeliharaan
Simpan dalam lemari es pada suhu +2°C hingga +8°C dalam gelap. Pembekuan dan pemanasan hingga +37°C akan menurunkan kualitas produk.
Jangan memanaskan media hingga lebih dari 37°C atau menggunakan sumber panas yang tidak terkendali (misalnya, peralatan microwave).
Jika hanya sebagian dari media yang akan digunakan, keluarkan jumlah ini dari botol dan hangatkan pada suhu kamar.
Umur simpan untuk media apa pun kecuali media dasar adalah 8 minggu sejak tanggal pembuatan.
Komposisi
Komponen
mg / L
Garam Anorganik
Kalsium klorida x 2 H2O
219,00
Kalium klorida
330,00
Kalium nitrat
0.076
Magnesium sulfat anhidrat
97,73
Natrium klorida
4,505.00
Natrium dihidrogen fosfat anhidrat
109,00
Natrium selenit
0,02
Komponen lainnya
D (+)
- Glukosa anhidrat
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natrium piruvat
110,00
Fenol merah
15,00
Asam Amino
L-Alanin
25,00
L-Arginin x HCl
84,00
L-Asparagin x H2O
25,00
Asam L-Aspartat
30,00
L-Sistin x 2HCl
91,24
L-Glutamin
584,00
Asam L-Glutamat
75,00
Glisin
30,00
L-Histidin x HCl x H2O
42,00
L-Isoleusin
104,80
L-Leusin
104,80
L-Lisin x HCl
146,20
L-Metionin
30,00
L-Fenilalanin
66,00
L-Prolin
40,00
L-Serine
42,00
L-Treonin
95,20
L-Tryptophan
16,00
L-Tirosin x 2Na
104,20
L-Valine
93,60
Vitamin
D (+)
- Biotin
0.013
D-Kalsium pantotenat
4,00
Kolin klorida
4,00
Asam folat
4,00
myo-Inositol
7,20
Media kultur sel: Gambaran umum
Dalam bidang ilmu kehidupan, salah satu metodologi yang paling penting adalah kultur sel. Pemindahan sel, jaringan, atau organ dari hewan atau tumbuhan dan implantasi sel, jaringan, atau organ tersebut dalam lingkungan buatan yang menguntungkan bagi kelangsungan hidup dan/atau pertumbuhannya adalah apa yang dimaksud dengan frasa "kultur sel" Kebutuhan lingkungan yang mendasar untuk perkembangan sel yang optimal adalah suhu yang terkendali, substrat untuk perlekatan sel, media pertumbuhan yang memadai, dan inkubator yang mempertahankan pH dan osmolalitas yang optimal. Sel harus memiliki kondisi ini agar dapat tumbuh secara maksimal.
Pemilihan media pertumbuhan yang memadai untuk kultur in vitro adalah tahap dalam kultur sel yang paling kritis dan paling vital. Media pertumbuhan, juga dikenal sebagai media kultur, adalah cairan atau gel yang diformulasikan untuk mendorong perkembangan organisme dalam skala mikroskopis, seluler, atau seperti tanaman. Media yang digunakan untuk menumbuhkan sel sering kali mengandung pasokan energi dan zat yang memadai yang mengontrol siklus sel. Komponen utama media kultur meliputi asam amino, vitamin, garam anorganik, glukosa, dan serum. Serum ditambahkan ke dalam media karena berfungsi sebagai sumber faktor pertumbuhan, hormon, dan faktor perlekatan. Selain menyediakan nutrisi, media juga berkontribusi pada pemeliharaan tingkat pH dan osmolalitas.
Jenis medium yang digunakan dalam kultur sel
Baik sel manusia maupun hewan memiliki potensi untuk ditumbuhkan dalam media buatan atau sintetis atau media yang sepenuhnya alami yang dilengkapi dengan unsur-unsur alami. Berikut ini, kami akan memberikan gambaran umum tentang berbagai jenis media yang saat ini tersedia.
Media alami
Hanya cairan biologis yang ada dalam keadaan alamiah yang dapat ditemukan dalam media alami. Media alami sangat membantu dan mudah untuk kultivasi berbagai jenis sel hewan. Kurangnya pemahaman tentang komponen-komponen yang tepat yang membentuk media alami adalah faktor utama yang berkontribusi terhadap rendahnya pengulangan hasil yang diperoleh dengan menggunakan media alami.
Media buatan
Pembuatan media buatan atau sintetis melibatkan penambahan nutrisi (baik organik maupun anorganik), protein serum, karbohidrat, kofaktor, vitamin, dan garam, serta fase gas O2 dan CO2 [1].
Berbagai jenis media buatan telah dikembangkan untuk memenuhi satu atau lebih fungsi berikut: 1) Kelangsungan hidup segera (larutan garam yang seimbang dengan pH dan tekanan osmotik yang tepat). 2) Kelangsungan hidup yang berkepanjangan (larutan garam seimbang yang dilengkapi dengan berbagai formulasi bahan kimia organik dan/atau serum). 3) Pengembangan yang tidak terbatas. 4) Fungsi khusus.
Terdapat empat klasifikasi yang berbeda untuk media buatan:
Media yang mengandung serum
Jenis suplemen yang paling sering ditemukan dalam media yang digunakan untuk menumbuhkan sel hewan adalah serum sapi janin. Ini ditambahkan ke media kultur sebagai suplemen berbiaya rendah untuk mencapai kondisi pertumbuhan terbaik. Selain bertindak sebagai pengangkut atau pengkelat nutrisi yang tidak stabil atau tidak larut dalam air, hormon dan faktor pertumbuhan, penghambat protease, dan zat lainnya, serum juga mengikat dan menetralkan molekul berbahaya.
Media Bebas Serum
Kehadiran serum dalam media memiliki sejumlah kelemahan dan berpotensi menyebabkan kesalahan besar dalam interpretasi dalam penelitian imunologi [2, 3]. Ada berbagai macam media bebas serum yang dibuat [4, 5]. Media-media ini umumnya diformulasikan secara khusus untuk mendukung kultur satu jenis sel, seperti Knockout Serum Replacement dan Knockout DMEM dari Thermo Fisher Scientific, dan media mTESR dari Stem Cell Technologies [6], untuk sel punca [7].
Selain itu, media-media ini menggabungkan sejumlah faktor pertumbuhan yang dimurnikan, lipoprotein, dan protein lainnya, yang biasanya disediakan oleh serum [8]. Media ini sering disebut sebagai "media kultur yang ditentukan" karena komponen-komponen yang membentuk media ini telah dipahami dengan baik.
Media yang ditentukan secara kimiawi
Media ini mencakup komponen anorganik dan organik yang sangat murni yang belum terkontaminasi oleh kontaminasi apa pun. Media ini juga dapat mencakup penambahan protein murni, seperti faktor pertumbuhan.
modifikasi genetik bakteri atau ragi, bersama dengan penambahan asam lemak, vitamin, kolesterol, dan asam amino tertentu, menghasilkan produksi bagian-bagian komponennya [9].
Media bebas protein
Media bebas protein adalah media yang tidak mengandung protein sama sekali dan hanya mengandung elemen non-protein. Jika dibandingkan dengan media dengan tambahan serum, penggunaan media tanpa tambahan protein mendorong proliferasi sel dan ekspresi protein yang lebih besar serta mempermudah pemurnian produk yang dihasilkan dalam proses hilir [10-12]. Protein tidak termasuk dalam formulasi seperti MEM dan RPMI-1640. Namun, suplemen protein dapat diberikan jika diperlukan.
Media kultur dan komponen dasarnya
Media kultur komersial dapat dibeli dalam bentuk bubuk atau cairan dan sering kali mengandung berbagai nutrisi seperti asam amino, glukosa, garam, vitamin, dan suplemen makanan lainnya.
Kebutuhan komponen-komponen ini berbeda untuk setiap lini sel, dan variasi ini bertanggung jawab atas banyaknya formulasi media yang berbeda. Setiap komponen bertanggung jawab atas fungsi tertentu, yang akan diuraikan dalam paragraf berikut:
Sistem penyangga
Untuk mempertahankan kondisi pertumbuhan yang optimal, pH harus dikontrol, yang sering dilakukan dengan salah satu dari dua sistem penyangga:
Sistem penyangga alami
Rasio CO2/H2CO3 di atmosfer sama dengan rasio medium, menciptakan mekanisme penyangga alami. Untuk mempertahankan mekanisme penyangga alami, kultur harus disimpan di lingkungan udara dengan 5-10% CO2, yang sering kali dicapai dengan menggunakan inkubator CO2. Salah satu hal terbaik tentang penggunaan penyangga alami adalah betapa murah dan amannya.
HEPES
Penyangga kimiawi menggunakan zwitterion HEPES memiliki kemampuan penyangga yang lebih besar dalam kisaran pH 7,2-7,4 dan tidak memerlukan lingkungan gas yang diatur. Untuk jenis sel tertentu, dosis HEPES yang lebih besar mungkin berbahaya. Media yang mengandung HEPES juga jauh lebih rentan terhadap efek fototoksik dari cahaya neon [13].
Fenol Merah
Indikator pH fenol merah sering disertakan dalam media kultur yang tersedia secara komersial, memungkinkan pemantauan pH secara terus menerus. Dengan mengembangkan sel, metabolit yang dihasilkan oleh sel-sel ini menyebabkan pergeseran pH dan oleh karena itu perubahan warna pada media. Fenol merah memiliki efek ganda pada warna media, mengubahnya menjadi kuning pada pH asam dan ungu pada pH basa. pH 7,4, nilai optimal untuk kultur sel, menyebabkan media tampak berwarna merah neon.
Tetapi fenol merah memiliki beberapa kelemahan: Pertama, fenol merah mampu mensimulasikan kinerja sejumlah hormon steroid, terutama estrogen [14]. Oleh karena itu, ketika mempelajari sel yang peka terhadap estrogen, seperti jaringan payudara, disarankan untuk menggunakan media yang bebas dari fenol merah. Keseimbangan natrium-kalium terganggu dengan adanya fenol merah dalam beberapa formulasi bebas serum. Menambahkan serum atau hormon hipofisis sapi ke dalam media dapat mengatasi efek ini [15]. Ketiga, deteksi dalam percobaan sitometri aliran terhalang oleh adanya fenol merah.
Garam anorganik
Media yang mengandung garam anorganik, seperti ion natrium, kalium, dan kalsium, membantu menjaga keseimbangan osmotik dan mengatur potensial membran.
Asam amino
Karena asam amino adalah komponen dasar protein, asam amino merupakan komponen penting dari setiap media pertumbuhan sel yang pernah ada. Karena sel tidak dapat memproduksi asam amino tertentu dengan sendirinya, maka penting bagi media kultur untuk menyertakan asam amino esensial. Mereka diperlukan untuk proliferasi sel, dan konsentrasi di mana mereka hadir menentukan kepadatan sel maksimum yang dapat dicapai. Secara khusus, L-glutamin, asam amino esensial sangat penting.
L-glutamin berfungsi sebagai sumber energi sekunder untuk metabolisme dan menyumbangkan nitrogen untuk produksi NAD, NADPH, dan nukleotida. Karena fakta bahwa L-glutamin adalah asam amino yang tidak stabil yang, seiring berjalannya waktu, berubah menjadi bentuk yang tidak dapat digunakan oleh sel, asam amino ini harus diberikan ke dalam medium.
Selain itu, asam amino non-esensial dapat disuplai ke medium untuk mengisi bahan bakar yang telah digunakan selama proses pertumbuhan. Pertumbuhan sel didorong dan kelangsungan hidupnya meningkat ketika media pertumbuhan dilengkapi dengan asam amino nonesensial.
Karbohidrat
Karbohidrat dalam bentuk gula adalah sumber energi utama. Banyak media juga mengandung maltosa dan fruktosa selain gula yang lebih umum yaitu glukosa dan galaktosa.
Protein dan peptida
Albumin, transferin, dan fibronektin adalah protein dan peptida yang paling sering digunakan, terutama dalam media yang tidak mengandung serum. Albumin, transferin, aprotinin, fetuin, dan fibronektin adalah beberapa protein yang dapat ditemukan dalam serum, yang merupakan sumber protein yang kaya.
Albumin adalah protein utama yang ditemukan dalam darah, dan fungsinya adalah untuk mengikat dan mengangkut berbagai zat, termasuk air, garam, asam lemak bebas, hormon, dan vitamin, di antara berbagai organ dan sel. Kemampuan albumin untuk melekat pada bahan kimia membuatnya menjadi kandidat yang efektif untuk menghilangkan senyawa berbahaya dari media tempat sel dikultur.
Aprotinin adalah agen pelindung dalam sistem kultur sel, karena stabil pada pH netral dan asam, serta tahan terhadap suhu tinggi dan kerusakan yang mungkin disebabkan oleh enzim proteolitik. Ia mampu menghambat sejumlah protease serin, termasuk tripsin, di antaranya.
Fetuin adalah glikoprotein yang dapat dideteksi dalam jumlah yang lebih tinggi dalam serum janin dan bayi baru lahir dibandingkan dengan serum orang dewasa. Selain itu, ia bertindak sebagai inhibitor protease serin. Protein fibronektin adalah komponen penting dalam proses adhesi sel. Transferin adalah protein yang mengangkut zat besi dan bertanggung jawab untuk mengantarkan zat besi ke membran sel.
Asam lemak dan lipid
Mereka memainkan peran penting dalam media bebas serum ketika serum tidak ada.
Vitamin
Banyak vitamin yang diperlukan untuk perkembangan dan proliferasi sel. Vitamin tidak dapat diproduksi dalam jumlah yang memadai oleh sel dan karenanya penting dalam kultur jaringan sebagai suplemen makanan.
Dalam kultur sel, serum adalah sumber utama vitamin; namun, media juga diperlakukan dengan berbagai vitamin agar sesuai untuk jenis sel tertentu. Biasanya, vitamin kelompok B digunakan untuk stimulasi pertumbuhan.
Elemen jejak
Unsur-unsur kimia seperti tembaga, seng, selenium, dan zat antara asam trikarboksilat dikenal sebagai elemen jejak. Elemen jejak sering ditambahkan ke media yang tidak mengandung serum untuk menggantikan unsur-unsur yang biasanya ada dalam serum. Elemen-elemen ini adalah komponen kimia penting yang diperlukan untuk perkembangan sel yang sehat. Banyak reaksi biokimia bergantung pada mikronutrien tertentu, seperti aktivitas enzim.
Suplemen medium
Media pertumbuhan lengkap yang disarankan untuk lini sel tertentu membutuhkan komponen tambahan yang tidak ada dalam media dasar dan serum. Suplemen makanan ini mendukung pertumbuhan sel dan fungsi metabolisme yang tepat.
Meskipun hormon, faktor pertumbuhan, dan molekul pensinyalan sangat penting untuk proliferasi yang tepat dari garis sel tertentu, tindakan pencegahan berikut harus selalu dilakukan: Karena penambahan suplemen dapat mengubah osmolalitas media pertumbuhan lengkap, yang dapat menghambat perkembangan sel, selalu disarankan untuk memverifikasi osmolalitas setelah menambahkan suplemen. Untuk sebagian besar garis sel, osmolalitas optimal berkisar antara 260 dan 320 mOSM/kg.
Antibiotik
Antibiotik sering digunakan untuk menghambat perkembangan polutan bakteri dan jamur [16], meskipun tidak penting untuk pertumbuhan sel. Karena antibiotik dapat menyembunyikan kontaminasi oleh mikoplasma dan bakteri resisten, penggunaan rutinnya tidak disarankan untuk kultur sel [17, 18].
Selain itu, antibiotik dapat mengganggu metabolisme sel yang hipersensitif. Kombinasi penisilin-streptomisin yang dibuat oleh MilliporeSigma dan Life Technologies sering digunakan. Plasmocin telah digunakan dalam kultur garis sel glioma TS603, TS516, dan BT260 [19], dan telah terbukti efektif dalam menghilangkan kontaminasi mikoplasma (20).
Serum
Albumin, faktor pertumbuhan, dan penghambat pertumbuhan semuanya ada dalam serum. Serum adalah salah satu komponen paling penting dari media kultur sel karena menyediakan asam amino, protein, vitamin (terutama vitamin yang larut dalam lemak seperti A, D, E, dan K), karbohidrat, lipid, hormon, faktor pertumbuhan, mineral, dan elemen.
Serum dari sumber janin dan anak sapi sering digunakan untuk mendorong perkembangan sel yang dikultur. Serum janin merupakan sumber faktor pertumbuhan yang melimpah dan cocok untuk kloning sel dan pengembangan sel sensitif. Karena kemampuannya dalam mendorong pertumbuhan yang berkurang, serum anak sapi digunakan dalam eksperimen penghambatan kontak. Media pertumbuhan normal sering kali mengandung 2% hingga 10% serum. Penambahan serum ke dalam media kultur memiliki tujuan sebagai berikut [21]:
-
Serum memberikan nutrisi penting untuk sel (baik dalam larutan maupun yang melekat pada protein).
-
Beberapa faktor pertumbuhan dan hormon yang terlibat dalam promosi pertumbuhan dan aktivitas sel khusus termasuk dalam serum.
-
Serum juga mengandung banyak protein pengikat, seperti albumin dan transferin, yang mengangkut bahan kimia lain ke dalam sel. Sebagai contoh, albumin mengantarkan lemak, vitamin, hormon, dan lain-lain ke dalam sel.
-
Ini juga menyediakan protein, seperti fibronektin, yang meningkatkan daya rekat sel ke substrat. Selain itu, ia menghasilkan elemen penyebar yang membantu ekspansi sel sebelum pembelahan.
-
Ini memberikan inhibitor protease yang mencegah proteolisis dalam sel.
-
Ini juga mengandung mineral seperti Na+, K+, Zn2+, dan Fe2+.
-
Ini meningkatkan viskositas media, sehingga melindungi sel dari cedera mekanis selama agitasi kultur suspensi.
-
Ini juga merupakan penyangga.
Referensi
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrisi sel hewan dalam kultur jaringan; studi awal pada media sintetis. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Adsorpsi cepat komponen serum anak sapi janin oleh sel mamalia dalam kultur. Sumber artefak potensial dalam studi antisera terhadap antigen spesifik sel. Imunologi. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Penambahan serum ke media yang digunakan untuk persiapan suspensi sel sebagai sumber artefak yang mungkin dalam reaksi yang diperantarai sel yang dipelajari dengan menggunakan uji kelenjar getah bening poplitea. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Media bebas serum komersial: pertumbuhan hibridoma dan produksi antibodi monoklonal. J Metode Imunol. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Metode untuk pertumbuhan sel yang dikultur dalam media bebas serum. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,dkk. HSP70 mengawal TDP-43 bebas RNA ke dalam cangkang bola cair intranuklear anisotropik. Sains. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,dkk. Penuaan yang diinduksi oleh sindrom Down mengganggu arsitektur nuklir progenitor saraf. Sel Induk Sel. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Penggantian lengkap serum oleh albumin, transferin, dan lipid kedelai dalam kultur limfosit B yang reaktif terhadap lipopolisakarida. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Perbaikan sistematis dari media bebas protein yang ditentukan secara kimiawi untuk pertumbuhan hibridoma dan produksi antibodi monoklonal. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Media bebas protein untuk pertumbuhan hibridoma dan sel-sel lain dari sistem kekebalan tubuh. In Vitro Cell Dev Biol. 1990; 26: 769-78
[11] Barnes D, Sato G. Kultur sel bebas serum: pendekatan pemersatu. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Pertumbuhan klonal garis sel hamster Cina dalam media bebas protein. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analisis efek sitotoksik dari media kultur yang mengandung HEPES yang terpapar cahaya. In Vitro Cell Dev Biol. 1985; 21: 282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenol merah dalam media kultur jaringan adalah estrogen yang lemah: implikasi mengenai studi tentang sel-sel yang responsif terhadap estrogen dalam kultur. Proc Natl Acad Sci US A. 1986; 83: 2496-500
[15] Karmiol S. Pengembangan media bebas serum. Dalam: Master JRW, editor. Kultur sel hewan, 3rd ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Penggunaan antibiotik dalam media kultur sel. Metode Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Penyebaran dan pengendalian infeksi mikoplasma pada kultur sel. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Mengubah media dan melewatkan garis sel. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,dkk. Histone demethylase KDM6A secara langsung mendeteksi oksigen untuk mengontrol kromatin dan nasib sel. Sains. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,dkk. Efisiensi Plasmocin ™ pada berbagai garis sel mamalia yang terinfeksi oleh molicutes dibandingkan dengan antibiotik yang umum digunakan dalam kultur sel: pengalaman lokal. Sitoteknologi. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Aspek molekuler dari pengikatan ligan pada serum albumin. Pharmacol Rev. 1981; 33: 17-53