Volume : 100 ml
Conservation : ≤ –15 °C
Stérilité : filtré stérile
La solution stable de glutamine (L-alanyl-L-glutamine, 200 mM) est une forme dipeptidique hautement stable de L-glutamine conçue pour remplacer directement la L-glutamine conventionnelle dans les milieux de culture cellulaire. La L-glutamine est un acide aminé essentiel et une source d'énergie majeure pour les cellules cultivées, jouant un rôle crucial dans la croissance cellulaire, le métabolisme et la synthèse des protéines.
Application et avantages
Dans les milieux liquides standard, la L-glutamine se dégrade relativement rapidement à 37 °C, ce qui entraîne la formation de sous-produits toxiques tels que des ions ammonium qui peuvent nuire à la viabilité des cellules et aux résultats expérimentaux. La glutamine stable surmonte cette limitation en fournissant une forme dipeptidique non dégradable qui reste intacte dans les conditions de culture.
Les cellules clivent enzymatiquement la liaison dipeptidique pour libérer la L-glutamine selon les besoins, assurant ainsi un approvisionnement continu tout en empêchant l'accumulation de déchets nocifs. Cela rend la solution particulièrement avantageuse pour les cultures cellulaires à long terme et les systèmes de croissance à haute densité.
Formulation et utilisation
La solution de L-alanyl-L-glutamine est préparée dans de l'eau de qualité culture cellulaire à une concentration de 200 mM et est filtrée de manière stérile pour les applications sensibles à la contamination. Elle peut être diluée directement dans un milieu complet en fonction des besoins expérimentaux. Conserver à une température ≤ -15 °C et éviter les cycles répétés de congélation-décongélation afin de maintenir la stabilité du produit.
À usage exclusif de recherche. Ne pas utiliser dans le cadre de procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 100 ml
Conservation : +2 °C à +8 °C
Stérilité : filtré stérile
La solution tampon HEPES (1 M), également connue sous le nom d'acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N-2-éthanesulfonique, est un agent tampon organique zwitterionique largement utilisé dans les milieux de culture cellulaire. Elle est conçue pour maintenir des conditions de pH stables dans la plage physiologique de 6,7 à 8,6, favorisant ainsi un fonctionnement cellulaire optimal lors d'applications in vitro.
Application et avantages
Le HEPES offre une capacité tampon fiable dans les systèmes de culture cellulaire, en particulier lorsque les cellules sont manipulées en dehors d'un incubateur à CO₂. L'ajout de 10 à 25 mM de HEPES aux milieux de culture offre une meilleure stabilité du pH pendant les périodes de manipulation prolongées, ce qui contribue à maintenir des conditions expérimentales constantes.
Ce tampon est imperméable aux membranes, interfère très peu avec les réactions biochimiques et présente une forte stabilité chimique et enzymatique. Ces propriétés le rendent adapté à un large éventail d'applications de culture cellulaire et biochimiques.
Formulation et utilisation
La solution est fournie sous forme de concentré 1 M préparé dans de l'eau de qualité culture cellulaire et est filtrée de manière stérile pour une utilisation dans des environnements sensibles à la contamination. Elle peut être diluée à la concentration de travail souhaitée en fonction des exigences de l'application. Conserver entre +2 °C et +8 °C et manipuler dans des conditions aseptiques afin de préserver l'intégrité du produit.
À usage exclusif de recherche. Ne pas utiliser dans le cadre de procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 50 ml
Conservation : entre +2 °C et +8 °C
Stérilité : filtré stérile
La solution de D-(+)-glucose (solution de dextrose) est un complément stérile prêt à l'emploi contenant du D-(+)-glucose, un sucre naturel qui joue un rôle central dans le métabolisme cellulaire. Le glucose intervient dans des processus biologiques essentiels tels que la production d'énergie, la glycosylation et la formation de glycanes qui contribuent à la structure et au fonctionnement des cellules.
Application et avantages
Cette solution de glucose est largement utilisée comme supplément dans les milieux de culture cellulaire et dans de nombreuses applications de biologie cellulaire et moléculaire. En tant que principale source de carbone et d'énergie, le glucose favorise la croissance, la prolifération et l'activité métabolique des cellules. Son implication dans les voies biosynthétiques le rend également essentiel au maintien d'une physiologie cellulaire normale et à la cohérence des expériences.
Formulation et utilisation
La solution est fournie à une concentration élevée de 250 g/L de glucose, ce qui permet une dilution flexible dans les milieux de culture en fonction des besoins expérimentaux. Elle est filtrée de manière stérile afin de garantir son adéquation pour les applications sensibles à la contamination. Conserver entre +2 °C et +8 °C et manipuler de manière aseptique afin de préserver la qualité et la stabilité du produit.
À usage exclusif de recherche. Ne pas utiliser dans le cadre de procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 10 ml
Conservation : entre +2 °C et +8 °C
Stérilité : filtré stérile
La solution d'insuline-transferrine-sélénium (ITS) (100x) est un supplément chimiquement défini conçu pour une large gamme d'applications en culture cellulaire. Elle est le plus souvent utilisée comme additif dans les milieux de culture cellulaires de base pour favoriser la croissance cellulaire dans des conditions à faible teneur en sérum ou sans sérum.
Application et avantages
Notre supplément ITS fournit les composants essentiels nécessaires au fonctionnement optimal des milieux sans sérum. En enrichissant les milieux nutritifs conventionnels avec l'ITS, les besoins en sérum fœtal bovin (FBS) pour l'entretien courant de nombreuses lignées cellulaires peuvent être considérablement réduits. Cela permet de minimiser la variabilité associée à l'utilisation du sérum tout en maintenant une croissance et une viabilité cellulaires constantes.
L'insuline favorise l'absorption cellulaire et le métabolisme des nutriments clés, la transferrine facilite le transport du fer et le sélénium contribue à la défense antioxydante et à l'activité enzymatique. Ensemble, ces composants favorisent un métabolisme cellulaire équilibré et une meilleure reproductibilité dans les systèmes de culture définis.
Formulation et utilisation
L'insuline-transferrine-sélénium (ITS) est fournie sous forme de solution concentrée 100x dans une solution saline équilibrée d'Earle (EBSS) sans rouge de phénol. Pour les applications standard, diluer au 1:100 dans le milieu de base approprié afin d'obtenir la concentration de travail recommandée. Conserver entre +2 °C et +8 °C et manipuler dans des conditions aseptiques afin de préserver la stabilité et la stérilité du produit.
À usage exclusif en recherche. Ne pas utiliser dans des procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 5 ml
Conservation : entre +2 °C et +8 °C
Stérilité : filtré stérile
La solution d'insuline humaine recombinante est un complément chimiquement défini couramment utilisé pour la culture de lignées cellulaires de mammifères, notamment les cellules d'ovaire de hamster chinois (CHO). Cette solution de qualité culture cellulaire contient de l'insuline humaine recombinante exprimée dans Saccharomyces cerevisiae, garantissant une grande pureté et des performances constantes dans les applications de recherche.
Applications et avantages
L'insuline est couramment ajoutée aux milieux sans sérum et chimiquement définis pour favoriser la croissance et la productivité cellulaires. En tant qu'hormone régulatrice clé, l'insuline favorise l'absorption, l'utilisation et le stockage cellulaires du glucose, des acides aminés et des acides gras. Elle inhibe également la dégradation du glycogène, des protéines et des lipides, contribuant ainsi à améliorer la viabilité cellulaire et la stabilité métabolique dans les systèmes de culture. La formulation chimiquement définie favorise la reproductibilité et minimise la variabilité dans les protocoles de culture cellulaire sensibles.
Propriétés biologiques et utilisation
L'insuline est une hormone polypeptidique à deux chaînes produite naturellement par les cellules β des îlots pancréatiques. Elle a un poids moléculaire d'environ 5 800 Da. Les chaînes α et β sont reliées par deux liaisons disulfure interchaînes, et la chaîne α contient une liaison disulfure intra-chaîne. Pour les applications de culture cellulaire, la solution doit être manipulée dans des conditions aseptiques et conservée entre +2 °C et +8 °C afin de garantir sa stabilité et ses performances.
À usage exclusif en recherche. Ne pas utiliser dans le cadre de procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 100 ml
Conservation : +2 °C à +8 °C
Stérilité : filtré stérile
La solution de pyruvate de sodium (100 mM) est un supplément stérile prêt à l'emploi conçu pour fournir une source d'énergie supplémentaire facilement accessible aux milieux de culture cellulaire. Le pyruvate de sodium joue un rôle clé dans le métabolisme énergétique cellulaire et favorise la croissance des cellules métaboliquement actives et à prolifération rapide, telles que les cellules tumorales. La supplémentation peut améliorer la viabilité cellulaire et aider à maintenir la stabilité métabolique dans les systèmes de culture.
Application et avantages
Cette solution est largement utilisée dans la culture cellulaire de routine pour enrichir les milieux en pyruvate et favoriser des conditions de croissance optimales. Elle favorise la production d'ATP, peut contribuer à réduire le stress oxydatif et contribue à améliorer les performances métaboliques des cellules cultivées. Fabriqué à partir d'eau de qualité culture cellulaire et filtré de manière stérile, le produit garantit une qualité et une reproductibilité constantes dans les flux de travail de recherche.
Utilisation et compatibilité
La concentration finale recommandée pour la plupart des applications de culture cellulaire est de 1 mM de pyruvate de sodium, obtenue en diluant la solution mère à 100 mM dans un rapport de 1:100 dans un milieu de culture complet. La solution est compatible avec une large gamme de milieux de base et de lignées cellulaires mammifères. Conserver entre +2 °C et +8 °C et protéger de toute contamination afin de maintenir la stabilité du produit.
À usage exclusif pour la recherche. Ne pas utiliser dans le cadre de procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 100 ml Stockage : ≤-15°C Stérilité : Filtration stérile
Lasolution antibiotique/antimycosique (100x) est un concentré stérile, prêt à l'emploi, conçu pour réduire les risques de contamination microbienne dans les cultures cellulaires et les applications de laboratoire connexes. Cette solution 100x contient une combinaison bien établie de pénicilline, de streptomycine et d'amphotéricine B, qui fournit une activité antimicrobienne à large spectre contre les bactéries Gram-positives et Gram-négatives, les levures et les champignons filamenteux. La formulation convient aux cultures de cellules eucaryotes, aux milieux bactériens et à d'autres systèmes sensibles à la contamination, ce qui favorise des opérations de laboratoire propres et cohérentes.
Applications et avantages Optimisée pour les protocoles de recherche de routine, cette solution est largement utilisée pour maintenir des conditions aseptiques dans les flux de culture cellulaire. Elle offre des performances fiables dans les environnements sensibles à la contamination, aidant les chercheurs à réduire le risque de prolifération microbienne sans compromettre la santé des cellules ou la reproductibilité des expériences. La formulation stérile-filtrée élimine le besoin d'étapes de solubilisation supplémentaires, ce qui permet de rationaliser la préparation des milieux et de réduire la variabilité des procédures de laboratoire quotidiennes.
Utilisation et compatibilité Pour obtenir des concentrations de travail standard, diluer la solution au 1:100 dans votre milieu de culture complet. Le produit est compatible avec une large gamme de lignées cellulaires de mammifères et de milieux de base. Grâce à la disponibilité constante des stocks, les chercheurs bénéficient d'une continuité d'approvisionnement fiable et d'une planification logistique simplifiée. La solution doit être conservée à une température ≤ -15 °C et protégée des cycles répétés de congélation-décongélation pour maintenir sa stabilité. Réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
Volume : 100 ml Stockage : +2°C à +8°C Stérilité : Filtré stérilement
MEM Acides aminés non essentiels (100x) est un supplément stérile conçu pour améliorer la croissance et la viabilité des cellules dans les systèmes de culture de cellules de mammifères. La formulation correspond à un concentré 100x des acides aminés non essentiels présents dans le milieu minimum essentiel (MEM) standard, ce qui permet de compléter directement les milieux de base avec une préparation minimale.
Application et avantages Ce supplément fournit un pool d'acides aminés supplémentaires pour les cellules en prolifération rapide ou pour les lignées cellulaires qui ont perdu la capacité de synthétiser de novo les acides aminés non essentiels. En allégeant la charge métabolique de la biosynthèse, il permet d'améliorer la cinétique de croissance, de prolonger la viabilité et d'accroître la cohérence expérimentale, en particulier dans les cultures sensibles aux nutriments ou à haute densité.
Composition et utilisation La solution contient de la glycine, de la L-alanine, de la L-asparagine, de l'acide L-aspartique, de l'acide L-glutamique, de la L-proline et de la L-sérine. Elle est compatible avec les milieux MEM et la plupart des autres milieux standard. Pour l'utiliser, diluer 1:100 dans le milieu de culture final. Ce produit est filtré stérilement et prêt à l'emploi sans manipulation supplémentaire. Réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures diagnostiques ou thérapeutiques. Ne pas utiliser chez l'homme ou l'animal.
- Une alternative douce à la trypsine
Accutase est une solution de détachement cellulaire qui révolutionne l'industrie de la culture cellulaire. Il s'agit d'un mélange d'enzymes protéolytiques et collagénolytiques qui imite l'action de la trypsine et de la collagénase. Contrairement à la trypsine, Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est beaucoup plus doux pour les cellules, ce qui en fait une solution idéale pour le détachement de routine des cellules du matériel plastique de culture tissulaire standard et du matériel plastique à revêtement adhésif. Dans cet article de blog, nous allons explorer les avantages et les utilisations d'Accutase et la façon dont il change la donne dans la culture cellulaire.
Avantages d'Accutase
Accutase présente plusieurs avantages par rapport aux solutions de trypsine traditionnelles. Tout d'abord, il peut être utilisé chaque fois qu'un détachement doux et efficace d'une lignée cellulaire adhérente est nécessaire, ce qui en fait un substitut direct à la trypsine. Deuxièmement, Accutase fonctionne extrêmement bien sur les cellules souches embryonnaires et neuronales, et il a été démontré qu'il maintient la viabilité de ces cellules après le passage. Troisièmement, Accutase préserve la plupart des épitopes pour une analyse ultérieure par cytométrie de flux, ce qui la rend idéale pour l'analyse des marqueurs de la surface cellulaire.
En outre, il n'est pas nécessaire de neutraliser Accutase lors du passage des cellules adhérentes. L'ajout de milieu après la séparation des cellules dilue Accutase de sorte qu'elle n'est plus en mesure de détacher les cellules. Ceci élimine le besoin d'une étape d'inactivation et permet aux techniciens de culture cellulaire de gagner du temps. Enfin, Accutase n'a pas besoin d'être aliquoté et un flacon est stable au réfrigérateur pendant 2 mois.
Applications d'Accutase
Accutase remplace directement la solution de trypsine et peut être utilisé pour le passage des lignées cellulaires. En outre, Accutase donne de bons résultats lors du détachement de cellules pour l'analyse de nombreux marqueurs de surface cellulaire par cytométrie de flux et pour le tri cellulaire. D'autres applications en aval du traitement par Accutase comprennent l'analyse des marqueurs de surface cellulaire, les essais de croissance virale, la prolifération cellulaire, les essais de migration des cellules tumorales, le passage de routine des cellules, l'augmentation de la production (bioréacteur) et la cytométrie de flux.
Composition d'Accutase
Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est un mélange enzymatique naturel avec une activité enzymatique protéolytique et collagénolytique. Il est formulé à une concentration beaucoup plus faible que la trypsine et la collagénase, ce qui le rend moins toxique et plus doux, mais tout aussi efficace.
Efficacité d'Accutase
Accutase s'est avéré efficace pour détacher les cellules primaires et les cellules souches et maintenir une viabilité cellulaire élevée par rapport aux enzymes d'origine animale telles que la trypsine. 100 % des cellules sont récupérées après 10 minutes, et il n'y a aucun inconvénient à laisser les cellules dans Accutase jusqu'à 45 minutes, grâce à l'autodigestion d'Accutase.
En résumé
En conclusion, Accutase est une solution puissante qui change la donne dans le domaine de la culture cellulaire. Grâce à sa nature douce, son efficacité et sa polyvalence, Accutase est l'alternative idéale à la trypsine. Si vous recherchez une solution fiable et efficace pour le détachement cellulaire, Accutase est la solution qu'il vous faut.
Que contient l'EMEM ?
L'EMEM est une version modifiée du milieu minimum essentiel d'Eagle, contenant la solution saline équilibrée d'Earle, des acides aminés non essentiels, de la L-glutamine, du pyruvate de sodium et du bicarbonate de sodium. Il est important de noter que ce niveau de bicarbonate de sodium est destiné à une utilisation dans un air à 5 % de CO2. Pour préserver son efficacité, il est recommandé de conserver le milieu entre 2 °C et 8 °C dans l'obscurité lorsqu'il n'est pas utilisé.
À quoi sert l'EMEM ?
Le milieu minimal essentiel d'Eagle (EMEM) est un milieu de culture cellulaire qui permet de maintenir les cellules en culture tissulaire. Le milieu contient des concentrations plus élevées d'acides aminés, ce qui permet une approximation plus précise de la composition protéique des cellules de mammifères cultivées. L'EMEM peut être utilisé pour cultiver diverses cellules, notamment des fibroblastes, des cellules de la lignée cellulaire du cancer du foie humain (HepG2) et des cellules astrocytaires dérivées de progéniteurs de cerveau fœtal humain (PDA). Il est généralement utilisé en présence de sérum bovin fœtal (FBS), de sérum de veau ou de cheval.
En quoi l'EMEM est-il différent des autres milieux de culture cellulaire ?
Si l'EMEM et le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) présentent certaines similitudes, ils diffèrent également. Les deux milieux sont dépourvus de protéines et contiennent les acides aminés, les sels, le glucose et les vitamines nécessaires pour fournir de l'énergie à une cellule et la maintenir en culture tissulaire. Cependant, la formulation du DMEM est modifiée pour contenir jusqu'à quatre fois plus de vitamines et d'acides aminés et deux à quatre fois plus de glucose que l'EMEM. Il convient de noter que l'EMEM est également différent de la formulation originale du MEM.
Contrôle de la qualité
Filtré stérilement
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +8°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver à 4°C et utiliser dans les 6 à 8 semaines.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Acides aminés
L-Arginine HCl
126.00
L-Cystine 2 HCl
31.30
L-Glutamine
292.00
L-Histidine HClH2O
42.00
L-Isoleucine
52.00
L-Leucine
52.00
L-Lysine HCl
72.50
L-Méthionine
15.00
L-Phénylalanine
32.00
L-Thréonine
48.00
L-Tryptophane
10.00
L-Tyrosine 2 Na 2H2O
51.90
L-Valine
46.00
Vitamines
Chlorure de choline
1.00
Vitamines
D-Pantothénate de calcium
1.00
Acide folique
1.00
myo-Inositol
2.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxal HCl
1.00
Riboflavine
0.10
Thiamine HCl
1.00
Sels inorganiques
CaCl2 2H2O
265.00
Sels inorganiques
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Autres composants
D-Glucose
1000.00
Autres composants
Sel de sodium de phénol rouge
11.00
Les principales caractéristiques du milieu de congélation CM-1 sont les suivantes :
Large compatibilité: Efficace pour une large gamme de types de cellules, y compris les cellules primaires, les cellules souches et les lignées cellulaires établies.
Haute viabilité: Optimisé pour maximiser la récupération et la viabilité des cellules après décongélation, garantissant des résultats expérimentaux fiables.
Prêt à l'emploi: Pratiquement préparé et stérilisé pour une application immédiate, réduisant le temps de préparation et le risque de contamination.
Stabilité améliorée: Maintient des performances constantes dans des conditions de cryoconservation standard, garantissant des résultats reproductibles.
Longue durée de conservation: CM-1 est un milieu de cryoconservation contenant du sérum, prêt à l'emploi, qui peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à un an.
Utilisation du CM-1 pour la congélation des cellules
Pour utiliser le CM-1 pour congeler des cellules adhérentes ou en suspension, suivre les étapes suivantes
Pour les cellules adhérentes, les laver et les dissocier du substrat de culture. Pour les cellules en suspension, passer directement à l'étape suivante.
Compter les cellules pour s'assurer qu'elles ont la bonne concentration.
Centrifuger les cellules pour les culotter, puis les remettre en suspension dans le milieu de congélation CM-1.
Transférer les cellules remises en suspension dans des cryovials.
Utiliser une méthode de congélation lente avant de transférer les cellules pour un stockage à long terme
Méthode de congélation
Description
Etapes
❄️
Congélation manuelle
Méthode progressive impliquant une réduction graduelle de la température pour assurer la viabilité des cellules
1️⃣ Placer les cellules dans un milieu de congélation dans un congélateur à 4°C pendant 40 minutes.
2️⃣ Transférer dans un congélateur à -80°C pendant 24 heures.
3️⃣ Stocker les cellules dans de l'azote liquide pour une conservation à long terme
❄️
Utilisation de Mr. Frosty
Un appareil pratique qui permet de contrôler les taux de congélation sans alimentation électrique
1️⃣ Préparer les cellules dans des cryovials avec du milieu de congélation.
2️⃣ Placer les cryovials dans le récipient Mr. Frosty.
3️⃣ Conserver à -80°C pendant 24 heures avant de les transférer dans l'azote liquide
❄️
Congélateur à débit contrôlé
Un congélateur de haute précision de Thermo Fisher ou d'autres fabricants, conçu pour une réduction contrôlée de la température
1️⃣ Programmer l'appareil pour réduire progressivement la température.
2️⃣ Placer les cellules préparées dans le congélateur.
3️⃣ Après le cycle de congélation, transférer les cellules dans l'azote liquide
Stocker les cryovials à des températures inférieures à -130°C ou dans de l'azote liquide pour une conservation à long terme.
Ingrédients
Contient du FBS, du DMSO, du glucose et des sels
Pouvoir tampon : pH = 7,2 à 7,6
Le milieu de congélation CM-1 de Cytion offre une solution fiable pour la cryoconservation, garantissant une viabilité cellulaire et une fonctionnalité élevées après décongélation pour une large gamme d'applications de recherche.
Le milieu Ham's F-12K (Kaighn's) est soigneusement formulé pour optimiser les conditions de culture cellulaire. Il présente une composition enrichie, fournissant des niveaux élevés de composants essentiels tels que les acides aminés et le pyruvate de sodium, ainsi que des éléments supplémentaires tels que la putrescine, la thymidine, l'hypoxanthine et le zinc. Ces ajouts permettent aux chercheurs de compléter le milieu avec un minimum de sérum ou des composants définis pour des types de cellules spécifiques, facilitant ainsi des conditions expérimentales précises.
Notamment, le milieu Ham's F-12K (Kaighn's) ne contient pas de protéines ni de facteurs de croissance. Par conséquent, il est souvent nécessaire d'ajouter des facteurs de croissance et du sérum bovin fœtal (FBS), ce qui permet aux chercheurs d'adapter le milieu aux exigences de leurs lignées cellulaires spécifiques. Pour une performance optimale, la concentration de FBS doit être soigneusement optimisée pour chaque lignée cellulaire, afin de garantir une croissance et une fonctionnalité optimales.
Pour maintenir un pH physiologique, le milieu Ham's F-12K (Kaighn's) utilise un système tampon de bicarbonate de sodium (2,5 g/L), ce qui nécessite un environnement contrôlé de 5 à 10 % de CO2 pendant la culture. Cela garantit que le pH du milieu reste dans la plage idéale pour la croissance et la viabilité des cellules
Contrôle de qualité
pH = 7,2 +/
- 0,02 à 20-25°C.
Chaque lot a été testé pour la stérilité et l'absence de mycoplasmes et de bactéries.
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. La congélation et le réchauffement jusqu'à +37°C réduisent la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu à plus de 37°C ou utiliser des sources de chaleur incontrôlables (par exemple, des appareils à micro-ondes).
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, retirez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante.
La durée de conservation de tous les milieux, à l'exception du milieu de base, est de 8 semaines à compter de la date de fabrication.
Composition
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de calcium x 2H2O
135,24
Sulfate de cuivre(II) x 5H2O
0,00
Sulfate de fer (II) x 7H2O
0,83
Chlorure de magnésium x 6H2O
105,72
Sulfate de magnésium x 7H2O
394,49
Chlorure de potassium
283,29
Phosphate de potassium dihydrogène
58,52
Chlorure de sodium
7597,20
hydrogénophosphate de di-sodiumanhydre
115,02
Sulfate de zinc x 7H2O
0,14
Autres composants
D(+)-Glucose anhydre
1260,00
Hypoxanthine
4,08
Acide DL-α-Lipoïque
0,21
Rouge de phénol
3,00
Putrescine x 2HCl
0,32
Pyruvate de sodium
220,00
NaHCO3
2500,00
Thymidine
0,73
Acides aminés
L-Alanine
17,82
L-Arginine x HCl
421,40
L-Asparagine x H2O
30,02
Acide L-aspartique
26,62
L-Cystéine x HCl x H2O
70,24
L-Glutamine
292,20
Acide L-Glutamique
29,42
Glycine
15,01
L-Histidine x HCl x H2O
41,92
L-Isoleucine
7,87
L-Leucine
26,24
L-Lysine x HCl
73,04
L-Méthionine
8,95
L-Phénylalanine
9,91
L-Proline
69,06
L-Sérine
21,02
L-Thréonine
23,82
L-Tryptophane
4,08
L-Tyrosine
10,87
L-Valine
23,42
Vitamines
D(+)-Biotine
0,07
D-Pantothénate de calcium
0,48
Chlorure de choline
13,96
Acide folique
1,32
myo-Inositol
18,02
Nicotinamide
0,04
Pyridoxine x HCl
0,06
Riboflavine
0,04
Thiamine x HCl
0,34
Vitamine B12
1,36
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon largement utilisée dans la recherche biologique et chimique. Elle joue un rôle crucial dans le maintien de l'équilibre du pH et de l'osmolarité au cours de diverses procédures expérimentales, y compris le traitement des tissus et la culture cellulaire. Notre solution PBS est méticuleusement formulée avec des ingrédients de haute pureté afin de garantir la stabilité et la fiabilité de chaque expérience. L'osmolarité et les concentrations d'ions de notre PBS imitent étroitement celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.
Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient :
8000 mg/L de chlorure de sodium (NaCl)
200 mg/L Chlorure de potassium (KCl)
1150 mg/L phosphate de sodium dibasique anhydre (Na2HPO4)
200 mg/L Phosphate de potassium monobasique anhydre (KH2PO4)
Cette composition assure un pH et un équilibre ionique optimaux, convenant à une large gamme d'applications biologiques.
Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour diverses applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent appropriée pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Les solutions PBS contenant de l'EDTA sont efficaces pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, les métaux divalents tels que le zinc ne doivent pas être ajoutés au PBS, car ils peuvent provoquer une précipitation. Dans ce cas, les tampons Good's sont recommandés. En outre, notre solution PBS est une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage des virus à ARN, y compris le SARS-CoV-2.
Contrôle de la qualité
Filtré stérilement
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +25°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver entre 2°C et 25°C et utiliser dans les 24 mois.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Sels
Chlorure de potassium
200
Phosphate de potassium monobasique anhydre
200
Chlorure de sodium
8000
Phosphate de sodium dibasique anhydre
1150
Initialement conçu pour favoriser la croissance de cellules leucémiques humaines en suspension et en monocouche, le milieu RPMI 1640 a évolué au fil des modifications apportées par les chercheurs et les fournisseurs commerciaux pour convenir à une gamme variée de cellules de mammifères. Il est exceptionnellement compatible avec des lignées cellulaires telles que HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes et carcinomes.
Le milieu RPMI 1640 se distingue des autres milieux de culture cellulaire par sa composition unique. Il contient une quantité substantielle de phosphate, d'acides aminés et de vitamines. Il contient notamment de la biotine, de la vitamine B12 et du PABA, absents du milieu minimal essentiel d'Eagle ou du milieu modifié d'Eagle de Dulbecco. En outre, le milieu RPMI 1640 présente des concentrations significativement élevées de vitamines inositol et choline. Cependant, il ne contient pas de protéines, de lipides ou de facteurs de croissance. Par conséquent, une supplémentation avec 10% de sérum bovin fœtal (FBS) est généralement nécessaire pour fournir des conditions optimales pour la croissance des cellules.
Le système tampon du milieu RPMI 1640 repose sur le bicarbonate de sodium et nécessite un environnement de 5 à 10 % de CO2 pour maintenir un pH physiologiquement approprié. L'inclusion d'un agent réducteur, le glutathion, distingue encore davantage ce milieu des autres.
Contrôle de la qualité
Filtré stérilement
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +8°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver à 4°C et utiliser dans les 6-8 semaines.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Acides aminés
Glycine
10.00
L-Alanyl-L-Glutamine
434.40
L-Arginine
200.00
L-AsparagineH2O
56.82
Acide L-Aspartique
20.00
L-Cystine 2HCl
65.20
Acide L-Glutamique
20.00
L-Histidine HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Proline
20.00
L-Isoleucine
50.00
L-Leucine
50.00
L-Lysine HCl
40.00
L-Méthionine
15.00
L-Phénylalanine
15.00
L-Proline
20.00
L-Sérine
30.00
L-Thréonine
20.00
L-Tryptophane
5.00
L-Tyrosine 2Na 2H2O
28.83
L-Valine
20.00
Vitamines
acide p-amino-benzoïque
1.00
D-Biotine
0.20
Chlorure de choline
3.00
D-Pantothénate de calcium
0.25
Acide folique
1.00
myo-Inositol
35.00
Nicotinamide
1.00
Pyridoxine HCl
1.00
Riboflavine
0.20
Thiamine HCl
1.00
Vitamine B12
0.005
Sels inorganiques
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Autres composants
D-Glucose
2000.00
L-Glutathion réduit
1.00
Sel de sodium du rouge de phénol
5.30
Cette formulation unique combine le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et le Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) dans un rapport précis de 1:1. L'ajout de L-glutamine améliore encore sa composition.
Le DMEM, dérivé de l'Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), offre une concentration accrue d'acides aminés et de vitamines par rapport à son prédécesseur. En revanche, Ham's F-12 est basé sur le milieu Ham's F-10, fournissant un ensemble complémentaire de composants essentiels.
Pour favoriser une croissance cellulaire optimale, il est courant de compléter le DMEM:Ham's F12 par de la FBS à une concentration typique de 5 à 10 %. Cet ajout est nécessaire car le milieu manque d'hormones de croissance, de lipides et de protéines cruciales pour le développement cellulaire.
Le DMEM:Ham's F12 comprend un système tampon de pH et est souvent complété par du rouge de phénol, un indicateur de pH. Les cellules cultivées dans le DMEM:Ham's F12, ou tout autre milieu utilisant le système de tampon bicarbonate, nécessitent un environnement contrôlé en CO2 de 5 à 10 % pour maintenir des niveaux de pH appropriés.
Contrôle de la qualité
Stérile-filtré
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +8°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver à 4°C et utiliser dans les 6-8 semaines.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Acides aminés
Glycine
18.75
L-Alanine
4.45
L-Arginine HCl
147.50
L-Asparagine H₂O
7.50
Acide L-Aspartique
6.65
L-Cystéine HCl H₂O
17.56
L-Cystine 2 HCl
31.29
Acide L-Glutamique
7.35
L-Glutamine
365.00
L-Histidine HCl H₂O
31.48
L-Isoleucine
54.47
L-Leucine
59.05
L-Lysine HCl
91.25
L-Méthionine
17.24
L-Phénylalanine
35.48
L-Proline
17.25
L-Sérine
26.25
L-Thréonine
53.45
L-Tryptophane
9.02
L-Tyrosine sel disodique
48.10
L-Valine
52.85
Vitamines
D-Biotine
0.0035
Chlorure de choline
8.98
D-Pantothénate de calcium
2.24
Acide folique
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamide
2.02
Pyridoxine HCl
0.031
HCl de pyridoxal
2.00
Riboflavine
0.219
Thiamine HCl
2.17
Vitamine B12
0.68
Sels inorganiques
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Autres composants
D-Glucose
3151.00
Hypoxanthine
2.40
HEPES
3574.50
Acide linoléique
0.042
Acide lipoïque
0.105
Sel de sodium du rouge de phénol
8.63
Putrescine 2 HCl
0.081
Pyruvate de sodium
55.00
Thymidine
0.365
- 0,02 à 20-25 °C. Chaque lot a été testé pour vérifier sa stérilité et l'absence de mycoplasmes et de bactéries. Conservation Conserver au réfrigérateur entre +2 °C et +8 °C, à l'abri de la lumière. La congélation et le réchauffement à +37 °C réduisent la qualité du produit. Ne pas chauffer le milieu à plus de 37 °C ni utiliser de sources de chaleur incontrôlables (par exemple, des appareils à micro-ondes). Si seule une partie du milieu doit être utilisée, prélevez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante. La durée de conservation de tous les milieux, à l'exception du milieu de base, est de 6 à 8 semaines à compter de la date d'ouverture. Composition Composants mg/L Sels inorganiquesChlorure de calcium x 2H2O132,00 Sulfate de magnésium97,67 Chlorure de potassium400 Chlorure de sodium6 460,00 Hydrogénophosphate disodique (anhydre)504,00 Autres composantsD(+)-Glucose (anhydre)3 000 Glutathion (réduit)0,5 Peptone de viande600,00 Sel de sodium du rouge de phénol11 Acides aminésL-alanine13,36 L-arginine x HCl42,14 L-asparagine x H2O45,03 Acide L-aspartique19,97 L-Cystéine x HCl x H2O31,75 L-glutamine (stable)219,15 Acide L-glutamique22,07 Glycine7,51 L-histidine x HCl x H2O20,96 L-hydroxyproline19,67 L-isoleucine39,36 L-leucine39,36 L-lysine x HCl36,54 L-méthionine14,92 L-phénylalanine16,52 L-proline17,27 L-sérine26,28 L-thréonine17,87 L-tryptophane3,06 Sel disodique de L-tyrosine26,10 L-Valine17,57 VitaminesAcide p-aminobenzoïque1,00 Acide ascorbique0,56 D(+)-Biotine0,20 D-pantothénate de calcium0,20 Chlorure de choline5,00 Acide folique10 Myo-inositol36,00 Nicotinamide0,5 Acide nicotinique0,5 Chlorhydrate de pyridoxal0,50 Chlorhydrate de pyridoxine0,50 Riboflavine0,20 Chlorhydrate de thiamine0,20 Vitamine B122,00
Le milieu 199 offre une gamme d'applications dans ce domaine. Il peut maintenir efficacement le complexe cumulus-ovocyte (COC) et soutenir la maturation in vitro des ovocytes. En outre, il est utilisé pour le rinçage des lignes d'aspiration lors de la collecte d'ovules de vaches Holstein allemandes. De plus, le milieu 199 est un excellent milieu pour la culture de cellules endothéliales cardiaques provenant de rats. Ces applications démontrent la polyvalence et l'adaptabilité du milieu 199 à divers besoins expérimentaux.
Historique
La mise au point du milieu 199 dans les années 1950 a marqué un progrès important dans le domaine des milieux de culture tissulaire. Avant son introduction, de nombreux milieux de culture reposaient sur des produits d'origine animale et des extraits de tissus. Cependant, Morgan et ses collègues ont révolutionné le domaine en formulant une source nutritionnelle entièrement définie pour les cultures cellulaires. Grâce à leurs expériences impliquant différentes combinaisons de vitamines, d'acides aminés et d'autres facteurs, ils ont découvert les propriétés exceptionnelles de stimulation de la croissance du milieu 199.
Contrôle de qualité
pH = 7,2 +/
- 0,02 à 20-25°C.
Chaque lot a été testé pour la stérilité et l'absence de mycoplasmes et de bactéries.
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. La congélation et le réchauffement jusqu'à +37°C réduisent la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu à plus de 37° C ou utiliser des sources de chaleur incontrôlables (par exemple, des appareils à micro-ondes).
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, retirez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante.
La durée de conservation de tout milieu, à l'exception du milieu de base, est de 8 semaines à compter de la date de fabrication.
Composition
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de calcium x 2H2O
264,92
Nitrate de fer (III) x 9H2O
0,72
Sulfate de magnésium
97,67
Chlorure de potassium
400,00
Acétate de sodium x 3H2O
82,95
Chlorure de sodium
6,800.00
Dihydrogénophosphate de sodium x H2O
140,00
Autres composants
Sulfate d'adénine
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholestérol
0,20
2'-Désoxyribose
0,50
D(+)-Glucose anhydre
1,000.00
Glutathion (rouge)
0,05
Guanine x HCl
0,30
Hypoxanthine
0,30
Phénol rouge
10,00
D-Ribose
0,50
Thymine
0,30
Tween 80
4,90
Uracile
0,30
Xanthine
0,30
NaHCO3
2,200.00
Acides aminés
L-Alanine
25,00
L-Arginine x HCl
70,00
Acide L-Aspartique
30,00
L-Cystéine x HCl x H2O
0,10
L-Cystine
20,00
L-Glutamine stable
149,00
Acide L-Glutamique
67,00
Glycine
50,00
L-Histidine x HCl x H2O
21,88
L-Hydroxyproline
10,00
L-Isoleucine
20,00
L-Leucine
60,00
L-Lysine x HCl
70,00
L-Méthionine
15,00
L-Phénylalanine
25,00
L-Proline
40,00
L-Sérine
25,00
L-Thréonine
30,00
L-Tryptophane
10,00
L-Tyrosine
40,00
L-Valine
25,00
Vitamines
acide 4-Amino benzoïque
0,05
Acide ascorbique
0,05
D(+)-Biotine
0,01
Calciférol
0,10
D-Pantothénate de calcium
0,01
Chlorure de choline
0,50
Acide folique
0,01
myo-Inositol
0,05
Ménadione
0,01
Acide nicotinique
0.025
Nicotinamide
0.025
Pyridoxal x HCl
0.025
Pyridoxol x HCl
0.025
Riboflavine
0,01
Sel disodique de DL-α-Tocophérol phosphate
0,01
Thiamine x HCl
0,01
Vitamine A acétate
0,14
L'IMDM est bien adapté aux cultures cellulaires à haute densité et à prolifération rapide, notamment les cellules Jurkat, COS-7 et les macrophages. Les différentes modifications de l'IMDM disponibles pour une gamme d'applications de culture cellulaire peuvent être trouvées en utilisant l'outil de sélection des milieux. Les milieux liquides fournissent des nutriments essentiels pour toutes les applications de culture cellulaire. Chacun de nos milieux de culture cellulaire de haute qualité est fabriqué selon la formule initialement publiée ou selon les modifications nécessaires à la performance et à la stabilité du milieu de culture.
IMDM vs. DMEM
L'IMDM contient du nitrate de potassium au lieu du nitrate ferrique, de l'HEPES et du pyruvate de sodium. Les composants supplémentaires de l'IMDM le rendent plus adapté aux types de cellules spécialisées et aux applications spécifiques que le DMEM.
IMDM vs. RPMI
L'IMDM et le RPMI ont des formulations différentes qui peuvent être pertinentes pour la stimulation PMA/ionomycine. Une différence significative est la concentration de Ca2+. Alors que le RPMI contient 0,42 mM de Ca2+, l'IMDM en contient 1,49 mM.
Contrôle de qualité
pH = 7,2 +/
- 0,02 à 20-25°C.
Chaque lot a été testé pour la stérilité et l'absence de mycoplasmes et de bactéries.
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. La congélation et le réchauffement jusqu'à +37°C réduisent la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu à plus de 37° C ou utiliser des sources de chaleur incontrôlables (par exemple, des appareils à micro-ondes).
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, retirez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante.
La durée de conservation de tout milieu, à l'exception du milieu de base, est de 8 semaines à compter de la date de fabrication.
Composition
Composants
mg/L
Sels inorganiques
Chlorure de calcium x 2 H2O
219,00
Chlorure de potassium
330,00
Nitrate de potassium
0.076
Sulfate de magnésium anhydre
97,73
Chlorure de sodium
4,505.00
Dihydrogénophosphate de sodium anhydre
109,00
Sélénite de sodium
0,02
Autres composants
D(+)-Glucose anhydre
4,500.00
HEPES
5,958.00
Pyruvate de sodium
110,00
Rouge de phénol
15,00
Acides aminés
L-Alanine
25,00
L-Arginine x HCl
84,00
L-Asparagine x H2O
25,00
Acide L-aspartique
30,00
L-Cystine x 2HCl
91,24
L-Glutamine
584,00
Acide L-Glutamique
75,00
Glycine
30,00
L-Histidine x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucine
104,80
L-Leucine
104,80
L-Lysine x HCl
146,20
L-Méthionine
30,00
L-Phénylalanine
66,00
L-Proline
40,00
L-Sérine
42,00
L-Thréonine
95,20
L-Tryptophane
16,00
L-Tyrosine x 2Na
104,20
L-Valine
93,60
Vitamines
D(+)-Biotine
0.013
D-Pantothénate de calcium
4,00
Chlorure de choline
4,00
Acide folique
4,00
myo-Inositol
7,20
Milieux de culture cellulaire : Une vue d'ensemble
Dans le domaine des sciences de la vie, l'une des méthodologies les plus importantes est la culture cellulaire. L'expression "culture cellulaire" désigne le prélèvement de cellules, de tissus ou d'organes sur un animal ou une plante et l'implantation ultérieure de ces cellules, tissus ou organes dans un environnement artificiel favorable à leur survie et/ou à leur croissance Les besoins environnementaux fondamentaux pour un développement cellulaire optimal sont une température contrôlée, un substrat pour la fixation des cellules, un milieu de croissance adéquat et un incubateur qui maintient un pH et une osmolalité optimaux. Les cellules doivent bénéficier de ces conditions pour se développer au maximum de leur potentiel.
La sélection d'un milieu de croissance adéquat pour la culture in vitro est l'étape de la culture cellulaire qui est à la fois la plus critique et la plus vitale. Un milieu de croissance, également appelé milieu de culture, est un liquide ou un gel formulé pour favoriser le développement des organismes à l'échelle microscopique, cellulaire ou végétale. Le milieu utilisé pour la culture des cellules contient souvent un apport adéquat d'énergie et de substances qui contrôlent le cycle cellulaire. Les principaux composants d'un milieu de culture sont les acides aminés, les vitamines, les sels inorganiques, le glucose et le sérum. Le sérum est ajouté au milieu car il constitue une source de facteurs de croissance, d'hormones et de facteurs d'attachement. Outre l'apport de nutriments, le milieu contribue également au maintien des niveaux de pH et d'osmolalité.
Types de milieux utilisés en culture cellulaire
Les cellules humaines et animales peuvent être cultivées soit dans un milieu artificiel ou synthétique, soit dans un milieu entièrement naturel complété par des éléments naturels. Dans ce qui suit, nous vous donnons un aperçu des différents types de milieux actuellement disponibles.
Milieu naturel
Seuls les fluides biologiques existant à l'état naturel peuvent être trouvés dans les milieux naturels. Les milieux naturels sont très utiles et faciles pour la culture d'une grande variété de types de cellules animales. Le manque de compréhension des composants précis qui constituent les milieux naturels est le principal facteur contribuant à la faible répétabilité des résultats obtenus en utilisant les milieux naturels.
Milieux artificiels
La préparation de milieux artificiels ou synthétiques implique l'ajout de nutriments (organiques et inorganiques), de protéines sériques, d'hydrates de carbone, de cofacteurs, de vitamines et de sels, ainsi que de phases gazeuses d'O2 et de CO2 [1].
Différents types de milieux artificiels ont été développés pour remplir une ou plusieurs des fonctions suivantes : 1) Survie immédiate (une solution saline équilibrée avec un pH et une pression osmotique précis). 2) Survie prolongée (une solution saline équilibrée complétée par différentes formulations de produits chimiques organiques et/ou de sérum). 3) Développement indéfini. 4) Fonctions spécialisées.
Il existe quatre classifications distinctes pour les milieux artificiels :
Milieux contenant du sérum
Le type de supplément le plus fréquent dans les milieux utilisés pour la culture de cellules animales est le sérum bovin fœtal. Il est ajouté au milieu de culture en tant que supplément peu coûteux afin d'obtenir les meilleures conditions de croissance possibles. Outre son rôle de transporteur ou de chélateur pour les nutriments instables ou insolubles dans l'eau, les hormones et les facteurs de croissance, les inhibiteurs de protéase et d'autres substances, le sérum lie et neutralise les molécules nocives.
Milieu sans sérum
La présence de sérum dans les milieux présente un certain nombre d'inconvénients et peut entraîner des erreurs d'interprétation majeures dans la recherche immunologique [2, 3]. Différents milieux sans sérum ont été créés [4, 5]. Ces milieux sont généralement formulés spécifiquement pour favoriser la culture d'un seul type de cellule, comme le Knockout Serum Replacement et le Knockout DMEM de Thermo Fisher Scientific, et le milieu mTESR de Stem Cell Technologies [6], pour les cellules souches [7].
En outre, ces milieux incorporent des quantités définies de facteurs de croissance purifiés, de lipoprotéines et d'autres protéines, qui sont généralement fournies par le sérum [8]. Ces milieux sont souvent appelés "milieux culturels définis" car leurs composants sont bien connus.
Milieux chimiquement définis
Ces milieux comprennent des composants inorganiques et organiques ultra-purs qui n'ont été contaminés par aucun type de contamination. Ils peuvent également comprendre des ajouts de protéines pures, telles que des facteurs de croissance.
la modification génétique des bactéries ou des levures, ainsi que l'ajout d'acides gras, de vitamines, de cholestérol et d'acides aminés particuliers, aboutissent à la production de leurs composants [9].
Milieux sans protéines
Les milieux sans protéines sont ceux qui ne contiennent aucune protéine, mais uniquement des éléments non protéiques. Par rapport aux milieux contenant du sérum, les milieux sans protéines favorisent la prolifération cellulaire et l'expression des protéines et facilitent la purification de tout produit généré dans un processus en aval [10-12]. Les protéines ne sont pas incluses dans les préparations telles que MEM et RPMI-1640. Toutefois, un supplément de protéines peut être administré si cela s'avère nécessaire.
Le milieu de culture et ses composants de base
Les milieux de culture commerciaux peuvent être achetés sous forme de poudre ou de liquide et comprennent souvent une variété de nutriments tels que des acides aminés, du glucose, des sels, des vitamines et d'autres compléments alimentaires.
Les besoins en ces composants sont différents pour chaque lignée cellulaire, et ces variations sont à l'origine du grand nombre de formulations différentes de milieux. Chaque composant est responsable d'une certaine fonction, qui sera décrite dans les paragraphes suivants :
Systèmes tampons
Pour maintenir des conditions de croissance optimales, le pH doit être contrôlé, ce qui est souvent fait par l'un des deux systèmes tampons suivants :
Système tampon naturel
Le rapport CO2/H2CO3 dans l'atmosphère est égal à celui du milieu, ce qui crée un mécanisme tampon naturel. Afin de préserver leur mécanisme tampon naturel, les cultures doivent être maintenues dans un environnement atmosphérique contenant 5 à 10 % de CO2, ce qui est souvent réalisé à l'aide d'un incubateur à CO2. L'un des avantages de l'utilisation d'un tampon naturel est qu'il est bon marché et sûr.
HEPES
Le tamponnage chimique à l'aide du zwitterion HEPES a une plus grande capacité de tamponnage dans la plage de pH de 7,2 à 7,4 et n'a pas besoin d'un environnement gazeux réglementé. Pour certains types de cellules, une dose plus importante d'HEPES peut être nocive. Les milieux contenant de l'HEPES sont également beaucoup plus sensibles aux effets phototoxiques de la lumière fluorescente [13].
Rouge de phénol
L'indicateur de pH, le rouge de phénol, est souvent inclus dans les milieux de culture disponibles dans le commerce, ce qui permet un contrôle continu du pH. En faisant grossir les cellules, les métabolites produits par ces cellules provoquent un changement de pH et donc un changement de couleur du milieu. Le rouge de phénol a un double effet sur la couleur du milieu : il le rend jaune à un pH acide et violet à un pH alcalin. Le pH 7,4, la valeur optimale pour la culture cellulaire, fait apparaître le milieu en rouge fluorescent.
Le rouge de phénol présente toutefois quelques inconvénients : Tout d'abord, le rouge de phénol est capable de simuler la performance d'un certain nombre d'hormones stéroïdiennes, principalement les œstrogènes [14]. Par conséquent, il est recommandé d'utiliser un milieu exempt de rouge de phénol lors de l'étude de cellules sensibles aux œstrogènes, comme le tissu mammaire. L'équilibre sodium-potassium est perturbé par la présence de rouge de phénol dans plusieurs formulations sans sérum. L'ajout de sérum ou d'hormone hypophysaire bovine au milieu peut contrecarrer cet effet [15]. Troisièmement, la détection dans les expériences de cytométrie de flux est entravée par la présence de rouge de phénol.
Sels inorganiques
Les milieux contenant des sels inorganiques, tels que les ions sodium, potassium et calcium, contribuent à maintenir l'équilibre osmotique et à réguler le potentiel membranaire.
Acides aminés
Les acides aminés étant les composants fondamentaux des protéines, ils sont un élément essentiel de tous les milieux de croissance cellulaire jamais conçus. Les cellules étant incapables de produire elles-mêmes certains acides aminés, il est important que le milieu de culture contienne des acides aminés essentiels. Ils sont nécessaires à la prolifération des cellules et leur concentration détermine la densité cellulaire maximale qui peut être atteinte. En particulier, la L-glutamine, un acide aminé essentiel, est particulièrement cruciale.
La L-glutamine fonctionne comme une source secondaire d'énergie pour le métabolisme et contribue à la production de NAD, de NADPH et de nucléotides. Étant donné que la L-glutamine est un acide aminé instable qui, avec le temps, se transforme en une forme que les cellules ne peuvent pas utiliser, elle doit être apportée au milieu.
En outre, des acides aminés non essentiels peuvent être apportés au milieu afin de réapprovisionner ceux qui ont été utilisés au cours du processus de croissance. La croissance des cellules est stimulée et leur viabilité est accrue lorsque le milieu de croissance est supplémenté en acides aminés non essentiels.
Glucides
Les hydrates de carbone sous forme de sucres sont la principale source d'énergie. De nombreux milieux de culture contiennent du maltose et du fructose en plus des sucres plus courants que sont le glucose et le galactose.
Protéines et peptides
L'albumine, la transferrine et la fibronectine sont les protéines et les peptides les plus couramment utilisés. Ils sont particulièrement importants dans les milieux qui ne contiennent pas de sérum. L'albumine, la transferrine, l'aprotinine, la fétuine et la fibronectine sont quelques-unes des protéines que l'on peut trouver dans le sérum, qui est une source riche en protéines.
L'albumine est la principale protéine du sang et sa fonction est de lier et de transporter diverses substances, y compris l'eau, les sels, les acides gras libres, les hormones et les vitamines, entre les différents organes et cellules. La capacité de l'albumine à se lier aux produits chimiques en fait un candidat efficace pour éliminer les composés nocifs du milieu dans lequel les cellules sont cultivées.
L'aprotinine est un agent protecteur dans les systèmes de culture cellulaire, car elle est stable aux pH neutres et acides, et résiste aux températures élevées et à la destruction causée par les enzymes protéolytiques. Elle est capable d'inhiber un certain nombre de protéases à sérine, dont la trypsine, entre autres.
La fétuine est une glycoprotéine qui peut être détectée en plus grande quantité dans le sérum des fœtus et des nouveau-nés que dans le sérum des adultes. En outre, elle agit comme un inhibiteur de protéase à sérine. La protéine fibronectine est un composant essentiel dans le processus d'adhésion cellulaire. La transferrine est une protéine qui transporte le fer et qui est responsable de l'apport de fer aux membranes des cellules.
Acides gras et lipides
Ils jouent un rôle crucial dans le milieu sans sérum en cas d'absence de sérum.
Les vitamines
De nombreuses vitamines sont nécessaires au développement et à la prolifération des cellules. Les vitamines ne peuvent pas être produites en quantités suffisantes par les cellules et sont donc essentielles dans la culture de tissus en tant que compléments alimentaires.
Dans la culture cellulaire, le sérum est la principale source de vitamines ; cependant, les milieux sont également traités avec diverses vitamines pour les adapter à un type de cellule spécifique. Le plus souvent, les vitamines du groupe B sont utilisées pour stimuler la croissance.
Oligo-éléments
Les éléments chimiques tels que le cuivre, le zinc, le sélénium et les intermédiaires d'acide tricarboxylique sont connus sous le nom d'oligo-éléments. Les oligo-éléments sont souvent ajoutés aux milieux qui ne contiennent pas de sérum afin de remplacer ceux qui sont généralement présents dans le sérum. Ces éléments sont des composants chimiques importants qui sont nécessaires au bon développement des cellules. De nombreuses réactions biochimiques dépendent de certains micronutriments, comme l'activité enzymatique.
Suppléments au milieu
Le milieu de croissance complet proposé pour certaines lignées cellulaires nécessite des composants supplémentaires qui sont absents du milieu de base et du sérum. Ces compléments alimentaires soutiennent la croissance cellulaire et les fonctions métaboliques appropriées.
Bien que les hormones, les facteurs de croissance et les molécules de signalisation soient essentiels à la prolifération appropriée de certaines lignées cellulaires, les précautions suivantes doivent toujours être prises : L'ajout de suppléments pouvant modifier l'osmolalité du milieu de croissance complet, ce qui peut inhiber le développement cellulaire, il est toujours conseillé de vérifier l'osmolalité après l'ajout de suppléments. Pour la majorité des lignées cellulaires, l'osmolalité optimale se situe entre 260 et 320 mOSM/kg.
Antibiotiques
Les antibiotiques sont souvent utilisés pour inhiber le développement de polluants bactériens et fongiques [16], bien qu'ils ne soient pas essentiels à la croissance cellulaire. Comme les antibiotiques peuvent dissimuler une contamination par des mycoplasmes et des bactéries résistantes, leur utilisation systématique n'est pas recommandée pour la culture cellulaire [17, 18].
En outre, les antibiotiques peuvent perturber le métabolisme des cellules hypersensibles. Les combinaisons pénicilline-streptomycine fabriquées par MilliporeSigma et Life Technologies sont souvent utilisées. La plasmocine a été utilisée dans la culture des lignées cellulaires de gliome TS603, TS516 et BT260 [19], et elle s'est avérée efficace pour éliminer la contamination par les mycoplasmes (20).
Sérum
Les albumines, les facteurs de croissance et les inhibiteurs de croissance sont tous présents dans le sérum. Le sérum est l'un des composants les plus importants du milieu de culture cellulaire car il fournit des acides aminés, des protéines, des vitamines (en particulier des vitamines liposolubles telles que A, D, E et K), des hydrates de carbone, des lipides, des hormones, des facteurs de croissance, des minéraux et des oligo-éléments.
Le sérum fœtal et le sérum de veau bovin sont souvent utilisés pour favoriser le développement des cellules cultivées. Le sérum fœtal est une source abondante de facteurs de croissance et convient au clonage cellulaire et au développement de cellules sensibles. En raison de ses capacités réduites de promotion de la croissance, le sérum de veau est utilisé dans les expériences d'inhibition de contact. Les milieux de croissance normaux contiennent souvent de 2 à 10 % de sérum. L'ajout de sérum au milieu de culture répond aux objectifs suivants [21] :
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Le sérum fournit les nutriments essentiels aux cellules (à la fois en solution et attachés aux protéines).
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Plusieurs facteurs de croissance et hormones impliqués dans la promotion de la croissance et l'activité cellulaire spécialisée sont inclus dans le sérum.
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Il contient de nombreuses protéines de liaison, comme l'albumine et la transferrine, qui transportent d'autres substances chimiques dans la cellule. Par exemple, l'albumine transporte les graisses, les vitamines, les hormones, etc. dans les cellules.
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Elle fournit également des protéines, telles que la fibronectine, qui augmentent l'adhésion des cellules au substrat. En outre, elle produit des éléments d'étalement qui favorisent l'expansion cellulaire avant la division.
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Elle fournit des inhibiteurs de protéase qui empêchent la protéolyse dans les cellules.
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Il contient également des minéraux tels que Na+, K+, Zn2+ et Fe2+.
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Il augmente la viscosité du milieu, protégeant ainsi les cellules des lésions mécaniques lors de l'agitation des cultures en suspension.
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C'est également un tampon.
Références
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[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapid adsorption of a foetal calf serum component by mammalian cells in culture. A potential source of artifacts in studies of antisera to cell-specific antigens. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Addition of serum to the medium used for preparation of cell suspensions as a possible source of artefacts in cell-mediated reactions studied by means of the popliteal lymph node test. J Immunogenet. 1980;7:483-9
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[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficacité du Plasmocin™ sur diverses lignées cellulaires de mammifères infectées par des mollicutes en comparaison avec des antibiotiques couramment utilisés dans la culture cellulaire : une expérience locale. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Aspects moléculaires de la liaison des ligands à l'albumine sérique. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53