DMEM:Ham's F12 (1:1), w : 3.1 g/L Glucose, w : 1.6 mM L-Glutamine, w : 15 mM HEPES, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium, w : 1.2 g/L NaHCO3
Le DMEM:Ham's F12 est un milieu de base largement reconnu et utilisé dans la culture cellulaire pour la recherche biologique. Il constitue une source fondamentale de nutriments pour la croissance de diverses lignées cellulaires de mammifères, en particulier lorsqu'il est complété par du sérum bovin fœtal (FBS).
Cette formulation unique combine le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et le Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) dans un rapport précis de 1:1. L'ajout de L-glutamine améliore encore sa composition.
Le DMEM, dérivé de l'Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), offre une concentration accrue d'acides aminés et de vitamines par rapport à son prédécesseur. En revanche, Ham's F-12 est basé sur le milieu Ham's F-10, fournissant un ensemble complémentaire de composants essentiels.
Pour favoriser une croissance cellulaire optimale, il est courant de compléter le DMEM:Ham's F12 par de la FBS à une concentration typique de 5 à 10 %. Cet ajout est nécessaire car le milieu manque d'hormones de croissance, de lipides et de protéines cruciales pour le développement cellulaire.
Le DMEM:Ham's F12 comprend un système tampon de pH et est souvent complété par du rouge de phénol, un indicateur de pH. Les cellules cultivées dans le DMEM:Ham's F12, ou tout autre milieu utilisant le système de tampon bicarbonate, nécessitent un environnement contrôlé en CO2 de 5 à 10 % pour maintenir des niveaux de pH appropriés. Le rouge de phénol permet de surveiller les changements de pH de 6,2 (jaune) à 8,2 (rouge).
Contrôle de la qualité
- pH = 7,2 +/- 0,02 à 20-25°C.
- Chaque lot a été testé pour la stérilité et l'absence de mycoplasmes et de bactéries.
Entretien
- Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. La congélation et le réchauffement jusqu'à +37°C réduisent la qualité du produit.
- Ne pas chauffer le milieu à plus de 37°C ou utiliser des sources de chaleur incontrôlables (par exemple, des appareils à micro-ondes).
- Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, retirez cette quantité du flacon et réchauffez-la à température ambiante.
- La durée de conservation de tout milieu, à l'exception du milieu de base, est de 8 semaines à compter de la date de fabrication.
Composition
Composants | mg/L | |
Sels inorganiques | Chlorure de calcium x 2H2O | 154,45 |
Nitrate de fer(III) x 9H2O | 0,05 | |
Sulfate de fer(II) x 7H2O | 0,42 | |
Chlorure de potassium | 311,83 | |
Sulfate de cuivre(II) x 5H2O | 0.001 | |
Chlorure de magnésium anhydre | 28,57 | |
Sulfate de magnésium | 48,85 | |
Chlorure de sodium | 6,999.50 | |
Dihydrogénophosphate de sodium anhydre | 54,35 | |
hydrogénophosphate de sodium | 70,98 | |
Sulfate de zinc x 7H2O | 0,43 | |
Autres composants | D(+)-Glucose anhydre | 3,151.00 |
HEPES | 3,574.50 | |
Hypoxanthine | 2,04 | |
Acide linoléique | 0,04 | |
Acide lipoïque DL-68 | 0.103 | |
Pyruvate de sodium | 110,00 | |
Rouge de phénol | 8,10 | |
Putrescine x 2HCl | 0.081 | |
Thymidine | 0,36 | |
Acides aminés | L-Alanine | 4,45 |
L-Arginine x HCl | 147,35 | |
L-Asparagine x H2O | 7,50 | |
Acide L-aspartique | 6,65 | |
L-Cystine x 2HCl | 31,29 | |
L-Cystéine x HCl x H2O | 17,56 | |
L-Glutamine | 365,00 | |
Acide L-Glutamique | 7,35 | |
Glycine | 18,75 | |
L-Histidine x HCl x H2O | 31,48 | |
L-Isoleucine | 54,37 | |
L-Leucine | 58,96 | |
L-Lysine x HCl | 91,37 | |
L-Méthionine | 17,24 | |
L-phénylalanine | 35,48 | |
L-Proline | 17,27 | |
L-Sérine | 26,25 | |
L-Thréonine | 53,55 | |
L-Tryptophane | 9,02 | |
L-Tyrosine x 2Na x 2H2O | 55,81 | |
L-Valine | 52,66 | |
Vitamines | D-(+)-Biotine | 0,004 |
D-Pantothénate de calcium | 2,12 | |
Chlorure de choline | 8,98 | |
Acide folique | 2,66 | |
myo-Inositol | 12,51 | |
Nicotinamide | 2,02 | |
Pyridoxine x HCl | 2,03 | |
Riboflavine | 0,22 | |
Thiamine x HCl | 2,17 | |
Vitamine B12 | 0,68 | |
NaHCO3 | 1,200.00 |