Culture de cellules de mammifères : Principes et techniques
La culture de cellules de mammifères est une technique fondamentale de la recherche biologique, qui permet aux scientifiques d'étudier les cellules dans un environnement contrôlé en dehors des organismes vivants. Ce processus consiste à isoler des cellules à partir de tissus, à les maintenir dans des conditions soigneusement contrôlées et à les propager à diverses fins expérimentales. La culture de cellules mammaliennes est essentielle pour comprendre les processus cellulaires, les mécanismes des maladies et développer de nouvelles thérapies, y compris celles qui utilisent des lignées cellulaires immortelles
Principaux enseignements :
- Les cellules peuvent être isolées à partir de tissus par digestion enzymatique ou par culture d'explants
- Les cellules primaires ont une durée de vie limitée, tandis que les lignées cellulaires immortalisées peuvent proliférer indéfiniment
- Les conditions de culture, y compris la composition du milieu de croissance, sont essentielles à la survie et à la prolifération des cellules
- Les cellules peuvent être cultivées en suspension ou en adhérence, selon leur type et les besoins de la recherche
- Les milieux de culture courants comprennent le MEM, le DMEM et le RPMI 1640, chacun étant adapté à des types de cellules spécifiques
- Les conditions de croissance typiques sont une température de 37°C, 5% de CO2 et 95% d'humidité relative
- Les alternatives au sérum, comme le lysat plaquettaire humain (hPL), sont de plus en plus utilisées pour éviter les problèmes de contamination potentiels
Techniques d'isolement cellulaire
Le processus d'établissement d'une culture cellulaire commence par l'isolement des cellules à partir des tissus. Il existe plusieurs méthodes pour y parvenir, chacune adaptée à des types de tissus et à des objectifs de recherche différents. Pour les échantillons de sang, l'isolement des cellules est relativement simple, les globules blancs étant les premiers à être cultivés en raison de leur capacité de croissance. Les tissus solides nécessitent des techniques d'isolement plus complexes. Une méthode courante consiste en une digestion enzymatique, où des enzymes comme la collagénase, la trypsine ou la pronase sont utilisées pour décomposer la matrice extracellulaire, libérant ainsi des cellules individuelles en suspension. Les chercheurs peuvent également utiliser la méthode de culture d'explants, où de petits morceaux de tissu sont placés directement dans un milieu de croissance, permettant aux cellules de migrer et de proliférer. Le choix entre ces méthodes dépend souvent du type de tissu spécifique, de la population cellulaire souhaitée et de l'utilisation expérimentale prévue. Il est important de noter que les cellules isolées directement d'un organisme sont appelées cellules primaires et, à quelques exceptions près comme les cellules dérivées de tumeurs, ont généralement une durée de vie limitée en culture avant de subir une sénescence
Produits essentiels pour la culture de cellules de mammifères
| Nom du produit | Numéro du produit | Catégorie | Application |
|---|---|---|---|
| DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 1.5 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium | 820300a | Milieux de culture | Milieu à usage général pour divers types de cellules de mammifères |
| DMEM:Ham's F12 (1:1), w : 3.1 g/L Glucose, w : 1.6 mM L-Glutamine, w : 15 mM HEPES, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium, w : 1.2 g/L NaHCO3 | 820400a | Milieux de culture | Convient à une large gamme de cellules de mammifères, en particulier les cellules épithéliales |
| RPMI 1640, w : 2.1 mM Glutamine stable, w : 2.0 g/L NaHCO3 | 820700a | Milieux de culture | Couramment utilisés pour les cellules lymphoïdes et les lignées cellulaires hybrides |
| Accutase | 830100 | Dissociation cellulaire | Solution de détachement cellulaire en douceur pour les cellules adhérentes |
| Milieu de congélation CM-1 | 800150 | Cryopréservation | Pour la congélation et le stockage à long terme des cellules de mammifères |
| Milieu de congélation CM-ACF, sans sérum | 800650 | Cryopréservation | Milieu sans composants animaux pour la congélation de cellules |
| PBS | 860015 | Solution tampon | Pour le lavage des cellules et le maintien de l'équilibre du pH |
| Milieu de croissance des cellules endothéliales | 820731 | Milieu spécialisé | Optimisé pour la culture des cellules endothéliales |
| Test de dépistage des mycoplasmes | 900159 | Contrôle de qualité | Essentiel pour la détection de la contamination par les mycoplasmes dans les cultures |
| Authentification des lignées cellulaires - humaines | 900154 | Contrôle de qualité | Vérifie l'identité des lignées cellulaires humaines |
Ce tableau représente une sélection de produits essentiels pour la culture de cellules de mammifères. Pour notre gamme complète de produits de culture cellulaire, y compris les milieux et réactifs spécialisés, veuillez consulter la page de la catégorie Milieux et réactifs.
- Une alternative douce à la trypsine
Accutase est une solution de détachement cellulaire qui révolutionne l'industrie de la culture cellulaire. Il s'agit d'un mélange d'enzymes protéolytiques et collagénolytiques qui imite l'action de la trypsine et de la collagénase. Contrairement à la trypsine, Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est beaucoup plus doux pour les cellules, ce qui en fait une solution idéale pour le détachement de routine des cellules du matériel plastique de culture tissulaire standard et du matériel plastique à revêtement adhésif. Dans cet article de blog, nous allons explorer les avantages et les utilisations d'Accutase et la façon dont il change la donne dans la culture cellulaire.
Avantages d'Accutase
Accutase présente plusieurs avantages par rapport aux solutions de trypsine traditionnelles. Tout d'abord, il peut être utilisé chaque fois qu'un détachement doux et efficace d'une lignée cellulaire adhérente est nécessaire, ce qui en fait un substitut direct à la trypsine. Deuxièmement, Accutase fonctionne extrêmement bien sur les cellules souches embryonnaires et neuronales, et il a été démontré qu'il maintient la viabilité de ces cellules après le passage. Troisièmement, Accutase préserve la plupart des épitopes pour une analyse ultérieure par cytométrie de flux, ce qui la rend idéale pour l'analyse des marqueurs de la surface cellulaire.
En outre, il n'est pas nécessaire de neutraliser Accutase lors du passage des cellules adhérentes. L'ajout de milieu après la séparation des cellules dilue Accutase de sorte qu'elle n'est plus en mesure de détacher les cellules. Ceci élimine le besoin d'une étape d'inactivation et permet aux techniciens de culture cellulaire de gagner du temps. Enfin, Accutase n'a pas besoin d'être aliquoté et un flacon est stable au réfrigérateur pendant 2 mois.
Applications d'Accutase
Accutase remplace directement la solution de trypsine et peut être utilisé pour le passage des lignées cellulaires. En outre, Accutase donne de bons résultats lors du détachement de cellules pour l'analyse de nombreux marqueurs de surface cellulaire par cytométrie de flux et pour le tri cellulaire. D'autres applications en aval du traitement par Accutase comprennent l'analyse des marqueurs de surface cellulaire, les essais de croissance virale, la prolifération cellulaire, les essais de migration des cellules tumorales, le passage de routine des cellules, l'augmentation de la production (bioréacteur) et la cytométrie de flux.
Composition d'Accutase
Accutase ne contient aucun composant mammalien ou bactérien et est un mélange enzymatique naturel avec une activité enzymatique protéolytique et collagénolytique. Il est formulé à une concentration beaucoup plus faible que la trypsine et la collagénase, ce qui le rend moins toxique et plus doux, mais tout aussi efficace.
Efficacité d'Accutase
Accutase s'est avéré efficace pour détacher les cellules primaires et les cellules souches et maintenir une viabilité cellulaire élevée par rapport aux enzymes d'origine animale telles que la trypsine. 100 % des cellules sont récupérées après 10 minutes, et il n'y a aucun inconvénient à laisser les cellules dans Accutase jusqu'à 45 minutes, grâce à l'autodigestion d'Accutase.
En résumé
En conclusion, Accutase est une solution puissante qui change la donne dans le domaine de la culture cellulaire. Grâce à sa nature douce, son efficacité et sa polyvalence, Accutase est l'alternative idéale à la trypsine. Si vous recherchez une solution fiable et efficace pour le détachement cellulaire, Accutase est la solution qu'il vous faut.
La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon largement utilisée dans la recherche biologique et chimique. Elle joue un rôle crucial dans le maintien de l'équilibre du pH et de l'osmolarité au cours de diverses procédures expérimentales, y compris le traitement des tissus et la culture cellulaire. Notre solution PBS est méticuleusement formulée avec des ingrédients de haute pureté afin de garantir la stabilité et la fiabilité de chaque expérience. L'osmolarité et les concentrations d'ions de notre PBS imitent étroitement celles du corps humain, ce qui la rend isotonique et non toxique pour la plupart des cellules.
Composition de notre solution PBS
Notre solution PBS est un mélange de tampons phosphatés et de solutions salines de qualité supérieure dont le pH est ajusté. À une concentration de travail de 1X, elle contient :
8000 mg/L de chlorure de sodium (NaCl)
200 mg/L Chlorure de potassium (KCl)
1150 mg/L phosphate de sodium dibasique anhydre (Na2HPO4)
200 mg/L Phosphate de potassium monobasique anhydre (KH2PO4)
Cette composition assure un pH et un équilibre ionique optimaux, convenant à une large gamme d'applications biologiques.
Applications de notre solution PBS
Notre solution PBS est idéale pour diverses applications dans la recherche biologique. Ses propriétés isotoniques et non toxiques la rendent appropriée pour la dilution de substances et le rinçage de récipients cellulaires. Les solutions PBS contenant de l'EDTA sont efficaces pour désengager les cellules attachées et agglutinées. Cependant, les métaux divalents tels que le zinc ne doivent pas être ajoutés au PBS, car ils peuvent provoquer une précipitation. Dans ce cas, les tampons Good's sont recommandés. En outre, notre solution PBS est une alternative acceptable au milieu de transport viral pour le transport et le stockage des virus à ARN, y compris le SARS-CoV-2.
Contrôle de la qualité
Filtré stérilement
Stockage et durée de conservation
Stocker entre +2°C et +25°C, à l'abri de la lumière.
Après ouverture, conserver entre 2°C et 25°C et utiliser dans les 24 mois.
Conditions d'expédition
Température ambiante
Entretien
Conserver au réfrigérateur entre +2°C et +8°C à l'abri de la lumière. Éviter la congélation et le réchauffement fréquent jusqu'à +37°C, car cela réduit la qualité du produit.
Ne pas chauffer le milieu au-delà de 37°C ou utiliser des sources de chaleur non contrôlées telles que les micro-ondes.
Si une partie seulement du milieu doit être utilisée, prélever la quantité nécessaire et la réchauffer à température ambiante avant de l'utiliser.
Composition
Catégorie
Composants
Concentration (mg/L)
Sels
Chlorure de potassium
200
Phosphate de potassium monobasique anhydre
200
Chlorure de sodium
8000
Phosphate de sodium dibasique anhydre
1150
Méthode d'analyse
CLS propose des tests à court et à long terme pour la détection des mycoplasmes. Dans le premier cas, les échantillons sont testés immédiatement après leur arrivée, tandis que dans le second, une culture cellulaire est mise en place et les cellules sont testées après 14 jours de culture sans antibiotiques. Les tests de détection des mycoplasmes sont effectués à l'aide d'un système de détection à deux points avec le PlasmoTest™
- Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) et le Certus QC
- mycoADVANCED detection kit (Certus).
Échantillons
Pour le test rapide, veuillez fournir un minimum de 50 µl de suspension cellulaire contenant 50 000 cellules. La suspension cellulaire peut être expédiée à température ambiante.
Pour le test premium, veuillez fournir un minimum de 1 million de cellules dans un milieu de congélation approprié afin de garantir une culture robuste et saine pour la culture et le test ultérieur des cellules. Les échantillons doivent être expédiés sur de la glace sèche.
Veuillez remplir le formulaire d'échantillon pour le test des mycoplasmes et le joindre à votre envoi d'échantillons.
Test de rapporteur colorimétrique
Ce test est un essai colorimétrique sur cellules. En présence de mycoplasmes, une lignée de cellules rapporteuses induit une cascade de signalisation qui déclenche un changement de couleur dans le milieu, du rouge au bleu. L'essai est réalisé dans des plaques multipuits à 96 puits. Les signaux sont détectés dans un spectrophotomètre de microplaque à 620-655 nm. Toutes les espèces de mycoplasmes et d'acholeplasmes, mais aussi d'autres contaminants de la culture cellulaire tels que les bactéries, sont détectées.
Amplification isotherme
L'amplification isotherme est un test rapide et fiable basé sur l'amplification isotherme de l'ADN spécifique des mycoplasmes combinée à une détection en temps réel à l'aide d'un colorant intercalant l'ADN. Le test est capable de détecter six des espèces les plus courantes qui représentent plus de 95 % des contaminations : M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis et A.laidlawii. En raison de l'homologie des séquences, d'autres espèces de mycoplasmes seront également détectées (M.pneumoniae, M.gallisepticum et M.synoviae). Pour déterminer si l'échantillon est positif ou négatif à l'égard des mycoplasmes, la température de fusion (Tm) est étudiée.
Conclusion : Le rôle essentiel de la culture de cellules de mammifères dans la recherche moderne
La culture de cellules de mammifères a révolutionné la recherche biologique et médicale, en fournissant aux scientifiques des outils puissants pour étudier des processus cellulaires complexes, des mécanismes pathologiques et des interventions thérapeutiques potentielles. De l'isolement des cellules primaires au développement de lignées cellulaires immortalisées, cette technique est devenue un élément indispensable de la boîte à outils scientifique moderne
L'aventure de la culture de cellules de mammifères commence par des techniques d'isolement minutieuses, se poursuit par le maintien méticuleux des cellules dans des milieux spécialisés et se termine par un large éventail d'applications dans divers domaines d'étude. Qu'il s'agisse de recherche sur le cancer, de découverte de médicaments ou de biologie cellulaire fondamentale, la possibilité de cultiver et de manipuler des cellules de mammifères in vitro a ouvert des voies sans précédent à l'exploration scientifique
La clé du succès de la culture de cellules de mammifères réside dans les conditions soigneusement contrôlées dans lesquelles les cellules sont maintenues. De la composition des milieux de croissance aux paramètres environnementaux précis des incubateurs, chaque aspect est optimisé pour reproduire le plus fidèlement possible les conditions naturelles des cellules. Ce souci du détail garantit la fiabilité et la reproductibilité des expériences, pierre angulaire des bonnes pratiques scientifiques
Le développement de lignées cellulaires immortalisées, telles que les cellules HeLa, largement utilisées, a encore élargi les possibilités de la culture cellulaire. Ces lignées cellulaires fournissent des modèles cellulaires cohérents et facilement accessibles qui ont accéléré la recherche dans de nombreuses disciplines
Pour l'avenir, la culture de cellules de mammifères continue d'évoluer. Les progrès des techniques de culture en 3D, le développement d'organoïdes et l'utilisation de milieux chimiquement définis repoussent les limites de ce qui est possible en matière de culture cellulaire. Ces développements promettent de rapprocher les modèles in vitro de la complexité des systèmes in vivo, ce qui pourrait révolutionner la découverte de médicaments, la médecine personnalisée et notre compréhension de la biologie humaine
En conclusion, la culture de cellules de mammifères reste une technique dynamique et essentielle dans la recherche en sciences de la vie. Son perfectionnement et son application continus joueront sans aucun doute un rôle crucial dans la résolution de certaines des questions les plus pressantes en biologie et en médecine, stimulant ainsi le progrès scientifique pour les années à venir