Soluviljelymedium
Viljellyt solut vaativat huolellista ympäristön hallintaa kasvun ja ylläpidon onnistumiseksi. Kokonaisvaltaiseen lähestymistapaan kuuluu steriiliyden, ravinteiden saannin, pH:n vakauden ja lämpötilan valvonnan varmistaminen.
Steriilit olosuhteet ja ravinteiden saanti
Kontaminaation estämiseksi ja solujen elinkelpoisuuden varmistamiseksi steriili ympäristö on ratkaisevan tärkeä. Tämä saavutetaan yleensä aseptisilla tekniikoilla ja erityislaitteilla, kuten laminaarivirtaushuuvilla. Ravinteet syötetään kasvatusmedioiden kautta, jotka sisältävät sekoituksen keskeisiä ainesosia, kuten
- Epäorgaaniset suolat: Elintärkeät osmoottisen tasapainon ylläpitämiseksi ja solutoiminnalle välttämättömien ionien tuottamiseksi.
- Hiilihydraatit: Toimivat energianlähteinä; glukoosi on yleisimmin käytetty sokeri.
- Aminohapot: Proteiinien rakennusaineita; osa niistä on välttämättömiä, eivätkä solut voi syntetisoida niitä.
- Vitamiinit: Toimivat entsymaattisten reaktioiden kofaktorina; B-vitamiinit ovat välttämättömiä solujen aineenvaihdunnalle.
- Rasvahapot ja lipidit: Solukalvojen eheyden ja toiminnan kannalta välttämättömiä komponentteja.
- Proteiinit ja peptidit: Korvaavat seerumittomissa väliaineissa kasvutekijät ja sitovat proteiinit, joita seerumi yleensä tuottaa.
- Seerumi: Sisältyy usein kasvutekijöiden lähteenä, vaikka seerumivapaat vaihtoehdot ovatkin yleistymässä vaihtelun ja kontaminaatioriskien vähentämiseksi.
- pH- ja lämpötilavakaus: Solut vaativat tyypillisesti pH-alueen 7,2-7,4 optimaalisen kasvun varmistamiseksi. Tätä säädellään puskurointijärjestelmillä, jotka voivat olla joko CO2/bikarbonaattipohjaisia tai kemiallisesti aikaansaatuja käyttäen aineita, kuten HEPES. Lämpötila pidetään noin 37 °C:ssa fysiologisten olosuhteiden jäljittelemiseksi.
Väliainevaihtoehdot ja optimointi
Vuosien mittaan on kehitetty erilaisia perusmedioita, jotka soveltuvat tietyille solutyypeille:
- Tasapainotetut suolaliuokset: Muodostavat perustan monimutkaisemmille väliainevalmisteille.
- Perusmedioita, kuten Minimum Essential Medium (MEM), käytetään primaariviljelmille ja diploidisoluille.
- Monimutkaiset väliaineet: Kuten RPMI 1640, ne soveltuvat laajemmalle nisäkässoluvalikoimalle.
- Seerumivapaat väliaineet: Räätälöidään erityisiä sovelluksia varten, jolloin eläimistä peräisin olevien komponenttien aiheuttama kontaminaatioriski vähenee.
Väliaineiden valmistus ja laadunvalvonta
Väliaineet voidaan valmistaa itse keskeisistä ainesosista tai ostaa valmiina liuoksina. Laadunvalvontaan kuuluu epäpuhtauksien puuttumisen ja ainesosien oikean pitoisuuden varmistaminen. Jauhemaisten väliaineiden rekonstruointi edellyttää korkealaatuista vettä, ja valmistetut väliaineet on steriloitava, yleensä suodattamalla.
Seerumin käyttö ja turvallisuusnäkökohdat
Seerumin, erityisesti naudan sikiöseerumin (FBS), käyttö on yleistä, koska se sisältää runsaasti kasvutekijöitä. BSE:n kaltaisiin tauteihin liittyvien huolenaiheiden vuoksi turvallisuuden varmistamiseksi noudatetaan kuitenkin tiukkoja testaus- ja hankintaprotokollia.
Sääntelyohjeet ja suuntaukset
Säädökset ohjaavat eläinperäisten materiaalien käyttöä viljelmissä ja korostavat hankinnan ja testauksen merkitystä. Suuntaus tällaisten materiaalien poistamiseen mahdollisuuksien mukaan näkyy seerumivapaiden ja eläimistä vapaiden väliainevaihtoehtojen kehittämisessä.
Yhteenvetona voidaan todeta, että soluviljelyaineilla on perustavanlaatuinen merkitys solujen kasvattamisessa ja ylläpitämisessä in vitro. Kukin komponentti valitaan ja optimoidaan huolellisesti in vivo -ympäristön jäljittelemiseksi, jotta varmistetaan solujen kasvu-, selviytymis- ja toimintaolosuhteet.
- ja PC-12-solujen, viljelyyn.
DMEM erottuu muista väliaineista sen ainutlaatuisen koostumuksen ansiosta. Sen aminohappo
- ja vitamiinipitoisuudet ovat nelinkertaistuneet alkuperäiseen Eagle's Minimal Essential Mediumiin verrattuna. DMEM kehitettiin alun perin matalalla glukoosipitoisuudella (1 g/l) ja natriumpyruvaatilla, mutta sitä käytetään usein korkeammilla glukoosipitoisuuksilla joko natriumpyruvaatin kanssa tai ilman sitä. DMEM ei kuitenkaan sisällä proteiineja, rasvoja tai kasvutekijöitä, joten sitä on täydennettävä. Optimaalisen kasvun saavuttamiseksi DMEM:ää täydennetään yleensä 10 %:lla naudan sikiöseerumia (FBS). Lisäksi DMEM:ssä käytetään natriumbikarbonaattipuskurijärjestelmää, joka vaatii 5-10 % CO2-ympäristöä fysiologisen pH:n ylläpitämiseksi.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) on erittäin arvostettu solu
- ja kudosviljelyssä käytettävien määriteltyjen väliaineiden joukossa, sillä se vastaa erilaisten tarttuvien solujen fenotyyppien kasvutarpeisiin. Se ylittää alkuperäisen, 1950-luvulla kanasolujen viljelyyn kehitetyn Eagle's Medium -mediumin Dulbecco's Modification -nimellä tunnetun parannetun lisäravinteen avulla. Tämä modifikaatio nostaa valittujen aminohappojen ja vitamiinien pitoisuutta merkittävästi jopa nelinkertaiseksi alkuperäiseen väliaineeseen verrattuna.
Soluviljelyn alalla DMEM:llä on tärkeä rooli kasvualustana eri solutyypeille, kuten primaarisoluille, kantasoluille ja muunnetuille soluille. Tutkijat käyttävät DMEM:n modifioitua versiota myös monenlaisiin tutkimussovelluksiin, kuten lääkkeiden löytämiseen, kudostekniikkaan ja solujen signaalireittien tutkimiseen.
Laadunvalvonta
Steriilisuodatettu
Varastointi ja säilyvyys
Säilytetään +2°C
- +8°C:ssa valolta suojattuna.
Kun se on avattu, säilytä 4°C:ssa ja käytä 6-8 viikon kuluessa.
Toimitusolosuhteet
Ympäristön lämpötila
Huolto
Säilytettävä jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Vältä pakastamista ja usein tapahtuvaa lämmittämistä +37°C:seen, koska se heikentää tuotteen laatua.
Älä lämmitä väliaineen lämpötilaa yli 37°C äläkä käytä kontrolloimattomia lämmönlähteitä, kuten mikroaaltolaitteita.
Jos väliaineesta käytetään vain osa, poista tarvittava määrä ja lämmitä se huoneenlämpöiseksi ennen käyttöä.
Koostumus
Luokka
Ainesosat
Pitoisuus (mg/l)
Aminohapot
Glysiini
30.00
L-arginiini HCl
84.00
L-kystiini 2 HCl
62.57
L-Glutamiini
584.00
L-histidiini HClH2O
42.00
L-isoleusiini
105.00
L-leusiini
105.00
L-lysiini HCl
146.00
L-metioniini
30.00
L-Fenyylialaniini
66.00
L-Seriini
42.00
L-treoniini
95.00
L-tryptofaani
16.00
L-tyrosiini 2 Na 2H2O
103.79
L-valiini
94.00
Vitamiinit
Koliinikloridi
4.00
D-kalsiumpantotenaatti
4.00
Foolihappo
4.00
myo-Inositoli
7.20
Nikotiiniamidi
4.00
Pyridoksaali-HCl
4.00
Riboflaviini
0.40
Tiamiini HCl
4.00
Epäorgaaniset suolat
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Muut komponentit
D-glukoosi
4500.00
Fenolipunainen natriumsuola
15.90
Natriumpyruvaatti
110.00
Tämä käyttövalmis, steriilisti suodatettu nestemäinen formulaatio on täydennetty Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS) -liuoksella, 2 mM L-glutamiinilla, D-glukoosilla (1,0 g/l) ja 2,2 g/l natriumbikarbonaatilla (NaHCO3), minkä ansiosta se sopii käytettäväksi CO2-säädellyssä inkubaattoriympäristössä (tyypillisesti 5 % CO2). Mukana oleva fenolipunainen toimii pH-indikaattorina, mikä mahdollistaa väliaineen tilan kätevän visuaalisen seurannan soluviljelyn aikana.
Tärkeimmät ominaisuudet
Klassinen Eagle’s MEM -koostumus, jossa on Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS)
Sisältää 2 mM L-glutamiinia – valmis välittömään käyttöön
2,2 g/l natriumbikarbonaattia – puskuroitu 5 %:n CO2-inkubaatiota varten
Pääasiallisena hiilen lähteenä D-glukoosi (1,0 g/l)
Fenolipunainen pH-indikaattorina
Ilman HEPES:ää ja ilman natriumpyruvaattia
Steriilisuodatettu nestemäinen elatusaine, käyttövalmis
pH 7,0 – 7,6
Tyypillisiä sovelluksia
EMEM tukee monenlaisten nisäkässolulinjojen viljelyä, mukaan lukien HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 ja monet primaarisolut. Yleisiä käyttökohteita ovat:
Adherenttien solulinjojen rutiinihoito ja laajentaminen
Virusten lisääminen ja rokotetuotannon työnkulut
Sytotoksisuus
- ja bioassay-sovellukset
Transfektio
- ja proteiini-ilmentymistutkimukset
Solubiologian ja molekyylibiologian perustutkimus
Optimaalisen solujen kasvun saavuttamiseksi EMEM-alustaan lisätään tyypillisesti 5–10 % naudan sikiöseerumia (FBS) ja, solulinjasta riippuen, ei-välttämättömiä aminohappoja (NEAA) sekä antibiootteja, kuten penisilliiniä/streptomysiiniä.
Käsittely ja säilytys
Säilytä avaamaton pullo +2 °C – +8 °C:ssa, valolta suojattuna. Avaamisen jälkeen käytä aseptisissa olosuhteissa. L-glutamiini liuoksessa hajoaa vähitellen – suosittelemme käyttämään väliainetta 4 viikon kuluessa avaamisesta parhaan suorituskyvyn saavuttamiseksi tai lisäämään tuoretta L-glutamiinia ennen käyttöä, jos sitä säilytetään pidempään. Anna väliaineen lämmetä 37 °C:seen ennen sen lisäämistä soluihin.
Laatu
Valmistettu tiukkojen laatustandardien mukaisesti. Jokainen erä testataan steriilisyyden, pH:n, osmolaliteetin ja endotoksiinipitoisuuden osalta, jotta varmistetaan tasainen suorituskyky soluviljelykäytöissä.
Tuotetiedot
Tekniset tiedot
Yksityiskohdat
TuotetyyppiMEM
TuoteryhmäSoluviljelyalustat
MuotoNestemäinen
SteriiliKyllä
Koko500 ml
L-glutamiiniSisältää L-glutamiinia (2 mM)
GlukoosiSisältää glukoosia (1,0 g/l)
NatriumbikarbonaattiNaHCO3:lla (2,2 g/l)
HEPESIlman HEPES:ää
Natrium-pyruvaattiIlman natriumpyruvaattia
FenolipunainenFenolipunalla
SuolaliuosEarlen tasapainotettu suolaliuos (EBSS)
pH7,0 – 7,6
EndotoksiinipitoisuusEi määritelty
Säilytys+2 °C – +8 °C
Koostumus (litraa kohti)
Ainesosa
Pitoisuus (mg/l)
Epäorgaaniset suolat
Kalsiumkloridi · 2H2O265,00
Magnesiumsulfaatti97,72
Kaliumkloridi400,00
Natriumkloridi6 800,00
Natriumdihydrogeenifosfaatti, vedetön122,00
Natriumbikarbonaatti (NaHCO3)2 200,00
Aminohapot
L-arginiini · HCl126,00
L-kystiini · 2HCl31,30
L-glutamiini292,00
L-histidiini · HCl · H2O42,00
L-isoleusiini52,00
L-leusiini52,00
L-lysiini · HCl72,50
L-metioniini15,00
L-fenyylialaniini32,00
L-treoniini48,00
L-tryptofaani10,00
L-tyrosiini · 2Na · 2H2O51,90
L-valiini46,00
Vitamiinit
D-kalsiumpantotenaatti1,00
Koliinikloridi1,00
Foolihappo1,00
myo-inositoli2,00
Nikotiiniamidi1,00
Pyridoksaali · HCl1,00
Riboflaviini0,10
Tiamiini · HCl1,00
Muut komponentit
D(+)-glukoosi1 000,00
Fenolipunainen10,00
Yksi sen merkittävistä eduista on kyky tukea solujen kasvua ilman seerumin lisäystä. Tämä eliminoi seerumin komponenttien mahdollisesti aiheuttamat häiriöt, mikä takaa johdonmukaiset ja luotettavat koetulokset. Ham's F-12 Medium tarjoaa seerumivapaan viljely-ympäristön, joten tutkijat voivat hallita tutkimuksiaan paremmin.
Toinen Ham's F-12 Mediumin keskeinen ominaisuus on sen soveltuvuus yksittäisten solujen viljelyyn. Tämä tekee siitä erinomaisen valinnan erilaisille solulinjoille, kuten CHO-soluille, keuhkosoluille ja hiiren L-soluille. Mediumin optimoitu ravinnekoostumus helpottaa yksittäisten solujen tehokasta kiinnittymistä ja kasvua, mikä mahdollistaa homogeenisten soluviljelmien perustamisen paremmalla toistettavuudella.
Lisäksi Ham's F-12 Medium on saanut tunnustusta ensisijaisena väliaineena kloonitoksisuusmäärityksessä (Clonal Toxicity Assay, CTA). Tällä määrityksellä on ratkaiseva merkitys arvioitaessa aineiden soluihin kohdistuvia sytotoksisia vaikutuksia. Käyttämällä Ham's F-12 Mediumia CTA:ssa tutkijat voivat arvioida tarkasti erilaisten yhdisteiden tai hoitojen vaikutusta yksittäisiin soluihin ja saada arvokasta tietoa toksikologisista profiileista.
Laadunvalvonta
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C:ssa.
Jokainen erä on testattu steriiliyden sekä mykoplasman ja bakteerien puuttumisen varalta.
Ylläpito
Säilytetään jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Pakastaminen ja lämmittäminen +37° C:een asti minimoi tuotteen laadun.
Älä lämmitä elatusainetta yli 37° C:seen tai käytä hallitsemattomia lämmönlähteitä (esim. mikroaaltolaitteita).
Jos vain osa väliaineesta on tarkoitus käyttää, poista tämä määrä pullosta ja lämmitä se huoneenlämmössä.
Kaikkien elatusaineiden, lukuun ottamatta peruselatusainetta, säilyvyysaika on 8 viikkoa valmistuspäivästä.
Koostumus
Ainesosat
mg/l
Epäorgaaniset suolat
Kalsiumkloridi x 2H2O
44,00
Kupari(II)sulfaatti x 5H2O
0,00
Rauta(II)sulfaatti x 7H2O
0,83
Magnesiumkloridi x 6H2O
122,00
Kaliumkloridi
223,65
Natriumkloridi
7599,00
di-natriumvetyfosfaattivedetön
142,04
Sinkkisulfaatti x 7H2O
0,86
Muut aineosat
D(+)-glukoosi vedetön
1801,60
Hypoksantiini
4,08
Linolihappo
0,08
DL-α-Lipoiinihappo
0,21
Fenolipunainen
1,20
Putressiini x 2HCl
0,16
Natriumpyruvaatti
110,00
Tymidiini
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminohapot
L-alaniini
8,91
L-arginiini x HCl
210,70
L-asparagiini x H2O
15,01
L-asparagiinihappo
13,31
L-kysteiini x HCl x H2O
35,12
L-Alanyyli-L-Glutamiini
217,30
L-glutamiinihappo
14,71
Glysiini
7,51
L-histidiini x HCl x H2O
20,96
L-isoleusiini
3,94
L-leusiini
13,12
L-lysiini x HCl
36,54
L-metioniini
4,48
L-Fenyylialaniini
4,96
L-proliini
34,53
L-Seriini
10,51
L-treoniini
11,91
L-tryptofaani
2,04
L-tyrosiini
5,44
L-valiini
11,71
Vitamiinit
D(+)-Biotiini
0,01
D-kalsiumpantotenaatti
0,24
Koliinikloridi
13,96
Foolihappo
1,32
myo-Inositoli
18,02
Nikotiiniamidi
0,04
Pyridoksiini x HCl
0,06
Riboflaviini
0,04
Tiamiini x HCl
0,34
B12-vitamiini
1,36
Tämä ainutlaatuinen koostumus yhdistää Dulbeccon modifioidun Eagle-alustan (DMEM) ja Ham's F-12:n (Ham's Nutrient Mixture F-12) tarkassa 1:1-suhteessa. L-glutamiinin lisääminen parantaa sen koostumusta entisestään.
DMEM, joka on johdettu Eagle's Minimal Essential Mediumista (EMEM), tarjoaa edeltäjäänsä suuremman pitoisuuden aminohappoja ja vitamiineja. Sen sijaan Ham's F-12 perustuu Ham's F-10 -alustaan ja tarjoaa täydentävän joukon välttämättömiä komponentteja.
Optimaalisen solujen kasvun tukemiseksi on yleistä täydentää DMEM:Ham's F12:ta FBS:llä tyypillisesti 5–10 %:n pitoisuudella. Tämä lisäys on tarpeen, koska väliaineesta puuttuu solujen kehitykselle välttämättömiä kasvuhormoneja, lipidejä ja proteiineja.
DMEM:Ham's F12 sisältää pH-puskuriin ja siihen lisätään usein fenolipunainen, joka on pH-indikaattori. DMEM:Ham's F12:ssa tai missä tahansa bikarbonaattipuskuriin perustuvassa elatusaineessa viljellyt solut vaativat 5–10 %:n CO2-pitoisuuden, jotta sopiva pH-taso säilyy.
Laadunvalvonta
Steriilisuodatettu
Säilytys ja säilyvyysaika
Säilytä +2–+8 °C:ssa, suojattuna valolta.
Avatun pakkauksen säilytyslämpötila on 4 °C, ja se on käytettävä 6–8 viikon kuluessa.
Kuljetusolosuhteet
Ympäristön lämpötila
Säilytys
Säilytä jääkaapissa +2 °C – +8 °C:ssa pimeässä. Vältä jäädyttämistä ja toistuvaa lämmittämistä +37 °C:seen, sillä se heikentää tuotteen laatua.
Älä lämmitä elatusainetta yli 37 °C:n lämpötilaan tai käytä hallitsemattomia lämmönlähteitä, kuten mikroaaltouuneja.
Jos vain osa elatusaineesta käytetään, ota tarvittava määrä ja lämmitä se huoneenlämpötilaan ennen käyttöä.
Koostumus
Luokka
Komponentit
Pitoisuus (mg/l)
Aminohapot
Glysiini
18,75
L-alaniini
4,45
L-arginiini-HCl
147,50
L-asparagiini H₂O
7,50
L-asparagiinihappo
6,65
L-kysteiini-HCl-H₂O
17,56
L-kystiini 2 HCl
31,29
L-glutamiinihappo
7,35
L-glutamiini
365,00
L-histidiini-HCl-H₂O
31,48
L-isoleusiini
54,47
L-leusiini
59,05
L-lysiini-HCl
91,25
L-metioniini
17,24
L-fenyylialaniini
35,48
L-proliini
17,25
L-seriini
26,25
L-treoniini
53,45
L-tryptofaani
9,02
L-tyrosiini 2 Na 2 H2O
55,79
L-valiini
52,85
Vitamiinit
D-biotiini
0,0035
Koliinikloridi
8,98
D-kalsiumpantotenaatti
2,24
Foolihappo
2,66
myo-inositoli
12,60
Nikotiiniamidi
2,02
Pyridoksiini-HCl
0,031
Pyridoksaali-HCl
2,00
Riboflaviini
0,219
Tiamiini-HCl
2,17
B12-vitamiini
0,68
Epäorgaaniset suolat
CaCl2 2 H2O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO3)3 9 H2O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl2 6 H2O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na2HPO4
71,02
NaH2PO4 2 H2O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Muut komponentit
D-glukoosi
3151,00
Hypoxantiini
2,40
HEPES
3574,50
Linolihappo
0,042
Lipoiinihappo
0,105
Fenolipunaisen natriumsuola
8,63
Putreskiini-2-HCl
0,081
Natriumpyruvaatti
55,00
Tymidiini
0,365
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium on huolellisesti muotoiltu soluviljelyolosuhteiden optimoimiseksi. Sen koostumus on rikastettu, ja se sisältää runsaasti välttämättömiä komponentteja, kuten aminohappoja ja natriumpyruvaattia, sekä lisäaineita, kuten putressiiniä, tymidiiniä, hypoksantiiniä ja sinkkiä. Näiden lisäysten avulla tutkijat voivat täydentää väliaineen minimaalisella seerumilla tai tietyille solutyypeille määritellyillä komponenteilla, mikä helpottaa täsmällisten koeolosuhteiden luomista.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium ei sisällä proteiineja eikä kasvutekijöitä. Näin ollen kasvutekijöillä ja naudan sikiöseerumilla (FBS) täydentäminen on usein tarpeen, jolloin tutkijat voivat räätälöidä väliaineen tiettyjen solulinjojensa vaatimusten mukaiseksi. Optimaalisen suorituskyvyn saavuttamiseksi FBS:n pitoisuus on optimoitava huolellisesti kullekin solulinjalle, jotta varmistetaan optimaalinen kasvu ja toimivuus.
Fysiologisen pH:n ylläpitämiseksi Ham's F-12K (Kaighn's) -mediumissa käytetään natriumbikarbonaattipuskurijärjestelmää (2,5 g/l), mikä edellyttää kontrolloitua 5-10 %:n hiilidioksidipitoisuutta viljelyn aikana. Näin varmistetaan, että väliaineen pH pysyy solujen kasvun ja elinkelpoisuuden kannalta ihanteellisella alueella
Laadunvalvonta
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C:ssa.
Jokainen erä on testattu steriiliyden sekä mykoplasman ja bakteerien puuttumisen varalta.
Ylläpito
Säilytetään jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Pakastaminen sekä lämmittäminen +37°C:seen asti vähentävät tuotteen laatua.
Älä lämmitä elatusainetta yli 37°C:een tai käytä hallitsemattomia lämmönlähteitä (esim. mikroaaltolaitteita).
Jos vain osa väliaineesta halutaan käyttää, poista tämä määrä pullosta ja lämmitä se huoneenlämmössä.
Kaikkien väliaineiden paitsi perusmediumin säilyvyysaika on 8 viikkoa valmistuspäivästä.
Koostumus
Ainesosat
mg/l
Epäorgaaniset suolat
Kalsiumkloridi x 2H2O
135,24
Kupari(II)sulfaatti x 5H2O
0,00
Rauta(II)sulfaatti x 7H2O
0,83
Magnesiumkloridi x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfaatti x 7H2O
394,49
Kaliumkloridi
283,29
Kaliumdivetyfosfaatti
58,52
Natriumkloridi
7597,20
dinatriumvetyfosfaattivedetön
115,02
Sinkkisulfaatti x 7H2O
0,14
Muut aineosat
D(+)-glukoosi vedetön
1260,00
Hypoksantiini
4,08
DL-α-Lipoiinihappo
0,21
Fenolipunainen
3,00
Putressiini x 2HCl
0,32
Natriumpyruvaatti
220,00
NaHCO3
2500,00
Tymidiini
0,73
Aminohapot
L-alaniini
17,82
L-arginiini x HCl
421,40
L-asparagiini x H2O
30,02
L-asparagiinihappo
26,62
L-kysteiini x HCl x H2O
70,24
L-Glutamiini
292,20
L-glutamiinihappo
29,42
Glysiini
15,01
L-histidiini x HCl x H2O
41,92
L-isoleusiini
7,87
L-leusiini
26,24
L-lysiini x HCl
73,04
L-metioniini
8,95
L-Fenyylialaniini
9,91
L-proliini
69,06
L-Seriini
21,02
L-treoniini
23,82
L-tryptofaani
4,08
L-tyrosiini
10,87
L-valiini
23,42
Vitamiinit
D(+)-Biotiini
0,07
D-kalsiumpantotenaatti
0,48
Koliinikloridi
13,96
Foolihappo
1,32
myo-Inositoli
18,02
Nikotiiniamidi
0,04
Pyridoksiini x HCl
0,06
Riboflaviini
0,04
Tiamiini x HCl
0,34
B12-vitamiini
1,36
- 0,02 lämpötilassa 20–25 °C. Jokainen erä on testattu steriiliyden ja mykoplasman ja bakteerien puuttumisen osalta. Säilytys Säilytä jääkaapissa +2–+8 °C:ssa pimeässä. Jäädyttäminen ja lämmittäminen +37 °C:seen heikentää tuotteen laatua. Älä lämmitä väliainetta yli 37 °C:seen tai käytä hallitsemattomia lämmönlähteitä (esim. mikroaaltouunit). Jos vain osa väliaineesta on tarkoitus käyttää, ota tarvittava määrä pullosta ja lämmitä se huoneenlämpötilaan. Kaikkien väliaineiden, paitsi perusväliaineen, säilyvyysaika on 6–8 viikkoa avaamispäivästä. Koostumus Komponentit mg/l Epäorgaaniset suolatKalsiumkloridi x 2H2O132,0 Magnesiumsulfaatti97,67 Kaliumkloridi400 Natriumkloridi6 460,00 Dinatriumvetyfosfaatti (vedetön)504,00 Muut komponentitD(+)-glukoosi (vedetön)3 000 Glutationi (pelkistetty)0 Lihapeptoni600 Fenolipunainen natriumsuola11 AminohapotL-alaniini13 L-arginiini x HCl42,1 L-asparagiini x H2O45,03 L-asparagiinihappo19,97 L-kysteiini x HCl x H2O31,75 L-glutamiini (stabiili)219,15 L-glutamiinihappo22,07 Glysiini7,5 L-histidiini x HCl x H2O20,96 L-hydroksiproliini19,67 L-isoleusiini39,3 L-leusiini39,36 L-lysiini x HCl36,54 L-metioniini14,92 L-fenyylialaniini16,52 L-proliini17,27 L-seriini26,28 L-treoniini17,87 L-tryptofaani3,06 L-tyrosiinin dinatriumsuola26,1 L-valiini17,57 Vitamiinitp-Aminobentsoehappo1,0 Askorbiinihappo0,5 D(+)-biotiini0,2 D-kalsiumpantotenaatti0 Koliinikloridi5 Foolihappo10 Myo-inositoli36 Nikotinamidi0 Nikotiinihappo0,5 Pyridoksaali-HCl0,5 Pyridoksiini-HCl0,5 Riboflaviini0,2 Tiamiini-HCl0 B12-vitamiini2,0
IMDM soveltuu hyvin nopeasti lisääntyville, suuren tiheyden soluviljelmille, kuten Jurkat-, COS-7
- ja makrofagisoluille. IMDM:n eri modifikaatiot, joita on saatavilla erilaisiin soluviljelysovelluksiin, löytyvät mediavalintatyökalun avulla. Nestemäiset väliaineet tarjoavat välttämättömiä ravintoaineita kaikkiin soluviljelysovelluksiin. Jokainen korkealaatuinen soluviljelymediamme valmistetaan alun perin julkaistun kaavan tai sen modifikaatioiden mukaisesti, jotka ovat tarpeen viljelymedian tasaisen suorituskyvyn ja vakauden varmistamiseksi.
IMDM vs. DMEM
IMDM sisältää kaliumnitraattia rautanitraatin sijasta sekä HEPES:ää ja natriumpyruvaattia. IMDM:n sisältämien lisäkomponenttien ansiosta se soveltuu paremmin erikoistuneisiin solutyyppeihin ja erityissovelluksiin kuin DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM:llä ja RPMI:llä on erilaiset koostumukset, joilla voi olla merkitystä PMA/ionomysiini-stimulaation kannalta. Yksi merkittävä ero on Ca2+ -pitoisuus. RPMI sisältää 0,42 mM Ca2+:a, kun taas IMDM sisältää 1,49 mM Ca2+:a.
Laadunvalvonta
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C:ssa.
Jokainen erä on testattu steriiliyden sekä mykoplasman ja bakteerien puuttumisen varalta.
Ylläpito
Säilytetään jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Pakastaminen ja lämmittäminen +37° C:een asti minimoi tuotteen laadun.
Älä lämmitä elatusainetta yli 37° C:seen tai käytä hallitsemattomia lämmönlähteitä (esim. mikroaaltolaitteita).
Jos vain osa väliaineesta on tarkoitus käyttää, poista tämä määrä pullosta ja lämmitä se huoneenlämmössä.
Kaikkien elatusaineiden, lukuun ottamatta peruselatusainetta, säilyvyysaika on 8 viikkoa valmistuspäivästä.
Koostumus
Ainesosat
mg/l
Epäorgaaniset suolat
Kalsiumkloridi x 2 H2O
219,00
Kaliumkloridi
330,00
Kaliumnitraatti
0.076
Vedetön magnesiumsulfaatti
97,73
Natriumkloridi
4,505.00
Natriumdivetyfosfaatti vedetön
109,00
Natriumseleniitti
0,02
Muut komponentit
D(+)-glukoosi vedetön
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvaatti
110,00
Fenolipunainen
15,00
Aminohapot
L-alaniini
25,00
L-arginiini x HCl
84,00
L-asparagiini x H2O
25,00
L-asparagiinihappo
30,00
L-kystiini x 2HCl
91,24
L-Glutamiini
584,00
L-glutamiinihappo
75,00
Glysiini
30,00
L-histidiini x HCl x H2O
42,00
L-isoleusiini
104,80
L-leusiini
104,80
L-lysiini x HCl
146,20
L-metioniini
30,00
L-Fenyylialaniini
66,00
L-proliini
40,00
L-Seriini
42,00
L-treoniini
95,20
L-tryptofaani
16,00
L-tyrosiini x 2Na
104,20
L-valiini
93,60
Vitamiinit
D(+)-Biotiini
0.013
D-kalsiumpantotenaatti
4,00
Koliinikloridi
4,00
Foolihappo
4,00
myo-Inositoli
7,20
Alun perin se oli suunniteltu tukemaan ihmisen leukemiasolujen kasvua sekä suspensio
- että monokerrosviljelmissä, mutta tutkijoiden ja kaupallisten toimittajien tekemien muutosten myötä RPMI 1640 -medium on kehittynyt sopivaksi monille erilaisille nisäkässoluille. Se on poikkeuksellisen yhteensopiva sellaisten solulinjojen kanssa kuin HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrosyytit ja karsinoomat.
RPMI 1640 Medium erottuu muista soluviljelymedioista ainutlaatuisen koostumuksensa ansiosta. Se sisältää huomattavan määrän fosfaattia, aminohappoja ja vitamiineja. Erityisesti se sisältää biotiinia, B12-vitamiinia ja PABA:ta, joita ei ole Eagle's Minimal Essential Mediumissa tai Dulbecco's Modified Eagle Mediumissa. Lisäksi RPMI 1640 -mediassa on huomattavasti korkeammat inositoli
- ja koliinivitamiinien pitoisuudet. Se ei kuitenkaan sisällä proteiineja, lipidejä tai kasvutekijöitä. Näin ollen solujen kasvulle optimaalisten olosuhteiden luomiseksi tarvitaan yleensä 10 %:lla naudan sikiöseerumia (FBS).
RPMI 1640 -mediumin puskurointijärjestelmä perustuu natriumbikarbonaattiin, ja fysiologisesti sopivan pH:n ylläpitäminen edellyttää 5-10 %:n CO2-ympäristöä. Pelkistävän aineen, glutationin, sisältyminen tähän väliaineeseen erottaa tämän väliaineen edelleen muista.
Laadunvalvonta
Steriilisuodatettu
Varastointi ja säilyvyys
Säilytetään +2°C
- +8°C:ssa valolta suojattuna.
Kun se on avattu, säilytä 4 °C:ssa ja käytä 6-8 viikon kuluessa.
Toimitusolosuhteet
Ympäristön lämpötila
Huolto
Säilytettävä jääkaapissa +2°C
- +8°C:ssa pimeässä. Vältä pakastamista ja usein tapahtuvaa lämmittämistä +37°C:seen, koska se heikentää tuotteen laatua.
Älä lämmitä väliaineen lämpötilaa yli 37°C äläkä käytä kontrolloimattomia lämmönlähteitä, kuten mikroaaltolaitteita.
Jos väliaineesta käytetään vain osa, poista tarvittava määrä ja lämmitä se huoneenlämpöiseksi ennen käyttöä.
Koostumus
Luokka
Ainesosat
Pitoisuus (mg/l)
Aminohapot
Glysiini
10.00
L-Alanyyli-L-Glutamiini
434.40
L-arginiini
200.00
L-asparagiiniH2O
56.82
L-asparagiinihappo
20.00
L-kystiini 2HCl
65.20
L-glutamiinihappo
20.00
L-histidiini HClH2O
20.27
L-hydroksi-L-proliini
20.00
L-isoleusiini
50.00
L-leusiini
50.00
L-lysiini HCl
40.00
L-metioniini
15.00
L-Fenyylialaniini
15.00
L-Proliini
20.00
L-Seriini
30.00
L-treoniini
20.00
L-tryptofaani
5.00
L-tyrosiini 2Na 2H2O
28.83
L-valiini
20.00
Vitamiinit
p-Aminobentsoehappo
1.00
D-Biotiini
0.20
Koliinikloridi
3.00
D-kalsium-pantotenaatti
0.25
Foolihappo
1.00
myo-Inositoli
35.00
Nikotiiniamidi
1.00
Pyridoksiini HCl
1.00
Riboflaviini
0.20
Tiamiini HCl
1.00
B12-vitamiini
0.005
Epäorgaaniset suolat
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Muut komponentit
D-glukoosi
2000.00
L-Glutationi pelkistetty
1.00
Fenolipunainen natriumsuola
5.30