Neuro-2a-solulinja
Neuro-2a on hiirellä tuotettu hermosolulinja, jota käytetään laajalti neurotieteellisessä tutkimuksessa. Näitä soluja käytetään pääasiassa hermoston kehityksen, erilaistumisen, neurotoksisuuden, solujen signalointireittien ja aksonikasvun tutkimiseen. Lisäksi niitä käytetään lääkekehitykseen ja seulontatarkoituksiin.
Tässä artikkelissa keskitytään neuroblastooma Neuro-2a -soluihin liittyviin tärkeisiin näkökohtiin, joista voi olla apua ennen sen kanssa työskentelyn aloittamista. Se kattaa pääasiassa:
- Neuro-2a-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
- Neuro-2a-solulinjan viljelyä koskevat tiedot
- Neuro-2a-solulinjan edut ja haitat
- Neuro-2a-solulinjan tutkimussovellukset
- Neuro-2a-soluja sisältävät tutkimusjulkaisut
- Neuro-2a-soluja koskevat resurssit: -2a-2a: Protokollia, videoita ja muuta
1. Neuro-2a-solujen yleiset ominaisuudet ja alkuperä
Tässä osassa käsitellään Neuro-2a-solulinjan taustaa ja perusominaisuuksia, jotka on tärkeää tietää ennen sen kanssa työskentelyä. Tässä opit: Mikä on Neuro-2a-solulinja? Mikä on Neuro-2a-solulinjan alkuperä? Mitä on Neuro-2a-solulinjan erilaistuminen? Mikä on Neuro-2a-solun koko? Mikä on Neuro-2a-solujen morfologia?
- Neuro-2a-solut ovat peräisin albiinohiiren (kanta A) spontaanista kasvaimesta (neuroblastooma). Solulinjan perustivat R.J. Klebe ja F.H. Ruddle.
- Neuro-2a:n neuroblastooman soluilla on neuronaalinen ja ameboidinen kantasolumorfologia.
- Neuro-2a-solujen koko on 12 mikrometriä [1].
- Neuro-2a-solujen kromosomiluku voi vaihdella 59:stä 193:een, ja modaaliluku on 95. Näiden neuroblastoomasolujen karyotyyppi on epävakaa 94-98 kromosomin välillä.
2. Neuro-2a-solulinjan viljelyä koskevat tiedot
Neuro-2a-soluja käytetään laajalti neurotieteen tutkimuslaboratorioissa. Ennen kuin työskentelet näiden solujen kanssa, sinun on syytä tutustua alla mainittuihin välttämättömiin soluviljelytietoihin. Tämä voi auttaa sinua pääsemään helpommalla. Saat tietää: Mikä on Neuro-2a-soluviljelyalusta? Miten Neuro-2a-soluja viljellään? Mikä on Neuro-2a-solujen kaksinkertaistumisaika? Mikä on Neuro-2a-solujen kylvötiheys? Mikä on Neuro-2a-soluviljelyprotokolla? Mikä on Neuro-2a-solujen kasvatusmedia?
Neuro-2a-solujen viljelyä koskevat keskeiset seikat
|
Kaksinkertaistumisaika: |
Neuro-2a-solujen kaksinkertaistumisaika on noin 70 tuntia. |
|
Adheesiossa tai suspensiossa: |
Neuro-2a on tarttuva solulinja. |
|
Kylvötiheys: |
Neuro-2a-solulinjan optimoitu solujen kylvötiheys on 1 x104 solua/cm2. Kylvöä varten solut pestään magnesium- ja kalsiumvapaalla fosfaattipuskuriliuoksella (1x). Myöhemmin lisätään passage-liuos (Accutase) ja soluja inkuboidaan 8-10 minuuttia huoneenlämmössä. Solujen dissosioitumisen jälkeen lisätään tuoretta mediaa ja solut sentrifugoidaan. Kerätty solupelletti resuspendoidaan huolellisesti, ja solut kaadetaan kasvatusastiaan kasvattamista varten. |
|
Kasvualusta: |
Neuro-2a-solujen viljelyyn käytetään EMEM:ää. Se sisältää 10 % FBS:ää, 2 mM L-Glutamiinia, 1,5 g/l NaHCO3:a, EBSS:ää, 1 mM natriumpyruvaattia ja NEAA:ta solujen ihanteellista kasvua varten. Väliaine on vaihdettava 1-2 kertaa viikossa. |
|
Kasvuolosuhteet: |
Neuro-2a-viljelmiä pidetään 37 °C:n kostutetussa inkubaattorissa, joka on kytketty 5 %:n hiilidioksidilähteeseen. |
|
Varastointi: |
Solut on säilytettävä alle -150 °C:n lämpötilassa erittäin matalalämpöisessä sähköisessä pakastimessa tai nestemäisen typen höyryfaasissa pitkällä aikavälillä. |
|
Pakastusprosessi ja väliaine: |
Neuro-2a-solujen jäädyttämiseen käytetään CM-1- tai CM-ACF-mediaa. Solut jäädytetään hitaalla jäädytysprosessilla, joka sallii vain 1 °C:n pudotuksen minuutissa. Tämä suojaa soluja sokilta ja säilyttää niiden elinkelpoisuuden. |
|
Sulatusprosessi: |
Jäädytettyjen viljelmien sulattamiseksi injektiopullo asetetaan 37 °C:n vesihauteeseen 40-60 sekunniksi, kunnes jäljellä on vain pieni jäämöhkäle. Tämän jälkeen lisätään kasvatusmedia ja solut sentrifugoidaan. Tämä vaihe auttaa poistamaan pakastusmedian komponentit. Solupelletti suspendoidaan uudelleen, ja solut siirretään uuteen pulloon, joka täytetään kasvatusmedialla. Tämän jälkeen solut asetetaan inkubaattoriin 37 °C:n lämpötilaan vähintään 24 tunniksi. |
|
Bioturvallisuustaso: |
Neuro-2a-viljelmien käsittely ja ylläpito edellyttävät bioturvallisuustasoa 1. |
3. Neuro-2a-solulinjan edut ja haitat
Neuro-2a-soluilla on joitakin etuja ja haittoja, jotka erottavat ne muista hermosolulinjoista. Tässä luetellaan joitakin näiden solujen merkittäviä etuja ja haittoja.
Edut
Neuro-2a hiiren neuroblastooma-solulinjan etuja ovat:
-
Helppo ylläpitää
Neuro-2a-solulinjaan ei liity monimutkaisia tai monimutkaisia soluviljelymenetelmiä. Niitä on helppo viljellä ja ylläpitää tutkimuslaboratorioissa.
-
In vitro -neuronaalinen solumalli
Neuro-2a on kätevä hermosolumalli, jota tutkijat käyttävät laajalti hermosolujen kehitys- ja erilaistumistutkimuksissa.
Haitat
Neuro-2a-solujen haittoja ovat:
-
Hiiriperäinen alkuperä
Tutkijoiden on oltava varovaisia, kun he ekstrapoloivat hiiripohjaisten tutkimusten tuloksia ihmisten terveyteen ja sairauksiin, sillä hiiren ja ihmisen biologia voi poiketa merkittävästi toisistaan.
4. Neuro-2a-solulinjan tutkimussovellukset
Neuro-2a-solut tarjoavat monia sovelluksia neurotieteiden tutkimusalalla. Tässä käsitellään muutamia tämän solulinjan lupaavia käyttötarkoituksia:
- Hermoston kehitys: Neuro-2a on in vitro -neuronaalinen solumalli, jota käytetään laajalti hermosolujen kehityksen ja siihen liittyvien prosessien, kuten erilaistumisen, aksonikasvun ja synapsien muodostumisen, tutkimiseen. Vuonna 2020 tehdyssä tutkimuksessa käytettiin Neuro-2a-soluja mikroRNA-124:n roolin tutkimiseen retinohapon aiheuttamassa hermosolujen erilaistumisessa [2]. Toisessa tutkimuksessa tutkittiin Neuro 2a:n retinohapporeseptorin gamma (RARG) ja miRNA-124:n ilmentymistä neuroblastooma-solulinjassa (N2A). Tässä tutkimuksessa ehdotettiin, että RARG on miR-124:n kohteena ja tukahduttaa neuriitin uloskasvua [3].
- Neurotoksisuus: Neuro-2a:ta käytetään myös arvioimaan lääkkeiden, kemikaalien tai ympäristötekijöiden toksisia vaikutuksia hermosoluihin. Esimerkiksi Zhihong Yinin ja työtovereiden tekemässä tutkimuksessa tutkittiin ympäristökemikaalin bisfenoli A:n (BPA) neurotoksisuutta Neuro-2a-solujen avulla. He havaitsivat, että BPA tukahduttaa hermosolujen erilaistumista ja lisääntymistä häiritsemällä niiden solu- ja synaptista eheyttä [4].
- Lääkkeiden seulonta: Neuro-2a-soluja käytetään myös useiden lääkkeiden, yhdisteiden ja luonnontuotteiden terapeuttisten vaikutusten arviointiin. Esimerkiksi eräässä tutkimuksessa käytettiin Neuro-2a-soluja ja tutkittiin Gingko biloba -kasviuutteen antioksidatiivista potentiaalia. Lisäksi tutkimuksessa ehdotettiin, että se aiheuttaa Aβ-aggregaation vähenemistä ja voi olla mahdollinen Alzheimerin taudin hoito [5].
5. Neuro-2a-soluja sisältävät tutkimusjulkaisut
Tässä on joitakin mielenkiintoisia tutkimusjulkaisuja, joissa Neuro-2a-solulinja esiintyy.
Tässä Journal of Natural Medicines -lehdessä vuonna 2018 julkaistussa tutkimuksessa tutkittiin valkopippurista (P. nigrum) eristettyjen alkamidien terapeuttisia vaikutuksia Neuro-2a:n hermosoluihin.
Nkx2. 1:n alasääntely on mukana liiallisen retinohapon aiheuttamassa aivojen poikkeavuudessa
Tässä Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020 -lehdessä julkaistussa tutkimuksessa ehdotettiin, että Nkx2.1 -geenillä on tärkeä rooli hiiren aivojen kehityksessä säätelemällä Shh-signalointikaskadia.
Tämä artikkeli julkaistiin Toxicology and Industrial Health -lehdessä (2023), ja siinä ehdotetaan, että ympäristökemikaali bisfenoli A, aiheuttaa neurotoksisuutta neuro-2a-soluissa ja häiritsee niiden synaptista ja sytoskeletaalista toimintahäiriötä.
Tässä Pharmaceuticals-lehdessä (2021) julkaistussa artikkelissa ehdotettiin, että lääke, heksareliini, moduloi PI3K/AKT- ja MAPK-kaskadia neuroblastoomasoluissa (Neuro-2a) ja estää vetyperoksidin aiheuttamaa neuro-2a-solujen apoptoosia.
Tässä Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine -julkaisussa (2021) julkaistussa tutkimusartikkelissa ehdotettiin, että Emblica officinalis -hedelmäuute hillitsee neuroinflammatiota Neuro-2a-soluissa ja voi siten olla hyödyllinen neuroinflammatorisissa sairauksissa.
6. Neuro-2a-solujen resurssit: Neuro-2a-2a: Protokollien, videoiden ja muun muassa: Protokollien, videoiden ja muun muassa
Seuraavassa on lueteltu Neuro-2a-soluista saatavilla olevia verkkolähteitä. Niihin kuuluvat Neuro-2a-solujen viljely- ja transfektioprotokollat.
- Neuro-2a:n transfektioprotokolla: Neuro-2a on sopiva transfektio-isäntä. Tämä linkki opastaa sinua solulinjan transfektioprotokollasta. Neuro 2a:n transfektiotehokkuus vaihtelee reagenssikohtaisesti.
Seuraava linkki sisältää Neuro-2a-soluviljelyprotokollan.
- Neuro-2a-soluviljelyprotokolla: Tämä linkki auttaa sinua oppimaan Neuro 2a -solujen subkulturointiprotokollan.
- Neuro-2a-solut: Sivusto sisältää kattavat tiedot Neuro-2a-solujen elatusaineista, kylvötiheydestä sekä kryosäilöttyjen ja proliferatiivisten viljelmien subkulturointiin ja käsittelyyn liittyvistä protokollista.
Viitteet
- Lulevich, V., et al., Single-cell mechanics provides a sensitive and quantitative means for probing amyloid-beta peptide and neuronal cell interactions. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., MiR-124:n rooli retinohapon aiheuttaman Neuro-2A-solujen erilaistumisen säätelyssä. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., et al., Retinohapporeseptori gamma on mikroRNA-124:n kohteena ja estää neuriitin uloskasvua. Neuropharmacology, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisfenoli-A-altistus aiheutti neurotoksisuutta ja liittyi synapsiin ja sytoskelettiin Neuro-2a-soluissa. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Gingko biloba -uute (EGb) estää oksidatiivista stressiä APPsw:tä yliekspressoivissa neuro-2A-soluissa. BioMed research international, 2019. 2019.