Hep3B-rakud: maksarakulise kartsinoomi uurimine ja avastused
HEP3B on immortaliseeritud inimese hepatotsüütide kartsinoomi rakuliin. Seda kasutatakse laialdaselt hepatotoksilisuse ja ravimite metabolismi uurimisel. HEP3B transfektsiooni efektiivsus on märkimisväärne; seetõttu kasutatakse neid rakke sageli maksavähi arengu, progresseerumise ja ravimeetodite uurimiseks. Käesolev artikkel hõlmab kogu vajalikku teavet HEP3B rakuliini kohta, et aidata teil sellega töötada. Peamiselt sisaldab see järgmist:
- Kasvukeskkond
- HEP3B rakkude kasvatamiseks kasutatakse EMEM-keskkonda, mis sisaldab 10% FBS-i, 2,2 g/l NaHCO3-d, 2 mM L-glutamiini ja Earle'i tasakaalustatud soolalahust (EBSS).
- Kaksinkordistumisaeg
- HEP3B-rakkude kahekordistumisaeg on umbes 36 tundi.
- Kasvutüüp
- See hepatoma rakuliin on adhesiivne.
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli HEP3B
- HEP3B rakkude üldised omadused ja päritolu
- HEP3B rakuliini kasvatamise teave
- HEP3B rakuliin: eelised ja piirangud
- HEP3B rakkude rakendused teadustöös
- HEP3B rakuliini käsitlevad publikatsioonid
- HEP3B rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
HEP3B-rakkude üldised omadused ja päritolu
Rakuliini kohta vajalik peamine teave on selle päritolu ja üldised omadused. See aitab teil otsustada, kuidas seda oma teadustöös kasutada, ja aitab teil sellega toime tulla. Käesolevas artikli osas käsitletakse kogu olulist teavet HEP3B päritolu ja omaduste kohta. Siit saate teada: Mis on Hep 3B rakuliinid? Mis on Hep3B rakkude päritolu? Milline on HEP3B rakkude morfoloogia?
- HEP3B on pidev inimese hepatoma rakuliin, mis pärineb 8-aastase Aafrika poisi maksakoe, kellel oli hepatotsellulaarne kartsinoom (HCC). Selle asutasid Aden ja kolleegid 1979. aastal Barbara B. Knowlesi laboris Wistari instituudis Philadelphias, USA-s [1].
- HEP3B-rakkude kromosoomides on integreeritud B-hepatiidi viiruse (HBV) genoom.
- Need hepatotsüütkartsinoomi rakud näitavad epiteelimorfoloogiat.
- HEP3B-rakkude kromosoomide modaalne arv on 60. Erinevalt HepG2-st ei ole neil ümberkorraldatud 1. kromosoomi.
Mis on HepG2 ja Hep3B erinevus?
HepG2 ja HEP3B erinevad rakkude kromosoomide arvu poolest. HEP3B sisaldab 60 kromosoomi, samas kui HepG2 rakkudel on keskmiselt 55 kromosoomi. Lisaks on HepG2 mittetumorigeenne ja B-hepatiidi negatiivne, samas kui HEP3B on tumorigeenne ja HBV-positiivne.
HEP3B rakuliini kasvatamise juhised
Teadmised rakuliini kasvatamise kohta võivad teie tööd oluliselt hõlbustada. Käesolevas jaotises käsitletakse kõiki HEP3B HBV rakuliini kasvatamise põhipunkte, sealhulgas: Milline on Hep3B rakkude kahekordistumisaeg? Millised on HEP3B kasvatamistingimused? Kuidas kasvatada HEP3B HCC rakke?
HEP3B-rakkude kasvatamise põhipunktid
Kaksikordistumisaeg:
HEP3B-rakkude kahekordistumisaeg on umbes 36 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
See hepatoma rakuliin on adhesiivne.
Jagunemissuhe:
HEP3B-rakke subkultiveeritakse suhtes 1:2 kuni 1:4. Adherentseid HEP3B-rakke loputatakse 1x PBS-ga ja inkubeeritakse seejärel Accutase dissotsiatsioonilahusega. 8–10 minuti pärast lisatakse värsket kasvatuskeskkonda ja rakud tsentrifuugitakse. Saadud rakud suspendeeritakse seejärel hoolikalt ja valatakse soovitatud jagamissuhtega kasvatuskeskkonda sisaldavatesse kolvidesse.
Kasvukeskkond:
HEP3B-rakkude kultiveerimiseks kasutatakse EMEM-keskkonda, mis sisaldab 10% FBS-i, 2,2 g/l NaHCO3-d, 2 mM L-glutamiini ja Earle'i tasakaalustatud soolalahust (EBSS).
Kasvatustingimused:
HEP3B-rakke kasvatatakse 37 °C niisutatud inkubaatoris, kuhu juhitakse pidevalt 5% CO2.
Säilitamine:
Külmutatud HEP3B rakke säilitatakse temperatuuril alla -150 °C elektrilises külmkapis või vedela lämmastiku aurufaasis.
Külmutamisprotsess ja keskkond:
HEP3B rakkude külmutamiseks soovitatav keskkond on CM-1 või CM-ACF. Rakud külmutatakse aeglase külmutamisprotsessi abil, mis võimaldab temperatuuri langust vaid 1 °C minutis, et kaitsta rakkude eluvõimelisust.
Sulatusprotsess:
Külmutatud rakud sulatatakse eelnevalt 37 °C-le seadistatud veevannis 40–60 sekundit. Seejärel lisatakse need rakud värskesse kasvukeskkonda ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda kuuluvad osakesed. Kogutud rakud suspendeeritakse uuesti ja jaotatakse uude kolbi kasvatamiseks.
Bioloogiline ohutustase:
HEP3B rakkude kasvatamiseks on vaja 1. bioloogilise ohutuse taseme laborit.
HEP3B rakuliin: eelised ja piirangud
HEP3B on laialdaselt kasutatav hepatotsellulaarse kartsinoomi rakuliin. Käesolevas osas keskendutakse nende hepatoma rakkude peamistele eelistele ja piirangutele.
Eelised
HEP3B-rakkude peamised eelised on järgmised:
Lihtne kasvatada
HEP3B-rakkudel ei ole keerulisi kasvatamisnõudeid, mistõttu on neid teaduslaboris lihtne käsitseda ja hooldada. See lihtsustab katsemenetlusi.
Kõrge transfektsiooniefektiivsus
HEP3B-rakkudel on märkimisväärne transfektsiooniefektiivsus, mistõttu neid kasutatakse laialdaselt geneetilises manipuleerimises ja geeniekspressiooniga seotud uuringutes.
Tumorigeensus
HEP3B on tuumorigeenne hepatotsellulaarse kartsinoomi rakuliin, mis suudab moodustada kasvajaid, kui seda süstitakse immuunpuudulikkusega hiirele. See aitab uurida vähi progresseerumist ja arengut HEP3B ksenotransplantaadi mudelite abil.
HEP3B P53 staatus
HEP3B rakkudel on sarnane P53 geeni mutatsioon nagu hepatotsellulaarsel kartsinoomil (HCC) ja teistel vähivormidel, mistõttu on need asjakohased P53 mutatsiooni mõju uurimiseks vähi kasvule, arengule ja progresseerumisele.
Piirangud
HEP3B rakuliiniga seotud piirang on:
In vitro rakumudel
HEP3B rakuliin toimib hepatotsellulaarse kartsinoomi (HCC) rakkude in vitro mudelina. Siiski ei pruugi see täielikult kajastada HCC keerukust, nagu see esineb elusorganismides. Seetõttu võivad in vitro eksperimendi tulemused erineda in vivo täheldatutest.
HEP3B-rakkude rakendused teadustöös
HEP3B rakuliinil on mitmeid rakendusi biomeditsiinilises uurimistöös. HEP3B rakkude peamised rakendused uurimistöös on järgmised:
- Vähibioloogia: HEP3B on inimese hepatotsellulaarse kartsinoomi rakuliin. See on hindamatu väärtusega rakumudel HCC arengu ja progresseerumise aluseks olevate raku- ja molekulaarsete mehhanismide uurimiseks. Teadlased kasutavad neid rakke maksavähiga seotud geneetiliste mutatsioonide, rakuliste protsesside ja rakusignaalide radade uurimiseks. Näiteks ühes uuringus kasutati HEP3B-rakke ja leiti, et mikroRNA-223-3p reguleerib NLRP3-inflammasoomi komponente, pärsib proliferatsiooni ja soodustab HEP3B-maksakartsinoomi rakkude apoptoosi [2].
- Ravimite sõelumine ja arendamine: HEP3B rakuliini kasutatakse ka maksakartsinoomi vastu suunatud uute ravimite testimiseks, sõelumiseks ja arendamiseks. Lisaks kasutatakse seda erinevate vähivastaste ravimite ja ravimeetodite toksilisuse ja efektiivsuse hindamiseks. Teadlased kasutasid neid hepatoma rakke ka ravimite ainevahetuse uurimiseks. Teadlased kasutasid HEP3B rakke ja hindasid Cotinus coggygria taimeekstrakti tsütotoksilist potentsiaali HEP3B hepatotsüütide kartsinoomi rakkudel [3].
- Viirusnakkused: HEP3B on B-hepatiidi viiruspositiivne rakuliin; seetõttu kasutatakse seda maksavähi tekkele viivate viirusnakkuste, st HBV ja HCV uurimiseks. See võib aidata paremini mõista viirusnakkusi ja arendada potentsiaalseid viirusevastaseid ravimeetodeid. Näiteks kasutati ühes uuringus HEP3B hepatotsüütide vähirakke ja uuriti ubikvitinatsiooni tähtsust hepatiit C viiruse levimisel. Tulemused viitasid sellele, et ubikvitinispetsiifiline proteaas 15 (USP15) on seotud HCV levikuga, reguleerides hepatotsüütidele omaseid funktsioone, sealhulgas lipiiditilgakeste moodustumist ja HCV RNA transleerimist [4].
5. HEP3B rakuliini käsitlevad publikatsioonid
Artikli selles osas käsitletakse mõningaid huvitavaid teadusartikleid HEP3B rakkude kohta.
Apoptoosi ja autofaagia regulatsioon luteoliini abil inimese hepatotsellulaarse vähi Hep3B rakkudes
Selles ajakirjas Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) avaldatud artiklis väidetakse, et luteoliini poolt indutseeritud endoplasmaatilise retikuluumi stress võib avaldada P53-sõltumatut kasvajavastast mõju P53-negatiivsetes HEP3B rakkudes.
Avicennia marinast eraldatud lupeoli potentsiaalne sihtmärgistamine Hep3B maksavähirakkudes
Ajakirjas „Archiv der Pharmazie“ (2021) avaldatud uuringus pakuti välja pentatsükliline triterpenoid lupeool kui potentsiaalne vähivastane aine HEP3B-rakkude vastu.
See artikkel on avaldatud ajakirjas Molecular Medicine Reports (2017). Uuringu tulemused näitavad, et Cnidium monnieri (L.) Cussoni etanooliekstrakt indutseerib rakkude surma (apoptoosi) ja rakutsükli peatamist hepatokartsinoomi rakkudes HepG2 ja HEP3B p53 ja Akt/GSK-3β signaalitee reguleerimise kaudu.
Ajakirjas Biomolecules and Therapeutics (2020) avaldatud uuringus väideti, et auranofiinil on sünergiline toime ja see soodustab sulforafaani poolt vahendatud HEP3B-rakkude apoptoosi PI3K/AKT signaalitee aktiveerimise kaudu.
Ajakirjas BioFactors (2023) avaldatud uurimusest selgub, et tsirkulaarne RNA-0072309 avaldab HEP3B-maksarakk-kartsinoomi rakkudes kasvajavastast mõju, suunates oma toime miRNA-665-le.
HEP3B rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
Allpool on toodud mõned HEP3B rakkudega seotud ressursid:
- HEP3B transfektsioon: selles videos selgitatakse HEP3B rakkude transfektsiooniprotokolli.
- HEP3B transfektsiooni efektiivsus: See link aitab teil tutvuda HEP3B DMEM-keskkonna koostise, rakkude passaažimise ja HEP3B rakkude transfektsiooniprotokolliga. Lisaks pakub see teavet HEP3B lipofectamine 3000 reagendi optimeerimiseks teie transfektsiooniprotokollis.
Järgmine link sisaldab HEP3B rakukultuuri protokolli:
- HEP3B kultiveerimistingimused: See link aitab teil tutvuda Huh7 ja HEP3B kultuuride käitlemise ja hooldamise protokolliga.
- HEP3B rakud: Sellel veebilehel on palju teavet HEP3B rakkude kohta, sealhulgas HEP3B kasvukeskkonnad, rakkude jagamise, sulatamise ning proliferatiivsete ja krüokonserveeritud kultuuride käitlemise protokoll.
Viited
- Puttahanumantharayappa, L.D. jt, Hepatotsellulaarse kartsinoomi rakuliinide päritolu ja omadused. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): lk 1040.
- Wan, L. jt, miRNA-223-3p reguleerib NLRP3-d, et soodustada apoptoosi ja pärssida Hep3B-rakkude proliferatsiooni. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): lk 2429–2435.
- Danjolli-Hashani, D. ja S. Selen-Isbilir, Cotinus coggygria ekstrakti tsütotoksiline toime Hep3B vähirakkude liinile. Natural Product Research, 2022: lk 1–4.
- Kusakabe, S. jt, USP15 osaleb C-hepatiidi viiruse levikus, reguleerides viiruse RNA transleerimist ja lipiiditilgakeste moodustumist. Journal of Virology, 2019. 93(6): lk 10.1128/jvi. 01708-18.