HT22 rakuliin
HT22 on hiire neuronaalne rakuliin, mida kasutatakse sageli neuroteaduste uuringutes. See on väärtuslik neurodegeneratiivsete haiguste uurimisel ja potentsiaalsete neuroprotektiivsete ravimeetodite või ravitehnikate testimisel. Lisaks on HT22 rakud glutamaadile tundlikud, mistõttu neid kasutatakse glutamaadi poolt indutseeritud toksilisuse või neuronaalse kahjustuse uurimiseks.
- Kasvukeskkond
- HT22 rakkude kasvatamiseks kasutatakse DMEM-keskkonda. Optimaalse rakkude kasvu tagamiseks lisatakse sellele 10% FBS, 4,5 g/l glükoosi, 4 mM L-glutamiini, 1,5 g/l NaHCO3 ja 1,0 mM naatriumpüruvaati.
- Kahekordistumisaeg
- HT22 rakkude kahekordistumisaeg on umbes 15 tundi.
- Kasvutüüp
- HT22 rakud on adhesiivsed.
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli HT22
Käesolevas artiklis tuuakse esile HT22 rakkude olulised omadused, mis võivad aidata teid teie uurimistöös. Artiklis käsitletakse peamiselt järgmisi teemasid:
- HT22 rakkude üldised omadused ja päritolu
- HT22 rakuliini kasvatamise teave
- HT22 rakuliini eelised ja puudused
- HT22 rakuliini rakendused teadustöös
- HT22 rakke käsitlevad teadusartiklid
- HT22 rakkude ressursid: protokollid, videod ja muud
HT22 rakkude üldised omadused ja päritolu
Artikli selles osas selgitatakse HT22 rakkude päritolu ja üldisi omadusi. Enne töö alustamist on vaja teada seda teavet rakuliini kohta. Siit saate teada: Mis on HT22 rakud? Milline on HT22 hipokampuse rakkude morfoloogia? Milline on HT22 rakkude suurus?
HT22 on pidev rakuliin, mis on saadud hiire aju hipokampuse piirkonnast. See on vanemrakuliini HT-4 subkloon, mis on arendatud hiire närvirakkude kudede immortaliseerimise teel temperatuuritundliku polüoomaviiruse simianviiruse 40 (SV40) T-antigeeni abil.
Need rakud erinevad küpsetest hipokampuse rakkudest, kuna neil puuduvad glutamaadi- ja kolinergilised retseptorid, mis on olemas hipokampusest pärinevatel küpsetel neuronitel. Seetõttu ei sobi neid kasutada mäluga seotud uuringutes [1].
HT22 rakud on välimuselt sarnased epiteelrakkudega.
HT22 rakuliini kasvatamise juhised
HT22 rakke kasutatakse neuroteaduse uurimislaborites. Enne nende rakkude kasvatamist otsivad teadlased olulist teavet rakukultuuri kohta, mis muudab nende töö lihtsaks ja tõhusaks. Käesolevas jaotises käsitletakse kõiki HT22 rakkude kasvatamise põhipunkte. Saate teada: Milline on HT22 rakkude kahekordistumisaeg? Kuidas kasvatada HT22 rakke? Milline on HT22 rakkude kasvatamise protokoll? Milline on HT22 rakkude kasvukeskkond?
HT22 rakkude kasvatamise põhipunktid
Kaksikustumisaeg:
HT22-rakkude kahekordistumisaeg on umbes 15 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
HT22 rakud on adhesiivsed.
Subkultiveerimise suhe:
HT22 hipokampuse rakkude subkultiveerimissuhe on 1:3 kuni 1:6. Lühidalt öeldes eemaldatakse kasvukeskkond ja adhesiivsed rakud loputatakse 1x PBS-ga. Kolbi lisatakse Accutase lahustamisvedelik ja rakke inkubeeritakse 8–10 minutit toatemperatuuril. Seejärel lisatakse värsket kasvukeskkonda ja rakud kogutakse tsentrifuugimiseks viaali. Saadud rakupellet resuspendeeritakse hoolikalt ja rakud jaotatakse kasvuks kultuurikolbi.
Kasvukeskkond:
HT22 rakkude kasvatamiseks kasutatakse DMEM-keskkonda. Selle optimaalseks rakkude kasvuks täiendatakse seda 10% FBS-iga, 4,5 g/l glükoosiga, 4 mM L-glutamiiniga, 1,5 g/l NaHCO3-ga ja 1,0 mM naatrium-püruvaadiga.
Kasvatustingimused:
HT22 rakukultuure hoitakse niisutatud inkubaatoris (temperatuur 37 °C) 5% CO2 sisaldusega.
Säilitamine:
Külmutatud HT22 rakke võib pikaajaliselt säilitada temperatuuril alla -150 °C kas vedela lämmastiku aurufaasis või ülikülmas elektrilises sügavkülmikus.
Külmutamisprotsess ja keskkond:
HT22 rakke saab külmutada CM-1 või CM-ACF keskkonnas, kasutades aeglast külmutamismeetodit. See protsess võimaldab proovi temperatuuri langust vaid 1 °C minutis, kaitseb rakke šoki eest ja aitab säilitada nende eluvõimelisust.
Sulatusprotsess:
Rakke sulatatakse 37 °C veevannis 40–60 sekundit, kuni jääb alles väike jääklomp. Seejärel lisatakse rakkudele kasvukeskkond ja neid tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda sisaldavad komponendid. Rakupellet resuspendeeritakse ja rakud valatakse uude kolbi, mis sisaldab kasvukeskkonda. Seejärel inkubeeritakse rakke inkubaatoris 37 °C juures vähemalt 24 tundi.
Bioloogilise ohutuse tase:
HT22 rakkude kasvatamiseks on kohustuslikud 1. bioloogilise ohutuse taseme laboritingimused.
HT22 rakuliini eelised ja puudused
HT22 hipokampuse rakkudel on mõned eelised ja puudused, mis eristavad neid teistest neuronrakkude liinidest. Siin on nimetatud mõned selle rakuliini märkimisväärsed eelised ja puudused.
Eelised
HT22 hiire neuronaalse rakuliini eelised on järgmised:
-
Kiire kasvutempo
HT22 rakkude kahekordistumisaeg on 15 tundi, mis võimaldab kiiret ja tõhusat katsetamist ning aitab saavutada õigeaegseid uurimistulemusi.
-
Immortaliseerimine
HT22 on immortalisatsiooniga rakuliin, mis tagab pikaajalise pideva kasvu. See tagab rakkude pideva kättesaadavuse, vähendab aega ja kulusid ning hõlbustab pikaajalisi katseid, mille tulemused on ühtlased.
Puudused
HT22 rakkude puudused on järgmised:
-
Hiire päritolu
HT22 rakuliin on saadud hiire aju hipokampuse koest, mis ei pruugi täielikult kajastada inimese neuronirakkude füsioloogia ja käitumise keerukust, piirates seega nende rakenduslikku asjakohasust.
4. HT22 rakuliini rakendused teadusuuringutes
HT22 rakke kasutatakse laialdaselt neurobioloogia uurimistöös. Käesolevas artikli osas käsitletakse mõningaid selle rakuliini paljulubavaid rakendusi:
- Neuroteaduslikud uuringud: HT22 rakke kasutatakse laialdaselt neurodegeneratiivsete haiguste, st Alzheimeri ja Parkinsoni tõve uurimisel. Neid peetakse väärtuslikuks uurimisvahendiks nende haigustega seotud neurotoksilisuse ja oksüdatiivse stressi mehhanismide uurimisel. 2020. aastal läbi viidud uuringus leiti, et PI3K/AKT/CREB signaalitee on seotud hüperglükeemia poolt indutseeritud neurotoksilisusega HT22 rakkudes [2]. Samamoodi on hiljutises uuringus välja toodud, et Nrf2/HO-1 signaalitee ja NF-κB signaalitee mängivad olulist rolli HT22-rakkude amüloid-beeta toksilisuses [3].
- Ravimite sõelumine: HT22-rakke kasutatakse laialdaselt ravimite testimiseks ja sõelumiseks. Need aitavad teadlastel tuvastada potentsiaalseid ravimeid, millel on neuroprotektiivne toime neurodegeneratiivsete haiguste vastu võitlemisel. 2019. aastal läbi viidud uuringus uuriti tetrahüdrokurkumiini ühendi neuroprotektiivset potentsiaali glutamaadiga töödeldud HT22 hipokampuse rakkudes. Siinkohal indutseerib glutamaat HT22 rakkudes oksüdatiivset stressi ja põhjustab rakkude surma, aktiveerides mitogeeni poolt aktiveeritud proteiinkinaase [4].
5. HT22 rakke käsitlevad teadusartiklid
Siin on mõned huvitavad teadustööd, milles käsitletakse HT22 rakuliini:
Selles International Journal of Molecular Medicine (2019) ajakirjas avaldatud uuringus pakuti välja krotsiini, Crocus sativus L.-st eraldatud ühendi, neuroprotektiivne potentsiaal L-glutamaadiga kahjustatud HT22 rakkudes.
Ajakirjas Neuropharmacology (2018) avaldatud artiklis teatati, et oksindooli derivaadid kaitsevad oksüdatiivse stressi poolt indutseeritud HT22-rakkude surma eest.
Ginsenoside Rb2 pärsib glutamaadi vahendatud oksüdatiivset stressi ja neuronite surma HT22 rakkudes
See uurimistöö avaldati ajakirjas Journal of Ginseng Research 2019. aastal. Uuringus uuriti loodusliku toote, ginsenoside Rb2, neuroprotektiivset mõju, kasutades HT22 rakuliini. Uuringus leiti, et ginsenoside Rb2 vähendas tõhusalt glutamaadi poolt indutseeritud oksüdatiivset stressi ja rakkude surma hiire hipokampuse rakkudes HT22.
Selles ajakirjas Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) avaldatud uuringus hinnati hõbedananoosakeste tsütotoksilist potentsiaali HT22 rakuliinis.
Ferrostatin-1 kaitseb HT-22 rakke oksüdatiivse toksilisuse eest
See teadusartikkel avaldati 2020. aastal ajakirjas Neural regeneration research. Selles väideti, et ferrostoosi inhibiitor ferrostaatin-1 ennetab oksüdatiivset toksilisust HT22 hipokampuse rakkudes.
HT22 rakkude ressursid: protokollid, videod ja muud
Mõned HT22 rakke käsitlevad veebivahendid selgitavad nende transfektsiooni, diferentseerumise ja rakukultuuri protokolle:
- HT22 transfektsioon: See dokument sisaldab optimeeritud protokolli HT22 transfektsiooniks 24- ja 96-augulistes rakukultuuriplaatides.
- HT22 rakkude diferentseerumine: see artikkel annab põhjaliku ülevaate HT22 diferentseerumise protokollist.
Järgmine link sisaldab HT22 rakukultuuri protokolli:
- HT22 rakkude subkultiveerimine: See link aitab teil õppida HT22 rakuliini subkultiveerimise protokolli. Lisaks aitab see teil õppida protokolli neurotoksilisuse indutseerimiseks rakkudes.
- HT22 hipokampuse rakud: See veebisait sisaldab palju kasulikku teavet HT22 rakkude kahekordistumisaega, kasvukeskkondi ja rakukultuuri protokolle kohta.
Viited
- He, M. jt, Diferentseerumine muudab HT22 neuronid vastuvõtlikuks eksitotoksilisusele. Neural Regen Res, 2013. 8(14): lk 1297–306.
- Zhang, S. jt, Fisetin ennetab HT22-rakkude kõrge glükoositaseme poolt indutseeritud neurotoksilisust PI3K/Akt/CREB signaalitee kaudu. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: lk 241.
- Zhang, R.-l., jt., Berberiini kaitsvad mõjud β-amüloidi poolt indutseeritud neurotoksilisuse vastu HT22 rakkudes Nrf2/HO-1 signaalitee kaudu. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: lk 106–210.
- Park, C.-H. jt, Tetrahüdrokurkumiini neuroprotektiivne toime glutamaadi poolt indutseeritud oksüdatiivse stressi vastu hipokampuse HT22 rakkudes. Molecules, 2019. 25(1): lk 144.