DLD-1 rakud: DLD-1 rakkude rakendused ja tähelepanekud kolorektaalvähi uurimisel
DLD-1 on inimese kolorektaalse kartsinoomi rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes. See on väärtuslik vahend käärsoolevähi erinevate aspektide uurimiseks, sealhulgas kasvaja areng, progresseerumine, aluseks olevad molekulaarsed mehhanismid ja ravimite toime. Seega on DLD-1 silmapaistev haiguse mõistmisel ja potentsiaalsete ravistrateegiate väljatöötamisel.
- Kasvukeskkond
- DLD-1 rakkude kasvatamiseks kasutatakse RPMI 1640-t koos keskkonnalisanditega, sealhulgas 10% loote veise seerumit (FBS), 2,1 mM stabiilset glutamiini ja 2,0 g/l NaHCO3. Keskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
- Kahekordistumisaeg
- DLD-1 kahekordistumisaeg on umbes 15 tundi.
- Kasvutüüp
- DLD-1 on adhesiivne inimese käärsoolevähirakkude liin. Rakud kasvavad monokihiks.
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli DLD-1
DLD-1 rakkude üldised omadused ja päritolu
Enne rakuliiniga töötama hakkamist peab teadlane esmalt arvestama selle päritolu ja üldiste omadustega. Käesolev artikliosa on üksikasjalik sissejuhatus DLD-1 rakuliini. Siin käsitletakse järgmisi korduma kippuvaid küsimusi: Mis on DLD-1 rakud? Mis on DLD-1 vähirakuliin? Millised on DLD-1 rakuliini mutatsioonid? Kui suur on DLD-1 rakk? Milline on DLD-1 rakkude morfoloogia?
- DLD-1, käärsoolevähirakkude liin, pärineb 67-aastase kolorektaalse adenokartsinoomiga meespatsiendi jämesoole. Selle isoleerisid D.L. Dexter ja kolleegid aastatel 1977–1979. See rakuliin on sama päritolu kui rakuliinid HCT-8, HCT-15 ja HRT-18.
- Nagu kolorektaalvähid, on ka DLD-1 rakkudel mikrosatelliitide ebastabiilsuse fenotüüp [1].
- DLD-1 mutatsioonid hõlmavad KRAS, P53, BRAF, BRCA1 ja BRCA2. DLD-1 P53 staatuse, DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 ja DLD-1 KRAS mutatsiooni tõttu peetakse neid rakke ideaalseks vähiuuringuteks.
- Nendel rakkudel on epiteelilaadne morfoloogia.
- DLD-1 rakuliini suurus on umbes 15 µm.
- Inimese kolorektaalse vähi rakuliinil DLD-1 on pseudodiploidsed kromosoomid. Umbes 86% rakkudest omab modaalse kromosoomide arvu 46. Siiski võib polüploidsus esineda ka 17,1% rakupopulatsioonist.
DLD-1 rakuliini kasvatamise juhised
Enne mis tahes rakuliini kasvatamist peate teadma selle põhilisi rakukultuuri nõudeid. Käesolevas jaotises tuuakse esile olulised punktid, mida peate teadma enne DLD-1 rakuliiniga töötamise alustamist. See hõlmab järgmist: Mis on DLD-1 kahekordistumisaeg? Mis on DLD-1 kasvatuskeskkond? Mis on DLD-1 rakkude külvitihedus? Kuidas kasvatada DLD-1 rakke?
DLD-1 rakkude kasvatamise põhipunktid
Kahekordistumisaeg:
DLD-1 kahekordistumisaeg on umbes 15 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
DLD-1 on adheseeruv inimese käärsoolevähirakkude liin. Rakud kasvavad monokihiks.
Istutustihedus:
DLD-1 rakke külvatakse tihedusega 1–2 x 104 rakku/cm2. Adherentseid rakke pestakse 1x fosfaadipuhvri soolalahusega (PBS) ja inkubeeritakse passaažilahusega (Accutase) toatemperatuuril. Pärast 8–10-minutilist inkubeerimist lisatakse lahtikukkunud rakud kasvukeskkonnale ja tsentrifuugitakse. Seejärel suspendeeritakse rakupellet hoolikalt uuesti ja rakud valatakse uude kasvukeskkonnaga kultuurinõusse.
Kasvukeskkond:
DLD-1 rakkude kasvatamiseks kasutatakse RPMI 1640-t koos keskkonnalisanditega, sealhulgas 10% loote veise seerumit (FBS), 2,1 mM stabiilset glutamiini ja 2,0 g/l NaHCO3. Keskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
DLD-1 kultuure hoitakse 37 °C niisutatud inkubaatoris, kus on 5% CO2 sisaldus.
Säilitamine:
DLD-1 rakke säilitatakse vedela lämmastiku aurufaasis või elektrilises ülikülmas külmkapis (temperatuuril alla -150 °C).
Külmutamisprotsess ja keskkond:
DLD-1 rakkude külmutamiseks võib kasutada CM-1 või CM-ACF külmutuskeskkonda. Soovitatav on alati aeglane külmutamisprotsess, mis võimaldab temperatuuri järkjärgulist langust 1 °C võrra, vältides seeläbi rakkude šokki ja kaitstes nende eluvõimelisust.
Sulatusprotsess:
Külmutatud rakud sulatatakse eelnevalt 37 °C-le seadistatud veevannis 40–60 sekundit, kuni jääb alles väike jääklomp. Seejärel lisatakse rakud värskesse keskkonda ja tsentrifuugitakse. See samm on vajalik külmutuskeskkondade komponentide eemaldamiseks rakkudest. Kogutud rakud suspendeeritakse uuesti kasvukeskkonnas ja jaotatakse kasvuks kolbi.
Bioloogilise ohutuse tase:
DLD-1 rakuliini hoitakse 1. bioloogilise ohutuse taseme laborites.
DLD-1 rakuliin: eelised ja piirangud
Artikli selles osas vaatame läbi DLD-1 käärsoolevähi rakuliini eelised ja piirangud.
Eelised
DLD-1 rakuliini peamised eelised on järgmised:
Kolorektaalse vähi mudel
DLD-1 rakkudel esinevad kolorektaalvähiga patsientidel tavaliselt leitud mutatsioonid, nagu DLD-1 KRAS-mutatsioon, DLD-1 BRCA ja DLD-1 BRCA2. See asjaolu teeb neist kliiniliselt sobiva rakumudeli selle haiguse uurimiseks.
Tumorigeenne rakuliin
DLD-1 rakud on tuumorigeensed. Need võivad põhjustada kasvajate teket, kui neid süstitakse alasti hiirtele. Seetõttu kasutavad teadlased neid rakke ksenotransplantaadi kasvajamudelite väljatöötamiseks, mis aitavad uurida kasvajate teket, arengut ja progresseerumist in vivo.
Piirangud
DLD-1 rakkudega seotud piirangud on järgmised:
Heterogeensus
DLD-1 käärsoolevähirakkude populatsioonid on geneetiliselt ja fenotüübiliselt heterogeensed. See võib mõjutada uurimistulemuste üldistatavust.
DLD-1 rakuliini rakendused teadustöös
DLD-1 rakuliinil on mitmeid rakendusi vähiuuringutes. Käesolevas jaotises käsitletakse mõningaid olulisemaid rakendusi.
- Vähktõve uuringud: DLD-1 rakud on väärtuslik in vitro mudel, mis aitab mõista kolorektaalse vähktõve kasvu, arengu ja progresseerumise molekulaarseid mehhanisme. Lisaks kasutatakse neid geeniekspressiooni, signaaliteede ja konkreetsete geneetiliste mutatsioonide mõju uurimiseks vähirakkude käitumisele. 2022. aastal läbi viidud uuringus täheldati, et PI3K/Akt/YAP signaalikaskad reguleerib DLD-1 kolorektaalse vähirakkude liini rännet ja invasiivsust [2].
- Ravimite arendamine: Teadlased kasutavad DLD-1 rakuliini vähivastaste ravimite tõhususe testimiseks ja nende potentsiaali hindamiseks käärsoolevähi ravis. See aitab kaasa ravimite arendamisele ja haiguse tõhusale võitlemisele. 2022. aastal läbi viidud uuringus kasutati DLD-1 vähirakkude liini ja uuriti keemiliselt sünteesitud ühendite, räni-ftalotsüaniinide, vähivastast toimet. Uuringu tulemused viitasid sellele, et need ühendid on tugevad vähivastased ained [3]. Huvitaval kombel leiti teises uuringus DLD-1 rakke kasutades probiootikumidest saadud P8-valgu vähivastast potentsiaali [4].
5. DLD-1 rakke käsitlevad teadusartiklid
Käesolevas osas tutvustatakse mõningaid huvitavaid ja sageli tsiteeritud publikatsioone, milles käsitletakse DLD-1 käärsoolevähirakkude liini.
See publikatsioon on avaldatud ajakirjas Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Uuringus leiti, et flavonoid diosmin indutseeris DLD-1 rakkudes rakkude surma ja põhjustas ka rakutsükli peatumise; seega võib see olla potentsiaalne vähivastane aine.
Bromelaiin pärsib tõhusalt Kras-mutatsiooniga kolorektaalvähki, stimuleerides ferroptot
Ajakirjas „Animal Cells and Systems“ (2018) avaldatud uuringus väidetakse, et ensüüm bromelaiin pärsib DLD-1 KRAS-mutatsiooni ja avaldab tugevat tsütotoksilist mõju.
See uurimus avaldati 2019. aastal ajakirjas „Environmental Toxicology”. Uuringus uuriti loodusliku ühendi bergapteni kasvajavastast toimet, kasutades DLD-1 kolorektaalse rakuliini.
Ajakirjas „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials” (2023) avaldatud uuringus leiti, et kurkumiini/raudoksiidi nanokomposiidid on väga efektiivsed DLD-1 kolorektaalse vähirakkude vastu.
See teadusartikkel avaldati 2020. aastal ajakirjas Turkish Journal of Biology. Uuringus väideti, et looduslik toode, epibrassinoliidi vahendatud AKT aktiveerimine DLD-1 rakkudes, stimuleerib polüamiinidega seotud autofaagiat.
DLD-1 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
Allpool on toodud mõned DLD-1 rakkudega seotud ressursid:
- DLD-1 transfektsioon: see videoõpetus on põhjalik juhend DLD-1 in vitro transfektsiooni protokolli kohta.
- DLD-1 rakud: See uurimistöö kirjeldab lühidalt DLD-1 rakukultuuri nõudeid, sealhulgas kasvukeskkonda ja kultiveerimistingimusi. Lisaks võib see aidata teil õppida DLD-1 rakkude transfektsiooni protokolli.
Järgmised lingid sisaldavad protokolli DLD-1, inimese päritolu käärsoolevähirakkude kultiveerimiseks.
- DLD-1 rakuliin: See veebisait pakub põhiteavet DLD-1 rakuliini kohta. See aitab teil tutvuda erinevate DLD-1 rakukultuuri protokollidega, sealhulgas subkultiveerimise ning krüokonserveeritud ja proliferatiivsete kultuuride käitlemisega.
Viited
- Gavrilas, L.I. jt, Proapoptootilised geenid kui uued sihtmärgid resveratrooli ja kurkumiini ühe- ja kombinatsioonravi jaoks kolorektaalse vähi puhul. Food & function, 2019. 10(6): lk 3717–3726.
- Takeda, T. jt, PI3K/Akt/YAP signaalimine soodustab DLD-1 kolorektaalse vähi rakkude rännet ja invasiivsust. Oncology Letters, 2022. 23(4): lk 1–9.
- Farajzadeh, N. jt, Uute räni-ftalotsüaniinide vähivastane toime kolorektaalse adenokartsinoomi rakuliini (DLD-1) suhtes. New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): lk 19863–19873.
- An, B.C. jt, Probiootikumidest saadud P8-valgu vähivastane toime kolorektaalse vähirakkude liinis DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): lk 9857.