B16-F10 rakud - B16-F10 melanoomi rakuliini uurimine metastaaside uurimisel
B16-F10 rakud on C57BL/6J hiirest saadud melanoomi rakuliin. Neid kasutatakse laialdaselt nahavähi uurimisel. Teadlased kasutavad neid rakke kasvajate arengu ja progresseerumise ning terapeutiliste sekkumiste uurimiseks. Käesolevas artiklis käsitletakse B16-F10 melanoomirakkude põhiaspekte. Eelkõige hõlmab see järgmist:
- B16-F10 rakuliini päritolu ja üldised omadused
- Teave B16-F10 rakkude kasvatamise kohta
- B16-F10 rakud: Eelised ja puudused
- B16-F10 rakkude uurimisrakendused
- B16-F10 rakuliiniga seotud publikatsioonid
- B16-F10 rakuliini ressursid: Protokollid, videod ja muud
1. B16-F10 rakuliini päritolu ja üldised omadused
Selles jaotises saate ülevaate B16F10 melanoomi kasvajarakkude päritolust ja eriomadustest. See aitab teil kasutada rakuliini tõhusalt oma uurimistöös. Peamiselt saate teada: Mis on B16-F10 rakud? Millest on B16F10 saadud? Milline on B16F12 rakuliini morfoloogia? Milline on B16F10 rakkude suurus?
- B16-F10 on C57BL/6J-hiirte nahakoes saadud B16-tuumorirakuliini alamkloon. Siinkohal arenesid B16F10 melanoomirakud pärast B16 liini intravenoosset süstimist immuunpuudulikku või süngeensetele hiirtele. Need rakud selekteeriti nende võime järgi moodustada metastaseerunud kopsukolooniaid in vivo ja seejärel kehtestati pärast kümme tsüklit kopsukolooniate moodustamist in vitro [1]. Selle töötasid Fidler ja kolleegid välja 1976. aastal.
- B16-F10 rakuliinidel on epiteelilaadne ja spindlikujuline välimus.
- B16-F10 rakkude ligikaudne suurus on 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1 ja B16-F10 rakud
B16-F1 ja B16-F10 rakud on saadud B16 vanemrakuliinist. Mõlemad pärinevad samast ja omavad peaaegu sarnaseid omadusi. Peamine erinevus on aga nende metastaatiline võime. B16-F10 rakkudel on kõrge, samas kui B16-F1-l on madal metastaatiline potentsiaal [3].
2.b16-F10 rakkude kultiveerimisandmed
Enne rakuliini käitlemist ja kultiveerimist peate teadma selle kahekordistumisaega, kasvukeskkonda, tingimusi ja rakukultuuriprotokolle. Selles jaotises käsitletakse: Milline on b16-f10 rakkude kahekordistumisaeg? Kuidas kasvatada b16F10 rakke? Milline on B16-F10 rakkude kasvukeskkond? Milliseid kultiveerimistingimusi soovitatakse B16-F10 rakkude puhul?
B16-F10 rakkude kultiveerimise põhipunktid
|
Kordistumisaeg: |
B16-F10 rakkude kahekordistumisaeg on ligikaudu 20,1 tundi. Sõltuvalt kultiveerimistingimustest võib see olla 17-21 tundi. |
|
Adherentselt või suspensioonis: |
B16-F10 on adherentne rakuliin. Rakud kasvavad kiiresti ja moodustavad monokihi. |
|
Jagunemissuhe: |
B16-F10 rakke subkultiveeritakse jaotussuhtes 1:2 kuni 1:4. Rakke pestakse fosfaatpuhvrisoolalahusega (1x) ja seejärel inkubeeritakse Accutase passageerimislahusega 8-10 minutit toatemperatuuril. Rakkudele lisatakse värske söötme ja need tsentrifuugitakse. Korjatud rakupellet resuspendeeritakse uuesti ja rakud paigutatakse uude kolbi, mis sisaldab värsket kultuurkeskkonda vastavalt jaotussuhtele. |
|
Kasvukeskkond: |
B16-F10 rakke kasvatatakse DMEM-keskkonnas. Rakkude ideaalseks kasvuks on söötmesse lisatud 10% FBS, 4 mM L-Glutamiini, 1,5 g/L NaHCO3, 4,5 g/L glükoosi ja 1,0 mM naatriumpüruvaati. Keskkonda tuleb vahetada 2-3 korda nädalas. |
|
Kasvutingimused: |
B16-F10 rakke kasvatatakse niisutatud inkubaatoris temperatuuril 37 °C ja 5% CO2-ga. |
|
Säilitamine: |
Rakkude elujõulisuse säilitamiseks säilitatakse külmutatud rakke alla -150 °C elektrilises ülimadalatemperatuurilises sügavkülmikus või vedela lämmastiku aurufaasis. |
|
Külmutamisprotsess ja keskkond: |
B16-F10 rakud külmutatakse säilitamiseks CM-1 või CM-ACF keskkonnas. Selleks soovitatakse aeglast külmutamist, mis võimaldab temperatuuri langust ainult 1 °C minutis, et vältida rakkude šokki. |
|
Sulatamisprotsess: |
Külmutatud B16-F10 rakke sulatatakse eelnevalt seadistatud 37 °C veevannis 40-60 sekundit. Seejärel lisatakse rakud värskesse söötmesse ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonna komponendid. Kogutud rakud resuspenseeritakse kasvukeskkonnas ja valatakse kultiveerimiseks kolvidesse. |
|
Bioturvalisuse tase: |
B16-F10 rakuliini käitlemiseks ja hooldamiseks on vaja 1. bioloogilise ohutuse taseme laboratooriumi. |
3.b16-F10 rakud: B10F16: eelised ja puudused
Nagu teistelgi rakuliinidel, on ka B16-F10-l mõned eelised ja puudused. Selles jaotises käsitletakse selle naha melanoomi rakuliini mõningaid olulisi plusse ja miinuseid.
Eelised
B16-F10 rakuliini kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes. B16-F10 rakkude eelised on järgmised:
|
Metastaatiline potentsiaal |
Naha melanoomi B16F10 rakkudel on suur metastaatiline potentsiaal, mistõttu on need väärtuslikud vähi metastaaside ja nende aluseks olevate mehhanismide uurimiseks. |
|
In vitro kasvajamudel |
B16-F10 rakud on in vitro mudeliks vähi progresseerumise ja kasvu uurimiseks, aidates teadlastel mõista vähki põhjustavaid rakulisi ja molekulaarseid mehhanisme. |
Puudused
B16-F10 rakuliiniga seotud puudused on järgmised:
|
Hiirtest saadud rakuliin |
B16-F10 on hiirest saadud rakuliin, mis piirab selle kohaldatavust inimspetsiifilistes uuringutes. Nende rakkude abil saadud uurimistulemused ei pruugi alati tõeliselt ülekanduda inimese bioloogiasse. |
4.b16-F10 rakkude uurimisrakendused
B16-F10 rakuliini kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes. Siinkohal käsitletakse mõningaid selle rakuliini paljulubavaid rakendusi.
- Vähiuuringud: B16-F10 rakuliin on väärtuslik mudel vähirakkude protsesside, sealhulgas proliferatsiooni, invasiivsuse, migratsiooni ja rakusurma ehk apoptoosi uurimiseks. Lisaks aitab see teadlastel saada teadmisi molekulaarmehhanismidest ja -radadest, mis neid rakuprotsesse juhivad. 2018. aastal läbi viidud uuringus uuriti CCR5 (C-C kemokiini retseptori tüüp viis) rolli melanoomirakkude epiteliaalsete rakkude üleminekul mesenhüümsetesse rakkudesse ja metastaasis. Tulemustest selgus, et CCR5 puudulikkus piirab kasvaja kasvu ja metastaasi, samas kui kõrge ekspressioon viib B16-F10 rakkude suurenenud kasvu ja metastaasi tekkeni. Edasised uuringud teatasid, et CCR5 reguleerib TGFβ1 ekspressiooni, mis reguleerib PI3K/AKT/GSK3β-signalisatsiooni, et edendada epiteeli üleminekut mesenhüümiks ja rakkude migratsiooni [4].
- Ravimi testimine ja arendamine: B16F10 melanoomi kasvajarakud on väga agressiivsed ja seega sobivad potentsiaalsete kasvajavastaste ravimite ja ravimeetodite testimiseks. Teadlased kasutavad neid rakke ja hindavad erinevate ühendite mõju rakkude kasvule, proliferatsioonile ja metastaasile, mis aitab kaasa ravimite väljatöötamisele. Valentina Nanni ja kolleegide 2018. aastal läbi viidud uuringus uuriti Spartium junceum õite hüdroalkohoolse ekstrakti terapeutilist mõju. Uuringus pakuti välja, et õieekstrakt oli tõhus B16-F10 rakkude vananemise indutseerimisel, mis viib rakkude kasvu ja melanogeneesi pärssimiseni, seega võib see avaldada potentsiaalset vähivastast toimet [5].
5.b16-F10 rakuliiniga seotud publikatsioonid
Siin on mõned olulised teadusartiklid, milles on kasutatud B16-F10 melanoomi rakuliini:
See uuring avaldati ajakirjas Nutrients (2020). Selles pakuti välja, et Sorghum bicolor etanoolsel ekstraktil on naha melanoomi B16F10 rakkudes melanogeeniavastane toime.
Kaltsitriool pärsib proliferatsiooni ja potentsiaalselt kutsub esile apoptoosi B16-F10 rakkudes
Medical Science Monitor Basic Research'is (2022) avaldatud uuringus pakuti välja, et kaltsitriooli ravim avaldab B16-F10 melanoomirakkudes kasvajavastast toimet, inhibeerides proliferatsiooni ja indutseerides apoptoosi.
Artikkel on avaldatud ajakirjas Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Tulemustest selgus, et kardoolid, resortsinoolsed lipiidid, avaldavad intensiivset tsütotoksilisust B16-F10 rakuliinile.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) avaldatud uuringus uuriti Ginkgo biloba eksokarpiekstrakti antimetastaatilist potentsiaali, kasutades B16-F10 rakke.
See uuring ajakirjas World Neurosurgery (2018) pakkus välja, et tümokinoon võib olla tõhus ravi intratserebraalsete metastaatiliste kahjustuste vastu, kuna see pärsib B16-F10 rakkude kasvu ja indutseerib apoptoosi.
6.b16-F10 rakuliini ressursid: B161616: Protokollid, videod ja muud vahendid: protokollid, videod ja muud
B16F10 endoteelirakke kasutatakse laialdaselt nahavähiuuringutes. Siin on mõned veebiressursid, mis selgitavad selle kultiveerimise ja transfektsiooni protokollid:
- B16F10 melanoomirakkude transfektsioon: B16-F10 rakkude transfektsiooniprotokolli aitab õppida see videoõpik.
- B16-F10 transfektsioon: See dokument selgitab naha melanoomi B16F10 rakkude in vitro DNA transfektsiooni protokolli.
Järgmine link sisaldab rakukultuuriprotokolli B16-F10 rakkude jaoks:
- B16-F10 subkultuurimine: See veebisait sisaldab kasulikku teavet B16F10 melanoomi kasvajarakkude kohta. See sisaldab kasvukeskkonda, kahekordistumisaega, kasvatustingimusi ja rakkude subkultiveerimise protokolli ning krüokonserveeritud ja proliferatiivsete kultuuride käitlemist.
Viited
- Poste, G., et al., Comparison of the metastatic properties of B16 melanoma clones isolated from cultured cell lines, subcutaneous tumors, and individual lung metastases. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono ja S. Sugita, B16 melanoomi rakuvariantide mehhanofenotüpiseerimine (-)-Epigallokatekiingallaadi ravi tõhususe hindamiseks koonilise mikrofluidilise seadme abil. Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Behaviour of four different B16 murine melanoma cell sublines: C57BL/6J naha. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., CCR5 kõrge ekspressioon melanoomi puhul suurendab epiteliaal-mesenhümaalset üleminekut ja metastaasi TGFβ1 kaudu. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., Spartium junceum L. õite hüdroalkohoolne ekstrakt inhibeerib kasvu ja melanogeneesi B16-F10 rakkudes, indutseerides senestsentsust. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.