B16-F10 rakud – B16-F10 melanoomi rakuliini uurimine metastaaside uurimisel
B16-F10 rakud moodustavad C57BL/6J hiirest pärineva melanoomi rakuliini. Neid kasutatakse laialdaselt nahavähi uurimisel. Teadlased kasutavad neid rakke kasvajate arengu ja progresseerumise ning ravivõtete uurimiseks. Käesolevas artiklis käsitletakse B16-F10 melanoomirakkude põhilisi aspekte. Eelkõige hõlmab see järgmist:
- Kasvukeskkond
- B16-F10 rakke kasvatatakse DMEM-keskkonnas. Ideaalseks rakkude kasvuks on keskkonnale lisatud 10% FBS, 4 mM L-glutamiini, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glükoosi ja 1,0 mM naatriumpüruvaati. Keskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
- Kahekordistumisaeg
- B16-F10 rakkude kahekordistumisaeg on umbes 20,1 tundi. See võib varieeruda 17 kuni 21 tunni vahel, sõltuvalt kasvatamistingimustest.
- Kasvutüüp
- B16-F10 on adhesiivne rakuliin. Rakud kasvavad kiiresti ja moodustavad monokihid.
- Bioloogiline ohutustase
- BSL-1
- Saadaval
- Cytion — Telli B16-F10
- B16-F10 rakuliini päritolu ja üldised omadused
- B16-F10 rakkude kasvatamise teave
- B16-F10 rakud: eelised ja puudused
- B16-F10 rakkude kasutamine teadusuuringutes
- B16-F10 rakuliini käsitlevad publikatsioonid
- B16-F10 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
B16-F10 rakuliini päritolu ja üldised omadused
Käesolev osa annab ülevaate B16-F10 melanoomi kasvajarakkude päritolust ja eripäradest. See aitab teil rakuliini oma teadustöös tõhusalt kasutada. Peamiselt saate teada järgmist: Mis on B16-F10 rakud? Millest on B16F10 saadud? Milline on B16F12 rakuliini morfoloogia? Milline on B16F10 raku suurus?
- B16-F10 on C57BL/6J hiirte nahakudest pärineva B16 kasvajarakuliini subkloon. Käesolevas dokumendis on B16F10 melanoomirakud arendatud pärast B16 liini intravenoosset süstimist immuunpuudulikkusega või süngeneetsetele hiirtele. Need rakud valiti välja nende potentsiaali tõttu moodustada in vivo metastaasidega kopsukolooniaid ning seejärel kinnistati need pärast kümmet in vitro kopsukoloonia moodustamise tsüklit [1]. Selle arendasid välja Fidler ja kolleegid 1976. aastal.
- B16-F10 rakuliinidel on epiteelilaadne ja värtjas välimus.
- B16-F10 rakkude ligikaudne suurus on 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1 ja B16-F10 rakud
B16-F1 ja B16-F10 rakud on saadud B16 emarakuliinist. Mõlemad pärinevad samast allikast ja neil on peaaegu sarnased omadused. Peamine erinevus on aga nende metastaasivõime. B16-F10 rakkudel on kõrge, samas kui B16-F1-l on madal metastaasivõime [3].
B16-F10 rakkude kasvatamise juhised
Enne rakuliini käitlemist ja kasvatamist peate teadma selle kahekordistumisaega, kasvukeskkonda, tingimusi ja rakukultuuri protokolle. Käesolevas jaotises käsitletakse järgmisi teemasid: Milline on B16-F10 rakkude kahekordistumisaeg? Kuidas kasvatada B16-F10 rakke? Milline on B16-F10 rakkude kasvukeskkond? Millised kasvatustingimused on soovitatavad B16-F10 rakkude jaoks?
B16-F10 rakkude kasvatamise põhipunktid
Kahekordistumisaeg:
B16-F10 rakkude kahekordistumisaeg on umbes 20,1 tundi. See võib varieeruda 17 kuni 21 tunni vahel, sõltuvalt kasvatustingimustest.
Adherentne või suspensioonis:
B16-F10 on adhesiivne rakuliin. Rakud kasvavad kiiresti ja moodustavad monokihid.
Jagamissuhe:
B16-F10 rakke subkultiveeritakse jagamissuhtega 1:2 kuni 1:4. Rakud pestakse fosfaadipuhvri soolalahusega (1x) ja inkubeeritakse seejärel Accutase passaažilahusega 8–10 minutit toatemperatuuril. Rakud lisatakse värskesse keskkonnasse ja tsentrifuugitakse. Saadud rakupellet resuspendeeritakse uuesti ja rakud jaotatakse vastavalt jagamissuhtele uude kolbi, mis sisaldab värsket kasvukeskkonda.
Kasvukeskkond:
B16-F10 rakke kasvatatakse DMEM-keskkonnas. Ideaalseks rakkude kasvuks täiendatakse keskkonda 10% FBS-iga, 4 mM L-glutamiiniga, 1,5 g/l NaHCO3-ga, 4,5 g/l glükoosiga ja 1,0 mM naatrium-püruvaadiga. Keskkonda tuleks vahetada 2–3 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
B16-F10 rakke kasvatatakse niisutatud inkubaatoris 37 °C juures 5% CO2 sisaldusega.
Säilitamine:
Külmutatud rakke säilitatakse alla -150 °C temperatuuril elektrilises ülikülmas külmkapis või vedela lämmastiku aurufaasis, et säilitada rakkude eluvõime.
Külmutamisprotsess ja kasvukeskkond:
B16-F10 rakke külmutatakse säilitamiseks CM-1 või CM-ACF keskkonnas. Selleks soovitatakse aeglast külmutamisprotsessi, mis võimaldab temperatuuri langust vaid 1 °C minutis, et vältida rakkude šokki.
Sulatusprotsess:
Külmutatud B16-F10 rakud sulatatakse eelnevalt 37 °C-le seadistatud veevannis 40–60 sekundit. Seejärel lisatakse rakud värskesse keskkonnasse ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda kuuluvad komponendid. Kogutud rakud suspendeeritakse uuesti kasvukeskkonnas ja valatakse kultiveerimiseks kolbidesse.
Bioloogiline ohutustase:
B16-F10 rakuliini käitlemiseks ja hooldamiseks on vaja 1. bioloogilise ohutuse taseme laborit.
B16-F10 rakud: eelised ja puudused
Nagu teistelgi rakuliinidel, on ka B16-F10-l mõned eelised ja puudused. Käesolevas jaotises käsitletakse selle nahamelanoomi rakuliini mõningaid olulisemaid eeliseid ja puudusi.
Eelised
B16-F10 rakuliini kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes. B16-F10 rakkude eelised on järgmised:
Metastaaside tekkimise potentsiaal
Nahamelanoomi B16F10 rakkudel on kõrge metastaaside tekkimise potentsiaal, mis teeb need väärtuslikuks vähi metastaaside ja nende aluseks olevate mehhanismide uurimisel.
In vitro kasvajamudel
B16-F10 rakud toimivad in vitro mudelina vähi progresseerumise ja kasvu uurimiseks, aidates teadlastel mõista vähki põhjustavaid raku- ja molekulaarmehhanisme.
Puudused
B16-F10 rakuliiniga seotud puudused on järgmised:
Hiirest pärinev rakuliin
B16-F10 on hiirtelt pärinev rakuliin, mis piirab selle rakendatavust inimestele spetsiifilistes uuringutes. Nendest rakkudest saadud uurimistulemused ei pruugi alati tõepoolest kehtida inimese bioloogia puhul.
B16-F10 rakkude rakendused teadustöös
B16-F10 rakuliini kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes. Siin käsitletakse mõningaid selle rakuliini paljulubavaid rakendusi.
- Vähktõve uurimine: B16-F10 rakuliin on väärtuslik mudel vähirakkude protsesside uurimiseks, sealhulgas proliferatsiooni, invasiivsuse, migratsiooni ja rakusurma ehk apoptoosi uurimiseks. Lisaks aitab see teadlastel saada ülevaadet molekulaarsetest mehhanismidest ja signaalradadest, mis neid rakulisi protsesse juhivad. 2018. aastal läbi viidud uuringus uuriti CCR5 (C-C kemokiiniretseptor tüüp 5) rolli melanoomi rakkude epiteelist mesenküümseks muutumisel ja metastaaside tekkel. Tulemused näitasid, et CCR5 puudus piirab kasvaja kasvu ja metastaase, samas kui kõrge ekspressioon viib B16-F10 rakkude kasvu ja metastaaside suurenemiseni. Edasised uuringud näitasid, et CCR5 reguleerib TGFβ1 ekspressiooni, mis omakorda reguleerib PI3K/AKT/GSK3β signaalimist, soodustades epiteelrakkude mesenküümrakkudeks üleminekut ja rakkude rännet [4].
- Ravimite testimine ja arendamine: B16F10 melanoomi kasvajarakud on väga agressiivsed ja seetõttu sobivad potentsiaalsete kasvajavastaste ravimite ja ravimeetodite testimiseks. Teadlased kasutavad neid rakke ja hindavad erinevate ühendite mõju rakkude kasvule, proliferatsioonile ja metastaasidele, aidates kaasa ravimite arendamisele. Valentina Nanni ja kolleegide poolt 2018. aastal läbi viidud uuringus uuriti Spartium junceum'iõite vesialkoholiekstrakti terapeutilist mõju. Uuringus väideti, et õieekstrakt oli efektiivne B16-F10 rakkude vananemise esilekutsumisel, mis viib rakkude kasvu ja melanoogeneesi pärssimiseni, mistõttu võib sellel olla potentsiaalne vähivastane toime [5].
5. B16-F10 rakuliini käsitlevad publikatsioonid
Siin on mõned olulised teaduspublikatsioonid, milles käsitletakse B16-F10 melanoomi rakuliini:
See uuring avaldati ajakirjas Nutrients (2020). Selles väideti, et Sorghum bicolor'i etanooliekstraktil on melanoogeenne toime nahamelanoomi B16F10 rakkudes.
Kaltsitriool pärsib proliferatsiooni ja võib indutseerida apoptoosi B16–F10 rakkudes
Ajakirjas Medical Science Monitor Basic Research (2022) avaldatud uuringus väidetakse, et kaltsitrioolil on B16-F10 melanoomirakkudes kasvajavastane toime, pärssides proliferatsiooni ja indutseerides apoptoosi.
See artikkel on avaldatud ajakirjas Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Uuringu tulemused näitasid, et kardoolid, resorcinoolilised lipiidid, avaldavad B16-F10 rakuliinile tugevat tsütotoksilist toimet.
Ajakirjas Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) avaldatud uuringus uuriti ginkgo biloba eksokarbi ekstrakti metastaasivastast potentsiaali, kasutades B16-F10 rakke.
Ajakirjas World Neurosurgery (2018) avaldatud uuringus väideti, et timokinoon võib olla efektiivne ravi intratserebraalsete metastaatiliste kahjustuste vastu, kuna see pärsib B16-F10 rakkude kasvu ja indutseerib apoptoosi.
B16-F10 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud
B16F10 endoteelirakke kasutatakse laialdaselt nahavähi uurimisel. Siin on mõned veebivahendid, mis selgitavad nende kultiveerimise ja transfektsiooni protokolle:
- B16F10 melanoomi rakkude transfektsioon: see videoõpetus aitab teil õppida B16-F10 rakkude transfektsiooniprotokolli.
- B16-F10 transfektsioon: selles dokumendis selgitatakse nahamelanoomi B16F10 rakkude in vitro DNA transfektsiooni protokolli.
Järgmine link sisaldab B16-F10 rakkude kultiveerimisprotokolli:
- B16-F10 subkultiveerimine: See veebisait sisaldab kasulikku teavet B16F10 melanoomi kasvajarakkude kohta. See hõlmab kasvukeskkondi, kahekordistumisaega, kultiveerimistingimusi ja protokolli rakkude subkultiveerimiseks ning krüokonserveeritud ja proliferatiivsete kultuuride käitlemist.
Viited
- Poste, G. jt, Kultiveeritud rakuliinidest, nahaalustest kasvajatest ja üksikutest kopsumetastaasidest isoleeritud B16 melanoomi kloonide metastaatiliste omaduste võrdlus. Cancer Research, 1982. 42(7): lk 2770–2778.
- Nakamura, M., D. Ono ja S. Sugita, B16 melanoomi rakuvariantide mehaaniline fenotüpiseerimine (-)-epigallokatekiingallaadi ravi efektiivsuse hindamiseks, kasutades koonilist mikrofluidseadet. Micromachines, 2019. 10(3): lk 207.
- Danciu, C. jt, Nelja erineva B16 hiire melanoomi rakuliini käitumine: C57BL/6J nahk. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): lk 73–80.
- Liu, J. jt, CCR5 kõrge ekspressioon melanoomis soodustab epiteeli-mesenküümse üleminekut ja metastaase TGFβ1 kaudu. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): lk 481–493.
- Nanni, V. jt., Spartium junceum L. õite vesialkoholiekstrakt pärsib B16-F10 rakkude kasvu ja melanoogeneesi, indutseerides vananemist. Phytomedicine, 2018. 46: lk 1–10.