Rakuliin A375 – juhend melanoomi uurimiseks

A375 on inimese melanoomi rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt toksikoloogia ja immuno-onkoloogia uuringutes. Teadlased kasutavad seda rakuliini vähibioloogia ja signaaliteede uurimiseks, potentsiaalsete vähivastaste ravimite testimiseks või sõelumiseks ning uute ja tõhusate ravimite väljatöötamiseks.

A375 rakkude päritolu ja üldised omadused

Rakuliini päritolu ja üldiste omaduste tundmine aitab teil planeerida selle kasutamist teadustöös. Artikli selles osas käsitletakse A375 rakuliini päritolu ja omadusi. Näiteks, mis on A375 rakuliin? Millised on A375 rakuliini omadused? Kust pärinevad A375 rakud? Milline on A375 melanoomi rakkude morfoloogia? Milline on A375 rakkude suurus?

• Nahavähi rakuliin A375 pärineb 54-aastase pahaloomulise melanoomiga naise tahke kasvaja eksplantaadikultuurist [1].
• A375 rakkudel on epiteelilaadne morfoloogia.
• A375 rakkude suurus on teiste rakuliinidega võrreldes suhteliselt väiksem. Nende läbimõõt on umbes 12 µm.
• A375 melanoomi rakud on hüpotriploidsed. Selle rakuliini modaalne kromosoomide arv on 62. Tavaliselt on igal rakul üheksa markerkromosoomi ja üks koopia normaalsetest N2, N6 ja N22 kromosoomidest.

A375 rakud: teave rakukultuuri kohta

A375 rakukultuure on lihtne hooldada. Neil ei ole mingeid keerulisi rakukultuuri nõudeid. Käesolev osa aitab teil omandada vajalikku teavet rakukultuuri kohta. Näiteks, milline on A375 rakkude kahekordistumisaeg? Milline on A375 rakuliini kasvukeskkond? Milline on A375 rakkude külvitihedus? Kas A375 melanoomi rakud on adhesiivsed?

A375 rakkude kasvatamise põhipunktid

Populatsiooni kahekordistumisaeg:

A375 kahekordistumisaeg on 20 tundi.

Adherentne või suspensioonis:

A375 on adhesiivne inimese melanoomi rakuliin.

Külvitihedus:

A375 rakukultuuride jaoks on ideaalne rakutihedus 1 x 10⁴ rakku/cm². Adherentseid rakke loputatakse 1 x fosfaadipuhvri soolalahusega (PBS) ja inkubeeritakse passaažilahusega (Accutase). Seejärel lisati rakkudele kasvukeskkond ja tsentrifuugiti. Korjatud rakud suspendeeriti uuesti kasvukeskkonnas ja jaotati uude kolbi kasvatamiseks.

Kasvukeskkond:

DMEM-i soovitatakse ideaalseks A375-kasvatuskeskkonnaks, kui sellele lisatakse 10% loote veise seerumit (FBS), 4,5 g/l glükoosi, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamiini ja 1,0 mM naatrium-püruvaati. A375-kasvatuskeskkonda tuleks uuendada 2–3 korda nädalas.

Kasvatustingimused:

A375 melanoomi rakke kasvatatakse niisutatud inkubaatoris (37 °C) 5% CO2 sisaldusega.

Säilitamine:

Külmutatud A375 rakke tuleb hoida temperatuuril alla -150 °C vedela lämmastiku aurufaasis või elektrilises sügavkülmas.

Külmutamisprotsess ja keskkond:

A375 rakuliini külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF keskkonda. Rakute eluvõimelisuse säilitamiseks on valitud aeglane külmutamisprotsess, mis võimaldab temperatuuri järkjärgulist langust 1 °C võrra.

Sulatusprotsess:

Külmutatud A375 melanoomi rakkude viaali loksutatakse veevannis kiiresti 40–60 sekundit, kuni jääb alles vaid väike jääklomp. Rakkudele lisatakse värsket keskkonda ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonda jäävad osakesed. Saadud rakupellet resuspendeeritakse uuesti ja valatakse uutesse kolbidesse.

Bioloogiline ohutustase:

A375 kultuure käideldakse ja hoitakse bioloogilise ohutuse taseme 1 laboritingimustes.

A375 rakuliini rakendused teadustöös

A375 rakuliinil on laialdased rakendused vähiuuringutes. Siin on mõned levinumad valdkonnad, kus A375 rakke kasutatakse.

• Vähktõve uurimine: A375 rakkudel on laialdased rakendused melanoomi uurimisel. Teadlased kasutasid neid rakke nahavähi bioloogia, protsesside ja aluseks olevate rakkude signaalimismehhanismide uurimiseks, sealhulgas rakkude proliferatsiooni, migratsiooni ja invasiivsuse uurimiseks. See võib aidata teadlastel tuvastada uusi molekulaarseid ravieesmärke. Lin Zhu ja kolleegide 2019. aastal läbi viidud uuringus kasutati väga agressiivseid melanoomi rakke A375 ja leiti mikroRNA-3662 roll A375 melanoomi rakkude kasvu ja invasiivsuse suhtes. Uuringu tulemused näitavad, et mikroRNA-3662 suunab ZEB1 geeni ja reguleerib melanoomi rakkude kasvu in vitro ja in vivo A375 kasvajamudelis [2]. Samamoodi leiti 2018. aastal läbi viidud uuringus, et PI3K/AKT ja MAPK/ERK signaaliteed on seotud A375 rakuliini proliferatsiooni ja metastaasidega [3].
• Ravimite avastamine ja katsetamine: A375 rakuliin on kasulik in vitro kasvajamudel potentsiaalsete vähivastaste ravimite katsetamiseks ja sõelumiseks. Teadlased hindavad uute kemoteraapiavahendite, ühendite ja muude ravimeetodite toksilisust ja efektiivsust, kasutades neid A375 melanoomi rakke. Näiteks uuriti ühes uuringus greibist saadud mikro- ja nanovesikuleid A375 inimese melanoomi vähirakkudel. Tulemused näitasid, et mikro- ja nanovesikuleid indutseerivad rakutsükli peatamist ja apoptoosi ning pärsivad geeniekspressiooni rakkude proliferatsioonis, migratsioonis ja invasiivsuses [4].

A375 rakud: publikatsioonid

Siin on nimetatud mõned olulised teaduslikud publikatsioonid, milles käsitletakse A375 rakke.

D-vitamiin ja selle madala kaltsiumisisaldusega analoogid moduleerivad tsisplatiini ja dakarbasiini vähivastaseid omadusi inimese melanoomi A375 rakuliinis

See uuring avaldati ajakirjas Journal of Oncology 2019. aastal. Uuringus väideti, et D-vitamiini ja selle analoogidega kombineeritud ravi parandab tsisplatiini ja dakarbasiini vähivastast toimet A375 melanoomi rakkudes.

Valitud aloe liikidest saadud geeli ja tervete lehtede ekstraktide melanoomi vastaste mõjude in vitro hindamine (A375 rakuliin)

See uurimus avaldati ajakirjas Journal of Herbal Medicine 2022. aastal. Uurimuses uuriti aloe vera geeli melanoomi vastast toimet A375 melanoomi rakkudes.

Fermitiini perekonna liige 2 soodustab melanoomi progresseerumist, tugevdades p-α-Pixi seondumist Rac1-ga, et aktiveerida MAPK-signaalrada

Ajakirjas „Oncogene“ (2021) avaldatud uuringus väideti, et fermitiini perekonna liige 2 (FERMT2 või kindlin-2) soodustab melanoomi progresseerumist, aktiveerides MAPK-signaaliteed p-α-Pix-i ja Rac1-ga seondumise kaudu.

FARP1 soodustab rakkude proliferatsiooni, moduleerides MAPK signaaliteed nahamelanoomis

Ajakirjas The American Journal of Dermatopathology (2019) avaldatud uuringus väidetakse, et FARP1 võib soodustada nahamelanoomi teket ja progresseerumist. Seega võib see olla kasulik ravieesmärk.

Phyllodium elegans'i ekstraktide tsütotoksiline ja apoptootiline potentsiaal inimese vähirakkude liinidel

See uurimus avaldati ajakirjas Bioengineered (2019). Uuringus uuriti taime Phyllodium elegans ekstrakti tsütotoksilist ja apoptootilist aktiivsust inimese kartsinoomi rakuliinidel, sealhulgas A375.

A375 rakuliini ressursid: protokollid, videod ja muud

Allpool on toodud mõned veebiressursid, mis käsitlevad A375 rakke.

• A375 rakkude transfektsioon: see videoõpetus aitab teil samm-sammult õppida A375 rakkude transfektsiooni.
• Rakkude kasvatamine: selles videos on väga kasulikku teavet rakuliinide kasvatamise kohta.

A375 rakkude rakukultuuri protokollid on loetletud siin.

• A375 rakuliin: See link sisaldab kasulikku teavet A375 rakuliini kasvatamise ja hooldamise kohta, sealhulgas A375 kasvukeskkondade ning külmutatud ja paljunevate A375 kultuuride käitlemise kohta.

Viited

1. Avram, S. jt., A375 inimese melanoomi mudelite standardimine kanaembrüo korioallantoismembraanil ja Balb/c alasti hiirtel. Oncol Rep, 2017. 38(1): lk 89–99.
2. Zhu, L. jt, MicroRNA-3662 sihib ZEB1-i ja nõrgendab väga agressiivse melanoomi rakuliini A375 invasiivsust. Cancer Manag Res, 2019. 11: lk 5845–5856.
3. Peng, X. jt., Oxyfadichalcone C pärsib melanoomi A375 rakkude proliferatsiooni ja metastaase PI3K/Akt ja MAPK/ERK signaaliteede supresseerimise kaudu. Life sciences, 2018. 206: lk 35–44.
4. Stanly, C. jt, Greibist saadud mikro- ja nanovesiklid näitavad A375 inimese melanoomi rakuliinis erinevaid metaboloomiprofiile ja vähivastast toimet. Cells, 2020. 9(12): lk 2722.