A375 rakuliin - juhend melanoomi uuringute kohta

A375 on inimese melanoomi rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt toksikoloogia ja immunonkoloogia uuringutes. Teadlased kasutavad seda rakuliini vähi bioloogia ja signaaliradade uurimiseks, võimalike vähivastaste ainete testimiseks või sõelumiseks ning uute ja tõhusate ravimite väljatöötamiseks.

A375 rakkude päritolu ja üldised omadused

Rakuliini päritolu ja üldiste omaduste tundmine aitab teil kavandada selle kasutamist teadusuuringutes. Selles artikli osas käsitletakse A375 rakuliini päritolu ja omadusi. Näiteks, mis on A375 rakuliin? Millised on A375 rakuliini omadused? Kust pärinevad A375 rakud? Milline on A375 melanoomirakkude morfoloogia? Milline on A375 rakkude suurus?

Nahavähi rakuliin A375 pärineb 54-aastase pahaloomulise melanoomiga naise soliidse kasvaja eksplantatsioonikultuurist [1].
A375 rakkudel on epiteelilaadne morfoloogia.
A375 rakkude suurus on võrreldes teiste rakuliinidega suhteliselt väiksem. Nende läbimõõt on ligikaudu 12 µm.
A375 melanoomirakud on hüpotriploidsed. Selle rakuliini modaalne kromosoomide arv on 62. Tavaliselt on igal rakul üheksa markerkromosoomi ja üks koopia normaalsetest kromosoomidest N2, N6 ja N22.

Arst uurib täiskasvanu nahal olevaid kasvusid nahavähi suhtes.

A375 rakud: Teave rakukultuuri kohta

A375 rakukultuure on lihtne hooldada. Neil ei ole mingeid keerulisi rakukultuurinõudeid. See jaotis aitab teil õppida vajalikku rakukultuuriteavet. Näiteks, milline on A375 kahekordistumisaeg. Milline on A375 rakuliini keskkond? Milline on A375 külvitihedus? Kas A375 melanoomirakud on adherentsed?

A375 rakkude kultiveerimise põhipunktid

Populatsiooni kahekordistumisaeg:	A375 kahekordistumisaeg on 20 tundi.
Adherentne või suspensioonis:	A375 on adherentne inimese melanoomi rakuliin.
Külvikutihedus:	1 x¹⁰⁴ rakku/cm2^rakutiheduson A375 rakukultuuride jaoks ideaalne. Adherentsed rakud loputatakse 1 x fosfaatpuhvrisoolalahusega (PBS) ja inkubeeritakse passageerimislahusega (Accutase). Seejärel lisati rakud kultuurkeskkonnaga ja tsentrifuugiti. Korjatud rakud resuspenseeriti kasvukeskkonnas ja doseeriti uutesse kolvidesse kasvatamiseks.
Kasvukeskkond:	Ideaalse A375 kasvukeskkonnana soovitatakse kasutada DMEMi, millele on lisatud 10% veiste loote seerumit (FBS), 4,5 g/L glükoosi, 1,5 g/L NaHCO3, 4 mM L-glutamiini ja 1,0 mM naatriumpüruvaati. A375 keskkonda tuleks uuendada 2-3 päeva nädalas.
Kasvutingimused:	A375 melanoomirakke kasvatatakse niisutatud inkubaatoris (37 °C), kus on 5% CO2.
Säilitamine:	Külmutatud A375 rakke tuleb hoida alla -150 °C vedelas lämmastikus aurufaasis või elektrilises sügavkülmikus.
Külmutamisprotsess ja keskkond:	A375 rakuliini külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF keskkonda. Rakkude elujõulisuse kaitsmiseks on valitud aeglane külmutamisprotsess, mis võimaldab temperatuuri järkjärgulist langust 1 °C võrra.
Sulatamisprotsess:	Külmutatud A375 melanoomirakkude viaali segatakse kiiresti veevannis 40-60 sekundit, kuni alles jääb vaid väike jääklomp. Rakkudele lisatakse värsket keskkonda ja tsentrifuugitakse, et eemaldada külmutuskeskkonna elemendid. Saadud rakupellet resuspendeeritakse uuesti ja valatakse uutesse kolvidesse.
Bioturvalisuse tase:	A375 kultuure käideldakse ja hoitakse 1. bioloogilise ohutuse taseme laboratooriumis.

Konfluentne kiht adherentseid A375 rakke 20-kordse suurendusega.

A375 rakuliini eelised ja piirangud

Nagu teistelgi rakuliinidel, on ka melanoomi rakuliinil A375 ainulaadne kombinatsioon eeliseid ja piiranguid, mis teeb sellest väärtusliku vahendi melanoomi vähiuuringute jaoks. Käesolevas jaotises on loetletud ainult mõned olulised A375 rakuliini eelised ja puudused.

Eelised

A375 rakuliini olulised eelised on nimetatud allpool:

Melanoomi kasvaja mudel: A375 rakuliin on saadud pahaloomulise melanoomi kasvajast, mis on seega hindamatu kasvaja mudeliks melanoomi bioloogia ja terapeutiliste sekkumiste uurimiseks. Nendel rakkudel on melanoomi sarnased omadused, näiteks kõrge proliferatsioonikiirus ja invasiivsus.
Tumorigeensus: A375 rakud on väga tumorigeensed, mis tähendab, et nad võivad moodustada kasvajaid. A375 rakkude puhul on teatatud, et need tekitavad agressiivseid amelanootilisi melanoomi NIH Swiss hiirtel, keda on ravitud antitümotsüütide seerumiga (immuunsupressiivne aine).
Hästi iseloomustatud: A375 on geneetiliselt hästi iseloomustatud rakuliin. Sellel on spetsiifilised geneetilised mutatsioonid nagu melanoomil. A375 mutatsioonide hulka kuulub A375 BRAF-geeni muutus, mis muudab selle tundlikuks BRAF-spetsiifiliste inhibiitorite suhtes. Selline geneetiline profiil muudab A375 rakud seega suurepäraseks vähiuuringute vahendiks, et uurida aluseks olevaid molekulaarseid radu ja sihtotstarbelisi ravimeetodeid.

Piirangud

A375 rakkudega seotud piirangud on järgmised:

In vitro piirangud: A375 on in vitro kasvajamudel. Kuigi see jäljendab melanoomi omadusi, ei saa see täielikult esindada melanoomi kasvajate keerukust. Seetõttu tuleb olla ettevaatlik, kui in vitro saadud tulemusi üldistatakse kliinilistele uuringutele.

Ostke oma A375 rakke nüüd

430,00 €*

Sisu: 1.5 milliliter

Hinnad ilma maksudeta pluss saatmiskulud

cryovial

Toote number: 300110

A375 rakuliini uurimisrakendused

A375 rakuliinil on ulatuslikud teadusrakendused vähiuuringutes. Järgnevalt on esitatud mõned üldised valdkonnad, kus A375 rakke kasutatakse.

Vähiuuringud: A375 rakkudel on laialdased rakendused melanoomi uurimisel. Teadlased kasutasid neid rakke nahavähi bioloogia, protsesside ja aluseks olevate raku signaalimehhanismide, sealhulgas rakkude proliferatsiooni, migratsiooni ja invasiivsuse uurimiseks. See võib aidata teadlastel tuvastada ka uusi molekulaarseid terapeutilisi sihtmärke. Lin Zhu ja kolleegide 2019. aastal läbi viidud uuringus kasutati väga agressiivseid melanoomirakke A375 ja leiti mikroRNA-3662 roll A375 melanoomirakkude kasvule ja invasiivsusele. Uuringu tulemuste kohaselt on mikroRNA-3662 suunatud ZEB1 geenile ja reguleerib melanoomirakkude kasvu in vitro ja in vivo A375 kasvajamudelis [2]. Sarnaselt leiti 2018. aastal läbi viidud uuringus, et A375 rakuliini proliferatsioonis ja metastaasis osalevad PI3K/AKT- ja MAPK/ERK-radad [3].
Ravimite avastamine ja testimine: A375 rakuliin on kasulik in vitro kasvajamudel potentsiaalsete vähivastaste ainete testimiseks ja sõelumiseks. Teadlased hindavad uute kemoterapeutiliste ravimite, ühendite ja muude ravimeetodite toksilisust ja tõhusust, kasutades neid A375 melanoomirakke. Näiteks uuriti uuringus greibist saadud mikro- ja nanoosakeste vähivastaseid omadusi A375 inimese melanoomi vähirakkudel. Tulemused näitasid, et mikro- ja nanoosakesed indutseerivad rakutsükli peatumist ja apoptoosi ning takistavad rakkude proliferatsiooni, migratsiooni ja invasiooni geeniekspressiooni [4].

A375 rakud: Väljaanded

Siinkohal on mainitud mõned olulised teaduspublikatsioonid, milles käsitletakse A375 rakke.

D-vitamiin ja selle madala kaltsiumisisaldusega analoogid moduleerivad tsisplatiini ja dakarbasiini vähivastaseid omadusi inimese melanoomi A375 rakuliinis

See uuring avaldati ajakirjas Journal of Oncology 2019. aastal. Uuringus pakuti välja, et D-vitamiini ja analoogide kooskasutamine parandab tsisplatiini ja dakarbasiini vähivastast toimet A375 melanoomirakkudes.

Valitud aloe liikide geeli ja tervete lehtede ekstraktide melanoomivastase toime in vitro hindamine (A375 rakuliin)

See uuring avaldati ajakirjas Journal of Herbal Medicine 2022. aastal. Selles uuringus uuriti aloe vera geeli melanoomivastast toimet A375 melanoomirakkudel.

Fermitiini perekonna liige 2 soodustab melanoomi progresseerumist, suurendades p-α-Pixi seondumist Rac1-ga, et aktiveerida MAPK rada

See uuring ajakirjas Oncogene (2021) pakkus välja, et fermitiini perekonna liige 2 (FERMT2 või kindlin-2) soodustab melanoomi progresseerumist MAPK aktiveerimise kaudu p-α-Pixi ja Rac1-ga seondumise kaudu.

FARP1 soodustab rakkude proliferatsiooni läbi MAPK signaalitee moduleerimise naha melanoomi puhul

See uuring ajakirjas The American Journal of Dermatopathology (2019) pakkus välja, et FARP1 võib soodustada naha melanoomi arengut ja progresseerumist. Seega võib see olla kasulik terapeutiline sihtmärk.

Phyllodium elegans'i ekstraktide tsütotoksiline ja apoptootiline potentsiaal inimese vähirakuliinidel

See teadusartikkel on avaldatud ajakirjas Bioengineered (2019). Selles uuringus uuriti taime Phyllodium elegans ekstrakti tsütotoksilist ja apoptootilist aktiivsust inimese kantsinoomi rakuliinidele, sealhulgas A375.

A375 rakuliini ressursid: Protokollid, videod ja muud

Järgnevalt on esitatud mõned A375 rakuliiniga seotud veebiressursid.

A375 rakkude transfektsioon: See videoõpetus aitab teil õppida A375 rakkude transfektsiooni samm-sammult.
Rakkude kultiveerimine: See video sisaldab väga kasulikku teavet rakuliinide kultiveerimise kohta.

A375 rakkude kasvatamise protokollid on loetletud siin.

A375 rakuliin: See link sisaldab kasulikku teavet A375 rakuliini kultiveerimise ja hoolduse kohta, sealhulgas A375-keskkonna ja külmutatud ja paljunevate A375-kultuuride käitlemise kohta.

Korduma kippuvad küsimused (KKK) rakkude A375 kohta

Viited

Avram, S., et al., Inimese melanoomi A375 mudelite standardiseerimine kana embrüo kooriaalallantoilise membraani ja Balb/c alasti hiirtel. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 sihib ZEB1 ja nõrgestab väga agressiivse melanoomi rakuliini A375 invasiooni. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inhibeerib melanoomi A375 rakkude proliferatsiooni ja metastaasi PI3K/Akt ja MAPK/ERK radade pärssimise kaudu. Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
Stanly, C., et al., Greibist saadud mikro- ja nanoosakesed näitavad erinevaid metaboloomiprofiile ja vähivastaseid toimeid inimese melanoomi rakuliinis A375. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.