Vedela lämmastiku ohutusnõuanded raku turvaliseks ladustamiseks

Rakukultuurilaborites on vedela lämmastiku kasutamine oluline väärtuslike rakuliinide pikaajaliseks säilitamiseks ja säilitamiseks. Cytionis seame esikohale nii meie rakuliinide kvaliteedi kui ka krüogeensete materjalidega tegelevate laboratooriumide töötajate ohutuse. Selles põhjalikus juhendis kirjeldatakse olulisi ohutusmeetmeid ja parimaid tavasid töötamiseks vedela lämmastikuga rakkude säilitamisel.

Olulised isikukaitsevahendid (PPE) vedela lämmastiku käitlemisel

Kui töötate vedela lämmastikuga rakuliinide, näiteks HeLa rakkude või MCF-7 rakkude säilitamiseks, on nõuetekohane isikukaitsevahend vältimatu. Täielik visiir on kohustuslik, et kaitsta pritsmete ja aurude eest, mis võivad põhjustada tõsiseid kahjustusi teie silmadele ja näokudedele. Termoisoleeritud krüogeensed kindad peavad ulatuma kuni küünarvarre, kuna tavalised laborikindad ei paku piisavat kaitset äärmise külma eest. Pealmise kaitsekihina tuleks kanda laborikabuuri, mida ideaalis täiendab pritsmekindel plastist eesriie, mis pakub täiendavat kaitset juhusliku lekke eest. Kui kannate rakke meie külmutuskeskkonnast CM-1 vedela lämmastiku hoidlasse, veenduge, et teie isikukaitsevahendid on heas seisukorras, ilma kulumis- või kahjustusmärkideta. Pidage meeles, et isegi väike kokkupuude vedela lämmastikuga võib põhjustada koekahjustusi, mistõttu on kõikehõlmavad isikukaitsevahendid hädavajalikud iga LN2-süsteemiga kokkupuute korral.

Ventilatsiooninõuded ja hapniku seire

Väärtuslike teadusmaterjalide, nagu U937 rakkude ja RAJI rakkude, säilitamisel vedelas lämmastikus on oluline nõuetekohane ventilatsioon. LN2 aurustumisel laieneb see kiiresti - üks liiter vedelat lämmastikku tekitab umbes 700 liitrit lämmastikgaasi, mis võib suletud ruumides kiiresti hapniku välja tõrjuda. Teie vedela lämmastiku hoiuruum peab olema varustatud mehaanilise ventilatsioonisüsteemi ja hapniku jälgimise seadmetega. Mitmeid rakuliine ja suuri koguseid Freeze Medium CM-1 - 500 ml hoidvate rajatiste puhul soovitame paigaldada püsivad hapniku seireseadmed koos helisignaaliga, mis käivituvad 18% hapniku kontsentratsiooni korral. Ladustamiskohas peaksid olema kõrgetasemelised ventilatsioonipunktid, kuna lämmastikgaas on soojendatuna veidi kergem kui õhk. Ärge kunagi toetuge ainult loomulikule ventilatsioonile - mehaanilisi ventilatsioonisüsteeme tuleb regulaarselt kontrollida ja hooldada vastavalt tootja spetsifikatsioonidele, et tagada ühtlane õhuvahetuse kiirus.

Kahe isiku ohutusprotokoll

Tundlike rakuliinide, näiteks HUVEC-rakkude või inimese mesenhümaalsete tüvirakkude (luuüdi) krüokonserveerimiseks kasutatava vedela lämmastiku käsitsemisel töötage alati kahekesi. See on eriti oluline selliste oluliste toimingute puhul nagu proovide ülekandmine hoidlasse, krüogeensete anumate täitmine või suurte koguste Freeze Medium CM-1 käsitsemine. Teine isik on ohutusvaatleja ja saab kohe reageerida hädaolukordades, nagu lekked, hapniku vähenemine või isikukahjustused. Ta peaks asuma laborist väljapääsu lähedal, säilitades visuaalse kontakti, kuid viibides samal ajal eemal otsesest tööpiirkonnast. Mõlemad meeskonnaliikmed peavad olema täielikult koolitatud hädaolukorra menetlustes ja teadma ohutusseadmete asukohta. Planeerige vedela lämmastiku käitlemise toimingud tavalisel tööajal, kui tugipersonal on kohal, ning ärge kunagi üritage krüotehnilisi toiminguid väljaspool tööaega või nädalavahetustel.

LN2 käitlemise kohustuslikud koolitusnõuded

Enne vedela lämmastiku säilitussüsteemide käitlemist, mis sisaldavad väärtuslikke proove, nagu HeLa rakud, või töötamist külmutuskeskkonnaga CM-ACF, on kohustuslik korraldada põhjalik koolitus, mis ei sisalda seerumit. See koolitus peab hõlmama nõuetekohaseid käitlemistehnikaid, krüogeensetest ohtudest arusaamist ja hädaolukordadele reageerimise korda. Meie rakuliinidega töötavad töötajad peavad näitama pädevust ohutute täitmisprotseduuride, isikukaitsevahendite nõuetekohase kasutamise ja hapniku ammendumise riskide mõistmise osas. Koolitus peaks hõlmama praktilist harjutamist väiksemate koguste käitlemisel järelevalve all enne suuremate koguste käitlemist. Koolituse läbimise kohta tuleb säilitada dokumentatsioon ja planeerida korrapäraseid täienduskoolitusi. Uued töötajad peaksid enne iseseisvat töötamist meeskonna liikmena jälgima kogenud töötajaid vähemalt kolme täieliku LN2 käitlemise protseduuri jooksul. Pidage meeles, et isegi kogenud töötajad vajavad perioodilist ümberõpet, et tagada ohutusprotokollide värskus ja ajakohasus.

Hapniku seire- ja häiresüsteemid

Selliste kriitiliste teadusmaterjalide nagu inimese mesenhümaalsete tüvirakkude - rasvkoe ja inimese mesenhümaalsete tüvirakkude - Whartoni tarretis - ladustamisel vedelas lämmastikus on usaldusväärsed hapniku seiresüsteemid vältimatud. Paiksed hapniku monitorid peavad olema paigaldatud häiresignaalidega, mis käivituvad 18% hapniku kontsentratsiooni (v/v) korral. Need süsteemid peavad olema strateegiliselt paigutatud: põranda lähedale, kuhu algselt kogunevad õhust raskemad gaasid, töökõrgusele ja LN2-säilitusanumate lähedale. Proovide säilitamisel külmutuskeskkonnas CM-ACF - seerumivaba - 500 ml, tuleb tagada, et säilitamiskohad on varustatud nii helisignaalide kui ka visuaalsete häiresignaalidega, mis on äratuntavad üle labori taustamüra. Rakendage kõigi hapniku seiresüsteemide igakuine testimise kava, säilitage kalibreerimisprotokolle ja kehtestage selge evakuatsiooniprotseduur, kui häireid käivitub. Töötajad ei tohi kunagi üritada neid ohutussüsteeme ületada või välja lülitada, olenemata sellest, kui kaua nad kavatsevad vedela lämmastikuga töötada.