Neuro-2a rakuliin
Neuro-2a on hiire päritolu närvirakuliin, mida kasutatakse laialdaselt neuroteaduste uurimistöös. Peamiselt kasutatakse neid rakke närvisüsteemi arengu, diferentseerumise, neurotoksilisuse, rakkude signaaliteede ja aksonite kasvu uurimiseks. Lisaks kasutatakse neid ravimite arendamiseks ja sõelumiseks.
Käesolevas artiklis keskendutakse Neuro-2a neuroblastoomi rakkude olulistele aspektidele, mis võivad olla abiks enne nende kasutamisega alustamist. Artiklis käsitletakse peamiselt järgmisi teemasid:
- Neuro-2a rakkude üldised omadused ja päritolu
- Neuro-2a rakuliini kasvatamise teave
- Neuro-2a rakuliini eelised ja puudused
- Neuro-2a rakuliini rakendused teadustöös
- Neuro-2a rakke käsitlevad teadusartiklid
- Neuro-2a rakkude ressursid: protokollid, videod ja muud materjalid
Neuro-2a rakkude üldised omadused ja päritolu
Artikli selles osas käsitletakse Neuro-2a rakuliini tausta ja põhiomadusi, mida on oluline teada enne sellega töötamist. Siit saate teada: Mis on Neuro-2a rakuliin? Milline on Neuro-2a rakuliini päritolu? Mis on Neuro-2a rakkude diferentseerumine? Kui suur on Neuro-2a rakk? Milline on Neuro-2a rakkude morfoloogia?
- Neuro-2a rakud pärinevad albiino hiire (tõug A) spontaansest kasvajast (neuroblastoom). Rakuliini asutasid R.J. Klebe ja F.H. Ruddle.
- Neuro-2a neuroblastoomi rakkudel on nii neuronite kui ka amöboidsete tüvirakkude morfoloogia.
- Neuro-2a rakkude kõrgus on 12 mikromeetrit [1].
- Neuro-2a-rakkude kromosoomide arv võib ulatuda 59-st 193-ni, modaalväärtus on 95. Nende neuroblastoomi rakkude kariotüüp on ebastabiilne vahemikus 94–98 kromosoomi.
Neuro-2a rakuliini kasvatamise juhised
Neuro-2a rakke kasutatakse laialdaselt neuroteaduse uurimislaborites. Enne nende rakkudega töötamist peaksite tutvuma allpool nimetatud olulise rakukultuuri teabega. See võib teie tööd hõlbustada. Saate teada: Mis on Neuro-2a rakukultuuri kasvukeskkond? Kuidas kasvatada Neuro-2a rakke? Milline on Neuro-2a rakkude kahekordistumisaeg? Milline on Neuro-2a rakkude külvitihedus? Milline on Neuro-2a rakkude kasvatamise protokoll? Millised on Neuro-2a rakkude kasvukeskkonnad?
Neuro-2a-rakkude kasvatamise põhipunktid
Kaksikustumisaeg:
Neuro-2a rakkude kahekordistumisaeg on umbes 70 tundi.
Adherentne või suspensioonis:
Neuro-2a on adhesiivne rakuliin.
Istutustihedus:
Neuro-2a rakuliini optimeeritud külvitihedus on 1 x 10⁴ rakku/cm². Külvamiseks pestakse rakke magneesiumi- ja kaltsiumivaba fosfaadipuhvri soolalahusega (1x). Seejärel lisatakse passaažilahus (Accutase) ja rakke inkubeeritakse 8–10 minutit toatemperatuuril. Pärast rakkude dissotsiatsiooni lisatakse värsket kasvukeskkonda ja rakke tsentrifuugitakse. Kogutud rakupellet resuspendeeritakse hoolikalt ja rakud valatakse kasvatamiseks kultuurianumasse.
Kasvukeskkond:
Neuro-2a rakkude kasvatamiseks kasutatakse EMEM-i. See sisaldab 10% FBS-i, 2 mM L-glutamiini, 1,5 g/l NaHCO₃, EBSS-i, 1 mM naatriumpüruvaati ja NEAA-d, mis tagavad ideaalse rakkude kasvu. Kasvatuskeskkonda tuleks vahetada 1–2 korda nädalas.
Kasvatustingimused:
Neuro-2a kultuure hoitakse 37 °C niisutatud inkubaatoris, mis on ühendatud 5% CO₂ varustusega.
Säilitamine:
Rakke tuleb pikaajaliseks säilitamiseks hoida temperatuuril alla -150 °C ülimaadala temperatuuriga elektrilises sügavkülmikus või vedela lämmastiku aurufaasis.
Külmutamisprotsess ja kasvukeskkond:
Neuro-2a rakkude külmutamiseks kasutatakse CM-1 või CM-ACF kasvatuskeskkonda. Rakud külmutatakse aeglase külmutamisprotsessi abil, mis võimaldab temperatuuri langust vaid 1 °C minutis. See kaitseb rakke šoki eest ja säilitab nende eluvõime.
Sulatusprotsess:
Külmutatud kultuuride sulatamiseks asetatakse viaal 37 °C veevanni 40–60 sekundiks, kuni jääb alles vaid väike jääklomp. Seejärel lisatakse kasvukeskkond ja rakud tsentrifuugitakse. See samm aitab eemaldada külmutuskeskkonda kuuluvad komponendid. Seejärel suspendeeritakse rakupellet uuesti ja rakud viiakse üle uude, kasvukeskkonnaga täidetud kolbi. Pärast seda hoitakse rakke inkubaatoris 37 °C juures vähemalt 24 tundi.
Bioloogilise ohutuse tase:
Neuro-2a kultuuride käitlemiseks ja hooldamiseks on kohustuslikud 1. bioloogilise ohutuse taseme laboritingimused.
- Neuro-2a rakuliini eelised ja puudused
- Neuro-2a rakuliini kasutamine teadusuuringutes
- Neuro-2a rakuliini kasvatamise teave
- Neuro-2a rakkude üldised omadused ja päritolu
- 5. Neuro-2a rakke käsitlevad teadusartiklid
- Neuro-2a rakkude ressursid: protokollid, videod ja muud materjalid
- Korduma kippuvad küsimused
Neuro-2a rakuliini eelised ja puudused
Neuro-2a rakkudel on mõned eelised ja puudused, mis eristavad neid teistest neuronrakkude liinidest. Siin on loetletud mõned nende rakkude märkimisväärsed eelised ja puudused.
Eelised
Neuro-2a hiire neuroblastoomi rakuliini eelised on järgmised:
-
Lihtne hooldada:
Neuro-2a rakuliini kasvatamine ei nõua keerukaid ega komplitseeritud rakukultuuri protseduure. Neid on teaduslaborites lihtne kasvatada ja hooldada.
-
In vitro neuronite rakumudel:
Neuro-2a on mugav neuronirakkude mudel, mida teadlased kasutavad laialdaselt neuronite arengu ja diferentseerumise uuringutes.
Puudused
Neuro-2a rakkude puudused on järgmised:
-
Hiire päritolu:
Neuro-2a on hiire päritolu ning teadlased peaksid olema ettevaatlikud, kui nad ekstrapoleerivad hiirepõhiste uuringute tulemusi inimeste tervisele ja haigustele, kuna hiire ja inimese bioloogia võib oluliselt erineda.
Neuro-2a rakuliini rakendused teadustöös
Neuro-2a rakkudel on palju rakendusi neuroteaduse valdkonnas. Siin käsitletakse mõningaid selle rakuliini paljulubavaid kasutusvõimalusi:
- Närvirakkude areng: Neuro-2a on in vitro närvirakkude mudel, mida kasutatakse laialdaselt närvirakkude arengu ja sellega seotud protsesside, nagu diferentseerumine, aksonite kasv ja sünapside moodustumine, uurimiseks. 2020. aastal läbi viidud uuringus kasutati Neuro-2a rakke, et uurida mikroRNA-124 rolli retinoehappe poolt indutseeritud neuronaalsete rakkude diferentseerumisel [2]. Teises uuringus uuriti Neuro-2a retinoehappe retseptori gamma (RARG) ja miRNA-124 ekspressiooni neuroblastoomi rakuliinis (N2A). Selles uuringus esitati hüpotees, et miR-124 mõjutab RARG-i ja pärsib neurite väljakasvu [3].
- Neurotoksilisus: Neuro-2a rakke kasutatakse ka ravimite, kemikaalide või keskkonnategurite toksilise mõju hindamiseks närvirakkudele. Näiteks uurisid Zhihong Yin ja tema kolleegid läbi viidud uuringus keskkonnakemikaali bisfenool A (BPA) neurotoksilisust, kasutades selleks Neuro-2a rakke. Nad täheldasid, et BPA pärsib neuronite diferentseerumist ja proliferatsiooni, häirides nende rakulist ja sünaptilist terviklikkust [4].
- Ravimite sõelumine: Neuro-2a rakke kasutatakse ka mitmete ravimite, ühendite ja looduslike toodete terapeutilise toime hindamiseks. Näiteks kasutati ühes uuringus Neuro-2a rakke, et uurida hõlmikpuu (Ginkgo biloba) taimeekstrakti antioksüdatiivset potentsiaali. Lisaks järeldati uuringus, et see vähendab Aβ agregatsiooni ja võib olla potentsiaalne ravivõimalus Alzheimeri tõve puhul [5].
5. Neuro-2a rakke käsitlevad teadusartiklid
Siin on mõned huvitavad teadusartiklid, milles käsitletakse Neuro-2a rakuliini.
Selles 2018. aastal ajakirjas „Journal of Natural Medicines“ avaldatud uuringus uuriti valgest piprast (P. nigrum) eraldatud alkamidide terapeutilist mõju Neuro-2a neuronrakkudele.
Nkx2.1-i ekspressiooni langus on seotud liigse retinoehappe poolt põhjustatud aju anomaaliatega
Aastal 2020 ajakirjas „Acta Biochimica et Biophysica Sinica“ avaldatud uuringus esitati hüpotees, et Nkx2.1-geen mängib hiire aju arengus olulist rolli, reguleerides Shh-signaalikaskadi.
See artikkel avaldati ajakirjas „Toxicology and Industrial Health“ (2023) ning selles väidetakse, et keskkonnakemikaal bisfenool A põhjustab neuro-2a-rakkudes neurotoksilisust ning häirib nende sünaptilist ja tsütoskeletilist funktsioneerimist.
Ajakirjas „Pharmaceuticals“ (2021) avaldatud artiklis väidetakse, et ravim heksareliin moduleerib PI3K/AKT ja MAPK kaskaadi neuroblastoomi rakkudes (Neuro-2a) ning pärsib vesinikperoksiidi poolt indutseeritud Neuro-2a rakkude apoptoosi.
Ajakirjas „Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine“ (2021) avaldatud uurimistöös väidetakse, et Emblica officinalis’e puuviljaekstrakt pärsib neuropõletikku Neuro-2a rakkudes ja võib seetõttu olla kasulik neuropõletikuliste haiguste ravis.
Neuro-2a-rakkude alased materjalid: protokollid, videod ja muud
Allpool on loetletud Neuro-2a rakkude kohta kättesaadavad veebivahendid. Nende hulka kuuluvad Neuro-2a rakukultuuri ja transfektsiooni protokollid.
- Neuro-2a transfektsiooniprotokoll: Neuro-2a on sobiv transfektsioonivõõrperemees. See link annab juhiseid selle rakuliini transfektsiooniprotokolli kohta. Neuro-2a transfektsiooni efektiivsus varieerub sõltuvalt kasutatavast reagendist.
Järgmine link sisaldab Neuro-2a rakukultuuri protokolli.
- Neuro-2a rakukultuuri protokoll: See link aitab teil tutvuda Neuro-2a rakkude subkultiveerimise protokolliga.
- Neuro-2a rakud: Veebisait sisaldab põhjalikku teavet Neuro-2a rakukultuuri kasvukeskkonna, külvitiheduse ning subkultiveerimise ja krüokonserveeritud ning proliferatiivsete kultuuride käitlemise protokollide kohta.
Viited
- Lulevich, V. jt., Üherakuline mehaanika pakub tundlikku ja kvantitatiivset vahendit amüloid-beeta peptiidi ja närvirakkude vastastikmõju uurimiseks. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): lk 13872–7.
- You, Q. jt., miR-124 roll retinoehappe poolt indutseeritud Neuro-2A-rakkude diferentseerumise reguleerimisel. Neural Regen Res, 2020. 15(6): lk 1133–1139.
- Su, X. jt., MikroRNA-124 mõjutab retinoehappe retseptorit gamma ja pärsib neurite kasvu. Neuropharmacology, 2020. 163: lk 107657.
- Yin, Z. jt., Bisfenool-A-ga kokkupuutest tingitud neurotoksilisus ja selle seos sünapside ja tsütoskeletiga Neuro-2A-rakkudes. Toxicology in Vitro, 2020. 67: lk 104911.
- Chen, L. jt., Ginkgo biloba ekstrakt (EGb) pärsib oksüdatiivset stressi APPsw-d üleväljendavates Neuro-2A rakkudes. BioMed Research International, 2019. 2019.