Medium til cellekultur
Dyrkning af celler kræver omhyggelig miljøkontrol for at sikre en vellykket vækst og vedligeholdelse. En omfattende tilgang omfatter sikring af sterilitet, næringstilførsel, pH-stabilitet og temperaturkontrol.
Sterile forhold og tilførsel af næringsstoffer
For at forhindre kontaminering og sikre cellernes levedygtighed er et sterilt miljø afgørende. Det opnås typisk ved hjælp af aseptiske teknikker og specialudstyr som f.eks. laminar flow-hætter. Næringsstoffer tilføres via dyrkningsmedier, som indeholder en blanding af vigtige ingredienser, herunder:
- Uorganiske salte: Vigtigt for at opretholde den osmotiske balance og levere de nødvendige ioner til cellulære aktiviteter.
- Kulhydrater: Fungerer som energikilder; glukose er det mest almindeligt anvendte sukker.
- Aminosyrer: Byggestenene i proteiner; nogle er essentielle og kan ikke syntetiseres af cellerne.
- Vitaminer: Fungerer som co-faktorer for enzymatiske reaktioner; B-vitaminer er vigtige for cellernes stofskifte.
- Fedtsyrer og lipider: Væsentlige komponenter for cellemembranens integritet og funktion.
- Proteiner og peptider: I serumfrie medier erstatter disse de vækstfaktorer og bindingsproteiner, der typisk leveres af serum.
- Serum: Indgår ofte som kilde til vækstfaktorer, selv om serumfri alternativer bliver mere og mere populære for at reducere risikoen for variation og kontaminering.
- pH- og temperaturstabilitet: Celler kræver typisk et pH-område på 7,2-7,4 for at vokse optimalt. Dette reguleres af buffersystemer, som enten kan være CO2/bicarbonat-baserede eller opnås kemisk ved hjælp af midler som HEPES. Temperaturen holdes omkring 37 °C for at efterligne fysiologiske forhold.
Medievarianter og optimering
I årenes løb er der blevet udviklet forskellige basalmedier til at imødekomme specifikke celletyper:
- Balancerede saltopløsninger: Danner grundlaget for mere komplekse medieformuleringer.
- Basale medier, såsom Minimum Essential Medium (MEM), bruges til primære kulturer og diploide celler.
- Komplekse medier: Ligesom RPMI 1640 er de velegnede til en bredere vifte af pattedyrsceller.
- Serumfri medier: Skræddersyet til specifikke anvendelser, hvilket reducerer risikoen for kontaminering fra animalske komponenter.
Forberedelse af medier og kvalitetskontrol
Medier kan fremstilles internt af vigtige ingredienser eller købes som færdige løsninger. Kvalitetskontrol indebærer at sikre fraværet af forurenende stoffer og den rette koncentration af ingredienser. Rekonstitution af pulveriserede medier kræver vand af høj kvalitet, og forberedte medier skal steriliseres, typisk ved filtrering.
Brug af serum og sikkerhedsovervejelser
Brug af serum, især føtalt bovint serum (FBS), er almindeligt på grund af dets rige indhold af vækstfaktorer. Men på grund af bekymringer om sygdomme som BSE følges der strenge test- og indkøbsprotokoller for at sikre sikkerheden.
Regulatoriske retningslinjer og tendenser
Der er regler for materialer fra dyr i kulturer, som understreger vigtigheden af indkøb og testning. Tendensen til at eliminere sådanne materialer, hvor det er muligt, afspejles i udviklingen af serumfri og dyrefri mediealternativer.
Konklusionen er, at cellekulturmedier spiller en grundlæggende rolle i væksten og vedligeholdelsen af celler in vitro. Hver komponent er nøje udvalgt og optimeret til at efterligne in vivo-miljøet og sikre, at cellerne har vækst-, overlevelses- og funktionsbetingelser.
Det, der adskiller DMEM fra andre medier, er dets unikke sammensætning. Det indeholder en imponerende firedobling af aminosyre
- og vitaminkoncentrationen sammenlignet med det originale Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM blev oprindeligt udviklet med lav glukose (1 g/L) og natriumpyruvat, men anvendes ofte med højere glukoseniveauer, enten med eller uden natriumpyruvat. Det er bemærkelsesværdigt, at DMEM ikke indeholder proteiner, lipider eller vækstfaktorer, hvilket kræver tilskud. For at opnå optimal vækst er det almindeligt at supplere DMEM med 10 % føtalt kvægserum (FBS). Derudover anvender DMEM et natriumbicarbonat-buffersystem, der kræver et 5-10 % CO2-miljø for at opretholde en fysiologisk pH-værdi.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) er højt anset blandt de definerede medier til celle
- og vævskultur og opfylder vækstbehovene for forskellige adhærente cellefænotyper. Det overgår det oprindelige Eagle's Medium, der blev udviklet i 1950'erne til dyrkning af kyllingeceller, gennem den forbedrede supplerende formulering, der er kendt som Dulbeccos modifikation. Denne modifikation øger indholdet af udvalgte aminosyrer og vitaminer op til fire gange i forhold til det oprindelige medium.
Inden for celledyrkning spiller DMEM en vigtig rolle som vækstmedium for forskellige celletyper, herunder primære celler, stamceller og transformerede celler. Forskere anvender også den modificerede version af DMEM til en lang række forskningsformål, f.eks. opdagelse af lægemidler, vævsteknik og undersøgelse af cellesignalveje.
Kvalitetskontrol
Sterilt filtreret
Opbevaring og holdbarhed
Opbevares ved +2°C til +8°C, beskyttet mod lys.
Når den er åbnet, skal den opbevares ved 4 °C og bruges inden for 6-8 uger.
Betingelser for forsendelse
Omgivelsestemperatur
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da det forringer produktkvaliteten.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerede varmekilder som f.eks. mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du fjerne den nødvendige mængde og varme den op til stuetemperatur før brug.
Sammensætning
Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)
Aminosyrer
Glycin
30.00
L-Arginin HCl
84.00
L-Cystine 2 HCl
62.57
L-Glutamin
584.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-Isoleucin
105.00
L-Leucin
105.00
L-Lysin HCl
146.00
L-Methionin
30.00
L-Phenylalanin
66.00
L-Serin
42.00
L-Threonin
95.00
L-Tryptofan
16.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
103.79
L-Valin
94.00
Vitaminer
Cholinklorid
4.00
D-calcium-pantothenat
4.00
Folinsyre
4.00
myo-Inositol
7.20
Nikotinamid
4.00
Pyridoxal HCl
4.00
Riboflavin
0.40
Thiamin HCl
4.00
Uorganiske salte
CaCl2 2H2O
265.00
Fe(NO3)3 9H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Andre komponenter
D-Glucose
4500.00
Fenolrødt natriumsalt
15.90
Natriumpyruvat
110.00
Hvad er der i EMEM?
EMEM er en modificeret version af Eagle's minimum essential medium, der indeholder Earle's Balanced Salt Solution, ikke-essentielle aminosyrer, L-glutamin, natriumpyruvat og natriumbicarbonat. Det er vigtigt at bemærke, at dette niveau af natriumbikarbonat er beregnet til brug i 5 % CO2 i luften. For at bevare effektiviteten anbefales det at opbevare mediet ved 2 °C til 8 °C i mørke, når det ikke er i brug.
Hvad bruges EMEM til?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) er et cellekulturmedium, der kan vedligeholde celler i vævskultur. Mediet indeholder højere koncentrationer af aminosyrer, hvilket giver mulighed for en mere nøjagtig tilnærmelse af proteinsammensætningen i dyrkede pattedyrsceller. EMEM kan bruges til at dyrke forskellige celler, herunder fibroblaster, humane levercancercellelinjer (HepG2) og humane føtale hjerneprogenitor-afledte astrocytceller (PDA). Det bruges typisk i nærvær af føtalt bovint serum (FBS), kalve
- eller hestesera.
Hvordan adskiller EMEM sig fra andre celledyrkningsmedier?
Selvom EMEM og Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) har nogle ligheder, er de også forskellige. Begge medier mangler protein og indeholder de aminosyrer, salte, glukose og vitaminer, der er nødvendige for at forsyne en celle med energi og opretholde den i vævskultur. DMEM-formuleringen er dog modificeret, så den indeholder op til fire gange flere vitaminer og aminosyrer og to til fire gange mere glukose end EMEM. Det er værd at bemærke, at EMEM også er forskellig fra den oprindelige MEM-formulering.
Kvalitetskontrol
Sterilt filtreret
Opbevaring og holdbarhed
Opbevares ved +2°C til +8°C, beskyttet mod lys.
Når den er åbnet, skal den opbevares ved 4 °C og bruges inden for 6-8 uger.
Betingelser for forsendelse
Omgivelsestemperatur
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da det forringer produktkvaliteten.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerede varmekilder som f.eks. mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du fjerne den nødvendige mængde og varme den op til stuetemperatur før brug.
Sammensætning
Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)
Aminosyrer
L-Arginin HCl
126.00
L-Cystin 2 HCl
31.30
L-Glutamin
292.00
L-Histidin HClH2O
42.00
L-Isoleucin
52.00
L-Leucin
52.00
L-Lysin HCl
72.50
L-Methionin
15.00
L-Phenylalanin
32.00
L-Threonin
48.00
L-Tryptofan
10.00
L-Tyrosin 2 Na 2H2O
51.90
L-Valin
46.00
Vitaminer
Cholinklorid
1.00
Vitaminer
D-calcium-pantothenat
1.00
Folinsyre
1.00
myo-Inositol
2.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoxal HCl
1.00
Riboflavin
0.10
Thiamin HCl
1.00
Uorganiske salte
CaCl2 2H2O
265.00
Uorganiske salte
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Andre komponenter
D-Glucose
1000.00
Andre komponenter
Fenolrød natriumsalt
11.00
En af de store fordele er evnen til at understøtte cellevækst uden behov for serumtilskud. Det eliminerer potentiel interferens forårsaget af serumkomponenter, hvilket sikrer ensartede og pålidelige forsøgsresultater. Ved at skabe et serumfrit kulturmiljø giver Ham's F-12 Medium forskere større kontrol over deres undersøgelser.
En anden vigtig egenskab ved Ham's F-12 Medium er dens egnethed til enkeltcelleudplantning. Det gør det til et fremragende valg til en række forskellige cellelinjer, herunder CHO-celler, lungeceller og L-celler fra mus. Mediets optimerede næringssammensætning letter effektiv fastgørelse og vækst af individuelle celler, hvilket muliggør etablering af homogene cellekulturer med forbedret reproducerbarhed.
Desuden er Ham's F-12 Medium blevet anerkendt som det foretrukne medium til klontoksicitetsassayet (CTA). Dette assay spiller en afgørende rolle i vurderingen af stoffers cytotoksiske virkninger på celler. Ved at bruge Ham's F-12 Medium i CTA kan forskere nøjagtigt evaluere virkningen af forskellige forbindelser eller behandlinger på individuelle celler, hvilket giver værdifuld indsigt i toksikologiske profiler.
Kvalitetskontrol
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er blevet testet for sterilitet og fravær af mycoplasma og bakterier.
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysning og opvarmning op til +37° C minimerer produktets kvalitet.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovne).
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du tage denne mængde ud af flasken og varme den op ved stuetemperatur.
Holdbarheden for alle medier undtagen basismediet er 8 uger fra fremstillingsdatoen.
Sammensætning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salte
Calciumchlorid x 2H2O
44,00
Kobber(II)sulfat x 5H2O
0,00
Jern(II)-sulfat x 7H2O
0,83
Magnesiumklorid x 6H2O
122,00
Kaliumklorid
223,65
Natriumklorid
7599,00
dinatriumhydrogenfosfatvandfri
142,04
Zinksulfat x 7H2O
0,86
Andre komponenter
D(+)-Glucose vandfri
1801,60
Hypoxanthin
4,08
Linolsyre
0,08
DL-α-liponsyre
0,21
Fenolrød
1,20
Putrescin x 2HCl
0,16
Natriumpyruvat
110,00
Thymidin
0,73
NaHCO3
1176,00
Aminosyrer
L-Alanin
8,91
L-Arginin x HCl
210,70
L-Asparagin x H2O
15,01
L-Asparaginsyre
13,31
L-cystein x HCl x H2O
35,12
L-Alanyl-L-Glutamin
217,30
L-glutaminsyre
14,71
Glycin
7,51
L-Histidin x HCl x H2O
20,96
L-isoleucin
3,94
L-Leucin
13,12
L-Lysin x HCl
36,54
L-Methionin
4,48
L-Phenylalanin
4,96
L-prolin
34,53
L-Serin
10,51
L-Threonin
11,91
L-Tryptofan
2,04
L-Tyrosin
5,44
L-Valin
11,71
Vitaminer
D(+)-Biotin
0,01
D-Calcium-pantothenat
0,24
Cholinklorid
13,96
Folinsyre
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoxin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Thiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
Denne unikke formulering kombinerer Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) og Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) i et præcist forhold på 1:1. Tilsætningen af L-glutamin forbedrer sammensætningen yderligere.
DMEM, der stammer fra Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), giver en øget koncentration af aminosyrer og vitaminer sammenlignet med sin forgænger. I modsætning hertil er Ham's F-12 baseret på Ham's F-10 medium, hvilket giver et supplerende sæt af essentielle komponenter.
For at understøtte optimal cellevækst er det almindelig praksis at supplere DMEM:Ham's F12 med FBS i en typisk koncentration på 5-10 %. Denne tilsætning er nødvendig, da mediet mangler væksthormoner, lipider og proteiner, der er afgørende for cellernes udvikling.
DMEM:Ham's F12 indeholder et pH-buffersystem og suppleres ofte med fenolrødt, en pH-indikator. Celler, der dyrkes i DMEM:Ham's F12 eller et hvilket som helst medium, der anvender bikarbonatbuffersystemet, kræver et kontrolleret CO2-miljø på 5-10 % for at opretholde et passende pH-niveau.
Kvalitetskontrol
Sterilt filtreret
Opbevaring og holdbarhed
Opbevares ved +2°C til +8°C, beskyttet mod lys.
Når den er åbnet, skal den opbevares ved 4 °C og bruges inden for 6-8 uger.
Betingelser for forsendelse
Omgivelsestemperatur
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da det forringer produktkvaliteten.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerede varmekilder som f.eks. mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du fjerne den nødvendige mængde og varme den op til stuetemperatur før brug.
Sammensætning
Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)
Aminosyrer
Glycin
18.75
L-Alanin
4.45
L-arginin HCl
147.50
L-Asparagin H₂O
7.50
L-Asparaginsyre
6.65
L-cystein HCl H₂O
17.56
L-Cystin 2 HCl
31.29
L-glutaminsyre
7.35
L-Glutamin
365.00
L-Histidin HCl H₂O
31.48
L-Isoleucin
54.47
L-Leucin
59.05
L-Lysin HCl
91.25
L-Methionin
17.24
L-Phenylalanin
35.48
L-Prolin
17.25
L-Serin
26.25
L-Threonin
53.45
L-Tryptofan
9.02
L-tyrosin dinatriumsalt
48.10
L-Valin
52.85
Vitaminer
D-Biotin
0.0035
Cholinklorid
8.98
D-Calcium Pantothenat
2.24
Folinsyre
2.66
myo-Inositol
12.60
Nikotinamid
2.02
Pyridoxin HCl
0.031
Pyridoxal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Thiamine HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Uorganiske salte
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Andre komponenter
D-Glucose
3151.00
Hypoxanthin
2.40
HEPES
3574.50
Linolsyre
0.042
Lipoic Acid
0.105
Phenol Red Sodium Salt
8.63
Putrescin 2 HCl
0.081
Sodium Pyruvate
55.00
Thymidin
0.365
- og kyllingeleverceller, især under forhold med reduceret serum.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium er omhyggeligt formuleret for at optimere betingelserne for celledyrkning. Det har en beriget sammensætning, der giver forhøjede niveauer af essentielle komponenter som aminosyrer og natriumpyruvat samt yderligere elementer, herunder putrescin, thymidin, hypoxanthin og zink. Disse tilføjelser gør det muligt for forskere at supplere mediet med minimalt serum eller definerede komponenter til specifikke celletyper, hvilket letter præcise forsøgsbetingelser.
Især indeholder Ham's F-12K (Kaighn's) Medium ikke proteiner eller vækstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendigt at supplere med vækstfaktorer og Fetal Bovine Serum (FBS), så forskere kan skræddersy mediet til kravene i deres specifikke cellelinjer. For at opnå optimal ydeevne skal koncentrationen af FBS optimeres omhyggeligt for hver enkelt cellelinje for at sikre optimal vækst og funktionalitet.
For at opretholde en fysiologisk pH-værdi anvender Ham's F-12K (Kaighn's) Medium et natriumbicarbonat-buffersystem (2,5 g/L), hvilket kræver et kontrolleret 5-10 % CO2-miljø under dyrkningen. Dette sikrer, at mediets pH-værdi forbliver inden for det ideelle område for cellevækst og levedygtighed
Kvalitetskontrol
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er blevet testet for sterilitet og fravær af mycoplasma og bakterier.
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Nedfrysning og opvarmning til +37 °C minimerer produktets kvalitet.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovne).
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du tage denne mængde ud af flasken og varme den op ved stuetemperatur.
Holdbarheden for alle medier undtagen basismediet er 8 uger fra fremstillingsdatoen.
Sammensætning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salte
Calciumklorid x 2H2O
135,24
Kobber(II)sulfat x 5H2O
0,00
Jern(II)-sulfat x 7H2O
0,83
Magnesiumklorid x 6H2O
105,72
Magnesiumsulfat x 7H2O
394,49
Kaliumklorid
283,29
Kaliumdihydrogenfosfat
58,52
Natriumklorid
7597,20
dinatriumhydrogenfosfatvandfri
115,02
Zinksulfat x 7H2O
0,14
Andre komponenter
D(+)-Glucose vandfri
1260,00
Hypoxanthin
4,08
DL-α-liponsyre
0,21
Fenol rød
3,00
Putrescin x 2HCl
0,32
Natriumpyruvat
220,00
NaHCO3
2500,00
Thymidin
0,73
Aminosyrer
L-Alanin
17,82
L-arginin x HCl
421,40
L-Asparagin x H2O
30,02
L-Asparaginsyre
26,62
L-cystein x HCl x H2O
70,24
L-glutamin
292,20
L-glutaminsyre
29,42
Glycin
15,01
L-Histidin x HCl x H2O
41,92
L-isoleucin
7,87
L-Leucin
26,24
L-Lysin x HCl
73,04
L-Methionin
8,95
L-Phenylalanin
9,91
L-prolin
69,06
L-Serin
21,02
L-Threonin
23,82
L-Tryptofan
4,08
L-Tyrosin
10,87
L-Valin
23,42
Vitaminer
D(+)-Biotin
0,07
D-Calcium-pantothenat
0,48
Cholinklorid
13,96
Folinsyre
1,32
myo-Inositol
18,02
Nikotinamid
0,04
Pyridoxin x HCl
0,06
Riboflavin
0,04
Thiamin x HCl
0,34
Vitamin B12
1,36
- 0,02 ved 20-25 °C. Hvert parti er testet for sterilitet og fravær af mycoplasma og bakterier. Opbevaring Opbevares i køleskab ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysning og opvarmning til +37 °C forringer produktets kvalitet. Opvarm ikke mediet til over 37 °C, og brug ikke ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovne). Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal denne mængde tages ud af flasken og opvarmes til stuetemperatur. Holdbarheden for alle medier undtagen basismediet er 6 til 8 uger fra åbningsdatoen. Sammensætning Komponenter mg/L Uorganiske salteCalciumchlorid x 2H2O132,00 Magnesiumsulfat97,67 Kaliumchlorid400 Natriumchlorid6.460,00 Dinatriumhydrogenphosphat (vandfrit)504,00 Andre komponenterD(+)-Glukose (vandfri)3.000,00 Glutathion (reduceret)0,5 Kødpeptone600,00 Phenolrødt natriumsalt11 AminosyrerL-alanin13,36 L-arginin x HCl42,14 L-asparagin x H2O45,03 L-asparaginsyre19,97 L-cystein x HCl x H2O31,75 L-glutamin (stabil)219,15 L-glutaminsyre22,07 Glycin7,51 L-histidin x HCl x H2O20,96 L-hydroxyprolin19,67 L-isoleucin39,36 L-leucin39,36 L-lysin x HCl36,54 L-methionin14,92 L-phenylalanin16,52 L-prolin17,27 L-serin26,28 L-threonin17,87 L-tryptofan3,06 L-tyrosin-dinatriumsalt26,10 L-valin17,57 Vitaminerp-Aminobenzoesyre1,0 Ascorbinsyre0,56 D(+)-biotin0,20 D-calciumpantothenat0,20 Kolinchlorid5,0 Folsyre10 Myo-inositol36 Nicotinamid0,5 Nikotinsyre0,5 Pyridoxal HCl0,5 Pyridoxin HCl0,50 Riboflavin0,2 Thiamin HCl0,2 Vitamin B122,0
IMDM er velegnet til hurtigt voksende cellekulturer med høj densitet, herunder Jurkat-, COS-7
- og makrofagceller. De forskellige modifikationer af IMDM, der er tilgængelige til en række celledyrkningsapplikationer, kan findes ved hjælp af medievælgerværktøjet. Flydende medier giver vigtige næringsstoffer til alle celledyrkningsprogrammer. Alle vores celledyrkningsmedier af høj kvalitet fremstilles i henhold til den oprindeligt offentliggjorte formel eller de modifikationer, der er nødvendige for at sikre en ensartet ydeevne og stabilitet i dyrkningsmediet.
IMDM vs. DMEM
IMDM indeholder kaliumnitrat i stedet for jernnitrat samt HEPES og natriumpyruvat. De ekstra komponenter i IMDM gør det mere velegnet til specialiserede celletyper og specifikke anvendelser end DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM og RPMI har forskellige formuleringer, som kan være relevante for PMA/ionomycin-stimulering. En væsentlig forskel er koncentrationen af Ca2+. Mens RPMI indeholder 0,42 mM Ca2+, indeholder IMDM 1,49 mM.
Kvalitetskontrol
pH = 7,2 +/
- 0,02 ved 20-25 °C.
Hvert parti er testet for sterilitet og fravær af mycoplasma og bakterier.
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Frysning og opvarmning op til +37° C minimerer produktets kvalitet.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerbare varmekilder (f.eks. mikrobølgeovne).
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du tage denne mængde ud af flasken og varme den op ved stuetemperatur.
Holdbarheden for alle medier undtagen basismediet er 8 uger fra fremstillingsdatoen.
Sammensætning
Komponenter
mg/L
Uorganiske salte
Calciumklorid x 2 H2O
219,00
Kaliumklorid
330,00
Kaliumnitrat
0.076
Vandfrit magnesiumsulfat
97,73
Natriumklorid
4,505.00
Vandfrit natriumdihydrogenfosfat
109,00
Natriumselenit
0,02
Andre komponenter
D(+)-Glucose vandfri
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natriumpyruvat
110,00
Fenol rød
15,00
Aminosyrer
L-Alanin
25,00
L-Arginin x HCl
84,00
L-Asparagin x H2O
25,00
L-Asparaginsyre
30,00
L-Cystin x 2HCl
91,24
L-Glutamin
584,00
L-glutaminsyre
75,00
Glycin
30,00
L-Histidin x HCl x H2O
42,00
L-Isoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-Methionin
30,00
L-Phenylalanin
66,00
L-Prolin
40,00
L-Serin
42,00
L-Threonin
95,20
L-Tryptofan
16,00
L-Tyrosin x 2Na
104,20
L-Valin
93,60
Vitaminer
D(+)-Biotin
0.013
D-Calcium pantothenat
4,00
Cholinklorid
4,00
Folinsyre
4,00
myo-Inositol
7,20
RPMI 1640 Medium blev oprindeligt designet til at understøtte væksten af humane leukæmiceller i både suspensions
- og monolagskulturer, men har udviklet sig gennem modifikationer af forskere og kommercielle leverandører til at være velegnet til en lang række pattedyrsceller. Det er usædvanligt kompatibelt med cellelinjer som HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytter og karcinomer.
RPMI 1640 Medium adskiller sig fra andre cellekulturmedier på grund af sin unikke sammensætning. Det indeholder en betydelig mængde fosfat, aminosyrer og vitaminer. Det omfatter især biotin, B12-vitamin og PABA, som ikke findes i Eagle's Minimal Essential Medium eller Dulbecco's Modified Eagle Medium. Desuden udviser RPMI 1640 Medium betydeligt forhøjede koncentrationer af vitaminerne inositol og cholin. Det indeholder dog ikke proteiner, lipider eller vækstfaktorer. Derfor er det ofte nødvendigt at supplere med 10 % føtalt kvægserum (FBS) for at skabe optimale betingelser for cellevækst.
Buffersystemet i RPMI 1640 Medium er baseret på natriumbicarbonat og kræver et 5-10 % CO2-miljø for at opretholde en fysiologisk passende pH-værdi. Inkluderingen af reduktionsmidlet glutathion adskiller yderligere dette medium fra andre.
Kvalitetskontrol
Sterilt filtreret
Opbevaring og holdbarhed
Opbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mod lys.
Når det er åbnet, skal det opbevares ved 4 °C og bruges inden for 6-8 uger.
Betingelser for forsendelse
Omgivelsestemperatur
Vedligeholdelse
Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da det forringer produktkvaliteten.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerede varmekilder som f.eks. mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du fjerne den nødvendige mængde og varme den op til stuetemperatur før brug.
Sammensætning
Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)
Aminosyrer
Glycin
10.00
L-Alanyl-L-Glutamin
434.40
L-arginin
200.00
L-AsparaginH2O
56.82
L-Asparaginsyre
20.00
L-Cystin 2HCl
65.20
L-glutaminsyre
20.00
L-Histidin HClH2O
20.27
L-Hydroxy-L-Prolin
20.00
L-Isoleucin
50.00
L-Leucin
50.00
L-Lysin HCl
40.00
L-Methionin
15.00
L-Phenylalanin
15.00
L-Prolin
20.00
L-Serin
30.00
L-Threonin
20.00
L-Tryptofan
5.00
L-Tyrosin 2Na 2H2O
28.83
L-Valin
20.00
Vitaminer
p-Amino Benzoic Acid
1.00
D-Biotin
0.20
Cholinklorid
3.00
D-Calcium Pantothenat
0.25
Folinsyre
1.00
myo-Inositol
35.00
Nikotinamid
1.00
Pyridoxin HCl
1.00
Riboflavin
0.20
Thiamine HCl
1.00
Vitamin B12
0.005
Uorganiske salte
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Andre komponenter
D-Glucose
2000.00
L-glutathion reduceret
1.00
Fenolrødt natriumsalt
5.30