EDTA ve Fenol Kırmızısı İçeren Accutase Hücre Ayrıştırma Çözeltisi – 100 ml

Accutase, yapışkan memeli hücrelerini standart doku kültürü plastik kaplarından ve yapışma kaplı yüzeylerden ayırmak için tripsin/EDTA'ya nazik bir alternatif olarak tasarlanmış, kullanıma hazır, steril filtrelenmiş bir hücre ayırma çözeltisidir. Dengeli bir tuz çözeltisi içinde proteolitik ve kollajenolitik enzim aktivitesini birleştirerek etkili ancak kontrollü bir ayrışma sağlar, hücre yüzeyi proteinlerini korur ve yüksek pasaj sonrası canlılık ve hızlı yeniden yapışmayı destekler.

Accutase formülasyonu, görsel pH göstergesi olarak EDTA ve fenol kırmızısı içeren Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) bazlıdır. Enzimler memeli ve bakteriyel kökenli değildir, bu da Accutase'i kök hücre araştırmaları, aşı iş akışları ve hayvan veya mikrobiyal kaynaklı kontaminantların en aza indirilmesi gereken tüm uygulamalar için özellikle uygun hale getirir. Çözelti 37 °C'de kendiliğinden inhibe olur, bu nedenle ayrılma işleminden sonra nötralize edici reaktif veya serum içeren ortam gerekmez – hücreler doğrudan taze ortama aktarılabilir.

Temel Özellikler

Kullanıma hazır 1x steril filtrelenmiş sıvı – seyreltme veya sulandırma gerekmez
Nazik ayrışma için birleşik proteolitik ve kollajenolitik enzim aktivitesi
Partiler arası tutarlılık için her parti, tanımlanmış bir ayrışma aktivitesine göre standartlaştırılmıştır
Memeli ve bakteri kaynaklı olmayan enzim
37 °C'de kendiliğinden inhibe olur – nötralize edici çözeltiye gerek yoktur
EDTA içeren Dulbecco’s PBS içinde formüle edilmiştir
Görsel pH göstergesi olarak fenol kırmızısı içerir
pH 6,8 – 7,8


Tipik Uygulamalar
Accutase, insan embriyonik kök hücreleri (hESC'ler), insan indüklenmiş pluripotent kök hücreleri (iPSC'ler), nöral kök hücreler, birincil nöronlar ve HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ve A549 gibi rutin olarak kültürlenen yapışkan hücre hatları dahil olmak üzere çok çeşitli yapışkan ve hassas hücre tiplerini nazikçe ayrıştırır. Tipik kullanım örnekleri şunlardır:

Yapışkan memeli hücrelerinin rutin alt kültürü ve pasajlanması
hESC'lerin, iPSC'lerin ve diğer hassas hatların nazik tek hücre ayrıştırması
Akış sitometrisi ve FACS analizi için numune hazırlığı
Epitop bütünlüğünün önemli olduğu hücre yüzeyi belirteçlerinin analizi
Hücre göçü, proliferasyon ve apoptoz testleri
Serum açlığı ve onkogen transfeksiyon çalışmaları ile durgunluk testleri
Tümör hücresi ve nöral kret hücresi göç testleri
Biyoreaktör iş akışlarında üretim ölçeğinin büyütülmesi

Rutin çalışmalar için, 75 cm2 kültür yüzeyi başına yaklaşık 10 ml Accutase uygulayın ve oda sıcaklığında 5–10 dakika inkübe edin. Optimum inkübasyon süresi her hücre hattı için ayrı ayrı belirlenmelidir ve bir saati geçmemelidir. İlave etmeden önce, kalıntı serum ve iki değerlikli katyonları gidermek için hücre tabakasını kalsiyum ve magnezyum içermeyen DPBS gibi Ca2+/Mg2+ içermeyen bir tuz çözeltisiyle durulayın.

Kullanım ve Saklama
Açılmamış şişeyi -15 °C veya altında dondurulmuş olarak saklayın. Oda sıcaklığında veya +2 °C ile +8 °C arasında bir gece boyunca çözdürün. Yüksek sıcaklıklar enzim aktivitesini azalttığından, Accutase'i 37 °C'lik su banyosunda çözdürmeyin. Çözdürme işleminden sonra, çözelti +2 °C ile +8 °C arasında 2 aya kadar saklanabilir; oda sıcaklığında saklamayın. Uygulamadan önce reaktifi 37 °C'ye önceden ısıtmayın – oda sıcaklığında yıkanmış hücrelere doğrudan ekleyin. Uzun süreli raf ömrü için, tekrarlanan çözme döngülerinden kaçınmak amacıyla tek kullanımlık alıkoyma önerilir. Her zaman aseptik koşullar altında çalışın.

Kalite
Sıkı kalite standartları altında üretilmiştir. Accutase'in her partisi, partiden partiye tutarlı ve tekrarlanabilir performans sağlamak için steril filtreden geçirilir ve sterilite, pH, görünüm ve ayrışma aktivitesi açısından test edilir.

Ürün Özellikleri



Özellik
Ayrıntı



Ürün türüHücre ayrıştırma / disosiyasyon reaktifi
BiçimSteril filtrelenmiş sıvı, kullanıma hazır
Hacim100 ml
Çalışma konsantrasyonu1x (kullanıma hazır)
Enzim aktivitesiKombine proteolitik ve kollajenolitik
Enzim kaynağıMemeli ve bakteri kaynaklı olmayan
Tampon sistemiEDTA içeren Dulbecco’s PBS
pH göstergesiFenol kırmızısı
pH aralığı6,8 – 7,8
GörünümBerrak, soluk kırmızı ila turuncu renkli çözelti
Saklama sıcaklığı-15 °C veya altında
Çözüldükten sonra stabilite+2 °C ila +8 °C arasında 2 aya kadar
Önerilen kullanım hacmi75 cm2 kültür yüzeyi başına ~10 ml
Tipik inkübasyon süresiOda sıcaklığında 5 – 10 dakika
Nakliye koşullarıKuru buzda dondurulmuş
Kullanım amacıYalnızca araştırma amaçlı ve ileri üretim için



Formülasyon (Litre Başına Bileşim)



Bileşen
Konsantrasyon (mg/L)




İnorganik Tuzlar

Sodyum klorür (NaCl)8000,00
Disodyum hidrojen fosfat (Na2HPO4)1150,00
Potasyum klorür (KCl)200,00
Potasyum dihidrojen fosfat (KH2PO4)200,00

Diğer Bileşenler

EDTA · 4Na (tetrasodyum EDTA)220,00
Fenol kırmızısı3,00
Özel enzim karışımı (proteolitik ve kollajenolitik aktivite)1x



Accutase, Innovative Cell Technologies, Inc. şirketinin tescilli ticari markasıdır.

Fosfat Tamponlu Salin (PBS) Çözeltisi
Fosfat tamponlu salin (PBS) biyolojik ve kimyasal araştırmalarda yaygın olarak kullanılan bir tampon çözeltisidir. Doku işleme ve hücre kültürü dahil olmak üzere çeşitli deneysel prosedürler sırasında pH dengesinin ve ozmolaritenin korunmasında çok önemli bir rol oynar. PBS çözeltimiz, her deneyde stabilite ve güvenilirlik sağlamak için yüksek saflıkta bileşenlerle titizlikle formüle edilmiştir. PBS'mizin ozmolaritesi ve iyon konsantrasyonları insan vücudundakileri yakından taklit eder, bu da onu izotonik ve çoğu hücre için toksik olmayan hale getirir.

PBS Solüsyonumuzun Bileşimi
PBS çözeltimiz, ultra saf dereceli fosfat tamponları ve tuzlu su çözeltilerinin pH ayarlı bir karışımıdır. 1X çalışma konsantrasyonunda şunları içerir:

8000 mg/L Sodyum klorür (NaCl)
200 mg/L Potasyum klorür (KCl)
1150 mg/L Sodyum fosfat dibazik susuz (Na2HPO4)
200 mg/L Potasyum fosfat monobazik susuz (KH2PO4)

Bu bileşim, çok çeşitli biyolojik uygulamalar için uygun optimum pH ve iyonik denge sağlar.

PBS Çözeltimizin Uygulamaları
PBS solüsyonumuz biyolojik araştırmalarda çeşitli uygulamalar için idealdir. İzotonik ve toksik olmayan özellikleri onu madde seyreltme ve hücre kabı durulama için uygun hale getirir. EDTA içeren PBS çözeltileri bağlı ve kümelenmiş hücrelerin ayrılması için etkilidir. Ancak, çinko gibi iki değerlikli metaller çökelmeye neden olabileceğinden PBS'ye eklenmemelidir. Bu gibi durumlarda Good's tamponları tavsiye edilir. Ayrıca, PBS solüsyonumuz SARS-CoV-2 dahil olmak üzere RNA virüslerinin taşınması ve saklanması için viral taşıma ortamına kabul edilebilir bir alternatiftir.

Kalite Kontrol

Steril filtreli


Depolama ve Raf Ömrü

2°C ila +25°C arasında, ışıktan koruyarak saklayın.
Açıldıktan sonra 2°C ila 25°C'de saklayın ve 24 ay içinde kullanın.


Nakliye Koşulları

Ortam sıcaklığı


Bakım

2°C ila +8°C arasında karanlıkta buzdolabında saklayın. Ürün kalitesini düşürdüğü için dondurmaktan ve sık sık +37°C'ye kadar ısıtmaktan kaçının.
Besiyerini 37°C'nin üzerinde ısıtmayın veya mikrodalga fırın gibi kontrolsüz ısı kaynakları kullanmayın.
Ortamın sadece bir kısmı kullanılacaksa, gerekli miktarı çıkarın ve kullanmadan önce oda sıcaklığına kadar ısıtın.

Kompozisyon



Kategori
Bileşenler
Konsantrasyon (mg/L)


Tuzlar
Potasyum klorür
200



Potasyum fosfat monobazik susuz
200



Sodyum klorür
8000



Sodyum fosfat dibazik susuz
1150

Mikoplazmalar mikroskopta görülemeyecek kadar küçük prokaryotik organizmalardır ve yaygın antibiyotik reaktifleri ile ortadan kaldırılamazlar. Mikoplazma hücre büyümesini, çoğalmasını ve hücre hatlarının morfolojisini etkileyerek güvenilir olmayan deneysel sonuçlara yol açabilir. Laboratuvar hücre kültürlerinin yaklaşık %15 ila 35'i mikoplazma ile kontamine olmaktadır. Bu nedenle, mikoplazmasız bir ortamı garanti altına almak için sık sık kontrol yapılması önerilir.
Analiz yöntemi
CLS, mikoplazma tespiti için hem kısa vadeli hem de uzun vadeli testler sunmaktadır. İlkinde numuneler varıştan hemen sonra test edilirken, ikincisinde hücre kültürü başlatılır ve hücreler 14 günlük antibiyotiksiz ekimden sonra test edilir. Mikoplazma testi, hem PlasmoTest™
- Mycoplasma Tespit Kiti (Invivogen) hem de Certus QC
- mycoADVANCED tespit kiti (Certus) ile iki noktalı bir tespit sistemi kullanılarak gerçekleştirilir.
Örnekler

Hızlı test için lütfen 50.000 hücre içeren minimum 50 µl hücre süspansiyonu sağlayın. Hücre süspansiyonu ortam sıcaklığında gönderilebilir.
Premium test için, hücrelerin yetiştirilmesi ve daha sonra test edilmesi için sağlam ve sağlıklı bir kültür sağlamak üzere lütfen uygun bir dondurma ortamında minimum 1 milyon hücre sağlayın. Lütfen numuneleri kuru buz üzerinde gönderin.

Lütfen Mikoplazma Testi Numune Formunu doldurun ve numune gönderinize ekleyin.

Kolorimetrik Reporter Testi
Bu test hücre bazlı kolorimetrik bir testtir. Mikoplazma varlığında, bir raportör hücre hattı, ortamda kırmızıdan maviye bir renk değişimini tetikleyen bir sinyal kaskadını indükler. Test 96 kuyucuklu çok kuyucuklu plakalarda gerçekleştirilir. Sinyaller bir mikroplaka spektrofotometresinde 620-655 nm'de tespit edilir. Tüm mikoplazma ve akoleplazma türlerinin yanı sıra hücre kültüründeki bakteriler gibi diğer kontaminantlar da tespit edilir.
İzotermal amplifikasyon
İzotermal amplifikasyon, mikoplazmaya özgü DNA'nın izotermal amplifikasyonuna dayanan ve DNA ile etkileşen bir boya kullanılarak gerçek zamanlı saptama yapan hızlı ve güvenilir bir testtir. Test, kontaminasyonların >%95'ini oluşturan en yaygın altı türü tespit edebilmektedir: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis ve A.laidlawii. Sekans homolojisi nedeniyle diğer mikoplazma türleri de tespit edilecektir (M.pneumoniae, M.gallisepticum ve M.synoviae). Numunenin mikoplazma pozitif veya negatif olup olmadığını belirlemek için erime sıcaklığı (Tm) incelenir.