P19 Hücreleri - P19 Hücreleri kullanılarak Embriyonal Karsinom Araştırması
P19 bir murin embriyonal karsinom hücre hattıdır. Biyomedikal araştırmalarda, özellikle gelişim biyolojisi, kök hücre biyolojisi, hücre farklılaşması ve ilaç taraması çalışmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. P19 hücreleri farklılaşma yeteneğine sahip olduklarından, doku oluşumu ve erken embriyonik gelişim gibi karmaşık biyolojik süreçlerin araştırılmasında yararlı olabilirler. Bu makalede, fare kaynaklı P19 hücrelerinin temellerini tartışacağız.
P19 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Bir hücre hattının genel özellikleri ve kökeni hakkında bilgi sahibi olmak, onunla çalışmaya başlamadan önce çok önemlidir. Bu bölüm aşağıdakileri kapsayacaktır: P19 hücre hattı nedir? P19 hücresinin boyutu nedir? P19 hücrelerinin kökeni nedir?
- P19, orijinal olarak C3H/He faresinde geliştirilen teratokarsinomdan elde edilen bir tür pluripotent embriyonal karsinom hücresidir. Hücre hattı ilk olarak 1982 yılında McBurney ve Rogers tarafından kurulmuştur.
- P19 hücreleri serumla desteklenmiş bir kültür ortamında sürekli olarak büyüyebilir. Retinoik asit ve dimetil sülfoksit (DMSO) gibi toksik olmayan ilaçlara maruz kaldıklarında diğer hücre tiplerine farklılaşabilirler [1].
- Bu fare karsinom hücreleri epitelyal benzeri bir morfolojiye sahiptir.
- P19 hücre hattı öploid erkek karyotipine sahiptir (n=40; XY).
P19 Hücreleri Hakkında Kültürleme Bilgileri
P19 hücre hattı, benzersiz özellikleri nedeniyle araştırma laboratuvarlarında yaygın olarak kültüre alınmaktadır. Kültürü kolay ve yönetilebilirdir. Bu bölümde, P19 hücre kültürünü korumak ve büyütmek için ihtiyacınız olan tüm temel bilgilerden bahsedilmiştir. Şunları öğreneceğiz: P19 hücrelerinin ikiye katlanma süresi nedir? P19 hücre hattını nasıl kültürlersiniz? P19 yapışkan bir hücre hattı mıdır?
P19 Hücrelerini Kültürlemek için Önemli Noktalar
|
İki Katına Çıkma Süresi: |
P19 hücre hattı için bildirilen iki katına çıkma süresi yaklaşık 2 ila 3 gündür. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
P19 embriyonik karsinom hücre hattı yapışıktır. |
|
Alt kültürleme oranı: |
P19 hücreleri her 48 saatte bir alt kültüre alınmalı ve bu hücreler için 1:10'luk bir bölünme oranı korunmalıdır. Yapışık hücreler 1 X fosfat tampon salin ile yıkanır ve hücreler ayrışana kadar Accutase ile inkübe edilir. Hücrelere kültür ortamı eklenir ve santrifüj yoluyla hasat edilir. Toplanan hücreler dikkatlice yeniden süspanse edilir ve yeni flasklara dağıtılır. |
|
Büyüme Ortamı: |
P19 hücrelerini kültürlemek için %5 Fetal sığır serumu, 3,1 g/L Glukoz, 1,6 mM L-Glutamin, 1,0 mM Sodyum piruvat, 15 mM HEPES ve 1,2 g/L NaHCO3 içeren DMEM/Ham's F12 ortamı kullanılır. |
|
Büyüme Koşulları: |
P19 embriyonik karsinom hücre hattını büyütmek ve kültürlemek için %5 CO2 beslemeli 37°C'de ayarlanmış nemlendirilmiş bir inkübatör gereklidir. |
|
Depolama: |
Dondurulmuş P19 hücre şişeleri, hücrelerin canlılığını uzun vadede korumak için bir dondurucuda veya sıvı nitrojenin buhar fazında -150°C'nin altındaki sıcaklıklarda saklanmalıdır. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortam: |
CM-1 veya CM-ACF ortamı, hücreleri herhangi bir şoktan koruyan ve canlılıklarını koruyan yavaş bir dondurma yöntemi kullanarak P19 hücrelerini dondurmak için kullanılabilir. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş P19 hücreleri 37°C su banyosunda bir flakon 40 ila 60 saniye boyunca hızla çalkalanarak çözülebilir. Hücrelere taze besiyeri eklenir ve donmuş besiyeri öğelerini uzaklaştırmak için santrifüjlenir. Hücre paleti yeniden süspanse edilir ve hücreler büyüme için yeni şişeye dökülür. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: |
P19 hücre hattı için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvar ayarları gereklidir. |
P19 hücre hattı: Avantajlar ve Dezavantajlar
Bu bölümde P19 hücre hattının avantajları ve dezavantajları tartışılacaktır.
Avantajlar
- Farklılaşma potansiyeli: P19 hücreleri kardiyomiyositler, nöronlar ve mikroglial hücreler dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerine farklılaşabilir. Farklılaşma için retinoik asit ve dimetil sülfoksit (DMSO) gibi toksik olmayan ilaçlara ihtiyaç duyarlar. Retinoik asit nöron, mikroglia ve astroglia gelişimini indüklerken DMSO atan kardiyomiyosit ve düz kas hücrelerinin gelişimini başlatır. Bu nedenle, P19 hücreleri hücre farklılaşması ve gelişimsel süreçlerin incelenmesinde yararlıdır
- Model sistem: Pluripotent embriyonik karsinom hücre hattı P19, erken embriyonik gelişimi incelemek için değerli bir modeldir. Araştırmacılar, hücre sinyal yollarını ve bu süreçlerde yer alan hücresel ve moleküler mekanizmaları aydınlatmak için P19 hücrelerini kullanmaktadır
Dezavantajları
- Murin kökenli: P19 bir murin embriyonal karsinom hücre hattıdır. Sonuç olarak, bu hücrelerin kullanıldığı çalışmalardan elde edilen bulgular insan biyolojisi ve süreçlerine tam olarak tercüme edilemeyebilir
P19 hücrelerinin araştırma uygulamaları
P19 hücreleri, farklılaşma yetenekleri ve gelişim biyolojisi ve kök hücre araştırmalarıyla ilgileri nedeniyle çeşitli araştırma uygulamalarına sahiptir. P19 embriyonik karsinom hücrelerinin önemli araştırma uygulamalarından bazıları şunlardır:
- Hücre farklılaştırma çalışmaları: Bildiğimiz gibi, P19 hücreleri nöronlara, mikroglial, düz kas hücrelerine ve kardiyomiyositlere farklılaşabilir; bu nedenle hücre farklılaşma süreçlerini incelemek için yaygın olarak kullanılır. Ayrıca, nöral ve kardiyak gelişimin ve altta yatan mekanizmaların araştırılmasına yardımcı olur. 2018'de yapılan bir çalışmada, reaktif oksijen türlerinin (ROS) P19 hücrelerinin belirli hücre tiplerine farklılaşmasını yönlendirdiği ve diğerlerinin indüksiyonunu önlediği bulunmuştur [3]. Başka bir çalışmada retinoik asit aracılı nöral farklılaşma süreci araştırılmış ve PI3K/Akt/GSK3β sinyal yolunun katılımı bulunmuştur [4].
- Gelişim biyolojisi: P19 hücreleri erken embriyonik gelişimi incelemek için çok değerli bir modeldir. Araştırmacıların embriyo gelişimi sırasında doku oluşumu gibi karmaşık biyolojik süreçleri anlamalarına yardımcı olurlar. Araştırmada P19 hücreleri kullanılmış ve ventriküler septal defekt (VSD) oluşumuna katkıda bulunan moleküler faktörler incelenmiştir. Bulgular, uzun kodlamayan bir RNA SNHG6'nın miRNA-101'i negatif düzenleyerek ve Wnt/β-katenin yolunu aktive ederek VSD'ye katkıda bulunduğunu ortaya koymuştur [5].
- İlaç testi: P19 fare embriyonik karsinom hücre hattı da potansiyel ilaç adaylarını taramak için kullanılmaktadır. Bir çalışmada farklılaştırılmış P19 hücre nöronları kullanılmış ve sentetik L-Dopa ve Mucuna pruriens tohumu sulu ekstraktının nöroprotektif asetilkolinesteraz İnhibitör etkileri araştırılmıştır. Sonuçlar, bitki özütünün L-Dopa'ya kıyasla umut verici sonuçlar sergilediğini göstermiştir [6].
P19 Hücre Hattınızı Bugün Satın Alın
P19 hücreleri: Araştırma yayınları
Bu makale bölümü, P19 hücrelerini içeren birkaç ilginç araştırma yayınını kapsayacaktır.
Bu makale 2017 yılında Oncology Reports'ta yayımlanmıştır. Çalışma, hipofiz seks hormonlarının, P19 hücreleri de dahil olmak üzere teratokarsinom hücre dizilerinin yapışmasını, çoğalmasını ve göçünü yönlendirdiğini öne sürdü.
Uzun kodlamayan RNA uc. 4, TGF-beta sinyal yolu aracılığıyla hücre farklılaşmasını etkiliyor
Experimental & Molecular Medicine dergisindeki (2018) bu yayında P19 hücreleri kullanıldı ve uzun kodlamayan RNA uc.4'ün işlevi incelendi. Bulgular uc.4'ün TGF beta sinyal yolunu modüle ederek hücre farklılaşmasını etkilediğini ortaya koydu.
Bu araştırma makalesi 2018 yılında Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine dergisinde yayımlanmıştır. Çalışma, doğal beyin dokusu özütü ve 3D hücre kültürünün P19 embriyonik karsinom hücrelerinin nöral hücrelere farklılaşmasını hızlandırabileceğini buldu.
Bu çalışma 2020 yılında Journal of Ethnopharmacology dergisinde yayımlanmıştır. Çalışma, Cichorium intybus L. yaprak özütünün P19 embriyonik karsinom hücrelerinde insülin üreten pankreatik β hücrelerine farklılaşmayı indükleyebileceğini öne sürmüştür.
Bu araştırma Molecules (2022) dergisinde yayımlanmıştır. Bu çalışmada, Mucuna pruriens tohum ekstraktının P19 hücre nöronları üzerindeki nöroprotektif ve asetilkolinesteraz inhibitör etkileri araştırılmıştır.
P19 hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Aşağıda P19 hücreleri hakkında birkaç kaynak bulunmaktadır.
- P19 hücreleri nöronal farklılaşma protokolü: Bu makale P19 hücreleri nöral farklılaşma protokolünü ve P19 hücre farklılaşması hakkında diğer faydalı bilgileri içerir.
- P19 hücre transfeksiyonu: Bu bağlantı P19 hücre transfeksiyon protokolünü öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Aşağıdaki bağlantı p19 hücre kültürü protokolünü içerir.
- P19 hücreleri: Bu web sitesi, kültür koşulu, P19 hücre ortamı, hücre bölme ve çok daha fazlası dahil olmak üzere P19 hücre hattı hakkında tüm yararlı bilgileri içerir.
P19 Hücre Hattını Keşfetmek: Sıkça Sorulan Sorular
Referanslar
- McBurney, M.W., P19 embriyonal karsinoma hücreleri. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., ve diğerleri, P19 Embriyonik Karsinom Hücre Hattı: Gen-Çevre Etkileşimlerini İncelemek İçin Bir Model. Hücre Kültürü Teknikleri, 2011: s. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey, ve G. Rödel, Mitokondriyal ROS, murin pluripotent P19 hücrelerinin farklılaşmasını yönlendirir. Kök Hücre Araştırmaları, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., ve diğerleri, All-trans-retinoid asit, P19 hücrelerinin PI3K/Akt/GSK3β sinyal yolağında yer alan nöronlara farklılaşmasını indükler. Hücresel Biyokimya Dergisi, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., Uzun kodlamayan RNA SNHG6, miR-101'in negatif regülasyonu ve Wnt/β-katenin yolağının aktivasyonu yoluyla ventriküler septal defekt oluşumuna katkıda bulunur. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens tohumu sulu ekstresi, sentetik L-dopa ile karşılaştırıldığında nöroprotektif ve asetilkolinesteraz inhibitör etkilerini geliştirmiştir. Moleküller, 2022. 27(10): p. 3131.