NCI-H1299 Hücreleri: NCI-H1299 Akciğer Kanseri Hücrelerinin Araştırma ve Klinik Etkileri
NCI-H1299, immün onkoloji, kanser ve ilaç keşfi araştırmalarında yaygın olarak kullanılan ölümsüzleştirilmiş bir insan küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre hattıdır. Dahası, araştırmacılar bu hücreleri ilaç duyarlılığını, altta yatan sinyal yollarını ve akciğer kanseriyle ilgili moleküler mekanizmaları araştırmak için kullanmıştır. Ayrıca, bu hücreler SARS-CoV-2 gibi viral enfeksiyonları incelemek için kullanılmaktadır.
NCI-H1299 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Bir hücre hattı hakkında bilinmesi gereken ilk şey, araştırmanızda kullanımını tasarlamanıza yardımcı olacak kökeni ve genel özellikleridir. Makalenin bu bölümü, NCI-H1299'un kökeni ve özellikleri hakkında bazı önemli bilgileri öğrenmenize yardımcı olacaktır. Örneğin, NCI-H1299 akciğer kanseri hücreleri nedir? NCI-H1299 ne tür bir hücredir? NCI-H1299 hücrelerinin boyutu nedir? A549 ve NCI-H1299 arasındaki fark nedir?
- NCI-H1299 hücre hattı, 43 yaşında Kafkasya kökenli kanserli bir erkek hastanın akciğerindeki lenf nodu metastazından elde edilmiştir.
- Bu hücreler p53 geninin homozigot kısmi delesyonuna sahiptir; dolayısıyla p53 proteinini ifade etmezler. NCI-H1299 p53 protein ifadesinin eksikliği, H1299 akciğer kanseri hücrelerinin proliferatif eğilimine katkıda bulunmaktadır.
- P53'ün yanı sıra, bu ölümsüzleştirilmiş hücrelerin büyüme, çoğalma, göç ve istila özelliklerinden sorumlu olan NCI-H1299 KRAS mutasyonuna sahip oldukları bildirilmiştir.
- NCI-H1299 karyotipi diploide yakındır.
- NCI-H1299 hücreleri epitelyal hücre benzeri morfolojiye sahiptir.
- Bu hücreler düzleşmiş ve 5 µm'den daha az kalınlığa sahiptir.
NCI-H1299 ve A549
NCI-H1299 ve A549 küçük olmayan akciğer kanseri hücre dizileridir. NCI-H1299 hücreleri A549'a kıyasla daha agresif ve hassastır. Her ikisi de KRAS gibi nispeten benzer mutasyonlara sahiptir. Ancak, NCI-H1299 hücrelerinin aksine, A549 hücreleri P53 genini ifade eder.
Kültürleme bilgileri
Bir hücre hattı kültürünü sürdürmek, aşağıdakiler de dahil olmak üzere tüm temel bilgileri bilmeden kolay değildir: NCI-H1299 ikiye katlanma süresi nedir? NCI-H1299'un ekim yoğunluğu nedir? NCI-H1299 hücre ortamı nedir? NCI-H1299 hücre hatlarını nasıl kültürlersiniz? Bu bölüm, NCI-H1299 hücre kültürü ile ilgili tüm bu soruların yanıtlarını öğrenmenize yardımcı olacaktır.
NCI-H1299 Hücrelerinin Kültüre Alınması için Önemli Noktalar
|
İki Katına Çıkma Süresi: |
NCI-H1299 ikiye katlanma süresi 22-30 saat arasında değişmektedir. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
NCI-H1299 yapışık bir hücre hattıdır. |
|
Alt Kültivasyon Oranı: |
NCI-H1299 hücreleri önerilen 1:3 ila 1:6 oranında alt kültüre alınır. Tohumlama için, yapışık hücreler 1x PBS ile yıkanır ve Accutase pasajlama solüsyonu ile ortam sıcaklığında 8 ila 10 dakika inkübe edilir. Ayrılan hücrelere taze kültür ortamı eklenir ve santrifüjlenir. Hücre peleti daha sonra yeniden süspanse edilir ve hücreler büyüme ortamı içeren yeni flasklara dökülür. |
|
Büyüme Ortamı: |
RPM1 1640 ideal bir NCI-H1299 hücre ortamıdır. 10 fetal sığır serumu, 4500 mg/L glukoz, 2,0 mM L-glutamin, 1 mM sodyum piruvat, 1500 mg/L NaHCO3 ve 10 mM HEPES ile desteklenir. Ortam haftada 2 ila 3 kez yenilenmelidir. |
|
Büyüme Koşulları: |
NCI-H1299 akciğer kanseri hücre kültürleri 37°C'de nemlendirilmiş bir inkübatörde %5 CO2 kaynağı ile muhafaza edilir. |
|
Depolama: |
NCI-H1299 hücre hattı, sıvı nitrojenin buhar fazında veya ultra düşük sıcaklıklı dondurucularda -150°C'nin altındaki sıcaklıklarda uzun süreli olarak saklanabilir. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortamı: |
CM-1 veya CM-ACF, NCI-H1299 hücrelerinin dondurulduğu ortamlardır. Hücreler, hücre canlılığını korumak için dakikada sadece 1 derecelik sıcaklık düşüşüne izin veren yavaş bir dondurma işlemi kullanılarak dondurulur. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş NCI-H1299 hücreleri, küçük bir buz parçası kalana kadar 40 ila 60 saniye boyunca 37 santigrat derecede önceden ısıtılmış bir su banyosunda hızla çalkalanır. Çözülmüş hücreler taze besiyerine eklenir ve doğrudan yeni şişelerde kültürlenebilir veya santrifüjlenebilir. İlk durumda, ortam 24 saatlik inkübasyondan sonra değiştirilmelidir. Santrifüjleme, donan ortam öğelerinin uzaklaştırılmasına yardımcı olur. Daha sonra, hasat edilen hücreler taze besiyerinde yeniden süspanse edilir ve kültürleme için yeni şişeye dağıtılır. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: |
NCI-H1299 hücre kültürünü işlemek için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvarı gereklidir. |
NCI-H1299 Hücre Hattı Satın Alın: Akciğer Kanseri Biyolojisinin Araştırılması için Yüksek Kaliteli Araştırma Araçları
NCI-H1299 hücrelerinin avantajları ve dezavantajları
Diğer insan kanser hücre hatları gibi, NCI-H1299 da belirli artılar ve eksilerle ilişkili bazı ayırt edici özelliklere sahiptir. Burada, önemli olan birkaç tanesini özetledik.
Avantajlar
NCI-H1299 küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
-
İn Vitro akciğer kanseri modeli
NCI-H1299 hücre hatları akciğer karsinomunun lenf nodu metastazından geliştirilmiştir ve bu nedenle nispeten benzer özelliklere sahiptir. Bu nedenle, bu hücreler akciğer kanseri biyolojisini, hücre ve moleküler mekanizmalarını araştırmak ve potansiyel terapötikleri taramak ve test etmek için in vitro bir model olarak hizmet edebilir.
-
Kültürlenmesi kolay
NCI-H1299 hücrelerinin bir araştırma laboratuvarında kültürü ve bakımı kolaydır. Telaşlı hücre kültürü gereksinimleri ve prosedürleri yoktur.
-
NCI-H1299 P53 ve NCI-H1299 KRAS mutasyonu
NCI-H1299 hücreleri, hücrelerin güçlü bir şekilde çoğalmasını sağlayan p53 gen ekspresyonundan yoksundur. Dahası, hücre büyümesine, çoğalmasına, istilasına ve göçüne katkıda bulunan KRAS mutasyonuna sahiptirler. Bunları göz önünde bulunduran araştırmacılar, KRAS ve P53 mutasyonlarıyla ilgili moleküler mekanizmaları araştırmak için H1299 hücrelerini kullanmaktadır.
Dezavantajlar
NCI-H1299 hücrelerinin dezavantajları şunlardır:
-
Doku özgüllüğü
NCI-H1299 akciğer dokusundan elde edilmiştir. Bu nedenle, uygulanabilirliği çoğunlukla akciğer karsinomu araştırmalarıyla sınırlıdır. Diğer kanser türlerinin heterojenliğini ve genel özelliklerini tam olarak temsil etmeyebilir.
NCI-H1299 hücrelerinin araştırma uygulamaları
NCI-H1299 hücre hattı akciğer kanseri araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu hücre hattının birkaç umut verici uygulamasından burada bahsedilmektedir.
- Kanser biyolojisi: NCI-H1299 hücreleri kanser gelişimi, ilerlemesi ve ilgili hücre ve moleküler mekanizmaları araştırmak için harika bir araştırma aracı olarak hizmet eder. Bu hücreler, araştırmacıların ilgili kanser hücresi davranışlarını, sinyal yollarını ve gen ifade profillerini keşfetmelerine olanak tanıyan belirli mutasyonları donatır. Birçok çalışmada akciğer kanseri biyolojisini incelemek için NCI-H1299 küçük hücreli dışı akciğer karsinomu hücre hattı kullanılmıştır. Örneğin, 2018 yılında yapılan bir çalışmada, NCI-H1299 hücreleri kullanılarak akciğer kanseri hücre apoptozunda rol oynayan sinyal yolu araştırılmıştır. Araştırmacılar PI3K/AKT yolağının hücre proliferasyonuna katkıda bulunduğunu ve inhibisyonunun kanser hücresi ölümüne neden olabileceğini bulmuşlardır [1]. Benzer şekilde, başka bir araştırma NCI-H1299 epitelden mezenkimal geçişe (EMT) dahil olan mekanizmaları araştırmıştır. Bu çalışma, hücre dışı bir protein olan SPARC'ın (salgılanan protein asidik ve sistein bakımından zengin) NCI-H1299 EMT ve migrasyonuna katkıda bulunduğunu, böylece hücrelerde tümörigenezi teşvik ettiğini öne sürmüştür - SPARC proteini, TGF-β1 sinyalinin bir aracısı olarak hareket etmektedir [2].
- İlaç keşfi ve taraması: Bir insan akciğer kanseri hücre hattı olan NCI-H1299, potansiyel ilaçların toksisitesini ve etkinliğini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca, araştırmacılar tarafından anti-tümör ilaçların etki mekanizmasını araştırmak için kullanılır. Çalışmalar bu hücreleri olası ilaç hedeflerini ve direnç mekanizmalarını belirlemek için de kullanmıştır. Örneğin, Xiao-Yun Shen ve meslektaşları tarafından yürütülen araştırmada, doğal bileşik bruceine D'nin (BD) anti-kanser potansiyeli incelenmiştir. Bulgular, BD'nin NCI-H1299 hücrelerinin çoğalmasını, istilasını ve göçünü önemli ölçüde engellediğini ortaya koymuştur. Bu nedenle, küçük hücreli dışı akciğer karsinomunun tedavisi için potansiyel bir adjuvan tedavi olarak düşünülebilir [3]. Benzer şekilde, bir çalışmada ksantohumolün tek başına ve sisplatin kemoterapötik ilacı ile kombinasyon halinde NCI-H1299 akciğer kanseri hücreleri üzerindeki sitotoksik etkileri değerlendirilmiştir [4].
NCI-H1299 Hücrelerini İçeren Araştırma Yayınları
NCI-H1299 akciğer karsinom hücre hattı ile ilgili bazı önemli ve en çok atıf alan araştırma yayınları burada yer almaktadır.
Bu makale Human and Experimental Toxicology dergisinde (2021) yayınlanmıştır. Çalışma, indol-3-karbinolün reaktif oksijen türleri (ROS) seviyelerini yükselterek H1299'da apoptozu indüklediğini öne sürmüştür.
Bu araştırma 2018 yılında Cellular Physiology and Biochemistry dergisinde yayımlandı. Araştırma bulguları, kafeik asit ve paklitaksel kombinasyonunun küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre hattı NCI-H1299'da sinerjik bir anti-kanser etkisi gösterdiğini ortaya koymuştur.
Bu araştırma makalesi Molecular Medicine Reports (2018) dergisinde yayımlanmıştır. Bu çalışmada, bir triterpenoid saponin olan tubeimoside-1'in anti-tümör etkisi ve altında yatan mekanizmalar NCI-H1299 hücre hattında değerlendirilmiştir.
Journal of Cancer'da (2020) yayımlanan bu makalede, doğal bir bileşik olan Pristimerin'in NCI-H1299 hücrelerinin çoğalmasını ve göçünü baskıladığı öne sürülmüştür.
İnsan akciğer adenokarsinomu H1299 hücrelerini düzenleyen VIPR1 geninin mekanizması
Medical Oncology'deki (2019) bu çalışma, VIPR1 geninin aşırı ekspresyonunun NCI-H1299 adenokarsinom hücre hattı üzerindeki potansiyel etkilerini araştırmıştır.
NCI-H1299 Hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
İşte NCI-H1299 hücrelerini içeren bazı çevrimiçi kaynaklar.
- NCI-H1299 transfeksiyonu: Bu video, NCI-H1299 hücre hatları için geçici transfeksiyon protokolünü açıklayacaktır.
- Yapışık bir hücre hattının alt kültürlenmesi: Bu video, yapışık bir hücre hattı için genel bir alt kültürleme prosedürünü öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Aşağıdaki bağlantıda NCI-H1299 hücreleri için hücre kültürü bilgileri bulunmaktadır.
- NCI-H1299 hücre hattı: Bu bağlantı, NCI-H1299 hücre pasajlama ve transfeksiyon protokolü hakkında bilgi edinmenize yardımcı olabilir.
NCI-H1299 Hücre Hattı Hakkında Sıkça Sorulan Sorular
Referanslar
- Gu, J., et al., PI3K/Akt sinyal yolunu inhibe ederek akciğer kanseri hücrelerinde EGCG kaynaklı apoptozun incelenmesi. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC, A549 ve H1299 akciğer kanseri hücrelerinde epitelden mezenkimal geçişi teşvik etmede TGF-β1'in bir aracısı olarak hareket eder. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., Küçük hücreli dışı akciğer kanseri H1299 hücrelerinin tedavisinde bruceine D mekanizması üzerine bir çalışma. Dünya Geleneksel Çin Tıbbı Dergisi, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Ksantohumol ve Sisplatin ile Kombinasyonunun İnsan Metastatik Akciğer Kanseri H1299 Hücreleri Üzerindeki Sitotoksik Etkileri. Tıp ve Tıbbi Araştırmalarda Gelişmeler Dergisi, 2019. 30(9): p. 1-15.