INS-1 Hücre Hattı
INS-1, diyabet araştırmalarında yaygın olarak kullanılan iyi karakterize edilmiş bir sıçan insülinoma hücre hattıdır. INS-1 hücreleri glikoz uyarımı üzerine insülin salgılar; bu nedenle glikoz metabolizmasını, beta hücre fizyolojisini ve insülin salgısının düzenlenmesini incelemek için kullanılırlar. Ayrıca, bu hücreler diabetes mellitusa karşı potansiyel terapötiklerin taranması, test edilmesi ve geliştirilmesinde de kullanılmaktadır.
Bu makale, araştırmanızda kullanmadan önce bilmeniz gereken INS-1 beta hücreleri hakkında gerekli tüm bilgileri size sağlayacaktır. Temel olarak, aşağıdakileri öğreneceksiniz:
- INS-1 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
- INS-1 hücre hattı: Kültürleme bilgileri
- INS-1 hücre hattının avantajları ve dezavantajları
- INS-1 sıçan insülinoma hücrelerinin araştırma uygulamaları
- INS-1 beta hücrelerini içeren araştırma yayınları
- INS-1 Hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
1. INS-1 hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Bir hücre hattının genel özellikleri ve kökeni hakkında bilgi sahibi olmak, onu araştırmanızda verimli ve etkili bir şekilde kullanmanıza büyük ölçüde yardımcı olabilir. Bu makale bölümü sizi INS-1'in kökeni ve genel özellikleri hakkında bilgilendirecektir. Öğreneceksiniz: INS-1 sıçan İnsülinoma hücre hattı nedir? INS-1'in genel özellikleri nelerdir? INS-1 832/3 hücre hattı nedir? INS-1E nedir?
- INS-1 hücreleri ilk olarak X-ışını ile indüklenen nakledilebilir insülinomalı 666 günlük bir sıçandan izole edilmiştir.
- INS-1 hücreleri bi-hormonaldir. Aynı anda insülin ve proglukagon proteinlerini ifade ederler. Bu hücreler, Nkx6.1 transkripsiyon faktörünün düşük ekspresyon seviyelerini sergiledikleri ve alfa hücre belirteçlerinden yoksun oldukları için olgunlaşmamış olarak kabul edilirler [1].
- INS-1 hücrelerinin INS-1E ve INS-1 832/3 olmak üzere iki alt klonu vardır.
- INS-1E, glikoz ve insülin içeriğine sekreter yanıtları açısından ana hücre hattı INS-1'den farklıdır.
- INS-1 832/3 veya INS-1 832/13 de INS-1 hücre hattının bir alt klonudur. Pankreatik adacık beta hücrelerinin işlevini ve insülin salgılama düzenlemesini incelemek için paha biçilmez bir modeldir. Ayrıca glikozla uyarılan insülin salgıları (GSIS) bağlamında ana INS-1 hücrelerinden farklıdır.
2. INS-1 hücre hattı: Kültürleme bilgileri
Bir hücre hattını verimli bir şekilde kullanmak ve bakımını yapmak için, aşağıdaki kültürleme bilgilerini bilmeniz gerekir. Makalenin bu bölümünde INS-1 hücrelerini kültüre etmek için tüm önemli noktaları öğreneceksiniz: INS-1 beta hücrelerini nasıl kültüre alırsınız? INS-1 hücre kültürü protokolü nedir? INS-1 hücrelerinin ikiye katlanma süresi nedir? INS-1 sıçan insülinoma hücre ortamı nedir?
INS-1 Hücrelerini Kültürlemek için Önemli Noktalar
|
İki Katına Çıkma Süresi: |
INS-1 hücrelerinin popülasyon ikiye katlanma süresi yaklaşık 44 saattir. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
INS-1 hücreleri hem süspansiyon hem de yapışık formda büyür. |
|
Alt Kültivasyon Oranı: |
INS-1 hücreleri 1:3 bölünme oranında alt kültüre alınır. Kısaca, süspansiyon halindeki hücreler toplanır. Yapışık hücreler PBS ile durulanır ve Accutase solüsyonu ile inkübe edilir. Hücreler ayrıldıktan sonra taze besiyeri eklenir. Daha sonra hem süspansiyon halindeki hem de yapışık hücreler santrifüjlenir ve toplanır. Hücreler dikkatlice yeniden süspanse edilir ve büyüme için yeni flasklara dağıtılır. |
|
Büyüme Ortamı: |
INS-1rat insülinoma hücre hattını kültürlemek için RPM1 1640 kullanılır. Ortam %10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu, 2,1 mM stabil Glutamin, 10 mM HEPES, 2,0 g/L NaHCO3 ve 1 mM sodyum piruvat ile desteklenir. |
|
Büyüme Koşulları: |
INS-1 hücreleri 37°C sıcaklığa ayarlanmış nemlendirilmiş bir inkübatörde ve sürekli %5 CO2 kaynağı ile tutulur. |
|
Depolama: |
INS-1 beta hücreleri sıvı nitrojenin buhar fazında veya -150°C'nin altındaki sıcaklıkta elektrikli bir dondurucuda uzun süreli olarak saklanabilir. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortam: |
INS-1 hücrelerini yavaş bir dondurma işlemiyle dondurmak için CM-1 veya CM-ACF ortamı kullanılır. Hücre canlılığını korumak için dakikada sadece 1°C'lik bir sıcaklık düşüşüne izin verir. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş INS-1 hücreleri 40 ila 60 saniye boyunca 37 santigrat derece sıcaklıkta önceden ayarlanmış bir su banyosunda çözdürülür. Çözüldükten sonra hücreler taze besiyerine eklenir ve büyüme için doğrudan yeni bir şişeye dökülür. 24 saat sonra donan ortam bileşenlerini ortadan kaldırmak için ortam değiştirilir. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: |
INS-1 sıçan insülinoma hücrelerini kültürlemek için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvar gereklidir. |
3. iNS-1 hücre hattının Avantajları ve Dezavantajları
Diğer hücre hatları gibi, INS-1 de belirli artılar ve eksilerle ilişkili bazı farklı özelliklere sahiptir. Burada, önemli olan birkaç tanesinden bahsettik.
Avantajlar
INS-1 hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
-
İyi karakterize edilmiş
INS-1 iyi kurulmuş ve iyi karakterize edilmiş bir hücre hattıdır. Çok sayıda araştırma çalışmasında kullanılmıştır. Fenotipik özelliklerini ve insülin salgılama kapasitelerini daha uzun bir süre boyunca korur, böylece güvenilir ve tutarlı deneysel sonuçlar sağlar.
-
Beta hücre modeli
INS-1 hücreleri, insülin salgıladıkları ve glikoz seviyelerindeki dalgalanmalara duyarlı oldukları için pankreas adacık beta hücrelerinin işlevini incelemek için kullanılır.
dezavantajlar
INS-1 hücrelerinin dezavantajları şunlardır:
-
İnsan kaynaklı olmayan
INS-1 beta hücreleri insan dışı bir kökene sahiptir. Sıçan insülinomasından türetilmişlerdir. Bu durum türe özgü farklılıklara neden olabilir ve deneysel sonuçların insan fizyolojisine doğrudan aktarılmasını sınırlayabilir.
4. INS-1 sıçan insülinoma hücrelerinin araştırma uygulamaları
INS-1 beta hücreleri diyabet araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu hücre hattının birkaç umut verici uygulamasından burada bahsedilmektedir.
- İnsülin salgılama çalışmaları: INS-1 hücreleri insülin salgılama yeteneğine sahiptir ve bu nedenle insülin salgılanmasının altında yatan hücresel mekanizmaları incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Araştırmacılar, glikoz metabolizması, sinyal yolları, hormonlar ve farmakolojik ajanlar dahil olmak üzere insülin salınımında rol oynayan temel faktörleri araştırmaktadır. Bir çalışmada, K + ATP iyon kanalına bağlı bir yolun INS-1 beta hücrelerinde insülin salgılanmasını düzenlediği bulunmuştur [2]. Ayrıca, çalışmalar INS-1 sıçan insülinoma hücrelerinde GLP-1R ve AKT/PDX1 yolaklarının da insülin salgılanmasında rol oynadığını ortaya koymuştur [3].
- Beta hücre fonksiyon çalışmaları: INS-1 hücreleri, glikoz metabolizmasına yanıt verme ve insülin salgılama gibi pankreatik adacık beta hücresi benzeri özelliklere sahiptir. Bu nedenle, beta hücrelerinin fizyolojik süreçlerini ve işlevlerini incelemek için kullanılırlar. 2022'de yapılan bir çalışmada INS-1 hücreleri kullanılmış ve H2O2 aracılığıyla bir beta hücresi işlev bozukluğu modeli geliştirilmiştir. Doğal bileşik tedavisine yanıt olarak bu hücrelerde hücre canlılığı, insülin salgılanması ve oksidatif stresle ilgili belirteçler incelenmiştir [4].
- İlaç keşfi ve geliştirilmesi: Sıçan insülinoma hücreleri INS-1, anti-diyabetik bileşikleri veya ilaçları taramak ve test etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Terapötik ajanların insülin sekresyonu ve diğer ilgili parametreler üzerindeki potansiyel etkilerini incelemek için kullanılabilirler. Bir çalışmada, Çin bitkisel formülünün bir bileşeni olan loganinin, INS-1 hücrelerinin insülin salgılama işlevini koruduğu ve potansiyel anti-diyabetik etkiler gösterdiği bulunmuştur. Bileşen, PI3K/AKT yolu üzerinden FOXO1 geninin nükleer translokasyonunu inhibe ederek bu faydalı etkilere aracılık etmiştir [5].
5. INS-1 beta hücrelerini içeren araştırma yayınları
İşte INS-1 sıçan insülinoma hücre hattını içeren bazı önemli araştırma yayınları.
Bu çalışma 2018 yılında Internation Journal of Molecular Sciences dergisinde yayımlanmıştır. Çalışma, sarı kristalli doğal bir bileşik olan Alfa-mangostinin, INS-1 beta hücrelerinde insülin salgılanmasını desteklediğini ve onları beta hücre toksini streptozotosinin neden olduğu hasara karşı koruduğunu öne sürdü.
Bu araştırma 2018 yılında acta pharmacologica sinica dergisinde yayımlanmıştır. Çalışmanın bulguları, epikateşin bileşiğinin, CaMKII yolağı aktivasyonu yoluyla doymuş yağ asidi ile bozulmuş INS-1 beta hücrelerinde glikozla uyarılmış insülin salgılanmasını desteklediğini ortaya koymuştur.
Molecules (2019) dergisindeki bu makale, yeni bir doğal bileşik olan Feniletanoid Glikozit'in INS-1 sıçan insülinoma hücrelerinde insülin salgılanmasını etkilediğini ve dolayısıyla anti-diyabetik potansiyele sahip olduğunu öne sürmüştür.
Loureirin B, GLP-1R ve AKT/PDX1 yolakları aracılığıyla insülin salgılanmasını teşvik eder
Bu araştırma European Journal of Pharmacology'de (2022) yayımlanmıştır. Çalışma, doğal bir ürün olan Loureirin B'nin INS-1 pankreatik adacık beta hücrelerinde AKT/PDX1 ve GLP-1R yolaklarının modülasyonu yoluyla insülin sekresyonunu artırdığını ileri sürmüştür.
Bu Integrative Medicine Research (2018) makalesinde, INS-1 kanser hücreleri kullanılarak Withania coagulans özütünün antikanser potansiyeli değerlendirilmiştir.
6. INS-1 Hücre hattı için kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
İşte INS-1 hücrelerini içeren bazı çevrimiçi kaynaklar:
- Süspansiyon hücrelerinin alt kültürü: Bu video, süspansiyon kültürlerinde büyüyen hücrelerin alt kültürü için kapsamlı bir kılavuzdur.
- Yapışık hücrelerin alt kültürü: Bu video, yapışık hücreleri pasajlamak için genel protokolü öğrenmenize yardımcı olacaktır.
Aşağıdaki bağlantı INS-1 hücre kültürü protokolünü içermektedir:
- INS-1 hücre hattı: Bu web sitesi INS-1 hücre kültürü hakkında tüm bilgileri içerir. INS-1 hücre kültürü ve dondurma ortamı bilgilerini, alt kültürleme protokollerini ve kriyoprezerve edilmiş ve proliferatif INS-1 kültürlerinin işlenmesini içerir.
Referanslar
- Acosta-Montalvo, A., ve diğerleri, Sıçan İnsülinoma INS-1 Hücrelerinde Proglukagon Türevi Peptitlerin Ekspresyonu ve Sekresyonu. Front Cell Dev Biol, 2020. 8: p. 590763.
- Park, J.E. ve J.S. Han, Portulaca oleracea L. özütü, INS-1 pankreatik β-hücrelerinde K+ ATP kanalına bağlı bir yolak aracılığıyla insülin salgılanmasını teşvik eder. Beslenme Araştırmaları ve Uygulamaları, 2018. 12(3): p. 183.
- Fang, H., ve diğerleri, Loureirin B, GLP-1R ve AKT/PDX1 yolakları aracılığıyla insülin sekresyonunu teşvik eder. Avrupa Farmakoloji Dergisi, 2022. 936: p. 175377.
- Duan, J., et al., Swietenia macrophylla king'den elde edilen swietenine ve swietenolide, H2O2 ile indüklenen INS-1 hücrelerinde insülin sekresyonunu iyileştirir ve apoptozu hafifletir. Çevresel Toksikoloji, 2022. 37(11): p. 2780-2792.
- Mo, F.-F., et al., INS-1 hücresinde PI3K/Akt sinyal yolu üzerinden FOXO1 nükleer translokasyonunu inhibe ederek loganinin anti-diyabetik etkisi. Iranian Journal of Basic Medical Sciences, 2019. 22(3): p. 262.