Hep2 Hücreleri ve Larenks Kanseri Araştırmalarındaki Rolü
Hep 2 hücreleri, romatoloji, kanser araştırmaları ve immünoloji gibi biyomedikal araştırma alanlarında yaygın olarak kullanılan önemli bir in vitro modeldir. Larenks karsinomundan köken alan bu insan hücreleri, larenks neoplazmlarının köken dokusunun ve spesifik özelliklerinin aydınlatılmasında ayrılmaz bir rol oynamıştır. Bu hücrelerin önemi, laringeal kanser araştırma yayınlarında önemli bir yer tutarak kanserlerin laringeal doğasını ve kökenini anlamamıza büyük ölçüde katkıda bulundukları translasyonel kanser araştırmalarında iyi bilinmektedir [1].
Hep 2 hücrelerinin kökeni ve genel özellikleri
Bir hücre hattının kökeni ve genel özellikleri, araştırmada uygulanabilirliğini belirler. Bu bölüm Hep 2 hücrelerinin kökeni ve bazı göze çarpan özellikleri hakkında bilgi sahibi olmanıza yardımcı olacaktır. Örneğin, şunları öğreneceksiniz: HEp-2 hücre hattı nedir? Hep 2 hücrelerinin kaynağı nedir? Ve Hep 2'nin morfolojisi nedir?
- Ölümsüz bir insan epitel hücre hattı olan Hep 2, ilk olarak 1954 yılında H.W. Toolan tarafından laringeal karsinom hücreleri olarak tanımlanmıştır. Ancak son zamanlarda Hep 2 hücre hattının servikal adenokarsinom hücrelerinden oluştuğu ve Hela hücre hattının kontaminasyonundan kaynaklandığı bildirilmiştir [2].
- Hep 2 hücreleri Hela marker kromozomları içerir ve sırasıyla immünoperoksidaz boyama ve PCR yoluyla doğrulandığı üzere Keratin ve insan papillomavirüs DNA dizileri için pozitif bulunur.
- Hela hücre hattı türevi Hep 2, epitel benzeri bir morfolojiye sahiptir.
- Hep 2 hücre hattı, triploide yakın bir karyotip ile hem yapısal hem de sayısal kromozomal aşınmalar sergiler [3].
Hep 2 hücre hattı: Kültürleme bilgileri
Bir hücre hattı ile çalışmadan önce, kültürleme için aşağıdaki kilit noktaları bilmeliyiz. Bu bilgiler, hücre hattının etkili bir şekilde kültüre edilmesi ve bakımı için yararlı olabilir. Bilmeniz gerekenler: HEp-2 hücrelerinin ikiye katlanma süresi nedir? Hep 2 hücreleri yapışık mıdır? Hep2 hücrelerinin ekim yoğunluğu nedir?
|
Popülasyon İkiye Katlanma Süresi: |
Hep 2 hücreleri için bildirilen ikiye katlanma süresi yaklaşık 40 saattir. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
Hep 2 hücreleri yapışıktır ve tek tabakalar halinde büyür. |
|
Tohumlama Yoğunluğu: |
Hep 2 hücre kültürü için 1 x104 hücre/cm2 'lik bir ekim yoğunluğu idealdir. Tohumlama için, yapışık Hep 2 hücreleri 1 x PBS çözeltisi ile durulanır, ardından Accutase ayrıştırma çözeltisi ile inkübe edilir. Ortam sıcaklığında 8-10 dakikalık inkübasyondan sonra hücreler ortam içinde yeniden süspanse edilir ve santrifüjlenir. Toplanan hücreler daha sonra taze besiyerine dağıtılır ve kültürleme için yeni şişelere dökülür. |
|
Büyüme Ortamı: |
Hep 2 hücrelerini kültürlemek için EMEM veya Eagle'ın minimal temel ortamı kullanılır. Bu ortam ideal hücre büyümesi için %10 FBS, 1,0 g/L glukoz, 2,2 g/L NaHCO3, 2,0 mM L-glutamin, %1 NEAA ve 1 mM sodyum piruvat ile desteklenir. Ortam haftada 2 ila 3 kez yenilenmelidir. |
|
Büyüme Koşulları: |
Diğer memeli hücre hatları gibi Hep 2 de 37°C sıcaklığa ayarlanmış nemlendirilmiş bir inkübatörde ve sürekli %5 CO2 kaynağı ile kültürlenir. |
|
Depolama: |
Hep 2 hücreleri ultra düşük sıcaklıktaki elektrikli dondurucularda (-150 °C'nin altında) veya uzun süreli saklama için sıvı nitrojen buharı fazında saklanabilir. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortamı: |
Hep 2 hücreleri için önerilen dondurma ortamı CM-1 veya CM-ACF'dir. Hücreler, sıcaklıkta kademeli olarak 1 °C düşüşe izin veren ve hücre canlılığını koruyan yavaş bir dondurma işlemi kullanılarak dondurulmalıdır. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş hücre şişesi, küçük bir buz kümesi kalana kadar37°C'de su banyosunda çalkalanarak hızla çözdürülür. Hücreler daha sonra taze ortama eklenir ve donmuş ortam bileşenlerini uzaklaştırmak için santrifüjlenir. Daha sonra hücre peleti besiyerinde yeniden süspanse edilir ve hücreler kültür şişelerine dağıtılır. Hücrelerin yapışması için neredeyse 24 saat dinlenmesi gerekir. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi |
Hep 2 hücre kültürlerinin kullanımı ve bakımı için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvar önerilir. |
Hep 2 hücrelerinin Avantajları ve Sınırlamaları
Neredeyse tüm hücre hatları, araştırma alanında kullanımlarına katkıda bulunan avantaj ve sınırlamaların benzersiz bir kombinasyonunu sergiler. Bu bölümde Hep 2 hücre hattıyla ilişkili birkaç ana avantaj ve dezavantaj açıklanacaktır.
Avantajlar
Hep 2 hücre hattının başlıca avantajları şunlardır:
- İnsan Kökenli : Hep 2 insan epitel hücrelerinden türetilmiştir, bu da onu insan hastalıkları ve viral enfeksiyonları incelemek için değerli bir in vitro model haline getirir
- ANA Tespiti: Hep 2 hücre hattı, çok sayıda antijen sunan doğal bir protein dizisine sahiptir, bu da onu antinükleer antikorları (ANA) tespit etmek için mükemmel bir substrat haline getirir. Bu özellik, serumda ANA'nın spesifik ve son derece hassas bir şekilde taranmasını sağlayarak onu bağ dokusu hastalıklarının belirlenmesinde önemli bir tanı aracı haline getirir
Sınırlamalar
- Kromozomal Anormallikler: Hep 2 hücreleri çok sayıda sayısal ve yapısal kromozomal anormallik sergiler. Bu anormallikler hücre davranışını etkileyebilir ve belirli laboratuvar deneylerinde uygulanabilirliklerini kısıtlayabilir
- Tümörijenisite: Tümör türevi bir insan epitelyal hücre hattı olan Hep 2, tipik olarak epitelyal hücrelerde bulunmayan genetik anormalliklere sahip olabilir. Sonuç olarak, Hep 2 hücrelerinin kullanımı normal hücresel fizyolojiye odaklanan spesifik çalışmalarda kısıtlı olabilir.
Biyomedikal Araştırmalarda Hep 2 Hücre Hattı Uygulamalarının Genişletilmesi
Hep 2 hücre hattı, biyomedikal araştırmalarda çok sayıda uygulama için örnek bir model olarak öne çıkmaktadır. Çok yönlülükleriyle tanınan bu hücreler, reseptör analizinden karmaşık hastalıkların incelenmesine kadar in vitro deneylerde kritik roller üstlenmektedir.
Hep 2 Hücreleri ile Tümörijenik Mekanizmaları ve Terapötik Hedefleri Keşfetmek
Tümörijenik olan Hep 2 hücreleri, kanser biyolojisinin inceliklerini araştırmak için çok önemlidir. Kanser sinyal yolakları, mekanistik çalışmalar hakkında bilgi sağlarlar ve antikanser ilaçların taranması ve değerlendirilmesinde temel dayanak noktasıdırlar. Örneğin, miRNA-33a'nın kanser hücresi proliferasyonu üzerindeki etkisini tanımlamak için Hep 2'den yararlanılmıştır. Bulgular, miRNA-33a'nın bilinen bir onkogen olan PIM1 ile etkileşimi yoluyla antiproliferatif etkilerini aydınlatarak yeni bir terapötik hedef önerdi [4]. Başka bir örnekte, Hep 2, Marsdenia tenacissima çinko oksit nanopartiküllerinin terapötik potansiyelinin değerlendirilmesinde kullanılmış ve antiproliferatif ve apoptotik etkinliklerinin altı çizilmiştir [5].
Hep 2 Hücre İçgörüleri ile Viroloji Araştırmalarını İlerletmek
Hep 2 hücrelerinin çeşitli insan virüslerine karşı duyarlılığı, onları virolojik araştırmalarda paha biçilmez bir kaynak haline getirmektedir. Virüs ve konakçı hücresel mekanizmalar arasındaki karmaşık etkileşimi çözmek için SARS-CoV-2 viral genlerinin ekspresyonunda etkili bir şekilde kullanılmışlardır [6]. Bu uygulama, COVID-19 gibi viral enfeksiyonları anlamanın ve bunlarla mücadele etmenin küresel bir öncelik olduğu günümüzde özellikle önemlidir.
Hücresel İşlevlerin Deşifre Edilmesi: Hep 2 Hücrelerinde Gen Manipülasyonu
Hep 2 hücre hattının genetik manipülasyona uyarlanabilirliği, mekanistik çalışmalardaki faydasının altını çizmektedir. Araştırmacılar, gen ifadesini modüle etmek ve belirli genlerin hücresel işlevlerdeki rollerini aydınlatmak için bu özellikten yararlanmaktadır. Kayda değer bir çalışma, Hep 2 hücrelerinde RNA bağlayıcı protein RBM6'nın aşırı ekspresyonunu içeriyordu; bu da tümör baskılayıcı potansiyelinin araştırılmasını kolaylaştırdı ve kanserin moleküler temelleri hakkında değerli bilgiler sağladı [7].
Hep 2 Hücre Hattı Uygulamaları ile Hastalık Teşhisinin Geliştirilmesi
Bu araştırma alanlarının ötesinde, Hep 2 hücreleri, özellikle sistemik lupus eritematozus gibi otoimmün hastalıkların teşhisinde kritik öneme sahip ANA'ların tespitinde, teşhis yetenekleriyle beğeni toplamaktadır. Hep 2 hücrelerinin ANA'ları sunma hassasiyeti, otoimmün patolojilere ilişkin anlayışımızı geliştirerek ve hasta bakımını iyileştirerek hedefe yönelik tedavilerin teşhisini ve geliştirilmesini desteklemektedir.
Bu çeşitli uygulamalar sayesinde Hep 2 hücreleri, translasyonel kanser araştırmalarındaki ilerlemelere, viral enfeksiyonların incelenmesine ve hücresel mekanizmaların keşfedilmesine önemli ölçüde katkıda bulunmuştur. Klinik olarak ilgili verilerin üretilmesine katkıları paha biçilmezdir ve hem laboratuvarda hem de klinikte vazgeçilmez rollerini doğrulamaktadır. Araştırmalar gelişmeye devam ettikçe, Hep 2 hücre hattı yeni tedavilerin keşfedilmesine yardımcı olarak ve insan sağlığı ve hastalıkları hakkındaki bilgilerimizi genişleterek ön planda kalmaya devam edecektir.
HEp-2 Hücre Hattınızı Bugün Güvence Altına Alın
Hep 2 hücreleri: Araştırma Yayınları
Aşağıda Hep 2 hücreleri ile ilgili bazı ilginç ve en çok atıf alan araştırma yayınları yer almaktadır.
- Marsdenia tenacissima'dan Çinko oksit nanopartiküllerinin sentezi hücre proliferasyonunu inhibe eder ve larenks kanseri hücrelerinde (Hep-2) apoptozu indükler
Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology (2019) dergisinde yayınlanan bu makale, Hep 2 hücre hattında biyosentezlenmiş Marsdenia tenacissima çinko oksit nanopartiküllerinin anti-kanser potansiyelini araştırmıştır. - Biyoformüle hesperidin yüklü PLGA nanopartikülleri kanser hücrelerinde mitokondriyal aracılı intrinsik apoptotik yola karşı koyuyor
Bu makale 2021 yılında Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials dergisinde yayımlanmıştır. Bu çalışmada, biyolojik olarak formüle edilmiş hesperidin yüklü Poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) nanopartiküllerinin Hep 2 hücrelerindeki anti-kanser özellikleri incelenmiştir. - Lophatherum gracile etanol ekstraktının respiratuar sinsityal virüs enfeksiyonuna karşı antiviral aktivitesi
2019'da Journal of Ethnopharmacology'de yayınlanan bu yayında, solunum sinsityal virüs enfeksiyonunu incelemek ve buna karşı antiviral ilaçları taramak için Hep 2 hücreleri kullanıldı. Çalışmada, tıbbi bir bitki olan Lophatherum gracile'nin etanol ekstraktının solunum sinsityal virüs enfeksiyonuna karşı umut verici antiviral potansiyeli rapor edilmiştir. - Dört aromatik bitkiden elde edilen sulu ekstraktların insan HEp-2 epitel hücrelerine Candida albicans yapışmasına karşı aktivitelerinin değerlendirilmesi
Bu araştırma Gene Reports (2020) dergisinde yayımlanmıştır. Bu çalışmada, dört aromatik bitkinin sulu ekstraktlarının Candida albicans'ın insan Hep 2 epitel hücrelerine yapışmasına karşı inhibitör potansiyeli araştırılmıştır. - Wnt1 ile indüklenebilir sinyal proteini 1, YAP1/TEAD1/GLUT1 yolağı aracılığıyla laringeal skuamöz hücreli karsinom glikolizini ve kemorezistansı düzenler
Bu çalışma 2019 yılında Journal of Cellular Physiology dergisinde yayımlanmıştır. Çalışma, Wnt1-inducible signalling protein 1'in (WISP1) YAP1/TEAD1/GLUT1 yolağı ile etkileşime girdiğini ve Hep 2 hücre hattında glikoz metabolizmasını ve kemorezistansı düzenlediğini bildirmektedir.
Hep2 Hücre Hattı için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Hep 2 iyi bilinen bir hücre hattıdır. Hep 2 hücre hattını içeren çeşitli kaynaklar mevcuttur.
- Hep2 hücre hattının alt kültürlenmesi: Bu video, Hep 2 hücrelerini alt kültüre almak için adım adım bir kılavuzdur.
- Hep 2 hücreleri ANA taraması: Bu video Hep 2 hücre hattını kullanarak anti-nükleer antikor (ANA) taramasını açıklamaktadır.
- Hep 2 kültürleme: Bu bağlantı Hep 2 hücreleri hakkında temel hücre kültürü bilgilerini içerir. Hücre bölme, hücre dondurma ve çözme işlemlerini içerir.
Biyomedikal Araştırmalarda HEp-2 Hücreleri Hakkında Sıkça Sorulan Sorular
Referanslar
- Fusi, M. ve S. Dotti, HEp-2 hücre hattının tamamen hayvansız kültür sistemlerine adaptasyonu ve hücre büyümesinin gerçek zamanlı analizi. Biotechniques, 2021. 70(6): p. 319-326.
- Gorphe, P., Larenks kanseri için translasyonel araştırmalarda Hep-2 hücre hattının kapsamlı bir incelemesi. Am J Cancer Res, 2019. 9(4): p. 644-649.
- Wang, M., et al., İnsan HEp-2 ile oluşturulmuş larenks ksenogreft tümöründeki kanserle ilişkili fibroblastlar, epitelyal-mezenkimal geçiş yoluyla kanser hücrelerinden türetilmez, fenotipik olarak aktive edilir ancak karyotipik olarak normaldir. PLoS One, 2015. 10(2): s. e0117405.
- Karatas, O.F., Larenks kanseri Hep-2 hücrelerinde miR-33a'nın PIM1'i hedefleyerek antiproliferatif potansiyeli. Baş Boyun, 2018. 40(11): p. 2455-2461.
- Wang, Y., et al., Marsdenia tenacissima'dan Çinko oksit nanopartiküllerinin sentezi hücre proliferasyonunu inhibe eder ve larenks kanseri hücrelerinde (Hep-2) apoptozu indükler. Fotokimya ve Fotobiyoloji Dergisi B: Biyoloji, 2019. 201: p. 111624.
- Zhang, J., ve diğerleri, SARS-CoV-2 proteinlerinin hücre altı lokalizasyonu üzerine sistemik ve moleküler bir çalışma. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): p. 269.
- Wang, Q., et al., Bir tümör baskılayıcı gen olarak RNA-bağlayıcı protein RBM6, laringokarsinomda büyümeyi ve ilerlemeyi baskılar. Gene, 2019. 697: p. 26-34.
