Neuro-2a Hücre Hattı
Neuro-2a, sinirbilim araştırmalarında yaygın olarak kullanılan fare güdümlü bir nöral hücre hattıdır. Bu hücreler temel olarak nöral gelişim, farklılaşma, nörotoksisite, hücre sinyal yolakları ve aksonal büyümeyi incelemek için kullanılmaktadır. Ayrıca, ilaç geliştirme ve tarama amacıyla da kullanılırlar.
Bu makale, Neuro-2a nöroblastom hücreleri ile çalışmaya başlamadan önce size yardımcı olabilecek önemli yönlere odaklanmaktadır. Temel olarak kapsayacaktır:
- Neuro-2a hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
- Neuro-2a hücre hattı kültürleme bilgileri
- Neuro-2a hücre hattının avantajları ve dezavantajları
- Neuro-2a hücre hattının araştırma uygulamaları
- Neuro-2a hücrelerini içeren araştırma yayınları
- Neuro-2a Hücreleri için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
1. Neuro-2a hücrelerinin genel özellikleri ve kökeni
Makalenin bu bölümünde Neuro-2a hücre hattının arka planı ve onunla çalışmadan önce bilinmesi gereken temel özellikleri ele alınacaktır. Burada şunları öğreneceksiniz: Neuro-2a hücre hattı nedir? Neuro-2a hücre hattının kökeni nedir? Neuro-2a hücre farklılaşması nedir? Neuro-2a hücresinin boyutu nedir? Neuro-2a hücrelerinin morfolojisi nedir?
- Neuro-2a hücreleri bir Albino farenin (A suşu) spontan tümöründen (nöroblastom) köken almıştır. Hücre hattı R.J. Klebe ve F.H. Ruddle tarafından oluşturulmuştur.
- Neuro-2a nöroblastoma hücreleri nöronal ve amoeboid kök hücre morfolojisi sergilemektedir.
- Neuro-2a hücre boyutu 12 mikrometre yüksekliğindedir [1].
- Neuro-2a hücrelerinin kromozom sayısı 59 ile 193 arasında değişebilmekte olup modal sayı 95'tir. Bu nöroblastom hücrelerinin karyotipi 94 ila 98 kromozom aralığında kararsızdır.
2. Neuro-2a hücre hattı kültürleme bilgileri
Neuro-2a hücreleri sinirbilim araştırma laboratuvarlarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu hücrelerle çalışmadan önce, aşağıda belirtilen zorunlu hücre kültürü bilgilerini öğrenmelisiniz. Bu, işinizi kolaylaştırmanıza yardımcı olabilir. Şunları öğreneceksiniz: Neuro-2a hücre kültürü ortamı nedir? Neuro-2a hücrelerini nasıl kültürlersiniz? Neuro-2a hücrelerinin ikiye katlanma süresi nedir? Neuro-2a'nın tohumlama yoğunluğu nedir? Neuro-2a hücre kültürü protokolü nedir? Neuro-2a hücre ortamı nedir?
Neuro-2a Hücrelerinin Kültürü için Önemli Noktalar
|
İki Katına Çıkma Süresi: |
Neuro-2a hücre ikiye katlanma süresi yaklaşık 70 saattir. |
|
Yapışık veya Süspansiyon Halinde: |
Neuro-2a yapışık bir hücre hattıdır. |
|
Tohumlama yoğunluğu: |
Neuro-2a hücre hattı için optimize edilmiş hücre ekim yoğunluğu 1 x104 hücre/cm2'dir. Tohumlama için hücreler magnezyum ve kalsiyum içermeyen fosfat tampon salin (1x) ile yıkanır. Daha sonra bir pasajlama solüsyonu (Accutase) eklenir ve hücreler ortam sıcaklığında 8 ila 10 dakika inkübe edilir. Hücre ayrışmasından sonra taze ortam eklenir ve hücreler santrifüjlenir. Hasat edilen hücre peleti dikkatlice yeniden süspanse edilir ve hücreler büyüme için bir kültür kabına dökülür. |
|
Büyüme Ortamı: |
EMEM, Neuro-2a hücrelerini kültürlemek için kullanılır. 10 FBS, 2 mM L-Glutamin, 1,5 g/L NaHCO3, EBSS, 1 mM Sodyum piruvat ve ideal hücre büyümesi için NEAA içerir. Ortam haftada 1 ila 2 kez değiştirilmelidir. |
|
Büyüme Koşulları: |
Neuro-2a kültürleri %5 CO2 kaynağına bağlı 37°C nemlendirilmiş bir inkübatörde muhafaza edilir. |
|
Depolama: |
Hücreler uzun vadede -150 °C'nin altında bir sıcaklıkta ultra düşük sıcaklıkta bir elektrikli dondurucuda veya sıvı nitrojenin buhar fazında saklanmalıdır. |
|
Dondurma İşlemi ve Ortam: |
Neuro-2a hücrelerini dondurmak için CM-1 veya CM-ACF ortamı kullanılır. Hücreler dakikada sadece 1 °C'lik bir düşüşe izin veren yavaş bir dondurma işlemiyle dondurulur. Bu, hücreleri şoktan korur ve canlılıklarını sürdürür. |
|
Çözdürme İşlemi: |
Dondurulmuş kültürleri çözmek için flakon, sadece küçük bir buz kümesi kalana kadar 40 ila 60 saniye boyunca 37 °C su banyosuna yerleştirilir. Daha sonra kültür ortamı eklenir ve hücreler santrifüj işlemine tabi tutulur. Bu adım donmuş ortam bileşenlerinin uzaklaştırılmasına yardımcı olur. Hücre peleti daha sonra yeniden süspanse edilir ve hücreler kültür ortamıyla dolu yeni bir şişeye aktarılır. Daha sonra hücreler en az 24 saat boyunca 37 °C'de bir inkübatöre yerleştirilir. |
|
Biyogüvenlik Seviyesi: |
Neuro-2a kültürlerini işlemek ve muhafaza etmek için biyogüvenlik seviyesi 1 laboratuvar ortamları zorunludur. |
3. Neuro-2a hücre hattının avantajları ve dezavantajları
Neuro-2a hücreleri, kendilerini diğer nöronal hücre hatlarından ayıran bazı avantaj ve dezavantajlara sahiptir. Bu hücrelerin bazı önemli artıları ve eksileri burada listelenmiştir.
Avantajlar
Neuro-2a murin nöroblastom hücre hattının avantajları şunlardır:
-
Bakımı Kolay
Neuro-2a hücre hattı, karmaşık veya girift hücre kültürü prosedürleriyle ilişkili değildir. Araştırma laboratuvarlarında kültürlenmesi ve bakımı kolaydır.
-
İn Vitro Nöronal Hücre Modeli
Neuro-2a, araştırmacılar tarafından nöron gelişimi ve farklılaşma çalışmalarında yaygın olarak kullanılan uygun bir nöronal hücre modelidir.
Dezavantajlar
Neuro-2a hücrelerinin dezavantajları şunlardır:
-
Fare Kökenli
Neuro-2a fare kökenlidir ve fare ve insan biyolojisi önemli ölçüde farklılık gösterebileceğinden, araştırmacılar fare temelli çalışmalardan elde edilen sonuçları insan sağlığı ve hastalığına yansıtırken dikkatli olmalıdır.
4. Neuro-2a hücre hattının araştırma uygulamaları
Neuro-2a hücreleri sinirbilim araştırma alanında birçok uygulama sunmaktadır. Bu hücre hattının birkaç umut verici kullanımı burada tartışılmaktadır:
- Sinirsel gelişim: Neuro-2a, nöronal gelişimi ve farklılaşma, aksonal büyüme ve sinaps oluşumu gibi ilgili süreçleri incelemek için yaygın olarak kullanılan bir in vitro nöronal hücre modelidir. 2020'de yapılan bir çalışmada, retinoik asitle indüklenen nöronal hücre farklılaşmasında mikroRNA-124'ün rolünü araştırmak için Neuro-2a hücreleri kullanılmıştır [2]. Başka bir çalışmada, nöroblastom hücre hattında (N2A) Neuro 2a retinoik asit reseptör gama (RARG) ve miRNA-124 ekspresyonu araştırılmıştır. Bu çalışma, RARG'nin miR-124 tarafından hedeflendiğini ve nörit büyümesini baskıladığını öne sürmüştür [3].
- Nörotoksisite: Neuro-2a ayrıca ilaçların, kimyasalların veya çevresel faktörlerin nöral hücreler üzerindeki toksik etkilerini değerlendirmek için de kullanılır. Örneğin, Zhihong Yin ve çalışma arkadaşları tarafından yürütülen bir çalışmada, Neuro-2a hücreleri kullanılarak çevresel bir kimyasal olan bisfenol A'nın (BPA) nörotoksisitesi araştırılmıştır. BPA'nın hücresel ve sinaptik bütünlüklerini bozarak nöronal hücre farklılaşmasını ve çoğalmasını baskıladığını gözlemlemişlerdir [4].
- İlaç Taraması: Neuro-2a hücreleri ayrıca çeşitli ilaçların, bileşiklerin ve doğal ürünlerin terapötik aktivitelerini değerlendirmek için de kullanılmaktadır. Örneğin, bir çalışmada Neuro-2a hücreleri kullanılmış ve Gingko biloba bitki özütünün anti-oksidatif potansiyeli incelenmiştir. Ayrıca, araştırma Aβ agregasyonunda bir düşüşe neden olduğunu ve Alzheimer hastalığı için potansiyel bir tedavi olabileceğini öne sürmüştür [5].
5. Neuro-2a hücrelerini içeren araştırma yayınları
İşte Neuro-2a hücre hattını içeren bazı ilginç araştırma makaleleri.
Journal of Natural Medicines, 2018'de yer alan bu çalışmada, beyaz biberden (P. nigrum) izole edilen alkamidlerin Neuro-2a nöronal hücreleri üzerindeki terapötik etkileri araştırılmıştır.
Nkx2. 1 downregülasyonu, aşırı retinoik asitin neden olduğu beyin anormalliğinde rol oynar
Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 2020'deki bu araştırma, Nkx2.1 geninin Shh sinyal kaskadını düzenleyerek fare beyin gelişiminde önemli bir rol oynadığını öne sürdü.
Bu makale Toksikoloji ve Endüstriyel Sağlık (2023) dergisinde yayımlanmış ve çevresel bir kimyasal olan bisfenol A'nın nöro-2a hücrelerinde nörotoksisiteyi tetiklediğini ve sinaptik ve hücre iskeleti işlev bozukluğunu bozduğunu öne sürmüştür.
Pharmaceuticals (2021) dergisindeki bu makale, hekzarelin adlı bir ilacın nöroblastom hücrelerinde (Neuro-2a) PI3K/AKT ve MAPK kaskadını modüle ettiğini ve hidrojen peroksit kaynaklı nöro-2a hücrelerinin apoptozunu engellediğini öne sürmüştür.
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2021) dergisinde yayımlanan bu araştırma makalesi, Emblica officinalis meyve özütünün Neuro-2a hücrelerinde nöroinflamasyonu baskıladığını ve böylece nöroinflamatuar hastalıklar için faydalı olabileceğini öne sürmüştür.
6. Neuro-2a Hücreleri için Kaynaklar: Protokoller, Videolar ve Daha Fazlası
Aşağıda Neuro-2a hücreleri hakkında mevcut çevrimiçi kaynaklar yer almaktadır. Bunlar Neuro-2a hücre kültürü ve transfeksiyon protokolünü içerir.
- Neuro-2a transfeksiyon protokolü: Neuro-2a uygun bir transfeksiyon konağıdır. Bu bağlantı, hücre hattının transfeksiyon protokolü konusunda size yol gösterecektir. Neuro 2a transfeksiyon verimliliği reaktiften reaktife değişir.
Aşağıdaki bağlantı Neuro-2a hücre kültürü protokolünü içermektedir.
- Neuro-2a hücre kültürü protokolü: Bu bağlantı, nöro 2a hücrelerinin alt kültürleme protokolünü öğrenmenize yardımcı olacaktır.
- Nöro-2a hücreleri: Web sitesi, Neuro-2a hücre ortamı, ekim yoğunluğu ve alt kültürleme ve kriyoprezerve ve proliferatif kültürlerin işlenmesine yönelik protokoller hakkında kapsamlı bilgiler içermektedir.
Referanslar
- Lulevich, V., ve diğerleri, Tek hücre mekaniği, amiloid-beta peptid ve nöronal hücre etkileşimlerini araştırmak için hassas ve nicel bir araç sağlar. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): p. 13872-7.
- You, Q., et al., Retinoik asit ile indüklenen Neuro-2A hücre farklılaşmasının düzenlenmesinde miR-124'ün rolü. Neural Regen Res, 2020. 15(6): p. 1133-1139.
- Su, X., ve diğerleri, Retinoik asit reseptörü gama, mikroRNA-124 tarafından hedeflenir ve nörit büyümesini inhibe eder. Nörofarmakoloji, 2020. 163: p. 107657.
- Yin, Z., et al., Bisfenol-A maruziyeti nörotoksisiteye neden oldu ve Neuro-2a hücrelerinde sinaps ve hücre iskeleti ile ilişkilendirildi. Toxicology in Vitro, 2020. 67: p. 104911.
- Chen, L., et al., Gingko biloba ekstresi (EGb), APPsw'yi aşırı eksprese eden nöro 2A hücrelerinde oksidatif stresi inhibe eder. BioMed research international, 2019. 2019.