เซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
€800.00*การแปล: "การแปล"
ผลิตภัณฑ์จะถูกจัดส่งในสภาพแช่แข็งบนน้ำแข็งแห้งในหลอดเก็บตัวอย่างแบบฉนวนความเย็น (cryotubes) โดยแต่ละหลอดจะบรรจุเซลล์ประมาณ 3 × 10 6 เซลล์ สำหรับสายเซลล์ที่เกาะผนัง หรือ 5 × 106 เซลล์ สำหรับสายเซลล์แบบแขวนลอย (โปรดดูรายละเอียดเพิ่มเติมในใบรับรองการวิเคราะห์ (CoA) ของแต่ละล็อต)
ข้อมูลทั่วไป
| คำอธิบาย | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งกระดูกชนิด osteosarcoma ของมนุษย์ที่ถูกแก้ไขจีโนม ซึ่งพัฒนาจากเซลล์ U2OS โดยมีการดัดแปลงยีน SEH1L (SEH1) ที่มีอยู่เดิมในเซลล์ด้วยเทคโนโลยี CRISPR/Cas9 เพื่อให้สามารถเข้ารหัสแท็ก SNAPf ที่อยู่ในตำแหน่งที่เหมาะสม SEH1 เป็นองค์ประกอบหนึ่งของ Y-complex (หรือที่รู้จักในชื่อ NUP107-160 complex) ซึ่งเป็นโมดูลโครงสร้างหลักของนิวเคลียร์พอร์คอมเพล็กซ์ (NPC) ที่มีบทบาทในการประกอบโครงสร้างและเสถียรภาพของโครงร่างพอร์ ด้วยการแทรกลำดับรหัส SNAPf ที่ตำแหน่งในจีโนมตามธรรมชาติ โปรตีน SEH1 ที่ถูกแท็กจะถูกแสดงออกภายใต้การควบคุมของกลไกการควบคุมตามธรรมชาติ ซึ่งช่วยรักษาระดับการแสดงออกทางสรีรวิทยาและลดการรบกวนต่อองค์ประกอบของนิวเคลียร์พอร์ แท็ก SNAPf เป็นแท็ก SNAP ที่ถูกออกแบบทางวิศวกรรมให้ตอบสนองอย่างรวดเร็ว โดยสามารถจับกับซับสเตรตที่เชื่อมต่อกับเบนซิลกัวไนน์แบบโควาเลนต์ ทำให้สามารถติดฉลากฟลูออเรสเซนต์ได้อย่างเฉพาะเจาะจงและคงที่ในเซลล์ที่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ถูกตรึง ในเซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 โปรตีนฟิวชันจะสะสมอยู่ที่เยื่อหุ้มนิวเคลียสในรูปแบบจุดประ ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของการกระจายตัวของ NPC เนื่องจากการติดฉลากเกิดขึ้นที่ระดับโปรตีนภายในเซลล์ ระบบนี้จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์เชิงปริมาณ การถ่ายภาพความละเอียดสูงพิเศษ และการวิเคราะห์การติดตามอนุภาคเดี่ยวที่มุ่งศึกษาการจัดระเบียบและสัดส่วนของ NPC รูปร่างแบนและนิวเคลียสขนาดใหญ่ของเซลล์ U2OS ยังช่วยอำนวยความสะดวกในการมองเห็นโครงสร้างเยื่อหุ้มนิวเคลียสด้วยความละเอียดสูงอีกด้วย SEH1 มีส่วนร่วมในการสร้าง NPC และยังมีส่วนเกี่ยวข้องในกระบวนการที่เกี่ยวข้องกับไคเนโทโครในระหว่างการแบ่งเซลล์แบบไมโทซิส ดังนั้น สายเซลล์นี้จึงเป็นแพลตฟอร์มที่แข็งแกร่งสำหรับการศึกษาการประกอบและการแยกตัวของ NPC ที่ขึ้นกับวัฏจักรเซลล์ การจัดระเบียบเชิงพื้นที่ของ Y-complex ภายในโครงร่างของรู และบทบาทสองด้านที่เป็นไปได้ของ SEH1 ที่เยื่อหุ้มนิวเคลียสและไคเนโทโครในไมโทซิส U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ช่วยให้สามารถศึกษาเชิงกลไกของโครงสร้างและพลวัตของรูพรุนนิวเคลียสภายใต้สภาวะการแสดงออกที่เกี่ยวข้องทางสรีรวิทยา |
|---|---|
| สิ่งมีชีวิต | มนุษย์ |
| เนื้อเยื่อ | กระดูก |
| โรค | มะเร็งกระดูกชนิดออสทีโอซาร์โคมา |
ลักษณะ
| อายุ | 15 ปี |
|---|---|
| เพศ | เพศหญิง |
| เชื้อชาติ | คอเคเชียน |
| สัณฐานวิทยา | ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว |
| คุณสมบัติการเติบโต | ยึดติด |
ข้อมูลด้านกฎระเบียบ
| การอ้างอิง | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 300664) |
|---|---|
| ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ | 1 |
| NCBI TaxID | 9606 |
| ผู้ฝากเงิน | ห้องปฏิบัติการเอลเลนเบิร์ก (EMBL) |
| สถานะของสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรม | GMO-S1: สายเซลล์มะเร็งกระดูกของมนุษย์นี้ (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) ประกอบด้วย SNAPf-SEH1 fusion ที่เกิดจากการใช้ CRISPR ซึ่งช่วยให้สามารถติดฉลากเฉพาะเจาะจงกับ SEH1 nucleoporin ได้ การดัดแปลงนี้มีอยู่อย่างคงที่ การจำแนกประเภทนี้ใช้เฉพาะภายในประเทศเยอรมนีเท่านั้นและอาจแตกต่างจากที่อื่น |
ข้อมูลชีวโมเลกุล
| การแสดงออกของโปรตีน | SEH1, SNAPf-แท็ก |
|---|
การจัดการ
| อาหารเลี้ยงเชื้อ | McCoys 5a, w: 3.0 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: เสถียร กลูตามีน, w: 2.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต, w: 2.2 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820200a) |
|---|---|
| อาหารเสริม | เติมสารอาหารเสริมลงในอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%, กลูโคส 3.0 กรัม/ลิตร, กลูตามีนที่เสถียร, โซเดียมไพรูเวต 2.0 มิลลิโมลาร์, โซเดียมไฮโดรเจนคาร์บอเนต 2.2 กรัม/ลิตร, NEAA 1% |
| สารละลายตัวแยก | แอคคูเทส |
| การเพาะเลี้ยงเชื้อแบบแยกส่วน | นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว |
| สื่อเลี้ยงเซลล์แบบแช่แข็ง | ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง |
| การละลายและการเพาะเลี้ยงเซลล์ |
|
| บรรยากาศการบ่มเพาะ | 37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น |
| การเคลือบขวด | สำหรับการยึดเกาะและการมีชีวิตที่ดีที่สุดหลังการละลาย เราแนะนำให้ใช้ขวดหรือจานเคลือบคอลลาเจน |
| ขั้นตอนการแช่แข็ง | เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า |
| เงื่อนไขการจัดส่ง | เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า |
| เงื่อนไขการเก็บรักษา | สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น |
การควบคุมคุณภาพ / โปรไฟล์ทางพันธุกรรม / HLA
| ความปราศจากเชื้อ | การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน |
|---|