ปริมาณ: 100 มล.
การเก็บรักษา: ≤ –15°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
สารละลายกลูตามีนที่เสถียร (L-Alanyl-L-Glutamine, 200 mM) เป็นรูปแบบไดเปปไทด์ของ L-glutamine ที่มีความเสถียรสูง ออกแบบมาเพื่อทดแทน L-glutamine แบบดั้งเดิมในอาหารเลี้ยงเซลล์โดยตรง L-glutamine เป็นกรดอะมิโนที่จำเป็นและเป็นแหล่งพลังงานหลักสำหรับเซลล์ที่เพาะเลี้ยง มีบทบาทสำคัญในการเจริญเติบโตของเซลล์ การเผาผลาญ และสังเคราะห์โปรตีน
การสมัครและสิทธิประโยชน์
ในสื่อเหลวมาตรฐาน L-กลูตามีนจะสลายตัวค่อนข้างเร็วที่อุณหภูมิ 37°C ซึ่งนำไปสู่การเกิดผลพลอยได้ที่เป็นพิษ เช่น ไอออนแอมโมเนียม ซึ่งสามารถส่งผลเสียต่อความมีชีวิตของเซลล์และผลลัพธ์ของการทดลองได้ กลูตามีนที่เสถียรสามารถเอาชนะข้อจำกัดนี้ได้โดยการให้รูปแบบไดเปปไทด์ที่ไม่สลายตัวซึ่งยังคงสภาพสมบูรณ์ในสภาวะการเพาะเลี้ยง
เซลล์จะตัดพันธะไดเปปไทด์ด้วยเอนไซม์เพื่อปลดปล่อยแอล-กลูตามีนตามความต้องการ ซึ่งช่วยให้มีแหล่งสำรองที่สดใหม่อย่างต่อเนื่องและป้องกันการสะสมของของเสียที่เป็นอันตรายได้ นี่ทำให้สารละลายนี้มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ในระยะยาวและระบบเพาะเลี้ยงที่มีความหนาแน่นสูง
การเตรียมและวิธีการใช้
สารละลาย L-Alanyl-L-Glutamine ถูกเตรียมในน้ำเกรดเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีความเข้มข้น 200 mM และผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อสำหรับการใช้งานที่ต้องการความสะอาดสูง สามารถเจือจางลงในอาหารเลี้ยงเชื้อแบบสมบูรณ์ตามความต้องการของการทดลองได้ เก็บไว้ที่ ≤ –15°C และหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำหลายครั้งเพื่อรักษาเสถียรภาพของผลิตภัณฑ์
สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 100 มล.
การเก็บรักษา: +2°C ถึง +8°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
สารละลายบัฟเฟอร์ HEPES (1 M) หรือที่รู้จักในชื่อ N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulfonic acid เป็นสารบัฟเฟอร์อินทรีย์ที่มีคุณสมบัติเป็นซวิตเทอไรออนิก (zwitterionic) ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในอาหารเลี้ยงเซลล์ เหมาะสำหรับการรักษาค่า pH ให้คงที่ในช่วงทางสรีรวิทยาที่ 6.7 ถึง 8.6 เพื่อสนับสนุนการทำงานของเซลล์อย่างมีประสิทธิภาพสูงสุดในกระบวนการทดลองในหลอดทดลอง
การสมัครและสิทธิประโยชน์
HEPES ให้ความสามารถในการบัฟเฟอร์ที่เชื่อถือได้ในระบบเพาะเลี้ยงเซลล์ โดยเฉพาะเมื่อเซลล์ถูกจัดการนอกตู้อบที่มี CO₂ การเติม HEPES ในปริมาณ 10–25 มิลลิโมลาร์ลงในอาหารเพาะเลี้ยงจะช่วยเพิ่มความเสถียรของค่า pH ในช่วงเวลาที่มีการจัดการที่ยาวนาน ช่วยรักษาสภาวะการทดลองให้คงที่
บัฟเฟอร์นี้ไม่สามารถซึมผ่านเยื่อหุ้มได้ แทรกแซงปฏิกิริยาทางชีวเคมีน้อยมาก และมีความเสถียรทางเคมีและเอนไซม์สูง คุณสมบัติเหล่านี้ทำให้เหมาะสำหรับการใช้งานที่หลากหลายในการเพาะเลี้ยงเซลล์และทางชีวเคมี
การเตรียมและวิธีการใช้
สารละลายนี้จัดเตรียมเป็นสารเข้มข้น 1 M ในน้ำเกรดเพาะเลี้ยงเซลล์และผ่านการกรองฆ่าเชื้อเพื่อใช้ในสภาพแวดล้อมที่ไวต่อการปนเปื้อน สามารถเจือจางให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการตามข้อกำหนดของการใช้งาน เก็บที่ +2°C ถึง +8°C และจัดการภายใต้สภาวะปลอดเชื้อเพื่อรักษาความสมบูรณ์ของผลิตภัณฑ์
สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 50 มล.
การเก็บรักษา: +2°C ถึง +8°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
สารละลาย D-(+)-กลูโคส (สารละลายเดกซ์โทรส) เป็นสารเสริมที่ปราศจากเชื้อและพร้อมใช้งาน ประกอบด้วยน้ำตาล D-(+)-กลูโคส ซึ่งเป็นส่วนประกอบสำคัญในกระบวนการเมตาบอลิซึมของเซลล์ กลูโคสมีบทบาทในกระบวนการทางชีวภาพที่สำคัญ เช่น การผลิตพลังงาน การเติมหมู่กลูโคส และการสร้างไกลแคนที่มีส่วนช่วยในโครงสร้างและการทำงานของเซลล์
การสมัครและสิทธิประโยชน์
สารละลายกลูโคสนี้ถูกใช้อย่างแพร่หลายเป็นสารเสริมในอาหารเลี้ยงเซลล์และในงานวิจัยทางชีววิทยาเซลล์และโมเลกุลหลายประเภท ในฐานะแหล่งคาร์บอนและพลังงานหลัก กลูโคสช่วยสนับสนุนการเจริญเติบโต การเพิ่มจำนวน และกิจกรรมเมตาบอลิซึมของเซลล์ การมีส่วนร่วมในเส้นทางชีวสังเคราะห์ยังทำให้กลูโคสมีความสำคัญต่อการรักษาสรีรวิทยาของเซลล์ให้เป็นปกติและความสม่ำเสมอของการทดลอง
การเตรียมและวิธีการใช้
สารละลายนี้จัดเตรียมในความเข้มข้นสูงที่ 250 กรัม/ลิตรของกลูโคส ซึ่งสามารถเจือจางลงในอาหารเลี้ยงเชื้อได้ตามความต้องการของการทดลอง ผลิตภัณฑ์ผ่านการกรองแบบปราศจากเชื้อเพื่อรับประกันความเหมาะสมสำหรับการใช้งานที่ต้องการความปลอดเชื้อ เก็บไว้ในอุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C และจัดการในสภาวะปลอดเชื้อเพื่อรักษาคุณภาพและความเสถียรของผลิตภัณฑ์
สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 10 มล.
การเก็บรักษา: +2°C ถึง +8°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
สารละลายอินซูลิน-ทรานส์เฟอริน-ซีลีเนียม (ITS) (100 เท่า) เป็นสารเสริมที่กำหนดทางเคมีอย่างชัดเจน ออกแบบมาสำหรับการใช้งานในวัฒนธรรมเซลล์ที่หลากหลาย โดยทั่วไปใช้เป็นส่วนผสมเสริมในอาหารเลี้ยงเซลล์พื้นฐาน เพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์ภายใต้สภาวะที่มีซีรัมต่ำหรือไม่มีซีรัม
การสมัครและสิทธิประโยชน์
สารเสริม ITS ของเราประกอบด้วยส่วนประกอบที่จำเป็นสำหรับการทำงานที่เหมาะสมที่สุดของอาหารเลี้ยงเซลล์ปราศจากซีรัม โดยการเติมสาร ITS ลงในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่มีสารอาหารทั่วไป ความต้องการซีรัมจากเลือดวัวในครรภ์ (FBS) สำหรับการบำรุงรักษาเซลล์ไลน์หลายชนิดตามปกติสามารถลดลงได้อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งช่วยลดความแปรปรวนที่เกี่ยวข้องกับการใช้ซีรัมในขณะที่ยังคงการเจริญเติบโตและความมีชีวิตของเซลล์ที่สม่ำเสมอ
อินซูลินช่วยส่งเสริมการดูดซึมและการเผาผลาญสารอาหารที่สำคัญของเซลล์, ทรานส์เฟอร์รินช่วยในการขนส่งเหล็ก, และซีลีเนียมช่วยในการป้องกันอนุมูลอิสระและกิจกรรมของเอนไซม์. ทั้งหมดนี้ช่วยส่งเสริมการเผาผลาญของเซลล์ที่สมดุลและปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำในระบบเพาะเลี้ยงที่กำหนดไว้.
การเตรียมและวิธีการใช้
อินซูลิน-ทรานส์เฟอร์ริน-ซีลีเนียม (ITS) จัดเตรียมเป็นสารละลายเข้มข้น 100 เท่า ในสารละลายเกลือสมดุลของเอิร์ล (EBSS) โดยไม่มีฟีโนลเรด สำหรับการใช้งานมาตรฐาน ให้เจือจาง 1:100 ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐานที่เหมาะสมเพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่แนะนำสำหรับการใช้งาน เก็บที่ +2°C ถึง +8°C และจัดการภายใต้สภาวะปลอดเชื้อเพื่อรักษาความเสถียรและความปราศจากเชื้อของผลิตภัณฑ์
สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 5 มล.
การเก็บรักษา: +2°C ถึง +8°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
อินซูลิน รีคอมบิแนนท์ ฮิวแมน โซลูชั่น เป็นสารเสริมที่กำหนดทางเคมีอย่างชัดเจน ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการเพาะเลี้ยงเซลล์สายพันธุ์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม รวมถึงเซลล์รังไข่แฮมสเตอร์จีน (CHO) โซลูชั่นเกรดสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์นี้ประกอบด้วยอินซูลินรีคอมบิแนนท์ของมนุษย์ที่แสดงออกใน Saccharomyces cerevisiae ซึ่งรับประกันความบริสุทธิ์สูงและประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอในการใช้งานวิจัย
การสมัครและสิทธิประโยชน์
อินซูลินถูกเติมลงในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่ปราศจากซีรัมและอาหารเลี้ยงเซลล์ที่กำหนดทางเคมีเป็นประจำ เพื่อส่งเสริมการเจริญเติบโตและผลิตผลของเซลล์ ในฐานะฮอร์โมนควบคุมที่สำคัญ อินซูลินช่วยส่งเสริมการดูดซึม การใช้ประโยชน์ และการเก็บสะสมกลูโคส กรดอะมิโน และกรดไขมันของเซลล์ นอกจากนี้ยังยับยั้งการสลายตัวของไกลโคเจน โปรตีน และไขมัน ซึ่งช่วยปรับปรุงความมีชีวิตของเซลล์และเสถียรภาพทางเมตาบอลิซึมในระบบเพาะเลี้ยงเซลล์ สูตรที่กำหนดทางเคมีช่วยสนับสนุนความสม่ำเสมอและลดความแปรปรวนในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ไวต่อสิ่งรบกวน
สมบัติทางชีวภาพและการใช้งาน
อินซูลินเป็นฮอร์โมนโพลีเปปไทด์สองสายที่ผลิตตามธรรมชาติโดยเซลล์เบต้าของเกาะเล็ก ๆ ในตับอ่อน มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 5,800 ดาลตัน สาย α และสาย β เชื่อมต่อกันด้วยพันธะไดซัลไฟด์ระหว่างสายสองจุด และสาย α มีพันธะไดซัลไฟด์ภายในสายหนึ่งจุด สำหรับการใช้งานเพาะเลี้ยงเซลล์ ควรจัดการสารละลายภายใต้สภาวะปลอดเชื้อและเก็บรักษาที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C เพื่อรักษาความเสถียรและประสิทธิภาพ
สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 100 มล.
การเก็บรักษา: +2°C ถึง +8°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
สารละลายโซเดียมไพรูเวต (100 มิลลิโมลาร์) เป็นสารเติมแต่งที่ปราศจากเชื้อและพร้อมใช้งาน ออกแบบมาเพื่อเป็นแหล่งพลังงานเพิ่มเติมที่เข้าถึงได้ง่ายสำหรับอาหารเลี้ยงเซลล์ โซเดียมไพรูเวตมีบทบาทสำคัญในกระบวนการเมตาบอลิซึมพลังงานของเซลล์ และช่วยสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์ที่มีการเผาผลาญสูงและเพิ่มจำนวนอย่างรวดเร็ว เช่น เซลล์มะเร็ง การเติมสารนี้สามารถเพิ่มความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์และช่วยรักษาเสถียรภาพของกระบวนการเมตาบอลิซึมในระบบเพาะเลี้ยง
การสมัครและสิทธิประโยชน์
สารละลายนี้ถูกใช้อย่างแพร่หลายในการเพาะเลี้ยงเซลล์ตามปกติเพื่อเพิ่มปริมาณไพรูเวตในอาหารเลี้ยงเชื้อและส่งเสริมสภาวะการเจริญเติบโตที่เหมาะสมที่สุด ช่วยสนับสนุนการผลิต ATP อาจช่วยลดความเครียดออกซิเดชัน และมีส่วนช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพการเผาผลาญของเซลล์ที่เพาะเลี้ยง ผลิตในน้ำเกรดสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์และผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ ผลิตภัณฑ์นี้รับประกันคุณภาพที่สม่ำเสมอและความสามารถในการทำซ้ำได้ในกระบวนการวิจัย
การใช้งานและความเข้ากันได้
ความเข้มข้นสุดท้ายที่แนะนำสำหรับการใช้งานเพาะเลี้ยงเซลล์ส่วนใหญ่คือ 1 มิลลิโมลาร์ (mM) ของโซเดียมไพรูเวต ซึ่งสามารถทำได้โดยการเจือจางสารละลายสต็อก 100 มิลลิโมลาร์ ด้วยน้ำยาเพาะเลี้ยงสมบูรณ์ในอัตราส่วน 1:100 สารละลายนี้เข้ากันได้กับอาหารพื้นฐานหลากหลายชนิดและสายพันธุ์เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายชนิด ควรเก็บที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C และป้องกันไม่ให้ปนเปื้อนเพื่อรักษาเสถียรภาพของผลิตภัณฑ์
สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 100 มล.
การเก็บรักษา: ≤-15°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
สารละลายยาปฏิชีวนะ/ยาต้านเชื้อรา (100 เท่า)เป็นสารเข้มข้นที่ปราศจากเชื้อและพร้อมใช้งาน ออกแบบมาเพื่อลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนจุลินทรีย์ในวัฒนธรรมเซลล์และการใช้งานในห้องปฏิบัติการที่เกี่ยวข้อง สารละลาย 100 เท่านี้ประกอบด้วยส่วนผสมที่ได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวางของเพนิซิลลิน, สเตรปโตมัยซิน และแอมโฟเทอริซิน บี—ให้ฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ครอบคลุมต่อแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบ, ยีสต์ และเชื้อราเส้นใยสูตรนี้เหมาะสำหรับใช้ในวัฒนธรรมเซลล์ของสิ่งมีชีวิตที่มีนิวเคลียส, สื่อเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย, และระบบที่ต้องการความสะอาดและปราศจากการปนเปื้อนอื่น ๆ, ช่วยให้การปฏิบัติการในห้องปฏิบัติการสะอาดและสม่ำเสมอ.
การสมัครและสิทธิประโยชน์ ได้รับการปรับให้เหมาะสมสำหรับโปรโตคอลการวิจัยตามปกติ โซลูชันนี้ถูกใช้อย่างแพร่หลายเพื่อรักษาสภาพปลอดเชื้อในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ ให้ประสิทธิภาพที่เชื่อถือได้ในสภาพแวดล้อมที่ไวต่อการปนเปื้อน ช่วยให้นักวิจัยลดความเสี่ยงของการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์โดยไม่กระทบต่อสุขภาพของเซลล์หรือความสามารถในการทำซ้ำของการทดลอง สูตรที่ผ่านการกรองแบบปราศจากเชื้อช่วยลดความจำเป็นในการทำละลายเพิ่มเติม สนับสนุนการเตรียมสื่อที่ราบรื่นและลดความแปรปรวนในกระบวนการห้องปฏิบัติการประจำวัน
การใช้งานและความเข้ากันได้ เพื่อให้ได้ความเข้มข้นในการทำงานตามมาตรฐาน ให้เจือจางสารละลายด้วยน้ำยาเลี้ยงเซลล์ในอัตราส่วน 1:100 ลงในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่สมบูรณ์ของคุณ ผลิตภัณฑ์นี้เข้ากันได้กับสายพันธุ์เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและอาหารพื้นฐานหลากหลายชนิด ด้วยสต็อกที่มีอย่างสม่ำเสมอ นักวิจัยจะได้รับประโยชน์จากความต่อเนื่องในการจัดหาที่เชื่อถือได้และการวางแผนโลจิสติกส์ที่ง่ายขึ้น สารละลายควรเก็บไว้ที่ ≤ –15 °C และป้องกันไม่ให้เกิดการละลายและแช่แข็งซ้ำหลายครั้งเพื่อรักษาความเสถียร สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
ปริมาณ: 100 มล.
การเก็บรักษา: +2°C ถึง +8°C
ความปลอดเชื้อ: ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
MEM กรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น (100x)เป็นผลิตภัณฑ์เสริมอาหารที่ปราศจากเชื้อ ออกแบบมาเพื่อเพิ่มการเจริญเติบโตและความมีชีวิตของเซลล์ในระบบเพาะเลี้ยงเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม สูตรนี้เทียบเท่ากับสารเข้มข้น 100 เท่าของกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นที่พบในอาหารเลี้ยงเซลล์ขั้นต่ำมาตรฐาน (MEM) ช่วยให้สามารถเติมอาหารพื้นฐานได้โดยตรงโดยมีการเตรียมการน้อยที่สุด
การสมัครและสิทธิประโยชน์ อาหารเสริมนี้ให้แหล่งกรดอะมิโนเพิ่มเติมสำหรับเซลล์ที่แบ่งตัวอย่างรวดเร็วหรือสำหรับสายพันธุ์เซลล์ที่สูญเสียความสามารถในการสังเคราะห์กรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นใหม่ โดยลดภาระเมตาบอลิซึมของการสังเคราะห์ชีวภาพ จึงช่วยสนับสนุนการเพิ่มอัตราการเจริญเติบโต, ความคงทนที่ยาวนานขึ้น, และความสม่ำเสมอในการทดลองที่มากขึ้น โดยเฉพาะในวัฒนธรรมที่ไวต่อสารอาหารหรือความหนาแน่นสูง
องค์ประกอบและการใช้งาน สารละลายประกอบด้วยไกลซีน, แอล-อะลานีน, แอล-แอสพาราจีน, แอล-แอสพาร์ติก แอซิด, แอล-กลูตามิก แอซิด, แอล-โพรลีน และแอล-เซอรีน สามารถใช้ร่วมกับ MEM และสื่อมาตรฐานอื่น ๆ ได้เกือบทั้งหมด ในการใช้งาน ให้เจือจาง 1:100 ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อสุดท้าย ผลิตภัณฑ์นี้ผ่านการกรองแบบปราศจากเชื้อและพร้อมใช้งานโดยไม่ต้องผ่านขั้นตอนเพิ่มเติม สำหรับการวิจัยเท่านั้น ไม่ใช้ในกระบวนการวินิจฉัยหรือการรักษา ไม่ใช้ในมนุษย์หรือสัตว์
Accutase เป็นสารละลายสำหรับการแยกเซลล์ที่พร้อมใช้งานและผ่านการกรองฆ่าเชื้อ ออกแบบมาเพื่อเป็นทางเลือกที่อ่อนโยนแทน trypsin/EDTA สำหรับการแยกเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เกาะติดจากภาชนะเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อมาตรฐานและพื้นผิวที่เคลือบด้วยสารยึดเกาะ มันรวมการทำงานของเอนไซม์ที่ย่อยโปรตีนและคอลลาเจนในสารละลายเกลือที่สมดุล เพื่อการแยกที่มีประสิทธิภาพแต่ควบคุมได้ รักษาโปรตีนบนพื้นผิวเซลล์และสนับสนุนการมีชีวิตหลังการเพาะเลี้ยงที่สูงและการยึดเกาะใหม่ได้อย่างรวดเร็ว
สูตร Accutase มีพื้นฐานมาจาก Dulbecco's phosphate-buffered saline (DPBS) ที่มี EDTA และ phenol red เป็นตัวบ่งชี้ค่า pH แบบมองเห็น เอนไซม์เหล่านี้มีแหล่งกำเนิดที่ไม่ใช่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและไม่ใช่แบคทีเรีย ทำให้ Accutase เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการวิจัยเซลล์ต้นกำเนิด กระบวนการผลิตวัคซีน และการใช้งานใด ๆ ที่ต้องลดสิ่งปนเปื้อนที่มาจากสัตว์หรือจุลชีพให้น้อยที่สุด สารละลายจะยับยั้งตัวเองโดยอัตโนมัติที่อุณหภูมิ 37 °C ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องใช้สารทำให้เป็นกลางหรือมีเซรั่มในอาหารเลี้ยงเซลล์หลังการแยกเซลล์ – เซลล์สามารถถูกถ่ายโอนไปยังอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ได้ทันที
คุณสมบัติเด่น
พร้อมใช้งาน 1x ของเหลวที่ผ่านการกรองฆ่าเชื้อแล้ว – ไม่ต้องเจือจางหรือผสมใหม่
การทำงานของเอนไซม์โปรตีโอไลติกและคอลลาจีโนไลติกที่รวมกันเพื่อการแยกตัวที่อ่อนโยน
แต่ละชุดถูกมาตรฐานให้มีความสามารถในการแยกตัวที่กำหนดไว้เพื่อให้มีความสม่ำเสมอระหว่างชุดการผลิต
เอนไซม์ที่มีแหล่งกำเนิดไม่ใช่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและไม่ใช่แบคทีเรีย
ยับยั้งการทำงานโดยอัตโนมัติที่อุณหภูมิ 37 °C – ไม่ต้องใช้สารละลายกลางในการทำให้เป็นกลาง
สูตรใน Dulbecco's PBS พร้อม EDTA
ฟีโนลเรดรวมเป็นสารบ่งชี้ค่า pH แบบมองเห็น
ค่า pH 6.8 – 7.8
การใช้งานทั่วไป
Accutase สามารถแยกเซลล์ชนิดต่าง ๆ ที่เกาะติดและเซลล์ที่บอบบางได้อย่างอ่อนโยน รวมถึงเซลล์ต้นกำเนิดตัวอ่อนมนุษย์ (hESCs), เซลล์ต้นกำเนิดที่เหนี่ยวนำจากเซลล์ต้นกำเนิดมนุษย์ (iPSCs), เซลล์ต้นกำเนิดประสาท, เซลล์ประสาทปฐมภูมิ และเซลล์ที่เพาะเลี้ยงเป็นประจำ เช่น HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 และ A549 กรณีการใช้งานทั่วไปประกอบด้วย:
การเพาะเลี้ยงและเปลี่ยนอาหารเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เกาะติดเป็นประจำ
การแยกเซลล์เดี่ยวอย่างอ่อนโยนของ hESCs, iPSCs และสายเซลล์ที่บอบบางอื่น ๆ
การเตรียมตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ด้วยโฟลว์ไซโตเมทรีและ FACS
การวิเคราะห์ตัวบ่งชี้บนผิวเซลล์ที่ความสมบูรณ์ของเอพิโทปมีความสำคัญ
การทดสอบการเคลื่อนที่ของเซลล์, การเพิ่มจำนวนเซลล์ และการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิส
การทดสอบภาวะสงบโดยการอดอาหารจากซีรัมและการศึกษาการถ่ายโอนยีนเนื้องอก
การทดสอบการเคลื่อนที่ของเซลล์เนื้องอกและเซลล์ยอดประสาท
การเพิ่มขนาดการผลิตในกระบวนการทำงานของไบโอรีแอคเตอร์
สำหรับงานประจำ ให้ใช้ Accutase ประมาณ 10 มล. ต่อพื้นที่เพาะเลี้ยง 75 ซม.2 และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5–10 นาที เวลาบ่มที่เหมาะสมควรกำหนดสำหรับแต่ละสายพันธุ์ของเซลล์และไม่ควรเกินหนึ่งชั่วโมง ก่อนการเติม ให้ล้างชั้นเซลล์ด้วยสารละลายเกลือที่ไม่มี Ca2+/Mg2+ เช่น DPBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม เพื่อกำจัดซีรัมที่เหลือและแคตไอออนสองวาเลนต์
การจัดการและการเก็บรักษา
เก็บขวดที่ยังไม่เปิดไว้ในช่องแช่แข็งที่อุณหภูมิ -15 °C หรือต่ำกว่า ละลายที่อุณหภูมิห้องหรือแช่ค้างคืนที่อุณหภูมิ +2 °C ถึง +8 °C ห้ามละลาย Accutase ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37 °C เนื่องจากอุณหภูมิที่สูงขึ้นจะลดกิจกรรมของเอนไซม์ หลังจากละลายแล้ว สามารถเก็บสารละลายไว้ได้นานถึง 2 เดือนที่อุณหภูมิ +2 °C ถึง +8 °C ห้ามเก็บที่อุณหภูมิห้อง ห้ามอุ่นรีเอเจนต์ล่วงหน้าที่อุณหภูมิ 37 °C ก่อนการใช้งาน – ให้เติมรีเอเจนต์ลงในเซลล์ที่ล้างแล้วโดยตรงที่อุณหภูมิห้อง สำหรับการเก็บรักษาระยะยาว แนะนำให้แบ่งใช้ในปริมาณที่พอดีต่อการใช้งานแต่ละครั้งเพื่อหลีกเลี่ยงการละลายซ้ำหลายครั้ง ทำงานภายใต้สภาวะปลอดเชื้อเสมอ
คุณภาพ
ผลิตภายใต้มาตรฐานคุณภาพที่เข้มงวด แต่ละชุดของ Accutase ได้รับการกรองฆ่าเชื้อและทดสอบความบริสุทธิ์ ความเป็นกรด-ด่าง ลักษณะภายนอก และกิจกรรมการแยกตัว เพื่อให้มั่นใจในประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอและสามารถทำซ้ำได้ในแต่ละชุดการผลิต
ข้อมูลจำเพาะของสินค้า
ข้อกำหนด
รายละเอียด
ประเภทสินค้าสารละลายสำหรับการแยกเซลล์ออกจากกัน / สารละลายสำหรับการแยกเซลล์ออกจากกัน
รูปแบบของเหลวที่ผ่านการกรองแบบปราศจากเชื้อ พร้อมใช้งาน
ปริมาณ100 มิลลิลิตร
ความเข้มข้นในการทำงาน1x (พร้อมใช้งาน)
กิจกรรมของเอนไซม์การย่อยโปรตีนและคอลลาเจนแบบผสมผสาน
แหล่งกำเนิดของเอนไซม์ไม่ใช่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและไม่ใช่แบคทีเรีย
ระบบบัฟเฟอร์Dulbecco's PBS พร้อม EDTA
ตัวบ่งชี้ค่า pHฟีโนล เรด
ช่วงค่า pH6.8 – 7.8
ลักษณะสารละลายใส สีแดงอ่อนถึงสีส้ม
อุณหภูมิในการเก็บรักษา-15 °C หรือต่ำกว่า
ความเสถียรหลังการละลายสูงสุด 2 เดือน ที่ +2 °C ถึง +8 °C
ปริมาณการใช้งานที่แนะนำประมาณ 10 มิลลิลิตรต่อพื้นที่เพาะเลี้ยง 75 ตารางเซนติเมตร
ระยะเวลาฟักตัวโดยทั่วไป5 – 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง
เงื่อนไขการจัดส่งแช่แข็งด้วยน้ำแข็งแห้ง
การใช้ตามที่ตั้งใจไว้สำหรับการใช้งานวิจัยและการผลิตเพิ่มเติมเท่านั้น
สูตร (ส่วนประกอบต่อลิตร)
องค์ประกอบ
ความเข้มข้น (มิลลิกรัมต่อลิตร)
เกลืออนินทรีย์
โซเดียมคลอไรด์ (NaCl)แปดพันแปดร้อยบาทถ้วน
ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (Na2HPO4)หนึ่งพันหนึ่งร้อยห้าสิบจุดศูนย์ศูนย์
โพแทสเซียมคลอไรด์ (KCl)สองร้อยศูนย์ศูนย์
โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4)สองร้อยศูนย์ศูนย์
ส่วนประกอบอื่น ๆ
EDTA · 4Na (เตตราโซเดียม EDTA)สองร้อยยี่สิบจุดศูนย์ศูนย์
ฟีโนล เรด3.00
ส่วนผสมเอนไซม์เฉพาะ (มีฤทธิ์ในการย่อยโปรตีนและคอลลาเจน)1x
Accutase เป็นเครื่องหมายการค้าจดทะเบียนของ Innovative Cell Technologies, Inc.
สูตรน้ำพร้อมใช้ที่ผ่านการกรองฆ่าเชื้อแล้วนี้ เสริมด้วยสารละลายเกลือสมดุล Earle (EBSS) แอล-กลูตามีน 2 มิลลิโมลาร์ ดี-กลูโคส (1.0 กรัม/ลิตร) และโซเดียมไบคาร์บอเนต (NaHCO3) 2.2 กรัม/ลิตร ทำให้เหมาะสำหรับใช้ในบรรยากาศตู้ฟักที่ควบคุมด้วย CO2 (โดยทั่วไป 5% CO2). ฟีนอลเรดที่รวมอยู่ทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ค่า pH ช่วยให้สามารถตรวจสอบสภาพของอาหารเลี้ยงเซลล์ได้อย่างสะดวกด้วยสายตาในระหว่างการเพาะเลี้ยงเซลล์
คุณสมบัติเด่น
สูตร MEM แบบดั้งเดิมของ Classic Eagle พร้อมด้วย Earle's Balanced Salt Solution (EBSS)
ประกอบด้วย L-กลูตามีน 2 มิลลิโมลาร์ – พร้อมใช้งานทันที
2.2 กรัม/ลิตร โซเดียมไบคาร์บอเนต – ปรับเป็นบัฟเฟอร์สำหรับบ่มที่ 5 % CO2
โดยใช้ D-glucose (1.0 กรัม/ลิตร) เป็นแหล่งคาร์บอนหลัก
โดยใช้ฟีโนลเรดเป็นตัวบ่งชี้ค่าพีเอช
ไม่มี HEPES และไม่มีโซเดียมไพรูเวต
น้ำยาเหลวที่ผ่านการกรองแบบปราศจากเชื้อ พร้อมใช้งาน
ค่า pH 7.0 – 7.6
การใช้งานทั่วไป
EMEM สนับสนุนการเพาะเลี้ยงเซลล์สายพันธุ์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลากหลายชนิด รวมถึง HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 และเซลล์ต้นกำเนิดหลายชนิด การใช้งานทั่วไปได้แก่:
การบำรุงรักษาตามปกติและการขยายสายพันธุ์เซลล์ที่เกาะติด
การแพร่กระจายของไวรัสและกระบวนการผลิตวัคซีน
การทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์และการประยุกต์ใช้ทางชีววิเคราะห์
การศึกษาการถ่ายโอนยีนและการแสดงออกของโปรตีน
การวิจัยพื้นฐานในชีววิทยาของเซลล์และชีววิทยาโมเลกุล
สำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ที่ดีที่สุด EMEM มักจะเสริมด้วยเซรั่มจากเลือดวัวตัวเมียที่ตั้งท้อง 5–10 % (FBS) และขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ของเซลล์ อาจเสริมด้วยกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น (NEAA) และยาปฏิชีวนะ เช่น เพนิซิลลิน/สเตียโรมัยซิน
การจัดการและการเก็บรักษา
เก็บขวดที่ยังไม่เปิดไว้ที่ +2 °C ถึง +8 °C ป้องกันแสง หลังจากเปิดแล้ว ให้ใช้ภายใต้สภาวะปลอดเชื้อ L-Glutamine ในสารละลายจะเสื่อมสภาพอย่างช้าๆ
- เราแนะนำให้ใช้สื่อภายใน 4 สัปดาห์หลังจากเปิดเพื่อประสิทธิภาพที่ดีที่สุด หรือเสริมด้วย L-Glutamine ใหม่ก่อนใช้งานหากเก็บไว้นานกว่านั้น ปล่อยให้สื่ออุ่นถึง 37 °C ก่อนนำไปเติมในเซลล์
คุณภาพ
ผลิตภายใต้มาตรฐานคุณภาพที่เข้มงวด แต่ละชุดผ่านการทดสอบความปลอดเชื้อ ค่า pH ความเข้มข้นของออสโมลาลิตี้ และระดับเอนโดทอกซิน เพื่อให้มั่นใจในประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอในการใช้งานกับการเพาะเลี้ยงเซลล์
ข้อมูลจำเพาะของสินค้า
ข้อกำหนด
รายละเอียด
ประเภทสินค้าMEM
หมวดหมู่สินค้าอาหารเลี้ยงเซลล์
รูปแบบของเหลว
ปราศจากเชื้อใช่
ขนาด500 มิลลิลิตร
แอล-กลูตามีนด้วยแอล-กลูตามีน (2 มิลลิโมลาร์)
กลูโคสด้วยกลูโคส (1.0 กรัม/ลิตร)
โซเดียมไบคาร์บอเนตด้วย NaHCO3 (2.2 กรัม/ลิตร)
HEPESไม่มี HEPES
โซเดียมไพรูเวตปราศจากโซเดียมไพรูเวต
ฟีโนลเรดด้วยฟีนอลเรด
น้ำเกลือสารละลายเกลือสมดุลของเอิร์ล (EBSS)
พีเอช7.0 – 7.6
ปริมาณเอนโดทอกซินไม่ได้ระบุ
การจัดเก็บ+2 °C ถึง +8 °C
สูตร (ส่วนประกอบต่อลิตร)
องค์ประกอบ
ความเข้มข้น (มิลลิกรัมต่อลิตร)
เกลืออนินทรีย์
แคลเซียมคลอไรด์ · 2H2Oสองร้อยหกสิบห้าจุดศูนย์ศูนย์
แมกนีเซียมซัลเฟต97.72
โพแทสเซียมคลอไรด์สี่ร้อยศูนย์ศูนย์
โซเดียมคลอไรด์หกพันแปดร้อยบาท
โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต ชนิดไม่มีน้ำหนึ่งร้อยยี่สิบสองจุดศูนย์ศูนย์
โซเดียมไบคาร์บอเนต (NaHCO3)สองพันสองร้อยยี่สิบ
กรดอะมิโน
แอล-อาร์จินีน · เฮสเพอริดินหนึ่งร้อยยี่สิบหกจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ซิสเตอีน · 2HCl31.30
แอล-กลูตามีนสองร้อยเก้าสิบสองจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ฮิสทิดีน · เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ · น้ำสี่สิบสองจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ไอโซลิวซีนห้าสิบสองจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ลิวซีนห้าสิบสองจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ไลซีน · เฮกซะไฮโดรคลอไรด์เจ็ดสิบสองจุดห้าศูนย์
แอล-เมไทโอนีน15.00
แอล-ฟีนิลอะลานีนสามสิบสองจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ทรีโอนีนสี่สิบแปดจุดศูนย์ศูนย์
แอล-ทริปโตเฟนสิบโมง
แอล-ไทโรซีน · 2Na · 2H2O51.90
แอล-วาลีนสี่สิบหกจุดศูนย์ศูนย์
วิตามิน
ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนตหนึ่งจุดศูนย์ศูนย์
โคลีนคลอไรด์หนึ่งจุดศูนย์ศูนย์
กรดโฟลิกหนึ่งจุดศูนย์ศูนย์
ไมโอ-อิโนซิทอล2.00
นิโคตินาไมด์หนึ่งจุดศูนย์ศูนย์
ไพริดอกซัล · เฮกซะไฮโดรคลอไรด์หนึ่งจุดศูนย์ศูนย์
ไรโบฟลาวิน0.10
ไทอามีน · เฮกซะไฮโดรคลอไรด์หนึ่งจุดศูนย์ศูนย์
ส่วนประกอบอื่น ๆ
D(+)-กลูโคสหนึ่งพันบาทถ้วน
ฟีโนลเรดสิบโมง
คุณสมบัติหลักของ Freeze Medium CM-1 ได้แก่:
ความเข้ากันได้กว้าง: มีประสิทธิภาพสำหรับเซลล์หลากหลายประเภท รวมถึงเซลล์ต้นกำเนิด เซลล์ต้นกำเนิด และเซลล์สายพันธุ์ที่ตั้งขึ้นแล้ว
ความมีชีวิตสูง: ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวของเซลล์หลังการละลายน้ำแข็งและความมีชีวิตสูงสุด เพื่อให้ได้ผลลัพธ์การทดลองที่เชื่อถือได้
พร้อมใช้งาน: เตรียมไว้อย่างสะดวกและผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว สามารถนำไปใช้ได้ทันที ช่วยลดเวลาในการเตรียมและลดความเสี่ยงของการปนเปื้อน
เสถียรภาพที่เพิ่มขึ้น: รักษาประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอภายใต้เงื่อนไขการเก็บรักษาความเย็นมาตรฐาน ทำให้ได้ผลลัพธ์ที่สามารถทำซ้ำได้
อายุการเก็บรักษาที่ยาวนาน: CM-1 เป็นเซรั่มพร้อมใช้สำหรับแช่แข็งที่สามารถเก็บรักษาในตู้เย็นได้นานถึงหนึ่งปี
การใช้ CM-1 สำหรับการแช่แข็งเซลล์
ในการใช้ CM-1 สำหรับการแช่แข็งเซลล์ที่เกาะติดและเซลล์แขวนลอย ให้ปฏิบัติตามขั้นตอนเหล่านี้:
สำหรับเซลล์ที่เกาะติด ให้ล้างและแยกเซลล์ออกจากพื้นผิวของภาชนะเพาะเลี้ยง สำหรับเซลล์แขวนลอย ให้ดำเนินการไปยังขั้นตอนถัดไปโดยตรง
นับจำนวนเซลล์เพื่อให้แน่ใจว่ามีความเข้มข้นที่ถูกต้อง
ปั่นเหวี่ยงเซลล์เพื่อแยกเซลล์ออกเป็นตะกอน จากนั้นแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์แช่แข็ง CM-1
ถ่ายโอนเซลล์ที่แขวนลอยกลับเข้าไปในหลอดแช่แข็ง
ใช้วิธีแช่แข็งแบบช้า ก่อนที่จะถ่ายโอนเซลล์ไปยังการเก็บรักษาในระยะยาว
วิธีการ
คำอธิบาย
ขั้นตอน
❄️
การแช่แข็งด้วยตนเอง
วิธีการแบบทีละขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับการลดอุณหภูมิอย่างค่อยเป็นค่อยไปเพื่อให้แน่ใจว่าเซลล์ยังคงมีชีวิตอยู่
1️⃣ วางเซลล์เพลสในสารละลายแช่แข็งในตู้แช่แข็งที่อุณหภูมิ 4°C เป็นเวลา 40 นาที
2️⃣ ย้ายไปแช่ในตู้แช่แข็งที่อุณหภูมิ -80°C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง
3️⃣ เก็บเซลล์ในไนโตรเจนเหลวเพื่อการเก็บรักษาระยะยาว
❄️
การใช้คุณฟรอสตี้
อุปกรณ์ที่สะดวกซึ่งช่วยให้สามารถควบคุมอัตราการแช่แข็งได้โดยไม่ต้องใช้พลังงานไฟฟ้า
1️⃣ เตรียมเซลล์ในหลอดแช่แข็งด้วยสารละลายแช่แข็ง
2️⃣ วางขวดแช่แข็งในภาชนะ Mr. Frosty
3️⃣ เก็บไว้ที่ -80°C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ก่อนย้ายไปเก็บในไนโตรเจนเหลว
❄️
ตู้แช่แข็งควบคุมอุณหภูมิ
ตู้แช่แข็งความแม่นยำสูงโดย Thermo Fisher หรือผู้ผลิตรายอื่นที่ออกแบบมาเพื่อการลดอุณหภูมิที่ควบคุมได้
1️⃣ ตั้งโปรแกรมอุปกรณ์ให้ลดอุณหภูมิลงอย่างค่อยเป็นค่อยไป
2️⃣ วางเซลล์ที่เตรียมไว้ลงในช่องแช่แข็ง
3️⃣ หลังจากรอบการแช่แข็งแล้ว ให้ย้ายเซลล์ไปยังไนโตรเจนเหลว
เก็บขวดแช่แข็งที่อุณหภูมิต่ำกว่า -130°C หรือในไนโตรเจนเหลวสำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว
ส่วนผสม
ประกอบด้วย FBS, DMSO, กลูโคส, เกลือ
ความสามารถในการบัฟเฟอร์: pH = 7.2 ถึง 7.6
Cytion's Freeze Medium CM-1 เป็นโซลูชันที่เชื่อถือได้สำหรับการแช่แข็งเซลล์ โดยรับประกันความมีชีวิตและความสามารถในการทำงานของเซลล์หลังการละลายน้ำแข็ง เหมาะสำหรับการใช้งานวิจัยที่หลากหลาย
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium ได้รับการพัฒนาอย่างพิถีพิถันเพื่อปรับสภาพการเพาะเลี้ยงเซลล์ให้เหมาะสมที่สุด ประกอบด้วยส่วนประกอบที่เข้มข้นสูง ซึ่งให้ระดับของส่วนประกอบที่จำเป็น เช่น กรดอะมิโนและโซเดียมไพรูเวตในปริมาณที่สูงขึ้น รวมถึงองค์ประกอบเพิ่มเติม เช่น พูเทรซิน ไทมิดีน ไฮโปแซนธิน และสังกะสี การเติมส่วนประกอบเหล่านี้ช่วยให้นักวิจัยสามารถเสริมอาหารเลี้ยงเซลล์ด้วยซีรัมหรือส่วนประกอบที่กำหนดในปริมาณน้อยสำหรับเซลล์ประเภทเฉพาะ ทำให้สามารถสร้างสภาวะการทดลองที่แม่นยำได้
ที่น่าสังเกตคือ สารอาหาร Ham's F-12K (Kaighn's) Medium ไม่มีโปรตีนหรือปัจจัยการเจริญเติบโต ดังนั้น การเสริมด้วยปัจจัยการเจริญเติบโตและเซรั่มจากเลือดวัวในครรภ์ (FBS) จึงมักจำเป็น ซึ่งช่วยให้นักวิจัยสามารถปรับแต่งสารอาหารให้เหมาะกับความต้องการของสายพันธุ์เซลล์เฉพาะของพวกเขาได้ สำหรับประสิทธิภาพที่ดีที่สุด ความเข้มข้นของ FBS ต้องได้รับการปรับให้เหมาะสมอย่างระมัดระวังสำหรับแต่ละสายพันธุ์เซลล์ เพื่อให้มั่นใจถึงการเจริญเติบโตและการทำงานที่ดีที่สุด
เพื่อรักษาค่า pH ทางสรีรวิทยา สารอาหาร Ham's F-12K (Kaighn's) ใช้ระบบบัฟเฟอร์โซเดียมไบคาร์บอเนต (2.5 กรัม/ลิตร) ซึ่งจำเป็นต้องควบคุมสภาพแวดล้อมให้มี CO2 อยู่ระหว่าง 5-10% ในระหว่างการเพาะเลี้ยง เพื่อให้แน่ใจว่าค่า pH ของสารอาหารอยู่ในช่วงที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตและความมีชีวิตของเซลล์.
การควบคุมคุณภาพ
pH = 7.2 +/
- 0.02 ที่ 20-25 องศาเซลเซียส
แต่ละล็อตได้รับการทดสอบความปราศจากเชื้อและความไม่มีไมโคพลาสมาและแบคทีเรียแล้ว
การบำรุงรักษา
เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด การแช่แข็งหรือการอุ่นให้ถึง +37°C จะลดคุณภาพของผลิตภัณฑ์
ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37 องศาเซลเซียส หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ (เช่น เครื่องใช้ไมโครเวฟ)
หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารละลาย ให้ตักปริมาณที่ต้องการออกจากขวดแล้วนำไปอุ่นที่อุณหภูมิห้อง
อายุการเก็บรักษาสำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อทุกชนิด ยกเว้นอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐาน คือ 8 สัปดาห์นับจากวันที่ผลิต
องค์ประกอบ
ส่วนประกอบ
มิลลิกรัมต่อลิตร
เกลืออนินทรีย์
แคลเซียมคลอไรด์ x 2H2O
หนึ่งร้อยสามสิบห้าพันสองร้อยสี่
คอปเปอร์(II) ซัลเฟต x 5H2O
ศูนย์,ศูนย์
เหล็ก (II) ซัลเฟต x 7H2O
0.83
แมกนีเซียมคลอไรด์ x 6H2O
หนึ่งร้อยห้าหมื่นเจ็ดร้อยยี่สิบ
แมกนีเซียมซัลเฟต x 7H2O
394,49
โพแทสเซียมคลอไรด์
283,29
โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต
58,52
โซเดียมคลอไรด์
เจ็ดพันห้าร้อยเก้าสิบเจ็ดจุดสองศูนย์
ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟตไม่มีน้ำ
หนึ่งแสนห้าพันสอง
ซิงค์ซัลเฟต x 7H2O
0,14
ส่วนประกอบอื่น ๆ
กลูโคส (D(+)-) อนไฮเดรต
หนึ่งพันสองร้อยหกสิบ
ไฮโปแซนทีน
4,08
กรดดีแอล-แอลฟา-ไลโปอิก
0.21
ฟีโนล เรด
3,00
พุตเทรสซีน x 2HCl
0.32
โซเดียมไพรูเวต
สองร้อยยี่สิบ
โซเดียมไบคาร์บอเนต
สองพันห้าร้อย
ไทมีดีน
0.73
กรดอะมิโน
แอล-อะลานีน
17,82
แอล-อาร์จินีน x เกลือไฮโดรคลอไรด์
421,40
แอล-แอสพาราจีน x น้ำ
30,02
กรดแอล-แอสพาร์ติก
26,62
แอล-ซิสเตอีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ
เจ็ดสิบพันสองร้อยสี่
แอล-กลูตามีน
292,20
กรดแอล-กลูตามิก
29,42
ไกลซีน
15,01
แอล-ฮิสทิดีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ
41,92
แอล-ไอโซลิวซีน
7,87
แอล-ลิวซีน
26,24
แอล-ไลซีน x เอชซีแอล
73,04
แอล-เมไทโอนีน
8,95
แอล-ฟีนิลอะลานีน
9,91
แอล-โพรลีน
69,06
แอล-ซีรีน
21,02
แอล-ทรีโอนีน
23,82
แอล-ทริปโตเฟน
4,08
แอล-ไทโรซีน
10,87
แอล-วาลีน
23,42
วิตามิน
ดี(+)-ไบโอติน
0.07
ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนต
0.48
โคลีนคลอไรด์
13,96
กรดโฟลิก
1,32
ไมโอ-อิโนซิทอล
18,02
นิโคตินาไมด์
0.04
ไพริดอกซีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
0.06
ไรโบฟลาวิน
0.04
ไทอามีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
0.34
วิตามินบี12
1,36
สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) เป็นสารละลายบัฟเฟอร์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในงานวิจัยทางชีววิทยาและเคมี มีบทบาทสำคัญในการรักษาสมดุลของค่า pH และความเข้มข้นของออสโมซิสในระหว่างกระบวนการทดลองต่างๆ รวมถึงการเตรียมเนื้อเยื่อและการเพาะเลี้ยงเซลล์โซลูชัน PBS ของเราถูกคิดค้นอย่างพิถีพิถันด้วยส่วนผสมที่มีความบริสุทธิ์สูง เพื่อให้มั่นใจในความเสถียรและความน่าเชื่อถือในทุกการทดลอง ค่าออสโมลาリティและความเข้มข้นของไอออนใน PBS ของเราใกล้เคียงกับของร่างกายมนุษย์ ทำให้เป็นสารละลายไอโซโทนิกและไม่เป็นพิษต่อเซลล์ส่วนใหญ่
องค์ประกอบของโซลูชัน PBS ของเรา
โซลูชัน PBS ของเราเป็นสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเกรดบริสุทธิ์สูงที่ปรับค่า pH ผสมกับน้ำเกลือบริสุทธิ์ ในความเข้มข้นใช้งาน 1X ประกอบด้วย:
8000 มิลลิกรัม/ลิตร โซเดียมคลอไรด์ (NaCl)
โพแทสเซียมคลอไรด์ (KCl) 200 มิลลิกรัม/ลิตร
1150 มก./ลิตร โซเดียมฟอสเฟตไดเบสิกแอนไฮดรัส (Na2HPO4)
โพแทสเซียมฟอสเฟตโมโนเบสิก ชนิดไม่มีน้ำ (KH2PO4) 200 มิลลิกรัม/ลิตร
การประพันธ์นี้ช่วยให้ได้ค่า pH และสมดุลไอออนที่เหมาะสมที่สุด เหมาะสำหรับการประยุกต์ใช้ทางชีวภาพในวงกว้าง
การประยุกต์ใช้โซลูชัน PBS ของเรา
โซลูชัน PBS ของเราเหมาะสำหรับการใช้งานหลากหลายในงานวิจัยทางชีววิทยา คุณสมบัติไอโซโทนิกและไม่เป็นพิษทำให้เหมาะสำหรับการเจือจางสารและการล้างภาชนะบรรจุเซลล์ โซลูชัน PBS ที่มี EDTA มีประสิทธิภาพในการแยกเซลล์ที่ติดกันและจับกลุ่ม อย่างไรก็ตาม ไม่ควรเติมโลหะสองวาเลนซ์ เช่น สังกะสีลงใน PBS เนื่องจากอาจทำให้เกิดการตกตะกอนได้ ในกรณีดังกล่าว แนะนำให้ใช้บัฟเฟอร์ของ Good'sนอกจากนี้ โซลูชัน PBS ของเราเป็นทางเลือกที่ยอมรับได้สำหรับน้ำยาขนส่งเชื้อไวรัสในการขนส่งและเก็บรักษาไวรัส RNA รวมถึง SARS-CoV-2
การควบคุมคุณภาพ
ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
การเก็บรักษาและอายุการเก็บรักษา
เก็บไว้ที่ +2°C ถึง +25°C ป้องกันแสง
เมื่อเปิดแล้ว ให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2°C ถึง 25°C และใช้ภายใน 24 เดือน
เงื่อนไขการจัดส่ง
อุณหภูมิแวดล้อม
การบำรุงรักษา
เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและการอุ่นบ่อยครั้งถึง +37°C เนื่องจากจะทำให้คุณภาพของผลิตภัณฑ์ลดลง
ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37°C หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ เช่น เตาไมโครเวฟ
หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารให้ใช้ปริมาณที่ต้องการและทำให้อุ่นถึงอุณหภูมิห้องก่อนใช้
องค์ประกอบ
หมวดหมู่
ส่วนประกอบ
ความเข้มข้น (มิลลิกรัมต่อลิตร)
เกลือ
โพแทสเซียมคลอไรด์
200
โพแทสเซียมฟอสเฟตโมโนเบสิก อนีดรัส
200
โซเดียมคลอไรด์
แปดพัน
โซเดียมฟอสเฟตไดเบสิก ชนิดไม่มีน้ำ
หนึ่งพันหนึ่งร้อยห้าสิบ
RPMI 1640 Medium ได้รับการออกแบบในขั้นต้นเพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์เม็ดเลือดขาวมะเร็งในมนุษย์ทั้งในแบบแขวนลอยและแบบชั้นเดียว โดยผ่านการปรับปรุงโดยนักวิจัยและผู้จัดจำหน่ายเชิงพาณิชย์จนกลายเป็นที่เหมาะสมสำหรับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลากหลายชนิด มีความเข้ากันได้อย่างดีเยี่ยมกับสายเซลล์เช่น HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes และ carcinomas
RPMI 1640 Medium โดดเด่นจากสื่อเพาะเลี้ยงเซลล์อื่น ๆ เนื่องจากองค์ประกอบที่เป็นเอกลักษณ์ มีฟอสเฟต กรดอะมิโน และวิตามินในปริมาณมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งมีไบโอติน วิตามินบี12 และ PABA ซึ่งไม่มีใน Eagle's Minimal Essential Medium หรือ Dulbecco's Modified Eagle Mediumนอกจากนี้ สารอาหาร RPMI 1640 Medium ยังแสดงค่าความเข้มข้นของวิตามินอินโนซิทอลและโคลีนที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตาม สารอาหารนี้ไม่มีโปรตีน ไขมัน หรือปัจจัยการเจริญเติบโต ดังนั้น การเติมเซรั่มจากเลือดของลูกวัวในครรภ์ (Fetal Bovine Serum หรือ FBS) ในปริมาณ 10% จึงมักจำเป็นเพื่อให้ได้สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์
ระบบการบัฟเฟอร์ของ RPMI 1640 Medium อาศัยโซเดียมไบคาร์บอเนตและจำเป็นต้องมีสภาพแวดล้อมที่มี CO2 5-10% เพื่อรักษาค่า pH ที่เหมาะสมทางสรีรวิทยา การเพิ่มสารรีดิวซ์กลูตาไธโอนยังช่วยแยกความแตกต่างของอาหารเลี้ยงเซลล์นี้จากอาหารชนิดอื่นอีกด้วย
การควบคุมคุณภาพ
ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
การเก็บรักษาและอายุการเก็บรักษา
เก็บไว้ที่ +2°C ถึง +8°C ป้องกันแสง
เมื่อเปิดแล้ว ให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C และใช้ให้หมดภายใน 6–8 สัปดาห์
เงื่อนไขการจัดส่ง
อุณหภูมิแวดล้อม
การบำรุงรักษา
เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและการอุ่นบ่อยครั้งถึง +37°C เนื่องจากจะทำให้คุณภาพของผลิตภัณฑ์ลดลง
ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37°C หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ เช่น เครื่องใช้ไมโครเวฟ
หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารให้ใช้ปริมาณที่ต้องการและทำให้อุ่นถึงอุณหภูมิห้องก่อนใช้
องค์ประกอบ
หมวดหมู่
ส่วนประกอบ
ความเข้มข้น (มิลลิกรัมต่อลิตร)
กรดอะมิโน
ไกลซีน
10.00
แอล-อะลานิล-แอล-กลูตามีน
434.40
แอล-อาร์จินีน
200.00
แอล-แอสพาราจีนไฮโดรเจน 2 อะตอม
56.82
กรดแอล-แอสพาร์ติก
20.00
แอล-ซิสเทอีน 2HCl
65.20
แอล-กลูตามิก แอซิด
20.00
แอล-ฮีสติดีน เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ไฮโดรเจน 2 อะต
20.27
แอล-ไฮดรอกซี-แอล-โพรลีน
20.00
แอล-ไอโซลิวซีน
50.00
แอล-ลิวซีน
50.00
แอล-ไลซีน เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
40.00
แอล-เมไทโอนีน
15.00
แอล-ฟีนิลอะลานีน
15.00
แอล-โพรลีน
20.00
แอล-ซีรีน
30.00
แอล-ทรีโอนีน
20.00
แอล-ทริปโตเฟน
5.00
แอล-ไทโรซีน 2Na2H2O
28.83
แอล-วาลีน
20.00
วิตามิน
กรดพารา-อะมิโนเบนโซอิก
1.00
ดี-ไบโอติน
0.20
โคลีนคลอไรด์
3.00
ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนต
0.25
กรดโฟลิก
1.00
ไมโอ-อิโนซิทอล
35.00
นิโคตินาไมด์
1.00
ไพริดอกซีน เฮเซเดียมคลอไรด์
1.00
ไรโบฟลาวิน
0.20
ไทอามีน เฮเซ็กซ์คลอไรด์
1.00
วิตามินบี12
0.005
เกลืออนินทรีย์
แคลเซียมไนเตรต4H2O
100.00
โพแทสเซียมคลอไรด์
400.00
แมกนีเซียมซัลเฟต7H2O
100.00
NaCl
6000.00
โซเดียมไบคาร์บอเนต
2000.00
Na2HPO4
800.00
ส่วนประกอบอื่น ๆ
ดี-กลูโคส
2000.00
แอล-กลูตาไธโอน รีดิวซ์
1.00
โซเดียมฟีนอลเรด
5.30
สูตรเฉพาะนี้ผสมผสาน Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) และ Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) ในอัตราส่วนที่แม่นยำ 1:1 การเติม L-glutamine ช่วยเสริมองค์ประกอบให้ดียิ่งขึ้น
DMEM ซึ่งพัฒนามาจาก Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM) มีความเข้มข้นของกรดอะมิโนและวิตามินสูงกว่าสูตรเดิม ในทางตรงกันข้าม Ham's F-12 มีพื้นฐานมาจาก Ham's F-10 medium โดยให้ชุดองค์ประกอบที่จำเป็นซึ่งเสริมกัน
เพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์อย่างเหมาะสม การเติม FBS ลงใน DMEM:Ham's F12 ที่ความเข้มข้นทั่วไป 5-10% เป็นวิธีปฏิบัติที่พบได้บ่อย การเติมนี้มีความจำเป็นเนื่องจากอาหารเลี้ยงเซลล์ขาดฮอร์โมนการเจริญเติบโต ไขมัน และโปรตีนที่จำเป็นต่อการพัฒนาของเซลล์
DMEM:Ham's F12 ประกอบด้วยระบบบัฟเฟอร์ pH และมักเสริมด้วยฟีโนลเรด ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้ pH เซลล์ที่เพาะเลี้ยงใน DMEM:Ham's F12 หรืออาหารเลี้ยงเซลล์ใด ๆ ที่ใช้ระบบบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนต จำเป็นต้องอยู่ในสภาพแวดล้อมที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ควบคุมที่ 5-10% เพื่อรักษาระดับ pH ที่เหมาะสม
การควบคุมคุณภาพ
ผ่านการกรองแบบปลอดเชื้อ
การเก็บรักษาและอายุการเก็บรักษา
เก็บไว้ที่ +2°C ถึง +8°C ป้องกันแสง
เมื่อเปิดแล้ว ให้เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C และใช้ภายใน 6–8 สัปดาห์
เงื่อนไขการจัดส่ง
อุณหภูมิแวดล้อม
การบำรุงรักษา
เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและการอุ่นบ่อยครั้งถึง +37°C เนื่องจากจะทำให้คุณภาพของผลิตภัณฑ์ลดลง
ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37°C หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ เช่น เตาไมโครเวฟ
หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารให้ใช้ปริมาณที่ต้องการและอุ่นให้ถึงอุณหภูมิห้องก่อนใช้
องค์ประกอบ
หมวดหมู่
ส่วนประกอบ
ความเข้มข้น (มิลลิกรัมต่อลิตร)
กรดอะมิโน
ไกลซีน
18.75
แอล-อะลานีน
สี่โมงสี่สิบห้านาที
แอล-อาร์จินีน เฮสเพอไรดิน
หนึ่งร้อยสี่สิบเจ็ดจุดห้าศูนย์
แอล-แอสพาราจีน ไฮโดรเจน 2 อะตอม
เจ็ดโมงห้าสิบ
กรดแอล-แอสปาร์ติก
6.65
แอล-ซิสเตอีน เอชซีแอล เอช₂โอ
17.56
แอล-ซิสเตอีน 2 เฮกซอนไฮโดรคลอไรด์
31.29
แอล-กลูตามิก แอซิด
7.35
แอล-กลูตามีน
365.00
แอล-ฮิสทิดีน เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ ไฮโดรเจน 2 โมเลกุล
31.48
แอล-ไอโซลิวซีน
54.47
แอล-ลิวซีน
ห้าสิบเก้าจุดศูนย์ห้า
แอล-ไลซีน เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
91.25
แอล-เมไทโอนีน
17.24
แอล-ฟีนิลอะลานีน
35.48
แอล-โพรลีน
17.25
แอล-ซีรีน
26.25
แอล-ทรีโอนีน
53.45
แอล-ทริปโตเฟน
9.02
แอล-ไทโรซีน 2 โซเดียม 2 น้ำ 2
55.79
แอล-วาลีน
52.85
วิตามิน
ดี-ไบโอติน
0.0035
โคลีนคลอไรด์
แปดจุดเก้าแปด
ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนต
2.24
กรดโฟลิก
2.66
ไมโอ-อิโนซิทอล
12.60
นิโคตินาไมด์
2.02
ไพริดอกซีน เฮเซ็กซ์คลอไรด์
0.031
ไพริดอกซัล เฮซิลไฮโดรคลอไรด์
2.00
ไรโบฟลาวิน
0.219
ไทอามีน เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
2.17
วิตามินบี12
0.68
เกลืออนินทรีย์
แคลเซียมคลอไรด์ 2 ไฮโดรเจน 2 ออกไซด์
หนึ่งร้อยห้าสิบสี่จุดห้าศูนย์
CuSO4 5 H2O
0.0013
เหล็ก(II)ไนเตรต 9 น้ำ
0.05
เฟอรัสซัลเฟต 7 น้ำ
0.417
โพแทสเซียมคลอไรด์
311.80
แมกนีเซียมคลอไรด์ 6 น้ำ
61.20
แมกนีเซียมซัลเฟต 7 น้ำ
หนึ่งร้อยจุดศูนย์ศูนย์
NaCl
หกพันเก้าร้อยเก้าสิบหกจุดศูนย์ศูนย์
โซเดียมไบคาร์บอเนต
หนึ่งพันสองร้อยบาท
Na2HPO4
เจ็ดสิบเอ็ดจุดศูนย์สอง
NaH2PO4 2 H2O
เจ็ดสิบจุดแปดเจ็ด
ซิงค์ซัลเฟต 7 ไฮโดรเจน 2 โอ
0.432
ส่วนประกอบอื่น ๆ
ดี-กลูโคส
3151.00
ไฮโปแซนธิน
2.40
HEPES
3,574.50
กรดไลโนเลอิก
0.042
กรดไลโปอิก
0.105
โซเดียมฟีนอลเรด
แปดจุดหกสาม
พุตเทรสซีน 2 เฮกซ์อะมิโนไคด์
0.081
โซเดียมไพรูเวต
ห้าสิบห้าบาทถ้วน
ไทมีดีน
0.365
- 0.02 ที่ 20-25°C. แต่ละล็อตได้รับการทดสอบความปราศจากเชื้อและความไม่มีเชื้อราและแบคทีเรียแล้ว การบำรุงรักษา เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด การแช่แข็งและการอุ่นถึง +37°C จะลดคุณภาพของผลิตภัณฑ์ ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37°C หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ (เช่น เครื่องใช้ไมโครเวฟ) หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารละลาย ให้ตักปริมาณที่ต้องการออกจากขวดแล้วอุ่นให้อยู่ในอุณหภูมิห้อง อายุการเก็บรักษาสำหรับทุกชนิดของอาหารเลี้ยงเชื้อ ยกเว้นอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐาน คือ 6 ถึง 8 สัปดาห์นับตั้งแต่วันที่เปิดใช้ องค์ประกอบ ส่วนประกอบ มิลลิกรัมต่อลิตร เกลืออนินทรีย์แคลเซียมคลอไรด์ x 2H2Oหนึ่งร้อยสามสิบสองจุดศูนย์ศูนย์ แมกนีเซียมซัลเฟต97.67 โพแทสเซียมคลอไรด์สี่ร้อยศูนย์ศูนย์ โซเดียมคลอไรด์หกพันสี่ร้อยหกสิบ ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (ชนิดไม่มีน้ำ)504.00 ส่วนประกอบอื่น ๆD(+)-กลูโคส (ไม่มีน้ำ)สามพันบาทถ้วน กลูตาไธโอน (รีดิวซ์)0.50 เพปโทนเนื้อหกร้อยบาทถ้วน โซเดียมฟีนอลเรดสิบเอ็ดโมง กรดอะมิโนแอล-อะลานีน13.36 แอล-อาร์จินีน x เฮสเพอร์ไฮโดรคลอไรด์42.14 แอล-แอสพาราจีน x น้ำสี่สิบห้าจุดศูนย์สาม กรดแอล-แอสปาร์ติก19.97 แอล-ซิสเตอีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ31.75 แอล-กลูตามีน (เสถียร)219.15 กรดแอล-กลูตามิก22.07 ไกลซีน7.51 แอล-ฮีสติดีน x เกลือไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ20.96 แอล-ไฮดรอกซีโพรลีน19.67 แอล-ไอโซลิวซีน39.36 แอล-ลิวซีน39.36 แอล-ไลซีน x เอชซีแอล36.54 แอล-เมไทโอนีน14.92 แอล-ฟีนิลอะลานีน16.52 แอล-โพรลีน17.27 แอล-ซีรีน26.28 แอล-ทรีโอนีน17.87 แอล-ทริปโตเฟน3.06 แอล-ไทโรซีน ไดโซเดียมซัลต์26.10 แอล-วาลีน17.57 วิตามินกรดพารา-อะมิโนเบนโซอิกหนึ่งจุดศูนย์ศูนย์ กรดแอสคอร์บิก0.56 ดี(+)-ไบโอติน0.20 ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนต0.20 โคลีนคลอไรด์ห้าโมงตรง กรดโฟลิกสิบโมง ไมโอ-อิโนซิทอลสามสิบหกจุดศูนย์ศูนย์ นิโคตินาไมด์0.50 กรดนิโคตินิก0.50 ไพริดอกซัล เฮเซียมคลอไรด์0.50 ไพริดอกซีน เฮเซ็กซ์คลอไรด์0.50 ไรโบฟลาวิน0.20 ไทอามีน เฮกซะไฮโดรคลอไรด์0.20 วิตามินบี122.00
Medium 199 มีการใช้งานที่หลากหลายในภาคสนาม สามารถรักษาคอมเพล็กซ์ของเซลล์ไข่และเซลล์รอบไข่ (COC) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์ไข่ในหลอดทดลองนอกจากนี้ ยังใช้ในการล้างสายดูดระหว่างการเก็บไข่จากวัวพันธุ์เยอรมันโฮลสไตน์อีกด้วย นอกจากนี้ สารอาหาร 199 ยังเป็นสารอาหารที่ยอดเยี่ยมสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์เยื่อบุผนังหลอดเลือดหัวใจที่ได้จากหนูอีกด้วย การใช้งานเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงความหลากหลายและความสามารถในการปรับตัวของสารอาหาร 199 ต่อความต้องการในการทดลองต่างๆ
ประวัติศาสตร์
การพัฒนาของ Medium 199 ในทศวรรษ 1950 ถือเป็นความก้าวหน้าครั้งสำคัญในสื่อเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ก่อนที่จะมีการแนะนำ Medium 199 สื่อเพาะเลี้ยงหลายชนิดต้องพึ่งพาผลิตภัณฑ์ที่ได้จากสัตว์และสารสกัดจากเนื้อเยื่อ อย่างไรก็ตาม Morgan และคณะได้ปฏิวัติวงการด้วยการคิดค้นแหล่งสารอาหารที่กำหนดไว้อย่างสมบูรณ์สำหรับเซลล์เพาะเลี้ยง ผ่านการทดลองที่ผสมผสานวิตามิน กรดอะมิโน และปัจจัยอื่นๆ พวกเขาได้ค้นพบคุณสมบัติส่งเสริมการเจริญเติบโตที่โดดเด่นของ Medium 199
การควบคุมคุณภาพ
pH = 7.2 +/
- 0.02 ที่ 20-25°C.
แต่ละล็อตได้รับการทดสอบความปราศจากเชื้อและความไม่มีเชื้อราและแบคทีเรียแล้ว
การบำรุงรักษา
เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด การแช่แข็งและการอุ่นถึง +37°C จะลดคุณภาพของผลิตภัณฑ์
ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37° C หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ (เช่น เตาไมโครเวฟ)
หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารละลาย ให้ตักปริมาณที่ต้องการออกจากขวด แล้วนำไปอุ่นที่อุณหภูมิห้อง
อายุการเก็บรักษาสำหรับทุกชนิดของอาหารเลี้ยงเชื้อ ยกเว้นอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐาน คือ 8 สัปดาห์นับตั้งแต่วันที่ผลิต
องค์ประกอบ
ส่วนประกอบ
มิลลิกรัมต่อลิตร
เกลืออนินทรีย์
แคลเซียมคลอไรด์ x 2H2O
264,92
เหล็ก (III) นิเตรต x 9H2O
0.72
แมกนีเซียมซัลเฟต
97,67
โพแทสเซียมคลอไรด์
สี่ร้อย
โซเดียมอะซิเตต x 3H2O
82,95
โซเดียมคลอไรด์
หกพันแปดร้อยบาท
โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต x H2O
หนึ่งร้อยสี่สิบพัน
ส่วนประกอบอื่น ๆ
อะดีนีนซัลเฟต
10,000
AMP
0.20
เอทีพี
หนึ่งพัน
โคเลสเตอรอล
0.20
2'-ดีออกซีไรโบส
0.50
กลูโคส (D(+)-กลูโคส) ชนิดไม่มีน้ำ
หนึ่งพันบาทถ้วน
กลูตาไธโอน (สีแดง)
0.05
กัวนีน x เอชคลอไรด์
0.30
ไฮโปแซนทีน
0.30
ฟีโนล เรด
10,000
ดี-ไรโบส
0.50
ไทมีน
0.30
ทวีน 80
4,90
ยูราซิล
0.30
แซนทีน
0.30
โซเดียมไบคาร์บอเนต
สองพันสองร้อยบาท
กรดอะมิโน
แอล-อะลานีน
ยี่สิบห้าพัน
แอล-อาร์จินีน x เฮกซะไฮเดรต
เจ็ดสิบพัน
กรดแอล-แอสพาร์ติก
สามหมื่น
แอล-ซิสเตอีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ
0,10
แอล-ซิสตีน
ยี่สิบพัน
แอล-กลูตามีน คงตัว
หนึ่งแสนสี่หมื่นเก้าพัน
กรดแอล-กลูตามิก
67,00
ไกลซีน
ห้าสิบพัน
แอล-ฮิสทิดีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ
21,88
แอล-ไฮดรอกซีโพรลีน
10,000
แอล-ไอโซลิวซีน
ยี่สิบพัน
แอล-ลิวซีน
หกสิบพัน
แอล-ไลซีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
เจ็ดสิบพัน
แอล-เมไทโอนีน
15,000
แอล-ฟีนิลอะลานีน
ยี่สิบห้าพัน
แอล-โพรลีน
สี่สิบพัน
แอล-ซีรีน
ยี่สิบห้าพัน
แอล-ทรีโอนีน
สามหมื่น
แอล-ทริปโตเฟน
10,000
แอล-ไทโรซีน
สี่สิบ,00
แอล-วาลีน
ยี่สิบห้าพัน
วิตามิน
กรดอะมิโนเบนโซอิก 4
0.05
กรดแอสคอร์บิก
0.05
ดี(+)-ไบโอติน
0.01
แคลซิเฟอรอล
0,10
ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนต
0.01
โคลีนคลอไรด์
0.50
กรดโฟลิก
0.01
ไมโอ-อิโนซิทอล
0.05
เมนาไดโอน
0.01
กรดนิโคตินิก
0.025
นิโคตินาไมด์
0.025
ไพริดอกซาล x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
0.025
ไพริดอกโซล x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
0.025
ไรโบฟลาวิน
0.01
เกลือดิบฟอสเฟตของดีแอล-แอลฟา-โทโคเฟอรอล
0.01
ไทอามีน x เฮกซะไฮโดรคลอไรด์
0.01
วิตามินเออะซิเตต
0,14
IMDM เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีความหนาแน่นสูงและเพิ่มจำนวนอย่างรวดเร็ว รวมถึงเซลล์ Jurkat, COS-7 และเซลล์แมโครฟาจ การปรับเปลี่ยน IMDM ต่างๆ ที่มีให้สำหรับการใช้งานเพาะเลี้ยงเซลล์หลากหลายประเภทสามารถพบได้โดยใช้เครื่องมือเลือกสื่อ สื่อเหลวให้สารอาหารที่จำเป็นสำหรับการใช้งานเพาะเลี้ยงเซลล์ทุกประเภท สื่อเพาะเลี้ยงเซลล์คุณภาพสูงของเราแต่ละชนิดผลิตตามสูตรที่เผยแพร่ครั้งแรกหรือการปรับเปลี่ยนที่จำเป็นเพื่อให้ได้ประสิทธิภาพและความเสถียรที่สม่ำเสมอของสื่อเพาะเลี้ยง
IMDM เทียบกับ DMEM
IMDM ประกอบด้วยโพแทสเซียมไนเตรตแทนที่เหล็กไนเตรต และ HEPES และโซเดียมไพรูเวต ส่วนประกอบเพิ่มเติมใน IMDM ทำให้เหมาะสมกับเซลล์ชนิดเฉพาะและการใช้งานเฉพาะมากกว่า DMEM
IMDM เทียบกับ RPMI
IMDM และ RPMI มีสูตรที่แตกต่างกันซึ่งอาจมีความเกี่ยวข้องกับการกระตุ้นด้วย PMA/ไอโอโนไมซิน ความแตกต่างที่สำคัญประการหนึ่งคือความเข้มข้นของ Ca2+ ในขณะที่ RPMI มี Ca2+ อยู่ที่ 0.42 mM IMDM มีอยู่ที่ 1.49 mM
การควบคุมคุณภาพ
pH = 7.2 +/
- 0.02 ที่ 20-25°C.
แต่ละล็อตได้รับการทดสอบความปราศจากเชื้อและความไม่มีเชื้อราและแบคทีเรียแล้ว
การบำรุงรักษา
เก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ +2°C ถึง +8°C ในที่มืด การแช่แข็งและการอุ่นถึง +37°C จะลดคุณภาพของผลิตภัณฑ์
ห้ามให้ความร้อนกับตัวกลางเกิน 37° C หรือใช้แหล่งความร้อนที่ไม่สามารถควบคุมได้ (เช่น เตาไมโครเวฟ)
หากจะใช้เพียงบางส่วนของสารละลาย ให้ตักปริมาณที่ต้องการออกจากขวดแล้วนำไปอุ่นที่อุณหภูมิห้อง
อายุการเก็บรักษาสำหรับทุกชนิดของอาหารเลี้ยงเชื้อ ยกเว้นอาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐาน คือ 8 สัปดาห์นับตั้งแต่วันที่ผลิต
องค์ประกอบ
ส่วนประกอบ
มิลลิกรัมต่อลิตร
เกลืออนินทรีย์
แคลเซียมคลอไรด์ x 2 H2O
สองร้อยสิบเก้าพันเก้าร้อย
โพแทสเซียมคลอไรด์
สามร้อยสามสิบ
โพแทสเซียมไนเตรต
0.076
แมกนีเซียมซัลเฟต อนีดรัส
97,73
โซเดียมคลอไรด์
สี่พันห้าร้อยห้าบาท
โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต ชนิดไม่มีน้ำ
หนึ่งร้อยเก้าหมื่นเก้าร้อย
โซเดียมเซเลไนต์
0.02
ส่วนประกอบอื่น ๆ
กลูโคส (D(+)-) อนไฮเดรต
สี่พันห้าร้อยบาท
HEPES
ห้าพันเก้าร้อยห้าสิบแปดบาท
โซเดียมไพรูเวต
หนึ่งร้อยสิบ
ฟีโนลเรด
15,000
กรดอะมิโน
แอล-อะลานีน
ยี่สิบห้าพัน
แอล-อาร์จินีน x เฮสเพอร์ไรด์
แปดสิบสี่,00
แอล-แอสพาราจีน x น้ำ
ยี่สิบห้าพัน
กรดแอล-แอสปาร์ติก
สามสิบพัน
แอล-ซิสเตอีน x 2HCl
91,24
แอล-กลูตามีน
584,00
กรดแอล-กลูตามิก
เจ็ดสิบห้าพัน
ไกลซีน
สามสิบพัน
แอล-ฮิสทิดีน x เกลือไฮโดรคลอไรด์ x น้ำ
สี่สิบสองพัน
แอล-ไอโซลิวซีน
หนึ่งร้อยสี่พันแปดร้อย
แอล-ลิวซีน
หนึ่งร้อยสี่พันแปดร้อย
แอล-ไลซีน x เอชซีแอล
หนึ่งร้อยสี่สิบหกพันสองร้อย
แอล-เมไทโอนีน
สามหมื่น
แอล-ฟีนิลอะลานีน
หกสิบหกพัน
แอล-โพรลีน
สี่สิบพัน
แอล-ซีรีน
สี่สิบสองพัน
แอล-ทรีโอนีน
95,20
แอล-ทริปโตเฟน
16,000
แอล-ไทโรซีน x 2Na
หนึ่งร้อยสี่พันสองร้อย
แอล-วาลีน
93,60
วิตามิน
ดี(+)-ไบโอติน
0.013
ดี-แคลเซียมแพนโทเธเนต
สี่พัน
โคลีนคลอไรด์
สี่พัน
กรดโฟลิก
สี่พัน
ไมโอ-อิโนซิทอล
เจ็ดพันสองร้อย
สื่อเพาะเลี้ยงเซลล์: ภาพรวม
ในสาขาวิทยาศาสตร์ชีวภาพ หนึ่งในวิธีการที่สำคัญที่สุดคือการเพาะเลี้ยงเซลล์ การนำเซลล์ เนื้อเยื่อ หรืออวัยวะออกจากสัตว์หรือพืช และการนำเซลล์ เนื้อเยื่อ หรืออวัยวะเหล่านั้นไปปลูกฝังไว้ในสภาพแวดล้อมเทียมที่เอื้ออำนวยต่อการดำรงชีวิตและ/หรือการเจริญเติบโตของสิ่งมีชีวิตนั้น ๆ คือสิ่งที่หมายถึงคำว่า "การเพาะเลี้ยงเซลล์" ความต้องการด้านสิ่งแวดล้อมพื้นฐานสำหรับการพัฒนาเซลล์ที่เหมาะสมที่สุดคือ การควบคุมอุณหภูมิ พื้นผิวสำหรับเซลล์ยึดเกาะ สารอาหารที่เพียงพอสำหรับการเจริญเติบโต และตู้บ่มที่สามารถรักษาค่า pH และออสโมลาริตีที่เหมาะสมได้ เซลล์ต้องมีสภาพแวดล้อมเหล่านี้เพื่อให้สามารถเจริญเติบโตได้เต็มศักยภาพ
การเลือกใช้สื่อการเจริญเติบโตที่เหมาะสมสำหรับการเพาะเลี้ยงในหลอดทดลองเป็นขั้นตอนในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีความสำคัญและจำเป็นอย่างยิ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อ หรือที่รู้จักกันในชื่อ สารอาหารเพาะเลี้ยง เป็นของเหลวหรือเจลที่ถูกสังเคราะห์ขึ้นเพื่อส่งเสริมการพัฒนาของสิ่งมีชีวิตในระดับจุลทรรศน์ เซลล์ หรือคล้ายพืช อาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์มักมีแหล่งพลังงานและสารที่เพียงพอซึ่งควบคุมวงจรชีวิตของเซลล์ ส่วนประกอบหลักของอาหารเลี้ยงเชื้อประกอบด้วยกรดอะมิโน วิตามิน เกลือแร่ กลูโคส และซีรัม ซีรัมถูกเติมลงในอาหารเลี้ยงเชื้อเนื่องจากทำหน้าที่เป็นแหล่งของปัจจัยการเจริญเติบโต ฮอร์โมน และปัจจัยการยึดเกาะ นอกจากให้สารอาหารแล้ว อาหารเลี้ยงเชื้อยังช่วยรักษาค่า pH และระดับออสโมลาลิตี้อีกด้วย
ประเภทของตัวกลางที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์
ทั้งเซลล์มนุษย์และเซลล์สัตว์มีศักยภาพที่จะถูกเพาะเลี้ยงในทั้งสภาพแวดล้อมเทียมหรือสังเคราะห์ หรือในสภาพแวดล้อมธรรมชาติที่เสริมด้วยธาตุธรรมชาติ ในต่อไปนี้ เราจะให้คุณทราบถึงภาพรวมของประเภทของสภาพแวดล้อมที่มีให้ใช้ในปัจจุบัน
สื่อธรรมชาติ
ของเหลวทางชีวภาพที่สามารถพบได้ในสื่อธรรมชาติได้เพียงของเหลวที่มีอยู่ในสภาพธรรมชาติเท่านั้น สื่อธรรมชาติมีประโยชน์มากและง่ายต่อการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์หลากหลายชนิดอย่างมาก การไม่เข้าใจส่วนประกอบที่แน่ชัดซึ่งประกอบกันเป็นสื่อธรรมชาติเป็นปัจจัยหลักที่ทำให้ผลลัพธ์ที่ได้จากการใช้สื่อธรรมชาติมีความซ้ำซ้อนต่ำ
สื่อเทียม
การเตรียมสื่อเทียมหรือสังเคราะห์เกี่ยวข้องกับการเติมสารอาหาร (ทั้งอินทรีย์และอนินทรีย์) โปรตีนจากซีรัม คาร์โบไฮเดรต โคแฟคเตอร์ วิตามิน และเกลือ รวมถึงก๊าซ O2 และ CO2 ในเฟสแก๊ส [1]
มีการพัฒนาสื่อเทียมหลากหลายประเภทขึ้นเพื่อตอบสนองหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งหน้าที่ดังต่อไปนี้: 1) การอยู่รอดทันที (สารละลายเกลือสมดุลที่มีค่า pH และความดันออสโมติกที่แม่นยำ) 2) การอยู่รอดเป็นเวลานาน (สารละลายเกลือสมดุลที่เสริมด้วยสูตรสารเคมีอินทรีย์และ/หรือซีรัมที่แตกต่างกัน) 3) การพัฒนาอย่างไม่มีกำหนด 4) ฟังก์ชันเฉพาะทาง
มีการจำแนกประเภทของสื่อเทียมออกเป็นสี่ประเภทที่แตกต่างกัน:
ซีรั่มที่มีสารอาหาร
ชนิดของสารเสริมที่พบได้บ่อยที่สุดในอาหารเลี้ยงเซลล์สัตว์ที่ใช้ในการเพาะเลี้ยงคือเซรั่มจากเลือดของลูกวัวในครรภ์ (fetal bovine serum) โดยจะถูกเติมลงในอาหารเลี้ยงเซลล์เพื่อเป็นสารเสริมที่มีต้นทุนต่ำ เพื่อให้ได้สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากทำหน้าที่เป็นตัวขนส่งหรือตัวจับสารอาหารที่ไม่เสถียรหรือไม่ละลายน้ำ ฮอร์โมนและปัจจัยการเจริญเติบโต ตัวยับยั้งโปรตีเอส และสารอื่นๆ แล้ว ซีรั่มยังจับและทำให้โมเลกุลที่เป็นอันตรายเป็นกลางอีกด้วย
อาหารเลี้ยงเชื้อปราศจากซีรัม
การมีอยู่ของซีรัมในสื่อมีข้อเสียหลายประการและมีศักยภาพที่จะก่อให้เกิดข้อผิดพลาดสำคัญในการตีความในการวิจัยทางภูมิคุ้มกัน [2, 3] มีการสร้างสื่อปราศจากซีรัมหลากหลายรูปแบบขึ้นมาแล้ว [4, 5] สื่อเหล่านี้มักถูกพัฒนาขึ้นเป็นพิเศษเพื่อสนับสนุนการเพาะเลี้ยงของเซลล์ชนิดเดียว เช่น Knockout Serum Replacement และ Knockout DMEM จาก Thermo Fisher Scientific และ mTESR medium จาก Stem Cell Technologies [6] สำหรับเซลล์ต้นกำเนิด [7]
นอกจากนี้ สื่อเหล่านี้ยังประกอบด้วยปริมาณที่กำหนดไว้ของปัจจัยการเจริญเติบโตที่บริสุทธิ์, ไลโปโปรตีน, และโปรตีนอื่น ๆ ซึ่งโดยปกติแล้วจะได้รับจากซีรัม [8] สื่อเหล่านี้มักถูกเรียกว่า "สื่อเพาะเลี้ยงที่กำหนดไว้" เนื่องจากส่วนประกอบที่ประกอบขึ้นเป็นสื่อเหล่านี้เป็นที่เข้าใจกันดี
มีเดียที่กำหนดด้วยสารเคมี
สื่อเหล่านี้ประกอบด้วยส่วนประกอบอนินทรีย์และอินทรีย์ที่มีความบริสุทธิ์สูงมากซึ่งไม่ได้รับการปนเปื้อนจากสิ่งแปลกปลอมใด ๆ ทั้งสิ้น นอกจากนี้ยังอาจมีการเติมโปรตีนบริสุทธิ์ เช่น ปัจจัยการเจริญเติบโต ลงไปอีกด้วย
การดัดแปลงพันธุกรรมของแบคทีเรียหรือยีสต์ ร่วมกับการเติมกรดไขมัน วิตามิน คอเลสเตอรอล และกรดอะมิโนเฉพาะบางชนิด ส่งผลให้เกิดการผลิตส่วนประกอบของสิ่งเหล่านี้ [9]
อาหารเลี้ยงเชื้อปราศจากโปรตีน
อาหารเลี้ยงเชื้อที่ไม่มีโปรตีนคืออาหารที่ไม่มีการเติมโปรตีนเลย และประกอบด้วยองค์ประกอบที่ไม่ใช่โปรตีนเท่านั้น เมื่อเปรียบเทียบกับอาหารที่มีเซรั่มเติมเข้าไป การใช้สื่อที่ไม่มีโปรตีนเติมจะส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์และการแสดงออกของโปรตีนได้ดีขึ้น และทำให้การแยกผลิตภัณฑ์ที่เกิดขึ้นในกระบวนการต่อไปง่ายขึ้น [10-12] โปรตีนไม่ได้รวมอยู่ในสูตรอาหารเช่น MEM และ RPMI-1640 อย่างไรก็ตาม อาจมีการให้สารอาหารเสริมโปรตีนหากจำเป็น
อาหารเลี้ยงเชื้อและส่วนประกอบพื้นฐาน
อาหารเลี้ยงเชื้อเชิงพาณิชย์สามารถซื้อได้ทั้งในรูปแบบผงหรือของเหลว และมักประกอบด้วยสารอาหารหลากหลายชนิด เช่น กรดอะมิโน กลูโคส เกลือแร่ วิตามิน และสารอาหารเสริมอื่น ๆ
ความต้องการสำหรับส่วนประกอบเหล่านี้แตกต่างกันสำหรับแต่ละสายเซลล์ และความแตกต่างเหล่านี้เป็นสาเหตุให้เกิดจำนวนสูตรอาหารเลี้ยงเชื้อที่แตกต่างกันมากมาย แต่ละส่วนประกอบมีหน้าที่เฉพาะ ซึ่งจะอธิบายในย่อหน้าต่อไปนี้:
ระบบบัฟเฟอร์
เพื่อรักษาสภาพการเจริญเติบโตที่เหมาะสม pH ต้องได้รับการควบคุม ซึ่งมักทำโดยหนึ่งในสองระบบบัฟเฟอร์:
ระบบบัฟเฟอร์ธรรมชาติ
อัตราส่วนของ CO2/H2CO3 ในบรรยากาศเท่ากับอัตราส่วนในตัวกลาง ซึ่งสร้างกลไกการบัฟเฟอร์ตามธรรมชาติ เพื่อรักษาการบัฟเฟอร์ตามธรรมชาตินี้ไว้ สารละลายเพาะเลี้ยงต้องถูกเก็บไว้ในสภาพแวดล้อมที่มีอากาศประกอบด้วย CO2 5-10% ซึ่งมักทำได้โดยใช้ตู้เพาะเลี้ยงที่มี CO2 หนึ่งในสิ่งที่ดีที่สุดเกี่ยวกับการใช้บัฟเฟอร์ธรรมชาติคือราคาถูกและปลอดภัย
HEPES
การบัฟเฟอร์ทางเคมีโดยใช้ซวิตไทรออน HEPES มีความสามารถในการบัฟเฟอร์สูงกว่าในช่วง pH 7.2-7.4 และไม่จำเป็นต้องใช้สภาพแวดล้อมที่มีก๊าซควบคุม สำหรับเซลล์บางประเภท การใช้ HEPES ในปริมาณมากเกินไปอาจเป็นอันตรายได้ สื่อที่มี HEPES เช่นเดียวกันนั้นมีความไวต่อผลกระทบจากแสงฟลูออเรสเซนต์มากขึ้นอย่างมาก [13]
ฟีโนล เรด
สารบ่งชี้ค่า pH ฟีนอลเรดมักถูกใส่ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ ช่วยให้สามารถตรวจสอบค่า pH ได้อย่างต่อเนื่อง เมื่อเซลล์ขยายตัว สารเมตาบอไลต์ที่ผลิตโดยเซลล์เหล่านี้จะทำให้ค่า pH เปลี่ยนไป และส่งผลให้สีของอาหารเลี้ยงเชื้อก็เปลี่ยนไปด้วย ฟีโนลเรดมีผลสองประการต่อสีของอาหารเลี้ยงเชื้อ โดยเปลี่ยนเป็นสีเหลืองเมื่อมีค่า pH เป็นกรด และเปลี่ยนเป็นสีม่วงเมื่อมีค่า pH เป็นด่าง ที่ค่า pH 7.4 ซึ่งเป็นค่าที่เหมาะสมสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ อาหารเลี้ยงเชื้อจะปรากฏเป็นสีแดงเรืองแสง
แต่ฟีโนลเรดมีข้อเสียบางประการ: ประการแรก ฟีโนลเรดสามารถจำลองการทำงานของฮอร์โมนสเตียรอยด์หลายชนิดได้ โดยเฉพาะเอสโตรเจน [14] ดังนั้น เมื่อศึกษาเซลล์ที่ไวต่อเอสโตรเจน เช่น เนื้อเยื่อเต้านม จึงแนะนำให้ใช้สารอาหารที่ไม่มีฟีโนลเรด สมดุลโซเดียม-โพแทสเซียมถูกรบกวนจากการมีฟีนอลเรดในสูตรปราศจากซีรัมหลายชนิด การเติมซีรัมหรือฮอร์โมนต่อมใต้สมองของวัวลงในมีเดียอาจช่วยต้านผลนี้ได้ [15] ประการที่สาม การตรวจพบในทดลองโฟลว์ไซโตเมตริกถูกขัดขวางจากการมีฟีนอลเรด
เกลืออนินทรีย์
สื่อที่มีเกลืออนินทรีย์ เช่น ไอออนของโซเดียม โพแทสเซียม และแคลเซียม ช่วยรักษาสมดุลออสโมติกและควบคุมศักย์เยื่อหุ้มเซลล์
กรดอะมิโน
เนื่องจากกรดอะมิโนเป็นองค์ประกอบพื้นฐานของโปรตีน จึงเป็นองค์ประกอบที่จำเป็นของทุกสื่อการเจริญเติบโตของเซลล์ที่เคยคิดค้นขึ้นมา เนื่องจากเซลล์ไม่สามารถผลิตกรดอะมิโนบางชนิดได้เอง จึงเป็นสิ่งสำคัญที่สื่อเพาะเลี้ยงจะต้องมีกรดอะมิโนที่จำเป็นรวมอยู่ด้วย พวกมันจำเป็นสำหรับการเพิ่มจำนวนของเซลล์ และความเข้มข้นที่พวกมันมีอยู่จะกำหนดความหนาแน่นสูงสุดของเซลล์ที่สามารถเกิดขึ้นได้ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง แอล-กลูตามีน ซึ่งเป็นกรดอะมิโนที่จำเป็น มีความสำคัญอย่างยิ่ง
แอล-กลูตามีนทำหน้าที่เป็นแหล่งพลังงานรองสำหรับการเผาผลาญและช่วยให้นิโตรเจนในการผลิต NAD, NADPH และนิวคลีโอไทด์ เนื่องจากแอล-กลูตามีนเป็นกรดอะมิโนที่ไม่เสถียรซึ่งเมื่อเวลาผ่านไปจะเปลี่ยนเป็นรูปแบบที่เซลล์ไม่สามารถใช้ได้ จึงจำเป็นต้องให้แอล-กลูตามีนแก่สื่อ
นอกจากนี้ กรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นอาจถูกเติมลงในอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อเติมเต็มกรดอะมิโนที่ถูกใช้ไปตลอดกระบวนการเจริญเติบโต การเจริญเติบโตของเซลล์จะเพิ่มขึ้นและความสามารถในการดำรงชีวิตของเซลล์จะเพิ่มขึ้นเมื่ออาหารเลี้ยงเชื้อถูกเติมด้วยกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็น
คาร์โบไฮเดรต
คาร์โบไฮเดรตในรูปแบบของน้ำตาลเป็นแหล่งพลังงานหลัก สื่อหลายชนิดยังรวมถึงมอลโตสและฟรุกโตส นอกเหนือจากน้ำตาลที่พบได้ทั่วไปอย่างกลูโคสและกาแลคโตส
โปรตีนและเปปไทด์
อัลบูมิน, ทรานส์เฟอริน, และไฟโบรเนกติน เป็นโปรตีนและเปปไทด์ที่ใช้กันมากที่สุด พวกมันมีความสำคัญเป็นพิเศษในสื่อที่ไม่มีซีรัม อัลบูมิน, ทรานส์เฟอริน, อะโปรตีนิ, เฟทูอิน, และไฟโบรเนกติน เป็นโปรตีนบางชนิดที่อาจพบได้ในซีรัม ซึ่งเป็นแหล่งโปรตีนที่อุดมสมบูรณ์
อัลบูมินเป็นโปรตีนหลักที่พบในเลือด โดยมีหน้าที่จับและลำเลียงสารต่าง ๆ เช่น น้ำ เกลือแร่ กรดไขมันอิสระ ฮอร์โมน และวิตามิน ระหว่างอวัยวะและเซลล์ต่าง ๆ ความสามารถของอัลบูมินในการจับกับสารเคมีทำให้เป็นทางเลือกที่มีประสิทธิภาพในการกำจัดสารประกอบที่เป็นอันตรายออกจากสารละลายที่ใช้เพาะเลี้ยงเซลล์
อะโปรทินินเป็นสารป้องกันในระบบเพาะเลี้ยงเซลล์ เนื่องจากมีความเสถียรที่ค่า pH ที่เป็นกลางและกรด รวมถึงทนต่ออุณหภูมิสูงและการทำลายที่อาจเกิดจากเอนไซม์โปรตีโอไลติก นอกจากนี้ยังสามารถยับยั้งเอนไซม์เซรีนโปรตีเอสหลายชนิด รวมถึงทริปซิน
ฟีทูอินเป็นไกลโคโปรตีนที่อาจตรวจพบได้ในปริมาณที่สูงกว่าในซีรัมของสัตว์ในครรภ์และสัตว์แรกเกิดเมื่อเทียบกับซีรัมของสัตว์ที่โตเต็มวัย นอกจากนี้ ฟีทูอินยังทำหน้าที่เป็นสารยับยั้งเซรีนโปรตีเอส โปรตีนไฟโบรเนกตินเป็นองค์ประกอบที่สำคัญในกระบวนการยึดเกาะของเซลล์ ทรานส์เฟอร์รินเป็นโปรตีนที่ทำหน้าที่ขนส่งเหล็กและมีหน้าที่นำเหล็กไปยังเยื่อหุ้มเซลล์
กรดไขมันและไขมัน
พวกมันมีบทบาทสำคัญในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ไม่มีซีรัมเมื่อไม่มีซีรัม
วิตามิน
วิตามินหลายชนิดมีความจำเป็นต่อการพัฒนาและการเพิ่มจำนวนของเซลล์ วิตามินไม่สามารถผลิตได้ในปริมาณที่เพียงพอโดยเซลล์ ดังนั้นจึงมีความสำคัญในวัฒนธรรมเนื้อเยื่อในฐานะอาหารเสริม
ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ ซีรัมเป็นแหล่งวิตามินหลัก อย่างไรก็ตาม สารอาหารยังได้รับการเติมวิตามินต่างๆ เพื่อให้เหมาะสมกับชนิดของเซลล์ที่ต้องการ โดยทั่วไป วิตามินกลุ่มบีจะถูกใช้เพื่อกระตุ้นการเจริญเติบโต
ธาตุอาหารรอง
ธาตุเคมี เช่น ทองแดง สังกะสี ซีลีเนียม และสารตัวกลางของกรดไตรคาร์บอกซิลิก เป็นที่รู้จักกันในชื่อธาตุอาหารรอง ธาตุอาหารรองมักถูกเติมลงในสื่อที่ไม่รวมซีรัมเพื่อทดแทนธาตุที่มักพบในซีรัม ธาตุเหล่านี้เป็นองค์ประกอบทางเคมีที่สำคัญซึ่งจำเป็นต่อการพัฒนาของเซลล์ที่มีสุขภาพดี ปฏิกิริยาชีวเคมีหลายชนิดขึ้นอยู่กับสารอาหารรองบางชนิด เช่น การทำงานของเอนไซม์
อาหารเสริมขนาดกลาง
อาหารเลี้ยงเชื้อแบบสมบูรณ์ที่แนะนำสำหรับเซลล์ไลน์บางชนิดจำเป็นต้องมีส่วนประกอบเพิ่มเติมที่ไม่ได้อยู่ในอาหารพื้นฐานและซีรัม สารอาหารเสริมเหล่านี้ช่วยสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์และการทำงานเมตาบอลิซึมที่เหมาะสม
แม้ว่าฮอร์โมน ปัจจัยการเจริญเติบโต และโมเลกุลสัญญาณจะมีความจำเป็นต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์สายพันธุ์เฉพาะอย่างเหมาะสม แต่ควรปฏิบัติตามข้อควรระวังดังต่อไปนี้เสมอ: เนื่องจากการเติมสารเสริมอาจเปลี่ยนแปลงค่าออสโมลาริตีของอาหารเลี้ยงเซลล์ทั้งหมด ซึ่งอาจยับยั้งการพัฒนาของเซลล์ จึงควรตรวจสอบค่าออสโมลาริตีหลังจากเติมสารเสริมทุกครั้ง สำหรับเซลล์ไลน์ส่วนใหญ่ ค่าความเข้มข้นของออสโมลาลิตี้ที่เหมาะสมอยู่ระหว่าง 260 ถึง 320 mOSM/กก.
ยาปฏิชีวนะ
ยาปฏิชีวนะมักถูกนำมาใช้เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของสารปนเปื้อนจากแบคทีเรียและเชื้อรา [16] แม้ว่ายาปฏิชีวนะจะไม่ใช่สิ่งจำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ก็ตาม เนื่องจากยาปฏิชีวนะอาจปกปิดการปนเปื้อนของไมโคพลาสมาและแบคทีเรียที่ต้านทานยาได้ การใช้ยาปฏิชีวนะเป็นประจำจึงไม่ได้รับการแนะนำสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ [17, 18]
นอกจากนี้ ยาปฏิชีวนะอาจรบกวนการเผาผลาญของเซลล์ที่มีความไวต่อสิ่งกระตุ้นสูง การผสมผสานระหว่างเพนิซิลลินและสเตรปโตมัยซินที่ผลิตโดย MilliporeSigma และ Life Technologies มักถูกนำมาใช้ Plasmocin ได้ถูกนำมาใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ไลน์ของเนื้องอกในสมองชนิด glioma ได้แก่ TS603, TS516 และ BT260 [19] และได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพในการกำจัดเชื้อไมโคพลาสมาที่ปนเปื้อน (20)
ซีรั่ม
อัลบูมิน, ปัจจัยการเจริญเติบโต, และสารยับยั้งการเจริญเติบโต ล้วนมีอยู่ในซีรัม ซีรัมเป็นหนึ่งในส่วนประกอบที่สำคัญที่สุดของอาหารเลี้ยงเซลล์ เนื่องจากมันให้กรดอะมิโน, โปรตีน, วิตามิน (โดยเฉพาะวิตามินที่ละลายในไขมัน เช่น วิตามิน A, D, E, และ K), คาร์โบไฮเดรต, ไขมัน, ฮอร์โมน, ปัจจัยการเจริญเติบโต, แร่ธาตุ, และธาตุอาหารที่จำเป็นในปริมาณน้อย
ซีรั่มจากแหล่งรกและลูกวัวมักถูกนำมาใช้เพื่อส่งเสริมการพัฒนาของเซลล์เพาะเลี้ยง ซีรั่มจากรกเป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยปัจจัยการเจริญเติบโตและเหมาะสมสำหรับการโคลนนิ่งเซลล์และการพัฒนาเซลล์ที่มีความไวสูง เนื่องจากความสามารถในการส่งเสริมการเจริญเติบโตที่ลดลง ซีรั่มจากลูกวัวจึงถูกนำมาใช้ในการทดลองเกี่ยวกับการยับยั้งการเจริญเติบโตแบบสัมผัส อาหารเลี้ยงเชื้อปกติมักประกอบด้วยซีรัม 2% ถึง 10% การเติมซีรัมลงในอาหารเพาะเลี้ยงมีวัตถุประสงค์ดังต่อไปนี้ [21]:
-
เซรั่มนี้ส่งมอบสารอาหารที่จำเป็นสำหรับเซลล์ (ทั้งในรูปแบบที่ละลายอยู่ในสารละลายและที่เกาะติดกับโปรตีน)
-
ปัจจัยการเจริญเติบโตและฮอร์โมนหลายชนิดที่เกี่ยวข้องกับการส่งเสริมการเจริญเติบโตและการทำงานของเซลล์เฉพาะทางถูกบรรจุอยู่ในซีรัม
-
มันมีโปรตีนที่จับกับสารต่าง ๆ มากมาย เช่น อัลบูมินและทรานส์เฟอร์ริน ซึ่งทำหน้าที่ขนส่งสารเคมีอื่น ๆ เข้าสู่เซลล์ ตัวอย่างเช่น อัลบูมินจะลำเลียงไขมัน วิตามิน ฮอร์โมน ฯลฯ เข้าสู่เซลล์
-
นอกจากนี้ยังให้โปรตีน เช่น ไฟโบรเนคติน ซึ่งช่วยเพิ่มการยึดเกาะของเซลล์กับพื้นผิว นอกจากนี้ยังผลิตองค์ประกอบที่ช่วยในการแพร่กระจายซึ่งช่วยในการขยายตัวของเซลล์ก่อนการแบ่งตัว
-
มันส่งมอบโปรตีเอสอินฮิบิเตอร์ที่ป้องกันการสลายโปรตีนในเซลล์
-
นอกจากนี้ยังมีแร่ธาตุเช่น Na+, K+, Zn2+ และ Fe2+
-
มันช่วยเพิ่มความหนืดของสื่อ จึงช่วยปกป้องเซลล์จากการบาดเจ็บทางกลระหว่างการเขย่าในวัฒนธรรมแบบแขวนลอย
-
มันยังเป็นกันชนด้วย
เอกสารอ้างอิง
[1] มอร์แกน เจ, มอร์ตัน เอช, พาร์คเกอร์ อาร์. โภชนาการของเซลล์สัตว์ในวัฒนธรรมเนื้อเยื่อ; การศึกษาเบื้องต้นเกี่ยวกับอาหารสังเคราะห์. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. การดูดซับอย่างรวดเร็วของส่วนประกอบในซีรั่มลูกวัวโดยเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมในวัฒนธรรม. แหล่งที่มาที่เป็นไปได้ของสิ่งประดิษฐ์ในการศึกษาแอนติซีรั่มต่อแอนติเจนเฉพาะเซลล์. ภูมิคุ้มกันวิทยา. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. การเติมซีรัมลงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้ในการเตรียมสารแขวนลอยของเซลล์เป็นแหล่งที่มาของสิ่งผิดปกติในปฏิกิริยาที่เซลล์เป็นสื่อกลางซึ่งศึกษาโดยใช้การทดสอบต่อมน้ำเหลืองบริเวณขาหนีบ J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] มาริอาเนอี, มาริอาเนอา, มอนาโกเอ็ม, ลาลีอี, วิตัลีเอ็ม, ฟาชินีอา. สื่อเลี้ยงเซลล์เชิงพาณิชย์ปราศจากซีรัม: การเจริญเติบโตของไฮบริโดมาและการผลิตแอนติบอดีโมโนโคลนอล. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] บาร์นส์ ดี, ซาโตะ จี. วิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์ในอาหารเลี้ยงเชื้อปราศจากซีรัม. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O, และคณะ. HSP70 ชำระ RNA-free TDP-43 เข้าไปในเปลือกทรงกลมของเหลวภายในนิวเคลียสที่ไม่เป็นเนื้อเดียวกัน. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J, และคณะ. การชราภาพที่เกิดจากกลุ่มอาการดาวน์รบกวนโครงสร้างนิวเคลียร์ของเซลล์ต้นกำเนิดประสาท. เซลล์ สเต็มเซลล์. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. การแทนที่ซีรัมทั้งหมดด้วยอัลบูมิน, ทรานส์เฟอริน และลิพิดจากถั่วเหลืองในวัฒนธรรมของเซลล์บีลิมโฟไซต์ที่ตอบสนองต่อลิโพโพลีแซ็กคาไรด์. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. การปรับปรุงอย่างเป็นระบบของอาหารเลี้ยงเชื้อที่กำหนดด้วยสารเคมีและปราศจากโปรตีนสำหรับการเจริญเติบโตของไฮบริโดมาและการผลิตแอนติบอดีชนิดโมโนโคลนอล. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] ดาร์ฟเลอร์ เอฟ. สารอาหารปราศจากโปรตีนสำหรับการเจริญเติบโตของไฮบริโดมาและเซลล์อื่น ๆ ของระบบภูมิคุ้มกัน. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] บาร์นส์ ดี, ซาโตะ จี. การเพาะเลี้ยงเซลล์ปลอดซีรัม: แนวทางที่เป็นหนึ่งเดียว. เซลล์. 1980;22:649-55
[12] แฮมิลตัน ดับเบิลยู, แฮม อาร์. การเจริญเติบโตแบบโคลนของสายพันธุ์เซลล์แฮมสเตอร์จีนในอาหารเลี้ยงเซลล์ปราศจากโปรตีน. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. การวิเคราะห์ผลของสารพิษต่อเซลล์ของอาหารเพาะเลี้ยงที่มี HEPES ซึ่งได้รับแสง. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. ฟีนอลแดงในอาหารเลี้ยงเซลล์เนื้อเยื่อเป็นเอสโตรเจนอ่อน: ผลกระทบต่อการศึกษาเซลล์ที่ตอบสนองต่อเอสโตรเจนในวัฒนธรรม. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] คาร์เมียล เอส. การพัฒนาสื่อปลอดซีรัม. ใน: มาสเตอร์ เจอาร์ดับเบิลยู, บรรณาธิการ. การเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์, ฉบับที่ 3. ออกซฟอร์ด: สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยออกซฟอร์ด; 2000.
[16] Perlman D. การใช้ยาปฏิชีวนะในอาหารเลี้ยงเซลล์. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. การแพร่กระจายและการควบคุมการติดเชื้อไมโคพลาสมาในวัฒนธรรมเซลล์ In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. การเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเซลล์และการเพาะเลี้ยงเซลล์สายพันธุ์ในหลอดทดลอง. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] จักรวรรตี เอ, เลาคก้า ที, มิลลิโคสกี เอ็ม, ริงเกล เอ, บุ๊คเกอร์ เอ็ม, โทลสตอร์คูคอฟ เอ็ม, และคณะ. เฮสโตน เดเมทิลเอส KDM6A ตรวจจับออกซิเจนโดยตรงเพื่อควบคุมโครมาตินและชะตากรรมของเซลล์. วิทยาศาสตร์. 2019;363:1217-1222
[20] โมลลา คาเซมีฮา วี, อาซารี เอส, อามันซาเดห์ เอ, โบนาคดาร์ เอส, โชจาอี มอกดาห์ม เอ็ม, Habibi Anbouhi M, et al. ประสิทธิภาพของ Plasmocin™ ต่อเซลล์สายพันธุ์ต่างๆ ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ติดเชื้อโมลลิคูทเมื่อเปรียบเทียบกับยาปฏิชีวนะที่ใช้กันทั่วไปในการเพาะเลี้ยงเซลล์: ประสบการณ์ในท้องถิ่น. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. แง่มุมทางโมเลกุลของการจับสารลิแกนด์กับอัลบูมินในซีรัม. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53