เซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

€800.00*การแปล: "การแปล"

ผลิตภัณฑ์จะถูกจัดส่งในสภาพแช่แข็งบนน้ำแข็งแห้งในหลอดเก็บตัวอย่างแบบฉนวนความเย็น (cryotubes) โดยแต่ละหลอดจะบรรจุเซลล์ประมาณ 3 × 10 ⁶ เซลล์ สำหรับสายเซลล์ที่เกาะผนัง หรือ 5 × 10⁶ เซลล์ สำหรับสายเซลล์แบบแขวนลอย (โปรดดูรายละเอียดเพิ่มเติมในใบรับรองการวิเคราะห์ (CoA) ของแต่ละล็อต)

ราคาไม่รวมภาษีและค่าจัดส่ง

cryovial

หมายเลขสินค้า: 300663

เอกสารข้อมูลความปลอดภัย

แผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

ข้อตกลงบุคคลที่สาม

คำอธิบาย	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งกระดูกชนิด osteosarcoma ของมนุษย์ที่ถูกแก้ไขจีโนมซึ่งพัฒนามาจากเซลล์ U2OS โดยมีการปรับเปลี่ยนตำแหน่ง RANBP2 (หรือที่รู้จักในชื่อ NUP358) ที่มีอยู่เดิมด้วยเทคโนโลยี CRISPR/Cas9 ให้สามารถเข้ารหัสแท็ก SNAPf ในเฟรมเดียวกับโปรตีนธรรมชาติ Nup358/RanBP2 เป็นนิวคลีโอโปรอินขนาดใหญ่ที่ตั้งอยู่ในเส้นใยไซโทพลาซึมของนิวเคลียร์พอร์คอมเพล็กซ์ (NPC) และมีบทบาทสำคัญในการขนส่งระหว่างนิวเคลียสและไซโทพลาซึม, การเติม SUMOylation, และกระบวนการไมโทซิส การติดแท็กภายในร่างกายช่วยให้มั่นใจว่า SNAPf-Nup358 ถูกแสดงออกภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ทางสรีรวิทยา ซึ่งรักษาระดับการแสดงออกตามธรรมชาติและลดสิ่งประดิษฐ์ที่เกี่ยวข้องกับการแสดงออกเกิน แท็ก SNAPf เป็นรูปแบบการติดฉลากอย่างรวดเร็วของแท็ก SNAP ที่จับกับสารตั้งต้นที่เชื่อมโยงกับเบนซิลกัวไนน์อย่างถาวร ทำให้สามารถติดฉลากเรืองแสงที่เลือกได้และคงที่ของ Nup358 ในเซลล์ที่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ถูกตรึง ในเซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 โปรตีนฟิวชันจะกระจายตัวอยู่ในเยื่อหุ้มนิวเคลียสในรูปแบบจุดประ ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของเส้นใย NPC ในไซโทพลาซึม การจัดเรียงตัวนี้เอื้อต่อการถ่ายภาพฟลูออเรสเซนซ์ความละเอียดสูง การตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ความละเอียดสูงพิเศษ การติดฉลากด้วยพัลส์-เชส และการติดตามโมเลกุลเดี่ยว เพื่อศึกษาโครงสร้างและพลวัตของ NPC รูปร่างแบนและนิวเคลียสขนาดใหญ่ของเซลล์ U2OS ช่วยอำนวยความสะดวกในการถ่ายภาพเชิงปริมาณของโครงสร้างเยื่อหุ้มนิวเคลียสมากยิ่งขึ้น โมเดลนี้ช่วยให้สามารถศึกษาบทบาทเฉพาะของ Nup358 ในการส่งออกนิวเคลียสที่ขึ้นกับ CRM1/exportin, การควบคุมวัฏจักร Ran GTPase และการจัดระเบียบเชิงพื้นที่ของแพลตฟอร์มการขนส่งไซโทพลาซึมได้ เนื่องจาก Nup358 มีส่วนเกี่ยวข้องในการประกอบสปินเดิลไมโทติกและการทำงานของไคเนโทโคร์ เซลล์ไลน์นี้จึงเหมาะสำหรับการศึกษาการกระจายตัวใหม่ของนิวคลีโอโปรตินและกระบวนการแยก/ประกอบใหม่ของ NPC ที่ขึ้นกับวัฏจักรเซลล์ในระหว่างไมโทซิสด้วย U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 เป็นแพลตฟอร์มที่มีความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยาสำหรับการวิเคราะห์แง่มุมเชิงโครงสร้างและหน้าที่ของด้านไซโทพลาซึมของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์ในเซลล์มนุษย์
สิ่งมีชีวิต	มนุษย์
เนื้อเยื่อ	กระดูก
โรค	มะเร็งกระดูกชนิดออสทีโอซาร์โคมา

อายุ	15 ปี
เพศ	เพศหญิง
เชื้อชาติ	คอเคเชียน
สัณฐานวิทยา	ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว
คุณสมบัติการเติบโต	ยึดติด

การอ้างอิง	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 300663)
ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ	1
NCBI TaxID	9606
ผู้ฝากเงิน	ห้องปฏิบัติการเอลเลนเบิร์ก (EMBL)
สถานะของสิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรม	GMO-S1: สายพันธุ์เซลล์มะเร็งกระดูกของมนุษย์ (U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2) นี้ประกอบด้วย SNAPf-Nup358/RanBP2 ที่ถูกดัดแปลงด้วย CRISPR ซึ่งช่วยให้สามารถติดฉลากเส้นใยไซโทพลาซึมของรูพรุนนิวเคลียร์ได้อย่างแม่นยำ การดัดแปลงนี้ถูกรวมเข้าอย่างคงที่ การจำแนกประเภทนี้ใช้เฉพาะในเยอรมนีเท่านั้นและอาจแตกต่างกันในที่อื่น

การแสดงออกของโปรตีน	Nup358/RanBP2, SNAPf-แท็ก

อาหารเลี้ยงเชื้อ	McCoys 5a, w: 3.0 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: เสถียร กลูตามีน, w: 2.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต, w: 2.2 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820200a)
อาหารเสริม	เติมสารอาหารเสริมลงในอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%, กลูโคส 3.0 กรัม/ลิตร, กลูตามีนที่เสถียร, โซเดียมไพรูเวต 2.0 มิลลิโมลาร์, โซเดียมไฮโดรเจนคาร์บอเนต 2.2 กรัม/ลิตร, NEAA 1%
สารละลายตัวแยก	แอคคูเทส
การเพาะเลี้ยงเชื้อแบบแยกส่วน	นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
สื่อเลี้ยงเซลล์แบบแช่แข็ง	ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
การละลายและการเพาะเลี้ยงเซลล์	ยืนยันว่าขวดยังคงแช่แข็งอย่างสมบูรณ์เมื่อได้รับสินค้า เนื่องจากเซลล์ถูกจัดส่งบนน้ำแข็งแห้งเพื่อรักษาอุณหภูมิที่เหมาะสมระหว่างการขนส่ง เมื่อได้รับแล้ว ให้เก็บ cryovial ทันทีที่อุณหภูมิต่ำกว่า -150 องศาเซลเซียส เพื่อรักษาความสมบูรณ์ของเซลล์ หรือดำเนินการตามขั้นตอนที่ 3 หากจำเป็นต้องเพาะเลี้ยงทันที สำหรับการเพาะเลี้ยงทันที ให้ละลายน้ำแข็งในหลอดอย่างรวดเร็วโดยแช่หลอดในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37°C พร้อมน้ำสะอาดและสารต้านจุลชีพ คนเบา ๆ เป็นเวลา 40-60 วินาที จนกระทั่งเหลือเพียงก้อนน้ำแข็งขนาดเล็ก ดำเนินการขั้นตอนต่อไปทั้งหมดภายใต้สภาวะปลอดเชื้อในตู้ลมไหล โดยฆ่าเชื้อขวดแช่แข็งด้วยแอลกอฮอล์ 70% ก่อนเปิด เปิดขวดยาฆ่าเชื้ออย่างระมัดระวัง และถ่ายโอนสารแขวนลอยเซลล์ลงในหลอดปั่นเหวี่ยงขนาด 15 มิลลิลิตรที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อที่อุณหภูมิห้อง 8 มิลลิลิตร โดยคนเบา ๆ ปั่นเหวี่ยงส่วนผสมที่ความเร็ว 300 x g เป็นเวลา 3 นาที เพื่อแยกเซลล์ออกจากกัน แล้วเทส่วนใสที่อยู่ด้านบนซึ่งมีสารแช่แข็งตกค้างออกอย่างระมัดระวัง ค่อยๆ ผสมเซลล์ที่ตกตะกอนให้ละลายในอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ 10 มิลลิลิตร สำหรับเซลล์ที่เกาะติด ให้แบ่งสารแขวนลอยลงในขวดเลี้ยงเชื้อ T25 สองขวด สำหรับการเลี้ยงแบบแขวนลอย ให้ถ่ายอาหารเลี้ยงเชื้อทั้งหมดลงในขวด T25 ขวดเดียว เพื่อส่งเสริมการปฏิสัมพันธ์และการเจริญเติบโตของเซลล์อย่างมีประสิทธิภาพ ปฏิบัติตามระเบียบปฏิบัติของกลุ่มวัฒนธรรมย่อยที่กำหนดไว้สำหรับการเติบโตและการบำรุงรักษาของเซลล์ไลน์อย่างต่อเนื่อง เพื่อให้มั่นใจในผลลัพธ์การทดลองที่เชื่อถือได้
บรรยากาศการบ่มเพาะ	37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น
การเคลือบขวด	สำหรับการยึดเกาะและการมีชีวิตที่ดีที่สุดหลังการละลาย เราแนะนำให้ใช้ขวดหรือจานเคลือบคอลลาเจน
ขั้นตอนการแช่แข็ง	เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า
เงื่อนไขการจัดส่ง	เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า
เงื่อนไขการเก็บรักษา	สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

ความปราศจากเชื้อ	การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

โปรดทราบว่าสายเซลล์นี้ไม่สามารถใช้ได้ภายใต้ข้อตกลง Cytion MTA มาตรฐาน เนื่องจากต้องใช้ข้อตกลงกับบุคคลที่สามและ/หรือต้องเจรจากับผู้ให้สิทธิ์เดิม

เซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

ข้อมูลทั่วไป

ลักษณะ

ข้อมูลด้านกฎระเบียบ

ข้อมูลชีวโมเลกุล

การจัดการ

การควบคุมคุณภาพ / โปรไฟล์ทางพันธุกรรม / HLA

ข้อตกลงบุคคลที่สาม