Vero celice: pionirske poti v raziskavah virusov in inovacijah na področju cepiv

Celična linija Vero, model nesmrnih sesalskih celic, pridobljenih iz ledvičnih epitelnih celic afriške zelene opice, je v ospredju raziskav na področju virologije, mikrobiologije ter celične in molekularne biologije. Njihova široka uporaba obsega razvoj cepiv, farmacevtske presejalne teste ter raziskovanje biologije virusov in parazitov, imunologijo tumorjev in imunoterapevtske strategije.

Izvor in ključne značilnosti celic Vero

Poglobljeno raziskovanje celične linije, kot je Vero, sproži več vprašanj: Kaj točno so Vero celice? Kako je bila vzpostavljena celična linija Vero? Kakšna je zgodba za imenom »Vero«? Ta del je namenjen pojasnitvi nastanka in glavnih lastnosti Vero celic.

Nastanek celične linije Vero sega v leto 1962, izvira pa iz epitelnih celic ledvic afriške zelene opice. To linijo sta gojila Y. Kawakita in Yasumura na Univerzi v Chibi na Japonskem. Izraz »Vero« izhaja iz esperantskega izraza »Verda reno«, kar pomeni »zelena ledvica«, čeprav »Vero« odmeva tudi s pojmom »resnice«.

Vero celice običajno tvorijo monosloje, vendar se lahko prilagodijo tudi suspenzijskim kulturam, pri čemer kažejo epitelijsko podobno strukturo. Te celice so značilne po svoji zaobljeni do podolgovati obliki in povprečnem premeru okoli 17 µm. Zlasti je pomembno, da imajo Vero-celice hipodiploidno število kromosomov, pri čemer je modalno število kromosomov 58 pri približno 66 % celične populacije, čeprav v majhnem deležu (1,7 %) celic obstajajo variacije z višjimi ploidijami.

Kloni celic Vero in njihove edinstvene lastnosti

Različni kloni, ki izhajajo iz linije celic Vero, kažejo edinstvene lastnosti, ki jih ločujejo od izvorne linije. Med njimi sta dva pomembna klona celic Vero:

• Celična linija Vero E6: Ta klon, znan tudi kot Vero C1008, izhaja iz celic Vero 76 in ga je leta 1979 izoliral P.J. Price z uporabo tehnike redčenja na mikrotitrskih ploščah. Celice Vero E6 so še posebej primerne za gojenje virusov, ki se počasi razmnožujejo.

• Celice Vero 76: Te celice, ki izvirajo iz ledvice afriške zelene opice iz leta 1968, ohranjajo epitelijsko morfologijo, značilno za celice Vero.

Te variante celic Vero skupaj z izvorno linijo še naprej igrajo ključno vlogo pri napredku viroloških raziskav in razvoju medicinskih posegov, kar poudarja njihov pomen v znanstveni skupnosti.

Podatki o gojenju

Za gojenje celic Vero, celične linije opic, je potrebno poznavanje specifičnih parametrov, kot so čas podvojitve, gostota posevka in ustrezen gojišče.

• Čas podvojitve populacije: Čas podvojitve za Vero celice je okoli 24 ur.

• Adhezija: Vero celice se pri gojenju prilepijo na površine in običajno tvorijo monosloje.

• Gostota posevka: Priporočljivo je začeti z gostoto posevka 1 x 10^4 celic/cm^2. Za gojenje adhezivnih Vero celic jih operite s PBS in obdelajte z Accutase, da se ločijo. Po ločitvi celice centrifugirajte, jih ponovno suspendirajte v svežem gojišču in prenesite v nove gojiščne kolbe.

• Gojišče: Za gojenje celic Vero sta primerna gojišča Ham’s F12 in DMEM. Za optimalno rast ju je treba dopolniti z 2,5 mM L-glutamina in 5 % fetalnega govejega seruma (FBS). Gojišče je treba osvežiti dva- do trikrat na teden.

• Pogoji rasti: Vero celice se najbolje razvijajo pri temperaturi 37 °C v vlažnem okolju z 5 % CO₂.

• Shranjevanje: Za dolgoročno shranjevanje je treba celice Vero hraniti pri temperaturah pod -150 °C, bodisi v zamrzovalniku z izjemno nizko temperaturo bodisi v plinski fazi tekočega dušika.

• Postopek zamrzovanja in gojišče: Za krioprezervacijo kot zamrzovalno gojišče uporabite CM-1 ali CM-ACF ali gojišče z FBS in DMSO. Uporabite tehniko počasnega zamrzovanja, pri čemer temperaturo postopoma znižujte za 1 °C na minuto.

• Postopek odmrzovanja: Vero celice odmrzujte tako, da posodo potopite v vodno kopel s temperaturo 37 °C in jo nežno pretresate 40–60 sekund. Nato celice razredčite v svežem mediju, centrifugirajte, da odstranite krioprotektant, ponovno suspendirajte v svežem rastnem mediju in jih prestavite v novo kolbo, da si opomorejo in rastejo.

• Raven biološke varnosti: Z Vero-celicami je treba ravnati v laboratoriju, ki izpolnjuje zahteve za raven biološke varnosti 1.

Uporaba celične linije Vero v raziskavah

Celična linija Vero ima številne raziskovalne uporabe na področjih celične biologije in virologije. Tukaj smo obravnavali nekatere konkretne primere.

Celice Vero v raziskavah virusov in proizvodnji cepiv

Celice Vero, pridobljene iz ledvičnih celic afriške zelene opice, so postale nepogrešljiv del razvoja bioprocesov za proizvodnjo cepiv proti različnim virusom, vključno s poliovirusom in virusom japonskega encefalitisa. Njihova prilagodljivost tako v adhezivnih kot v suspenzijskih kulturah ter široka sposobnost podpore virusom, vključno s patogeni, kot je virus des petits ruminants, poudarjata njihov pomen pri izolaciji virusov in razvoju cepiv.

Številne študije so uporabile Vero celice za proizvodnjo cepiv za ljudi. Na primer, pomembna študija, objavljena leta 2019, je prikazala uporabo Vero celic pri razvoju inaktiviranega cepiva proti virusu rumene mrzlice [2].

Celice Vero se pogosto uporabljajo v študijah virusnih okužb, kot je študija, izvedena leta 2020, v kateri so celice Vero okužili z različnimi izolati virusa SARS-CoV-2, da bi proučili lastnosti rasti virusa [4]. Podobno je druga študija preučevala odzive celic na okužbo s SARS-CoV-2 z uporabo kulture celic Vero [5].

Vloga celic Vero v tkivnem inženirstvu in razvoju predhodnih bioprocesov

Poleg proizvodnje cepiv celice Vero prispevajo tudi k tkivnemu inženirstvu in širšemu področju razvoja bioprocesov, kar poudarja potrebo po nadaljnjih raziskavah njihovih lastnosti in uporabe. Izbor ustreznih podlinij celic Vero je ključen za izkoriščanje njihovega polnega potenciala v biotehnološki in farmacevtski industriji.

Uporaba celic Vero pri preskušanju učinkovitosti in varnosti zdravil

Celice Vero se pogosto uporabljajo pri testiranju zdravil za oceno učinkovitosti in varnosti farmacevtskih spojin. Te celice se pogosto štejejo za standardni model normalnih ledvičnih celic v študijah, ki preučujejo citotoksične učinke različnih zdravil in terapevtskih sredstev. Na primer, raziskava, v kateri so primerjali vpliv izvlečkov korenin rastline Terminalia avicennioides na celice HepG2, linijo rakavih jetrnih celic, in na Vero celice, pridobljene iz epitelija opičjih ledvic, je pokazala, da so bili izvlečki bolj škodljivi za rakave celice kot za normalne celice.

Omejitve celic Vero

Čeprav se celice Vero obsežno uporabljajo, imajo svoje omejitve, kot sta proizvodnja vero-toksina in genomski spremembi, ki lahko vplivata na določene uporabe. Razumevanje specifičnih podlinij in genomskih značilnosti celic Vero, vključno z linijo Vero F6, je bistveno za optimizacijo njihove uporabe v različnih bioprocesih.

Odkrijte naše Vero-celice in njihove derivate za revolucionarne raziskovalne namene

Raziskovalne publikacije

V nadaljevanju so navedene nekatere najnovejše in najpogosteje citirane raziskovalne publikacije, ki obravnavajo Vero celice.

Prilagoditev celic Vero za rast v suspenziji za proizvodnjo virusa stekline v različnih medijih brez seruma

Ta študija, objavljena v reviji Vaccine Journal (2019), je celice Vero prilagodila za rast v suspenzijskih kulturah za proizvodnjo virusa stekline z visokim titrom z uporabo različnih medijev brez seruma.

Občutljivost Toxoplasma gondii na etanolni ekstrakt Tinospora crispa v celicah Vero

Ta članek je bil objavljen v reviji Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine leta 2019. Študija je pokazala, da etanolni ekstrakt rastline Tinospora crispa škodljivo vpliva na parazita Toxoplasma gondii. Vendar je varen za gostiteljske celice (celicno linijo Vero).

Učinki izvlečka listov Colchicum baytopiorum na citotoksičnost in poti celične smrti v celičnih linijah C-4 I in Vero

Ta članek je bil objavljen v reviji »Journal of the Balkan Union of Oncology« leta 2021. V tej študiji sta Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez in Gul Ozcan raziskovali citotoksični učinek izvlečka listov rastline Colchicum baytopiorum na celični liniji C-4I in Vero.

Resveratrol zavira replikacijo koronavirusa 2, ki povzroča hudo akutno respiratorno sindrom (SARS-CoV-2), v gojenih celicah Vero

V tej študiji, objavljeni v reviji »Phytotherapy Research« (2021), so z uporabo celic Vero, okuženih s SARS-CoV-2, preučevali terapevtski učinek resveratrola na replikacijo virusa.

Lipofilni statini zavirajo nastajanje virusa Zika v celicah Vero

Ta članek v reviji *Nature Scientific Reports* (2019) predlaga, da lahko lipofilni statini, tj. cerivastatin, lovastatin, fuvastatin, simvastatin in mevastatin, zavirajo nastajanje virusa Zika v celicah Vero.

Viri za celice Vero: protokoli, videoposnetki in več

• Transfekcija celic Vero: Ta povezava vas bo vodila skozi protokol transfekcije za celice Vero.
• Transfekcija celične linije Vero: Ta videoposnetek pojasnjuje protokol transfekcije za celično linijo Vero.
• Subkultiviranje celic Vero: Ta videoposnetek opisuje splošna priporočila za subkultiviranje adhezivnih celičnih linij.

Protokoli za gojenje celic

• Kultiviranje celic Vero: Ta spletna stran vsebuje dobro razložen protokol za kultiviranje celic Vero.
• Kultura celic Vero: Ta dokument vam lahko pomaga pri spoznavanju protokola za razmnoževanje, vzdrževanje in zamrzovanje celic Vero.

Viri

1. Ammerman, N.C., M. Beier‐Sexton in A.F. Azad, Rast in vzdrževanje celičnih linij Vero. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): str. A. 4E. 1–A. 4E. 7.
2. Pato, T.P. in sod., Čiščenje virusa rumene mrzlice, proizvedenega v celicah Vero, za proizvodnjo inaktiviranega cepiva. Vaccine, 2019. 37(24): str. 3214–3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferativni učinek izvlečkov in frakcij korenine Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill in Perr. na celične linije HepG2 in Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): str. 1–7.
4. Yao, P., et al., Izolacija in značilnosti rasti SARS-CoV-2 v celicah Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): str. 348–350.
5. Park, B.K., et al., Različno signaliziranje in proizvodnja virusa v celicah Calu-3 in Vero ob okužbi s SARS-CoV-2. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): str. 273.