Celična linija Neuro-2a
Neuro-2a je mišja nevralna celična linija, ki se široko uporablja v nevroznanstvenih raziskavah. Te celice se uporabljajo predvsem za preučevanje nevralnega razvoja, diferenciacije, nevrotoksičnosti, celičnih signalnih poti in rasti aksonov. Poleg tega se uporabljajo tudi za razvoj zdravil in presejanje.
Ta članek se osredotoča na pomembne vidike nevroblastomskih celic Neuro-2a, ki vam lahko pomagajo pred začetkom dela z njimi. Obravnaval bo predvsem:
- Splošne lastnosti in izvor celic Neuro-2a
- Podatke o gojenju celične linije Neuro-2a
- Prednosti in slabosti celične linije Neuro-2a
- Raziskovalne aplikacije celične linije Neuro-2a
- Raziskovalne publikacije, ki obravnavajo celice Neuro-2a
- Viri za celice Neuro-2a: protokoli, videoposnetki in več
Splošne lastnosti in izvor celic Neuro-2a
V tem delu članka bomo obravnavali ozadje in osnovne značilnosti celične linije Neuro-2a, ki jih je nujno poznati pred delom z njo. Tukaj boste izvedeli: Kaj je celična linija Neuro-2a? Kakšen je izvor celične linije Neuro-2a? Kaj je diferenciacija celic Neuro-2a? Kakšna je velikost celice Neuro-2a? Kakšna je morfologija celic Neuro-2a?
- Celice Neuro-2a izvirajo iz spontanega tumorja (nevroblastoma) albinske miši (linija A). Celično linijo sta vzpostavila R.J. Klebe in F.H. Ruddle.
- Celice nevroblastoma Neuro-2a imajo morfologijo nevronskih in ameboidnih matičnih celic.
- Velikost celic Neuro-2a je 12 mikrometrov v višino [1].
- Število kromosomov celic Neuro-2a se giblje od 59 do 193, modalno število pa je 95. Kariotip teh celic nevroblastoma je nestabilen v razponu od 94 do 98 kromosomov.
Informacije o gojenju celične linije Neuro-2a
Celice Neuro-2a se pogosto uporabljajo v raziskovalnih laboratorijih na področju nevroznanosti. Preden začnete delati s temi celicami, se morate seznaniti z nujnimi informacijami o gojenju celic, navedenimi spodaj. To vam bo olajšalo delo. Izvedeli boste: Kaj je gojišče za celice Neuro-2a ? Kako se gojijo celice Neuro-2a? Kakšen je čas podvojitve celic Neuro-2a? Kakšna je gostota posevka celic Neuro-2a ? Kakšen je protokol za gojenje celic Neuro-2a? Kakšna je gojišča za celice Neuro-2a?
Ključne točke za gojenje celic Neuro-2a
Čas podvojitve:
Čas podvojitve celic Neuro-2a je približno 70 ur.
Adherente ali v suspenziji:
Neuro-2a je adhezivna celična linija.
Gostota posevka:
Optimizirana gostota sejanja celic za celično linijo Neuro-2a je 1 x 10⁴ celic/cm². Za sejanje se celice operejo s fosfatnim pufrom brez magnezija in kalcija (1x). Nato se doda raztopina za pasiranje (Accutase) in celice se inkubirajo 8 do 10 minut pri sobni temperaturi. Po disociaciji celic se doda svež gojišče in celice se centrifugirajo. Pridobljeni celični pelet se previdno ponovno suspendira, celice pa se prelijejo v kultivacijsko posodo za rast.
Gojilno gojišče:
Za gojenje celic Neuro-2a se uporablja EMEM. Vsebuje 10 % FBS, 2 mM L-glutamina, 1,5 g/L NaHCO₃, EBSS, 1 mM natrijevega piruvata in NEAA za idealno rast celic. Gojilno sredstvo je treba zamenjati 1- do 2-krat na teden.
Pogoji rasti:
Kulture Neuro-2a se gojijo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C, priključenem na vir 5 % CO₂.
Shranjevanje:
Celice je treba za dolgoročno shranjevanje hraniti pri temperaturi pod -150 °C v električnem zamrzovalniku z izjemno nizko temperaturo ali v plinski fazi tekočega dušika.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
Za zamrzovanje celic Neuro-2a se uporabljata gojišča CM-1 ali CM-ACF. Celice se zamrzujejo s postopkom počasnega zamrzovanja, ki omogoča padec temperature le za 1 °C na minuto. To celice ščiti pred šokom in ohranja njihovo sposobnost preživetja.
Postopek odmrzovanja:
Za odmrzovanje zamrznjenih kultur se viale postavi v vodno kopel s temperaturo 37 °C za 40 do 60 sekund, dokler ne ostane le majhen kepec ledu. Nato se doda gojišče in celice se centrifugirajo. Ta korak pomaga odstraniti sestavine sredstva za zamrzovanje. Pelet celic se nato ponovno suspendira, celice pa se prenesejo v novo kolbo, napolnjeno z gojiščem. Nato se celice postavijo v inkubator pri 37 °C za najmanj 24 ur.
Raven biološke varnosti:
Za ravnanje z in vzdrževanje kultur Neuro-2a so obvezne laboratorijske razmere stopnje biološke varnosti 1.
- Prednosti in slabosti celične linije Neuro-2a
- Raziskovalne aplikacije celične linije Neuro-2a
- Informacije o gojenju celične linije Neuro-2a
- Splošne lastnosti in izvor celic Neuro-2a
- 5. Raziskovalne publikacije o celicah Neuro-2a
- Viri za celice Neuro-2a: protokoli, videoposnetki in več
- Pogosta vprašanja
Prednosti in slabosti celične linije Neuro-2a
Celice Neuro-2a imajo nekatere prednosti in slabosti, ki jih ločujejo od drugih nevronskih celičnih linij. Tukaj so navedene nekatere pomembne prednosti in slabosti teh celic.
Prednosti
Prednosti mišje nevroblastomske celične linije Neuro-2a so:
-
Enostavno vzdrževanje:
Celična linija Neuro-2a ne zahteva zapletenih ali zahtevnih postopkov gojenja celic. V raziskovalnih laboratorijih jih je enostavno gojiti in vzdrževati.
-
In vitro model nevronskih celic:
Neuro-2a je priročen model nevronskih celic, ki ga raziskovalci pogosto uporabljajo v študijah razvoja in diferenciacije nevronov.
Pomanjkljivosti
Pomanjkljivosti celic Neuro-2a so:
-
Mišji izvor:
Neuro-2a je mišjega izvora, zato morajo raziskovalci biti previdni pri ekstrapolaciji rezultatov študij na miših na zdravje in bolezni ljudi, saj se biologija miši in človeka lahko znatno razlikuje.
Raziskovalne aplikacije celične linije Neuro-2a
Celice Neuro-2a ponujajo številne možnosti uporabe na področju nevroznanstvenih raziskav. Tukaj obravnavamo nekaj obetavnih uporab te celične linije:
- Nevralni razvoj: Neuro-2a je in vitro model nevronskih celic, ki se široko uporablja za preučevanje nevronskega razvoja in s tem povezanih procesov, kot so diferenciacija, rast aksonov in nastajanje sinaps. V študiji, izvedeni leta 2020, so z uporabo celic Neuro-2a raziskovali vlogo mikroRNA-124 pri diferenciaciji nevronskih celic, ki jo inducira retinoinska kislina [2]. Druga študija je preučevala izražanje receptorja za retinoinsko kislino gama (RARG) in miRNA-124 v celični liniji nevroblastoma (N2A). Ta študija je predlagala, da je RARG tarča miR-124 in da zavira rast nevritov [3].
- Nevrotoksičnost: Celice Neuro-2a se uporabljajo tudi za oceno toksičnih učinkov zdravil, kemikalij ali okoljskih dejavnikov na živčne celice. Na primer, študija, ki so jo izvedli Zhihong Yin in sodelavci, je z uporabo celic Neuro-2a preučevala nevrotoksičnost bisfenola A (BPA), okoljske kemikalije. Ugotovili so, da BPA zavira diferenciacijo in proliferacijo nevronskih celic s tem, da moti njihovo celično in sinaptično integriteto [4].
- Presejanje zdravil: Celice Neuro-2a se uporabljajo tudi za ocenjevanje terapevtskih učinkov številnih zdravil, spojin in naravnih proizvodov. V eni od študij so na primer z uporabo celic Neuro-2a preučevali antioksidativni potencial rastlinskega izvlečka Ginkgo biloba. Poleg tega so v raziskavi ugotovili, da ta izvleček zmanjšuje agregacijo Aβ in bi lahko predstavljal potencialno zdravilo za Alzheimerjevo bolezen [5].
5. Raziskovalne publikacije, v katerih so predstavljene celice Neuro-2a
Tukaj je nekaj zanimivih raziskovalnih člankov o celični liniji Neuro-2a.
Ta študija, objavljena v reviji Journal of Natural Medicines leta 2018, je preučevala terapevtske učinke alkamidov, izoliranih iz belega popra (P. nigrum), na nevronske celice Neuro-2a.
Ta raziskava, objavljena v reviji *Acta Biochimica et Biophysica Sinica* leta 2020, je predlagala, da gen Nkx2.1 igra pomembno vlogo pri razvoju možganov miši z uravnavanjem signalne kaskade Shh.
Ta članek je bil objavljen v reviji »Toxicology and Industrial Health« (2023) in predlaga, da okoljska kemikalija bisfenol A sproži nevrotoksičnost v celicah neuro-2a ter povzroči motnje v njihovem sinaptičnem in citoeskeletnem delovanju.
Ta članek v reviji Pharmaceuticals (2021) predlaga, da zdravilo heksarelin modulira kaskadi PI3K/AKT in MAPK v celicah nevroblastoma (Neuro-2a) ter zavira apoptozo celic Neuro-2a, ki jo povzroča vodikov peroksid.
Ta raziskovalni članek v reviji »Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine« (2021) navaja, da izvleček plodov rastline Emblica officinalis zavira nevrovnetje v celicah Neuro-2a in je zato lahko koristen pri nevrovnetnih boleznih.
Viri za celice Neuro-2a: protokoli, videoposnetki in več
Spodaj so navedene spletne vire o celicah Neuro-2a. Vključujejo protokol za gojenje celic Neuro-2a in protokol za transfekcijo.
- Protokol transfekcije celic Neuro-2a: Celice Neuro-2a so primeren gostitelj za transfekcijo. Ta povezava vas bo vodila skozi protokol transfekcije te celične linije. Učinkovitost transfekcije celic Neuro-2a se razlikuje glede na posamezni reagent.
Naslednja povezava vsebuje protokol za gojenje celic Neuro-2a.
- Protokol za gojenje celic Neuro-2a: Ta povezava vam bo pomagala spoznati protokol za subkultiviranje celic Neuro-2a.
- Celice Neuro-2a: Spletna stran vsebuje izčrpne informacije o gojiščih za celice Neuro-2a, gostoti posejanja ter protokolih za subkultiviranje in ravnanje s krioprezerviranimi in proliferativnimi kulturami.
Viri
- Lulevich, V., et al., Mehanika posameznih celic zagotavlja občutljiv in kvantitativen način za preučevanje interakcij med peptidom amiloid-beta in nevronskimi celicami. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): str. 13872–7.
- You, Q., et al., Vloga miR-124 pri regulaciji diferenciacije celic Neuro-2A, ki jo inducira retinoinska kislina. Neural Regen Res, 2020. 15(6): str. 1133–1139.
- Su, X., et al., MikroRNA-124 deluje na receptor za retinoinsko kislino gama in zavira rast nevritov. Neuropharmacology, 2020. 163: str. 107657.
- Yin, Z., et al., Izpostavljenost bisfenolu A povzroča nevrotoksičnost in je povezana s sinapsami ter cito-skeletom v celicah Neuro-2A. Toxicology in Vitro, 2020. 67: str. 104911.
- Chen, L., et al., Izvleček ginkgo bilobe (EGb) zavira oksidativni stres v celicah Neuro 2A, ki prekomerno izražajo APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.