Celice NCI-H1299: Raziskave in klinični pomen celic pljučnega raka NCI-H1299
NCI-H1299 je imortalizirana linija človeških celic nedrobnoceličnega pljučnega raka, ki se široko uporablja v raziskavah na področju imunološke onkologije, raka in odkrivanja zdravil. Poleg tega so raziskovalci te celice uporabili za preučevanje občutljivosti na zdravila, osnovnih signalnih poti in molekularnih mehanizmov, povezanih s pljučnim rakom. Poleg tega se te celice uporabljajo za preučevanje virusnih okužb, kot je SARS-CoV-2.
- Rastno gojišče
- RPM1 1640 je idealno gojišče za celice NCI-H1299. Dopolnjen je z 10 % fetalnim govejim serumom, 4500 mg/l glukoze, 2,0 mM L-glutamina, 1 mM natrijevega piruvata, 1500 mg/l NaHCO₃ in 10 mM HEPES. Gojišče je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.
- Čas podvojitve
- Čas podvojitve celic NCI-H1299 znaša med 22 in 30 urami.
- Vrsta rasti
- NCI-H1299 je adhezivna celična linija.
- Raven biološke varnosti
- BSL-1
- Na voljo pri
- Cytion — Naročite NCI-H1299
- Splošne značilnosti in izvor celic NCI-H1299
- Informacije o gojenju
- Nakup celične linije NCI-H1299: visokokakovostna raziskovalna orodja za preučevanje biologije pljučnega raka
- Prednosti in slabosti celic NCI-H1299
- Raziskovalne aplikacije celic NCI-H1299
- Raziskovalne publikacije, ki obravnavajo celice NCI-H1299
- Viri za celično linijo NCI-H1299: protokoli, videoposnetki in več
- Pogosta vprašanja o celični liniji NCI-H1299
- Sklici
- Pogosta vprašanja
Splošne značilnosti in izvor celic NCI-H1299
Prva stvar, ki jo morate vedeti o celični liniji, je njen izvor in splošne značilnosti, saj vam pomagajo pri načrtovanju njene uporabe v vaših raziskavah. Ta del članka vam bo pomagal spoznati nekaj pomembnih informacij o izvoru in značilnostih NCI-H1299. Na primer, kaj so celice pljučnega raka NCI-H1299? Kakšna vrsta celic je NCI-H1299? Kakšna je velikost celic NCI-H1299? Kakšna je razlika med A549 in NCI-H1299?
- Celična linija NCI-H1299 izvira iz metastaze v limfnih vozlih pljuč 43-letnega belega moškega bolnika z rakom.
- Te celice imajo homozigotno delno delecijo gena p53; zato ne izražajo beljakovine p53. Pomanjkanje izražanja beljakovine p53 v celicah NCI-H1299 prispeva k proliferativni nagnjenosti pljučnih rakavih celic H1299.
- Poleg p53 naj bi te imortalizirane celice imele tudi mutacijo KRAS v liniji NCI-H1299, ki je odgovorna za njihove lastnosti rasti, proliferacije, migracije in invazije.
- Kariotip NCI-H1299 je skoraj diploiden.
- Celice NCI-H1299 imajo morfologijo, podobno epitelijskim celicam.
- Te celice so sploščene in debele manj kot 5 µm.
NCI-H1299 in A549
NCI-H1299 in A549 sta celični liniji nedrobnoceličnega pljučnega raka. Celice NCI-H1299 so v primerjavi s celicami A549 bolj agresivne in občutljive. Obe imata relativno podobne mutacije, kot je na primer KRAS. Vendar pa celice A549, za razliko od celic NCI-H1299, izražajo gen P53.
Podatki o gojenju
Vzdrževanje kulture celične linije ni enostavno, dokler ne poznate vseh ključnih informacij o njej, vključno z: Kakšen je čas podvojitve NCI-H1299? Kakšna je gostota posejanja NCI-H1299? Kaj je gojišče za celice NCI-H1299? Kako gojiti celične linije NCI-H1299? Ta poglavje vam bo pomagalo najti odgovore na vsa ta vprašanja o gojenju celic NCI-H1299.
Ključne točke za gojenje celic NCI-H1299
Čas podvojitve:
Čas podvojitve NCI-H1299 znaša med 22 in 30 urami.
Adherente ali v suspenziji:
NCI-H1299 je adhezivna celična linija.
Razmerje pri subkultivaciji:
Celice NCI-H1299 se subkultivirajo v priporočenem razmerju od 1:3 do 1:6. Za sejanje se adhezivne celice operejo z 1x PBS in inkubirajo z raztopino Accutase za pasážiranje 8 do 10 minut pri sobni temperaturi. Odlepljene celice se dodajo v svež gojišče in centrifugirajo. Celicni pelet se nato ponovno suspendira, celice pa se prelijejo v nove kolbe, ki vsebujejo gojišče.
Rastno gojišče:
RPM1 1640 je idealno gojišče za celice NCI-H1299. Dopolnjen je z 10 % fetalnim govejim serumom, 4500 mg/l glukoze, 2,0 mM L-glutamina, 1 mM natrijevega piruvata, 1500 mg/l NaHCO₃ in 10 mM HEPES-a. Gojišče je treba zamenjati 2- do 3-krat na teden.
Pogoji za rast:
Kulture celic pljučnega raka NCI-H1299 se gojijo v vlažnem inkubatorju pri 37 °C z dovodom 5 % CO₂.
Shranjevanje:
Celično linijo NCI-H1299 je mogoče dolgoročno shranjevati v plinski fazi tekočega dušika ali v zamrzovalnikih z izredno nizko temperaturo pri temperaturi pod -150 °C.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
CM-1 ali CM-ACF sta medija za zamrzovanje celic NCI-H1299. Celice se zamrzujejo s postopkom počasnega zamrzovanja, ki omogoča znižanje temperature le za 1 stopinjo na minuto, da se ohrani vitalnost celic.
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice NCI-H1299 se hitro premešajo v predogreti vodni kopeli pri 37 stopinjah Celzija 40 do 60 sekund, dokler ne ostane le še majhen košček ledu. Odtaljenim celicam se doda svež medij in jih je mogoče neposredno gojiti v novih kolbah ali centrifugirati. V prvem primeru je treba medij zamenjati po 24 urah inkubacije. Centrifugiranje pomaga odstraniti sestavine medija za zamrzovanje. Nato se pridelane celice ponovno suspendirajo v svežem mediju in razdelijo v novo kolbo za gojenje.
Raven biološke varnosti:
Za ravnanje s celično kulturo NCI-H1299 je potreben laboratorij stopnje biološke varnosti 1.
Nakup celične linije NCI-H1299: visokokakovostna raziskovalna orodja za preučevanje biologije pljučnega raka
Prednosti in slabosti celic NCI-H1299
Tako kot druge človeške rakave celične linije ima tudi NCI-H1299 nekatere prepoznavne značilnosti, povezane s specifičnimi prednostmi in slabostmi. V nadaljevanju smo povzeli nekaj pomembnejših.
Prednosti
Glavne prednosti celične linije NCI-H1299 za nedrobnoceličnega pljučnega raka so:
-
In vitro model pljučnega raka
Celične linije NCI-H1299 so bile razvite iz metastaz v bezgavkah pri pljučnem karcinomu in zato imajo relativno podobne lastnosti. Zato lahko te celice služijo kot in vitro model za raziskovanje biologije pljučnega raka, celičnih in molekularnih mehanizmov ter za presejanje in testiranje potencialnih terapij.
-
Enostavno gojenje
Celice NCI-H1299 je enostavno gojiti in vzdrževati v raziskovalnem laboratoriju. Zahteve in postopki za gojenje celic niso zahtevni.
-
Mutacija p53 in KRAS v celicah NCI-H1299
Celice NCI-H1299 nimajo izražanja gena p53, kar jim omogoča bujno proliferacijo. Poleg tega imajo mutacijo KRAS, ki prispeva k rasti, proliferaciji, invaziji in migraciji celic. Glede na to raziskovalci uporabljajo celice H1299 za preučevanje molekularnih mehanizmov, povezanih z mutacijami KRAS in P53.
Pomanjkljivosti
Pomanjkljivosti celic NCI-H1299 so:
-
Tkivna specifičnost
NCI-H1299 izvirajo iz pljučnega tkiva. Zato je njihova uporabnost večinoma omejena na raziskave pljučnega karcinoma. Morda ne odražajo v celoti heterogenosti in splošnih značilnosti drugih vrst raka.
Raziskovalne uporabe celic NCI-H1299
Celična linija NCI-H1299 se obsežno uporablja v raziskavah pljučnega raka. Tukaj je navedenih nekaj obetavnih uporab te celične linije.
- Biologija raka: Celice NCI-H1299 so odlično raziskovalno orodje za preučevanje razvoja in napredovanja raka ter s tem povezanih celičnih in molekularnih mehanizmov. Te celice imajo določene mutacije, kar raziskovalcem omogoča raziskovanje povezanih vedenj rakavih celic, signalnih poti in profilov genske ekspresije. V več študijah so za preučevanje biologije pljučnega raka uporabili celično linijo NCI-H1299, ki izhaja iz nedrobnoceličnega pljučnega karcinoma. Na primer, v študiji iz leta 2018 so z uporabo celic NCI-H1299 preučevali signalno pot, vključeno v apoptozo pljučnih rakavih celic. Raziskovalci so ugotovili, da pot PI3K/AKT prispeva k celični proliferaciji, njeno zaviranje pa lahko povzroči smrt rakavih celic [1]. Podobno je druga raziskava preučevala mehanizme, vključene v epitelno-mezenhimalno preobrazbo (EMT) celic NCI-H1299. Ta študija je predlagala, da ekstracelularni protein SPARC (izločeni protein, kisel in bogat s cisteinom) prispeva k EMT in migraciji celic NCI-H1299 ter s tem spodbuja nastanek tumorjev v celicah – protein SPARC deluje kot posrednik signalizacije TGF-β1 [2].
- Odkrivanje in presejanje zdravil: NCI-H1299, človeška celična linija pljučnega raka, se pogosto uporablja za oceno toksičnosti in učinkovitosti potencialnih zdravil. Poleg tega jo raziskovalci uporabljajo za preučevanje mehanizma delovanja protitumorskih zdravil. V študijah so te celice uporabili tudi za identifikacijo možnih ciljev zdravil in mehanizmov odpornosti. Na primer, raziskava, ki so jo izvedli Xiao-Yun Shen in sodelavci, je preučevala protirakavni potencial naravne spojine bruceina D (BD). Ugotovitve so pokazale, da BD znatno zavira proliferacijo, invazijo in migracijo celic NCI-H1299. Zato se lahko šteje za potencialno adjuvantno terapijo za zdravljenje nedrobnoceličnega pljučnega karcinoma [3]. Podobno je študija ocenila citotoksične učinke ksantohumola samostojno in v kombinaciji s kemoterapevtskim zdravilom cisplatinom na celice pljučnega raka NCI-H1299 [4].
Raziskovalne publikacije o celicah NCI-H1299
Tukaj so navedene nekatere pomembne in najpogosteje citirane raziskovalne publikacije o celični liniji pljučnega karcinoma NCI-H1299.
Ta članek je objavljen v reviji Human and Experimental Toxicology (2021). Študija je pokazala, da indol-3-karbinol inducira apoptozo v celicah H1299 prek povišanja ravni reaktivnih kisikovih spojin (ROS).
Ta raziskava je bila objavljena leta 2018 v reviji »Cellular Physiology and Biochemistry«. Rezultati raziskave so pokazali, da kombinacija kofeinske kisline in paklitaksela izvaja sinergistični protirakav učinek v celični liniji nedrobnoceličnega pljučnega raka NCI-H1299.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen v reviji *Molecular Medicine Reports* (2018). Študija je ocenila protitumorski učinek tubeimosida-1, triterpenoidnega saponina, in z njim povezane mehanizme v celični liniji NCI-H1299.
Pristimerin inducira apoptozo ter zavira proliferacijo in migracijo celic pljučnega raka H1299
Ta članek, objavljen v reviji Journal of Cancer (2020), predlaga, da pristimerin, naravna spojina, zavira proliferacijo in migracijo celic NCI-H1299.
Mehanizem gena VIPR1 pri regulaciji celic človeškega pljučnega adenokarcinoma H1299
Ta študija, objavljena v reviji Medical Oncology (2019), je raziskala potencialne učinke prekomerne ekspresije gena VIPR1 na celično linijo adenokarcinoma NCI-H1299.
Viri za celično linijo NCI-H1299: protokoli, videoposnetki in več
Tukaj je nekaj spletnih virov, ki obravnavajo celice NCI-H1299.
- Transfekcija NCI-H1299: Ta videoposnetek pojasnjuje protokol za prehodno transfekcijo celičnih linij NCI-H1299.
- Subkultiviranje adhezivne celične linije: Ta video vam bo pomagal spoznati splošni postopek subkultiviranja adhezivne celične linije.
Naslednja povezava vsebuje informacije o celični kulturi za celice NCI-H1299.
- Celična linija NCI-H1299: Ta povezava vam bo pomagala spoznati protokol za pasiranje in transfekcijo celic NCI-H1299.
Pogosto zastavljena vprašanja o celični liniji NCI-H1299
Viri
- Gu, J., et al., Študija EGCG-inducirane apoptoze v celicah pljučnega raka z zaviranjem signalne poti PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): str. 4557–4563.
- Sun, W., et al., SPARC deluje kot posrednik TGF-β1 pri spodbujanju prehoda iz epitelijskega v mezenhimalni tip v celicah pljučnega raka A549 in H1299. Biofactors, 2018. 44(5): str. 453–464.
- Shen, X.-Y., in sod., Študija mehanizma delovanja bruceina D pri zdravljenju celic H1299 nedrobnoceličnega pljučnega raka. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): str. 500.
- Long, B., et al., Citotoksični učinki ksantohumola in njegove kombinacije s cisplatinom na človeške metastazirane pljučne rakave celice H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): str. 1–15.