Objavljeno: 17. oktober 2023 | Zadnji pregled: maj 2026
Celice A431: izvor, pogoji gojenja in raziskovalne aplikacije
A431 je linija celic človeškega epidermoidnega karcinoma, pridobljena iz kože 85-letne pacientke. Je ena najpogosteje uporabljanih celičnih linij v biomedicinskih raziskavah, zlasti v biologiji raka, imunoonkologiji, dermatologiji in raziskavah novih zdravil. Celice A431 močno prekomerno izražajo receptor epidermalnega rastnega faktorja (EGFR) – vsaka celica nosi približno 2–3 milijone receptorjev, kar je približno 20–50-krat več kot pri normalnih epitelnih celicah –, kar jih naredi za zlati standard in vitro modela za študije signalizacije EGFR in testiranje terapij, usmerjenih v EGFR, kot sta cetuksimab in erlotinib. Celice A431 so na voljo izključno pri Cytionu, vaši neodvisni evropski celični banki.
- Vrsta / Izvor
Človek (ženska, 85 let) - Tkivo
Epidermis kože (epidermoidni karcinom) - Morfologija
Epitelijska, adhezivna - Čas podvojitve
80–100 ur - Rastno gojišče
DMEM + 10 % FBS - Raven biološke varnosti
BSL-1 - Ključna značilnost
Prekomerna ekspresija EGFR (~2–3 milijone receptorjev/celica) - Ključni biomarkeri
EGFR (amplificiran), TP53 (mutiran), KRAS (divji tip), PTEN (eksprimiran) - Številka izdelka
300112 — Naročite celice A431 pri podjetju Cytion
- Celice A431: Splošne značilnosti in izvor
- Celična linija A431: Informacije o gojenju
- Prednosti in slabosti celične linije A431
- Raziskovalne aplikacije celic A431
- A431 v primerjavi z drugimi celicnimi linijami kožnega raka
- Raziskovalne publikacije o celicah A431
- Viri, protokoli in videoposnetki
- Pogosta vprašanja
Celice A431: splošne značilnosti in izvor
Ta poglavje obravnava ključne biološke lastnosti celične linije A431 – vključno z njenim izvorom, morfologijo, kariotipom in prekomerno ekspresijo EGFR, zaradi česar je izjemno dragocena za raziskave.
Izvor in zgodovina celične linije A431
- A431, celična linija človeškega kožnega raka, je bila pridobljena iz povrhnjice 85-letne pacientke z epidermoidnim karcinomom [1]. Ustanovil jo je D.J. Giard s sodelavci, ki so razvili še več drugih celičnih linij iz solidnih tumorjev.
- Celična linija je bila široko razširjena in potrjena s strani neodvisnih celičnih bank po vsem svetu, vključno s Cytionom, kot zanesljiv in ponovljiv raziskovalni model.
Morfologija in kariotip A431
- Celice A-431 imajo epitelijsko morfologijo. V standardnih kultivnih pogojih se združujejo in tvorijo celične skupke.
- Celična linija kožnega raka A431 je hipertriploidna. Modalno število kromosomov je 74, kar se pojavi v približno 36 % celic. Višje ploidije so prisotne tudi v približno 1 % celične populacije.
Ekspresija EGFR v celicah A431
Prekomerna ekspresija EGFR je značilna lastnost celic A431 in glavni razlog za njihovo široko uporabo. Celice A431 nosijo genomsko amplifikacijo lokusa gena EGFR, kar ima za posledico približno 2–3 milijone receptorjev EGFR na celico – 20- do 50-krat več kot pri normalnih epitelnih celicah. To naredi A431 zlati standard pozitivne kontrole za:
- potrjevanje protiteles proti EGFR z metodo Western blot, pretočno citometrijo in imunofluorescenco
- testiranje monoklonskih protiteles, usmerjenih proti EGFR, kot sta cetuksimab in panitumumab
- ocenjevanje zaviralcev tirozin kinaze EGFR (TKI), kot so erlotinib, gefitinib in afatinib
- proučevanje navzdolnih signalnih poti, vključno s PI3K/AKT/mTOR in RAS/MAPK/ERK
Celična linija A431: Navodila za gojenje
Poznavanje zahtev za gojenje celične linije omogoča nemoteno ravnanje z njo. Ta poglavje obravnava čas podvojitve, gojišče, pasiranje, krioprezervacijo in zahteve glede biološke varnosti za celično linijo A431.
Ključne točke za gojenje celic A431
Čas podvojitve:
Čas podvojitve populacije celic A431 znaša od 80 do 100 ur.
Adherentne ali v suspenziji:
A431 je adhezivna celična linija.
Gostota sejanja:
Za celično linijo A431 je idealna gostota 1 x 104 celic/cm2. Pri tej gostoti celice dosežejo konfluenco v približno 4 dneh. Adherentne celice se operejo s PBS (1×) in inkubirajo z raztopino za pasážiranje Accutase, nato se ponovno suspendirajo v gojišču, centrifugirajo in razdelijo v nove kolbe.
Rastni medij:
DMEM medij, dopolnjen z 10 % fetalnim govejim serumom (FBS), 4,5 g/l glukoze, 1,0 mM natrijevega piruvata, 1,5 g/l NaHCO3 in 4 mM L-glutamina. Medij je treba zamenjati vsakih 2–3 dni.
Pogoji rasti:
Rakave celice A431 se gojijo v vlažnem inkubatorju s 5 % CO2 pri 37 °C.
Shranjevanje:
Shranjujte v električnem zamrzovalniku ali v plinski fazi tekočega dušika pri temperaturi pod −150 °C, da se ohrani vitalnost celic.
Postopek zamrzovanja in gojišče:
CM-1 ali CM-ACF sta priporočena sredstva za zamrzovanje celic A431. Uporabite metodo počasnega zamrzovanja s kontrolirano hitrostjo (−1 °C/min).
Postopek odmrzovanja:
Zamrznjene celice A431 hitro odmrzujte v vodni kopeli pri 37 °C (40–60 sekund). Ko ostane le še majhen kepec ledu, dodajte gojišče in centrifugirajte. Pridobljene celice ponovno suspendirajte in prenesite v gojišče.
Raven biološke varnosti:
Za ravnanje s kulturami A431 se priporoča raven biološke varnosti 1 (BSL-1).
Prednosti in slabosti celične linije A431
Celična linija A431 ima posebne lastnosti, zaradi katerih je zelo uporabna, vendar tudi omejena glede na kontekst. Tukaj je uravnotežen povzetek.
Prednosti
Glavne prednosti rakave celične linije A431 so:
Prekomerna ekspresija EGFR
Celice A431 prekomerno izražajo EGFR z 2–3 milijoni receptorjev na celico, kar služi kot zlati standard pozitivne kontrole za študije signalizacije EGFR in validacijo zdravil proti EGFR (cetuksimab, erlotinib, gefitinib).
Tumorigenost
Celice A431 so tumorigenične in zlahka tvorijo tumorje pri imunokompromitiranih miših, kar jih naredi zanesljivo orodje za rakave modele s ksenotransplantati za preučevanje dinamike rasti tumorjev in ocenjevanje novih načinov zdravljenja raka in vivo.
Dobro karakterizirane
Desetletja objavljenih raziskav pomenijo, da so celice A431 obširno karakterizirane na genomski, proteomski in fenotipski ravni, kar zagotavlja trdno znanstveno podlago za zasnovo poskusov.
Oblikovanje 3D sferoidov
Celice A431 zlahka tvorijo kompaktne 3D sferoide v pogojih z izjemno nizko adhezijo, kar jih naredi združljive s sodobnimi platformami za presejanje organoidov in sferoidov za študije penetracije in učinkovitosti zdravil.
Pomanjkljivosti
Pomanjkljivosti celic A431 so:
Genetske anomalije
A431 je rakava celična linija z nakopičenimi genetskimi mutacijami in kromosomskimi spremembami (hipertriploidna, modalno število 74), ki morda ne odražajo v celoti prvotnih značilnosti tumorja.
Tveganje mikrobne kontaminacije
A431 je nagnjena k bakterijski kontaminaciji. Za zanesljive rezultate sta nujna stroga aseptična tehnika in redno testiranje na mikoplazmo.
Ni reprezentativna za vse tumorje EGFR
Ker je izražanje EGFR v A431 posledica genetske amplifikacije in ne mutacije (kot pri pljučnem raku), se ugotovitve morda ne morejo neposredno prenesti na tumorje z mutacijo EGFR, kot je nedrobnocelični pljučni rak (NSCLC).
Raziskovalne uporabe celic A431
Celična linija A431 se obsežno uporablja v številnih raziskovalnih disciplinah. Zaradi svoje edinstvene biologije EGFR, tumorigenosti in dobro opredeljenega genoma je ena najbolj vsestranskih človeških rakavih celičnih linij, ki so na voljo.
- Biologija raka: A431 je močno orodje za preučevanje celičnih in molekularnih mehanizmov, ki poganjajo rast raka, metastaze in invazijo. Študije so v tej celični liniji kartirale signalne poti PI3K/AKT/mTOR in RAS/MAPK/ERK, pri čemer je bilo dokazano, da njihova inhibicija inducira apoptozo v celicah kožnega tumorja A431 [2, 3].
- Testiranje terapij, usmerjenih v EGFR: Celice A431 so referenčni standard za ocenjevanje terapij proti EGFR – monoklonskih protiteles (cetuksimab, panitumumab) in majhnih molekul TKI (erlotinib, gefitinib, afatinib, osimertinib).
- Testiranje in ocenjevanje zdravil: Celice A431 se uporabljajo za ocenjevanje novih kandidatov za zdravila proti raku. Študija iz leta 2022, ki so jo opravili Rahim et al., je pokazala močne antiproliferativne učinke biogeno sintetiziranih srebrnih nanodelcev iz Alstonia angustiloba na celice A431 [4].
- Modeli tumorjev s presaditvijo: Celice A431 so tumorogene pri imunodeficientnih miših, kar omogoča subkutane in ortotopne modele presaditve za študije učinkovitosti in vivo. Lim in sod. so uporabili presadke, pridobljene iz A431, za oceno radiosenzibilizacijskih učinkov eksogenega EGF in vivo [5].
- Raziskave toksičnosti za kožo in dermatologija: Celice A431 se pogosto uporabljajo v farmacevtskih in kozmetičnih podjetjih za oceno dermalne toksičnosti, penetracije skozi kožo in varnostnih profilov topično nanašanih spojin.
- 3D sferoidni in organoidni modeli: Celice A431 tvorijo kompaktne 3D sferoide v pogojih z izjemno nizko adhezijo ali v visečih kapljicah, kar omogoča fiziološko relevantnejše študije penetracije zdravil in odpornosti.
- Validacija protiteles proti EGFR: Zaradi izjemne gostote EGFR so celice A431 standardna pozitivna kontrola za validacijo protiteles proti EGFR v Western blotu, imunofluorescenci, IHC in pretočni citometriji.
A431 v primerjavi z drugimi celičnimi linijami kožnega raka
Izbira prave celične linije je ključna za veljavnost poskusa. Tukaj je primerjava A431 z drugimi pogosto uporabljenimi celičnimi linijami kožnega in skvamoznega raka:
| Značilnost | A431 | A375 (melanom) | SCC-25 (SCC v ustih) | HaCaT (keratinocit) |
|---|---|---|---|---|
| Vrsta raka | Epidermoidni karcinom | Maligni melanom | Oralni skvamozni karcinom | Imortalizirani keratinocit |
| Izražanje EGFR | +++ (~2–3M/celica) | + (nizka) | ++ (zmerna) | ++ (zmerna) |
| Tumorigenost | Da | Da | Da | Ne |
| Morfologija | Epitelijska, adhezivna | Vretenasta, adhezivna | Epitelijska, adhezivna | Epitelijska, adhezivna |
| BSL | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Glavna uporaba | Raziskave EGFR, testiranje zdravil proti raku | Biologija melanoma, zaviralci BRAF | Rak glave in vratu, študije sevanja | Biologija kože, zaščitna funkcija |
Raziskovalne publikacije o celicah A431
Tukaj je nekaj pomembnih recenziranih publikacij, ki obravnavajo celično linijo kožnega karcinoma A431.
Objavljeno v reviji Materials Today Communications (2020). Ocenjen je bil protirakav potencial nano vlaken, obogatenih s kurkuminom iz poli-ε-kaprolaktona, in polivinilalkohola-AuNPs proti rakovnim celicam A431.
miRNA-221 spodbuja napredovanje kožnega skvamoznega karcinoma z delovanjem na PTEN
Objavljeno v reviji Cellular & Molecular Biology Letters (2019). Predlagano je bilo, da mikroRNA-221 igra onkogeno vlogo pri kožnem skvamoznem karcinomu z delovanjem na gen za zaviranje tumorjev PTEN.
Objavljeno v reviji BMC Complementary Medicine and Therapies (2016). Pokazano je bilo, da vinkristin iz glive Eutypella spp–CrP14 inducira apoptozo v celicah A431.
Objavljeno v reviji Cells (2019). Ugotovljeno je bilo, da je CDC42SE1 potencialni biomarker napredovanja kožnega raka, saj njegova zmanjšana ekspresija pospešuje nastanek tumorjev v celicah A431.
Metformin zavira proliferacijo celic A431 z moduliranjem signalne poti PI3K/Akt
Objavljeno v reviji Experimental and Therapeutic Medicine (2015). Dokazano je bilo, da metformin zavira proliferacijo A431 z regulacijo signalne poti PI3K/Akt.
Viri za celično linijo A431: protokoli, videi in več
Naslednji viri nudijo praktična navodila za delo s celicami A431 v laboratoriju.
- Transfekcija celic A-431 — Video vodnik po korakih za transfekcijo rakavih celic A431.
- Rakavska celična linija A431 — stran izdelka Cytion — popolne informacije o celični kulturi: gojišče, gostota posevka, pasiranje, krioprezervacija in certifikati kakovosti.
- Protokol za gojenje celic A431 — Kratek zunanji protokol za gojenje celične linije A431 iz Bio-Protocol.
- Preglejte vse linije rakavih celic kože podjetja Cytion — Odkrijte celotno ponudbo linij rakavih celic kože, ki jih ponuja podjetje Cytion.